Name: isolation of viable adipocytes and stromal vascular fraction from human visceral adipose tissue suitable for rna analysis and macrophage phenotyping
Uploaded: 2020-10-27T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Viable Adipocytes and Stromal Vascular Fraction from Human Visceral Adipose Tissue Suitable for RNA Analysis and Macrophage Phenotyping at JoVE.c

מחקר זה נתמך על ידי המכון הלאומי לפרינטולוגיה (מספרי מענקים: 3300-11402-01-575-17 ו- 212250-3210-21002-06-15) ו- CONACyT, Fondo Sectorial de Investigacion en Salud y Seguridad Social (FOSISS) (מספר מענק 2015-3-2-61661).

פרוטוקול זה אושר על ידי IRB של המכון הלאומי לפרינטולוגיה (212250-3210-21002-06-15). ההשתתפות הייתה מרצון, וכל הנשים שנרשמו חתמו על טופס הסכמה מדעת.
1. איסוף רקמות שומן בטני
<ol><li>קבלת ביופסיות מע"מ באמצעות כריתה חלקית במהלך ניתוח קיסרי מנשים בוגרות בריאות עם הריונות סינגלטון במועד ללא ליד...

מע"מ משחק תפקיד מכריע בוויסות מטבולי ודלקת. העניין הגובר בתפקידם של אדיפוציטים ותאי מערכת החיסון בדלקת הכרונית הקשורה להשמנת יתר הוביל לפיתוח טכניקות שונות להפרדת תאי SVF ושומן הנמצאים ב- AT. עם זאת, רוב הטכניקות אינן מאפשרות להשיג את שתי קבוצות התאים השונות הללו הניתנות ליישום במורד הזרם מא...

רקמת השומן הלבן מורכבת לא רק מתאי שומן או אדיפוציטים, אלא גם ממקטע תאי שאינו שומן המכונה מקטע כלי דם סטרומה (SVF), המכיל אוכלוסיית תאים הטרוגנית המורכבת ממקרופאגים, תאי חיסון אחרים כתאי T רגולטוריים (Tregs), ואאוזינופילים, פרדיפוציטים ופיברובלסטים, המוקפים ברקמת כלי דם וחיבור 1,2. רקמת השומן (AT) נחשבת כיום לאיבר המווסת תהליכים פיזיולוגיים הקשורים לחילוף חומרים ודלקת באמצעות אדיפוקינים, ציטוקינים ומיקרו-רנ"א המיוצרים ומשוחררים על ידי תאים שונים לתוך הרקמה, עם השפעות אוטוקריניות, פרקריניות ואנדוקריניות 3,4. בבני אדם, רקמת השומן הלבן כוללת את רקמת השומן התת עורית (SAT) ואת רקמת השומן הקרבית (VAT), עם הבדלים אנטומיים, מולקולריים, תאיים ופיזיולוגיים חשובים ביניהן 2,5. SAT מייצג עד 80% של AT, בעוד מע"מ ממוקם בתוך חלל הבטן, בעיקר mesentery ו omentum, להיות פעיל יותר מטבולית6. יתר על כן, מע"מ הוא איבר אנדוקריני המפריש מתווכים בעלי השפעה משמעותית על משקל הגוף, רגישות לאינסולין, חילוף חומרים של שומנים ודלקות. כתוצאה מכך, הצטברות מע"מ מובילה להשמנה בטנית ולמחלות הקשורות להשמנת יתר כגון סוכרת מסוג 2, תסמונת מטבולית, יתר לחץ דם וסיכון למחלות לב וכלי דם, המייצגים מנבא טוב יותר לתמותה הקשורה להשמנת יתר 6,7,8,9.
בתנאים הומיאוסטטיים אדיפוציטים, מקרופאגים ותאי חיסון אחרים משתפים פעולה כדי לשמור על חילוף החומרים של מע"מ באמצעות הפרשת מתווכים אנטי דלקתיים10. עם זאת, הרחבת מע"מ מוגזמת מקדמת גיוס של תאי T פעילים, תאי NK ומקרופאגים. למעשה, במע"מ רזה, היחס בין המקרופאגים הוא 5%, בעוד שיחס זה עולה עד 50% בהשמנת יתר, כאשר קיטוב המקרופאגים מפנוטיפ אנטי דלקתי לפנוטיפ פרו-דלקתי, יוצר סביבה דלקתית כרונית10,11.
כתוצאה ממגפת ההשמנה, מספר מדהים של דיווחים עלו המתייחסים לנושאי מחקר שונים של מע"מ, כולל ביולוגיה של אדיפוציטים, אפיגנטיקה, דלקת, תכונות אנדוקריניות ואזורים מתפתחים כמו שלפוחיות חוץ-תאיות, בין היתר 8,10,12,13. עם זאת, למרות שסביבת המע"מ מוגדרת על ידי הצלבה בין אדיפוציטים לבין המקרופאגים המתגוררים או המגיעים, רוב המחקרים התמקדו באוכלוסיית תאים אחת בלבד, ויש מידע מועט על האינטראקציה של תאים אלה במע"מ והשלכותיהם הפתופיזיולוגיות11,14. יתר על כן, מחקרים יקרי ערך העוסקים ביחסי הגומלין בין אדיפוציט-מקרופאגים ב-AT בוצעו באמצעות קווי תאים, ללא תנאי הפריימינג in vivo 11,14,15. אסטרטגיה מתאימה לנתח את האינטראקציה או את התרומה המסוימת של תאים אלה במע"מ דורשת בידוד של שני סוגי התאים מאותה ביופסיית שומן כדי לבצע בדיקות במבחנה המשקפות דומות ככל האפשר את תכונות in vivo המווסתות את חילוף החומרים במע"מ.
למרות ששיטות הדיסוציאציה הלא-אנזימטיות המבוססות על כוחות מכניים לשבירת ה-AT מבטיחות מניפולציה מינימלית, לא ניתן להשתמש בשיטות אלה אם המטרה היא לחקור תאי SVF, מכיוון שיש להם יעילות נמוכה יותר בשחזור תאים ויכולת קיום נמוכה של תאים בהשוואה לשיטות אנזימטיות, ויש צורך בנפח רקמה גדול יותר16,17. עיכול אנזימטי באמצעות collagenase היא שיטה עדינה המאפשרת עיכול נאות של קולגן וחלבוני מטריצה חוץ תאיים של רקמות סיביות כגון WAT18 והוא משמש לעתים קרובות כאשר טריפסין אינו יעיל או מזיק19. הפרוטוקול מספק הנחיות בסיסיות לפתרון בעיות לבידוד יעיל של אדיפוציטים בוגרים ותאי SVF ברי קיימא מביופסיות מע"מ אנושיות בתהליך יחיד, תוך שימוש בטכניקת עיכול אנזימטי של קולגן-אז, ומספק מידע כדי להבטיח תפוקות גבוהות (כמות, טוהר ושלמות) של סך כל הרנ"א מאדיפוציטים בוגרים, כולל מיקרו-רנ"א, עבור יישומי ביטוי במורד הזרם. במקביל, הפרוטוקול מותאם לזיהוי תת-קבוצות מקרופאגים מתאי SVF באמצעות צביעה של סמנים מרובים הקשורים לקרום לצורך ניתוח נוסף על ידי ציטומטריית זרימה20.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.2 mL PCR tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>PCR-02-C</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 mL serological pipettes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS4101-50EA</td>
			<td>Individually plastic wrapped</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L universal pipet tip</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>T-300-L-R</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#181;L universal pipet tip</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>T-300-R-S</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1000 &#181;L universal pipet tip</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>T-1000-B-R</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.0 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>MCT-200-C</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 &#181;L universal pipet tip</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>T-200-Y-R</td>
			<td>RNase, DNase free and nonpyrogenic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2100 Bioanalyzer Instrument</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G2939BA</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2101 Bioanalyzer PC</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G2953CA</td>
			<td>2100 Expert Software pre-installed in PC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352003&#160;</td>
			<td>Snap cap, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL centrifuge tubes</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS430828-100EA</td>
			<td>Polipropilene, conical bottom and sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acid-guanidinium-phenol based reagent</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>R2050-1-200</td>
			<td>TRI Reagent or similar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent RNA 6000 Nano Kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1511</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent Small RNA Kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1548</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC/Cy7 anti-human CD14 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>325620</td>
			<td>0.4 mg/106 cells, present on monocytes/macrophages, clone HCD14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baker</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>250 ml, non sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A3912-100G</td>
			<td>Heat shock fraction, pH 5.2, &#8805;96%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chip priming station</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5065-9951</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type II</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17101-015</td>
			<td>Powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G8270-100G</td>
			<td>Powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Direct-zol RNA Miniprep</td>
			<td>Zymo Research</td>
			<td>R2051</td>
			<td>Supplied with 50 mL TRI reagen</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting forceps</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Steel, serrated jaws and round ends</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection tray</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Stainless steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl alcohol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E7023-500ML</td>
			<td>200&#160;proof, for molecular biology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Flow Sheath Fluid</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>342003</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Lysing Solution</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>349202</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSAria III Flow Cytometer/Cell Sorter</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>648282</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FASCDiva Software</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>642868</td>
			<td>Software v6.0 pre-installed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemacytometer</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>Z359629-1EA</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual cell counter</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayo dissecting scisors</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Stainless steel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Adjustable temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>ND2000LAPTOP</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orbital shaker</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Adjustable temperature and speed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P10&#160;variable volume&#160;micropipette&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific-Finnpipette</td>
			<td>4642040</td>
			<td>1 to 10 &#956;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P1000&#160;variable volume&#160;micropipette&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific-Finnpipette</td>
			<td>4642090</td>
			<td>100 to 1000 &#956;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P2&#160;variable volume&#160;micropipette&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific-Finnpipette</td>
			<td>4642010</td>
			<td>0.2 to 2 &#956;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P200&#160;variable volume&#160;micropipette&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific-Finnpipette</td>
			<td>4642080</td>
			<td>20 to 200 &#956;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR tube storage rack</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>R96PCRFSP</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE/Cy5 anti-human HLA-DR Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>307608</td>
			<td>0.0625 mg/106 cells, present on macrophages, clone L243</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE/Cy7 anti-human CD45 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>304016</td>
			<td>0.1 mg/106 cells, present on leukocytes, clone H130</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3813-10PAK</td>
			<td>Powder, pH 7.4, for preparing 1 L solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette controller</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cells Lysis Buffer</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11 814 389 001</td>
			<td>For preferential lysis of red blood cells from human whole blood</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated centrifuge</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>Whit adapter for 50 mL conical tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Specimen container</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer pipette</td>
			<td>Thermo Scientific-Samco</td>
			<td>204-1S</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td>0.4% Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube racks</td>
			<td>-</td>
			<td>-</td>
			<td>For different tube sizes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex Mini Shaker</td>
			<td>Cientifica SENNA</td>
			<td>BV101</td>
			<td>-</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of viable adipocytes and stromal vascular fraction from human visceral adipose tissue suitable for rna analysis and macrophage phenotyping

רקמת השומן הקרבי (VAT) היא איבר מטבולי פעיל המורכב בעיקר מאדיפוציטים בוגרים ותאי מקטע כלי דם סטרומליים (SVF), המשחררים מולקולות ביו-אקטיביות שונות השולטות בתהליכים מטבוליים, הורמונליים וחיסוניים; נכון לעכשיו, לא ברור כיצד תהליכים אלה מוסדרים בתוך רקמת השומן. לכן, פיתוח שיטות להערכת תרומתה של כל אוכלוסיית תאים לפתופיזיולוגיה של רקמת השומן הוא קריטי. פרוטוקול זה מתאר את שלבי הבידוד ומספק את הנחיות פתרון הבעיות הדרושות לבידוד יעיל של אדיפוציטים בוגרים ברי קיימא ו- SVF מביופסיות מע"מ אנושיות בתהליך יחיד, תוך שימוש בטכניקת עיכול אנזימטית של collagenase. יתר על כן, הפרוטוקול מותאם גם לזיהוי תת-קבוצות מקרופאגים ולביצוע בידוד RNA אדיפוציט בוגר למחקרי ביטוי גנים, המאפשר ביצוע מחקרים המנתחים את האינטראקציה בין אוכלוסיות תאים אלה. בקצרה, ביופסיות מע"מ נשטפות, טחונות באופן מכני ומתעכלות כדי ליצור תרחיף חד-תאי. לאחר הצנטריפוגה, אדיפוציטים בוגרים מבודדים על ידי הנפקה מכדורית SVF. פרוטוקול מיצוי ה-RNA מבטיח תפוקה גבוהה של סך ה-RNA (כולל miRNAs) מהאדיפוציטים לצורך בדיקות ביטוי במורד הזרם. במקביל, תאי SVF משמשים לאפיון תת-קבוצות מקרופאגים (פנוטיפ פרו ואנטי דלקתי) באמצעות ניתוח ציטומטריית זרימה.

פרוטוקול זה מתאר שיטה אנזימטית המשתמשת בעיכול collagenase ואחריו צנטריפוגה דיפרנציאלית כדי לבודד, בתהליך יחיד, אדיפוציטים בוגרים קיימא ותאי SVF מביופסיות מע"מ המתקבלות מנשים הרות בריאות לאחר כריתה חלקית. במקרה זה, אנו משתמשים באדיפוציטים עבור מיצוי RNA וב- SVF עבור פנוטיפ מקרופאגים.
<p class="jove_content"...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Viable Adipocytes and Stromal Vascular Fraction from Human Visceral Adipose Tissue Suitable for RNA Analysis and Macrophage Phenotyping at JoVE.c

Isolation of Viable Adipocytes and Stromal Vascular Fraction from Human Visceral Adipose Tissue Suitable for RNA Analysis and Macrophage Phenotyping

פרוטוקול זה מספק שיטת עיכול יעילה של collagenase לבידוד של אדיפוציטים בני קיימא ותאי SVF של מקטע כלי דם סטרומה משומן בטני אנושי בתהליך יחיד, כולל מתודולוגיה להשגת RNA באיכות גבוהה מאדיפוציטים ופנוטיפפיקציה של SVF-מקרופאגים באמצעות צביעה של סמנים מרובים הקשורים לממברנה לניתוח על ידי ציטומטריית זרימה.

בידוד אדיפוציטים בני קיימא ומקטע כלי דם סטרומלי מרקמת השומן הקרבית האנושית המתאימה לניתוח RNA ופנוטיפ מקרופאגים

Visceral adipose tissue (VAT) is an active metabolic organ composed mainly of mature adipocytes and stromal vascular fraction (SVF) cells, which release ...

This protocol allows for isolation and study of viable adipocytes and stromal vascular fraction SVF cells from human visceral fat. Enzymatic digestion using collagenase ensures high yields of total RNA from mature adipocytes, including microRNAs suitable for expression analysis. Simultaneously, the method is optimized to identify macrophages by flow cytometry.This protocol provides fundamental troubleshooting guidelines for easy and efficient isolation of viable mature adipocytes and SVF cells from human VAT biopsies in a single process. After the uterine closure and hemostasis, identify greater omentum and extend it on a wet compress. Identify an avascular zone and use Kelly forceps to drill the outer side of visceral adipose tissue, or VAT.Use Ochsner forceps to clamp the proximal and distal side in the zone where VAT was drilled, and used Metzenbaum scissors to cut the tissue. Tie the greater omentum with black silk number one, then remove the Ochsner forceps and evaluate the hemostasis. To perform enzymatic digestion, cut four grams of VAT and use scissors to mince the tissue into small pieces in a dissection tray.Transfer the pieces to a new sterile 50-milliliter centrifuge tube and add 25 milliliters of digestion solution. Incubate the tube at 37 degrees Celsius for 60 minutes in an orbital shaker at 125 RPM. Then filter the digested tissue through three layers of gauze into a new sterile 50-milliliter centrifuge tube.Centrifuge the tube at 200 G for five minutes at four degrees Celsius. After centrifugation, two phases should be visible. The upper phase corresponds to mature adipocytes while SVF cells remain in the pellet.Transfer the mature adipocytes to a tube. Lyse cells by adding 1000 microliters of acid-guanidinium-phenol-based reagent and mix thoroughly with a P1000 micropipette to homogenize. Incubate the mixture for five minutes at room temperature to boost dissociation of nucleo-protein complexes.Centrifuge the cell lysate for five minutes at 12, 000 G to obtain three phases, an upper yellow phase corresponding to adipocyte lipids, a middle pink phase corresponding to nucleic acids, and a pellet with cellular debris. Carefully remove the lipid layer with a P200 micro pipette. Then transfer the middle phase into a new two-milliliter tube, taking care not to disturb the other phases.After purifying the RNA and measuring the concentration with a UV visible spectrophotometer, use an RNA integrity kit to determine the RNA integrity number. Then use the small RNA kit to determine the concentration and percent of microRNAs. Place the clip into a bioanalyzer.Dilute 10 microliters of SVF cell suspension into 90 microliters of 0.4%trypan blue solution, and apply 10 microliters to a standard hemocytometer. Count the viable cells carefully, excluding the dead cells, in four squares at the corner of the counting chamber. Transfer a total of 1 million SVF cells per milliliter to a five-milliliter round-bottom polypropylene test tube for flow cytometry and pellet the cells by centrifugation at 800 G for five minutes at four degrees Celsius.Vortex carefully to loosen the pellet and resuspend the cells in 100 microliters of PBS. Add the pre-titrated optimal concentration of each fluorochrome-conjugated monoclonal antibody specific for a cell surface antigen and mix gently, then incubate the cells for 15 minutes in the dark. Add an excess of cold PBS.And centrifuge the SVF at 400 G for five minutes at four degrees Celsius. Decant the supernatant, taking care to not disturb the pellet. Resuspend the pellet in five milliliters of sheath fluid.Then filter the cells through three layers of gauze into a new five-milliliter round-bottom polypropylene test tube. Vortex each tube briefly before analysis and count a minimum of 10, 000 events for flow analysis. This RNA extraction protocol was used to obtain adequate purity and high integrity RNA and microRNAs from mature adipocytes.The RNA integrity was assessed by an RNA quality control analyzer. Approximately 2.8 times 10 to the six nucleated cells were present per gram of visceral adipose tissue. The stromal vascular fraction cells were labeled with fluorophore-conjugated primary antibodies to identify and characterize 18 macrophages by fluorescence-activated cell-sorting analysis.Cell aggregates were eliminated from analysis by plotting the forward scatter area versus forward scatter height. Then cellular debris was excluded by gating the cells, based on the correct size and complexity, using forward scatter area and the side scatter area. To analyze macrophages, the monocyte and macrophage lineage cells were selected using CD45 and CD14 markers.Subsequently, the CD45-CD14 double positive cells were separated based on macrophage marker HLA-DR expression. Two subsets of macrophages were identified. In addition to identifying new cell phenotypes, this protocol makes it possible to use purified cell populations for future analyses, such as DNA methylation, post-translational modifications, and signaling pathways.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolation of Human Islets from Partially Pancreatectomized Patients

הבידוד של איי האדם מן המטופלים Pancreatectomized חלקית

Investigations into the pathogenesis of type 2 diabetes and islets of Langerhans malfunction 1 have been hampered by the limited availability of type 2 ...

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

הדור ניסויית של קרצינומה-Associated Fibroblasts (CAFs) מ Fibroblasts החלב אנוש

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Encapsulation Thermogenic Preadipocytes for Transplantation into Adipose Tissue Depots

Encapsulation תרמוגנית Preadipocytes להשתלה לבסיס מיון רקמת שומן

Cell encapsulation was developed to entrap viable cells within semi-permeable membranes. The engrafted encapsulated cells can exchange low molecular ...

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

בידוד נייד phenotyping של בתאי גזע mesenchymal נגזר הסינוביאלי נוזל מח עצם של Minipigs

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Stromal Vascular Fraction-enriched Fat Grafting for the Treatment of Symptomatic End-neuromata

סטרומה כלי דם מועשר שבר השמן הרכבה לטיפול סימפטומטי סוף-neuromata

The purpose of this study was to methodically illustrate and highlight the crucial steps of stromal vascular fraction (SVF)-enriched fat grafting as a ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

הערכה של רקמת שומן אנושי הפונקציה Microvascular באמצעות Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Clinical Protocol of Producing Adipose Tissue-Derived Stromal Vascular Fraction for Potential Cartilage Regeneration

פרוטוקול קליני של ייצור רקמת שומן-Derived השבר בכלי הדם סטרומה עבור פוטנציאל התחדשות הסחוס

Osteoarthritis (OA) is one of the most common debilitating disorders.&#160;Recently, numerous attempts have been made to improve the functions of the ...

Isolation of Adipose Derived Regenerative Cells for the Treatment of Erectile Dysfunction Following Radical Prostatectomy

בידוד של תאים רגנרטיביים שמקורם בשומן לטיפול בבעיות זיקפה בעקבות כריתת ערמונית רדיקלית

Stem cells are used in many research areas within regenerative medicine in part because these treatments can be curative rather than symptomatic. Stem ...

Technique for Obtaining Mesenchymal Stem Cell from Adipose Tissue and Stromal Vascular Fraction Characterization in Long-Term Cryopreservation

טכניקה לקבלת תאי גזע מזנכימליים מרקמת שומן ואפיון שבר כלי דם סטרומלי בשימור בהקפאה ארוכת טווח

Human mesenchymal stem cells derived from adipose tissue have become increasingly attractive as they show appropriate features and are an accessible ...

Isolation and Culture of Human Adipose-Derived Stem Cells With an Innovative Xenogeneic-Free Method for Human Therapy

בידוד ותרבית של תאי גזע שמקורם בשומן אנושי בשיטה חדשנית נטולת קסנוגניות לטיפול בבני אדם

Considering the increasing impact of stem cell therapy, biosafety concerns have been raised regarding potential contamination or infection transmission ...