Name: embryo injections for crispr-mediated mutagenesis in the ant harpegnathos saltator 
Uploaded: 2021-02-09T13:00:00
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著者らは、アリの遺伝学に関する支援について、ニューヨーク大学のダニー・ラインバーグとクロード・デスプランの研究室、アリゾナ州立大学のユルゲン・リービッヒの研究室に感謝している。Hua Yanは、国立科学財団I / UCRC、助成金番号IIP-1821914に基づく節足動物管理技術センター、および業界パートナーからの支援を認めています。マヤサールは、米国-イスラエル二国間農業研究開発基金、Vaadia-BARDポスドクフェローシップ番号FI-595-19の支援を受けました。

1. ハルペグナトス塩析 コロニーの定期的なメンテナンス
<ol><li>H. saltatorの野生型コロニーをアリ飼育室の透明なプラスチックの箱に入れて、22〜25°C、日長12時間の光:12時間の暗(12L:12D)照明スケジュールで維持します。<ol><li>小さな箱(9.5 x 9.5 cm2)を使用して、個々の労働者または小さなコロニーを育てます。より大きなコロニーを後方にするには、中型の箱(19 x 13.5 cm 2)ま...

<ol>
	<li>Evans, J. D., Wheeler, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+profiles+during+honeybee+caste+determination.">Expression profiles during honeybee caste determination.</a> Genome Biology. 2 (1), 1-6 (2000).</li><li>Keller, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+and+the+genetics+of+social+behaviour.">Adaptation and the genetics of social behaviour.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 364 (1533), 3209-3216 (2009).</li><li>Cahan, S. 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F., Zhang, B., Liao, C. H., Zeng, Z. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+CRISPR/Cas9-mediated+gene+editing+in+honeybee+(Apis+mellifera)+embryos.">High-efficiency CRISPR/Cas9-mediated gene editing in honeybee (Apis mellifera) embryos.</a> G3: Genes, Genomes, Genetics. 9 (5), 1759-1766 (2019).</li><li>Chiu, Y. K., Hsu, J. C., Chang, T., Huang, Y. C., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutagenesis+mediated+by+CRISPR/Cas9+in+the+red+imported+fire+ant,+Solenopsis+invicta.">Mutagenesis mediated by CRISPR/Cas9 in the red imported fire ant, Solenopsis invicta.</a> Insectes Sociaux. 67 (2), 317-326 (2020).</li><li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phylogenetic+and+transcriptomic+analysis+of+chemosensory+receptors+in+a+pair+of+divergent+ant+species+reveals+sex-specific+signatures+of+odor+coding.">Phylogenetic and transcriptomic analysis of chemosensory receptors in a pair of divergent ant species reveals sex-specific signatures of odor coding.</a> PLoS Genetics. 8 (8), 1002930 (2012).</li><li>Sutter, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P-2000+Laser+Based+Micropipette+Puller+System+Operation+Manual.+2.2+edn.">P-2000 Laser Based Micropipette Puller System Operation Manual. 2.2 edn.</a> Sutter Instrument Company. , (2012).</li><li>Perry, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanded+color+vision+in+butterflies:+molecular+logic+behind+three+way+stochastic+choices.">Expanded color vision in butterflies: molecular logic behind three way stochastic choices.</a> Nature. 535 (7611), 280-284 (2016).</li><li>Bonasio, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+comparison+of+the+ants+Camponotus+floridanus+and+Harpegnathos+saltator.">Genomic comparison of the ants Camponotus floridanus and Harpegnathos saltator.</a> Science. 329 (5995), 1068-1071 (2010).</li><li>Shields, E. J., Sheng, L., Weiner, A. K., Garcia, B. A., Bonasio, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-quality+genome+assemblies+reveal+long+non-coding+RNAs+expressed+in+ant+brains.">High-quality genome assemblies reveal long non-coding RNAs expressed in ant brains.</a> Cell Reports. 23 (10), 3078-3090 (2018).</li><li>Henderson, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila Cytogenetics Protocols. , (2004).</li><li>Kern, R., Stobrawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Step-by-Step Guide: Microinjection of Adherent Cells with the Eppendorf Injectman&#174; 4 and Femtojet&#174; 4. , (2019).</li></ol>

アリ、ハチ、ハチ、シロアリなどの昆虫の真社会性の進化は、新しい行動的および形態学的形質の出現をもたらし、その多くは環境的および遺伝的要因の組み合わせによって影響を受けると理解されています1,2,3,4。残念ながら、遺伝学の分野における研究モデルとしての真社会性昆虫の魅力と有...

昆虫の真社会性の進化、すなわち膜翅目とブラットデア目(旧等翅目)の進化は、個体レベルとコロニーレベルの両方で現れる独特でしばしば洗練された行動形質をもたらしました。社会性昆虫の最も進んだグループを特徴付ける特性である生殖分業には、多くの場合、いくつかの行動的およびしばしば形態学的に特徴的なグループで構成されるカーストシステムが含まれます。カースト間のこのような行動的および形態学的多様性は、その遺伝システムだけでなく、しばしば環境によっても制御されており1,2,3,4、真社会性昆虫を遺伝的およびエピジェネティックな研究にとって魅力的な対象にしています。
真社会性昆虫の遺伝システムを操作する能力は、多くの種が実験室の設定で交尾および繁殖しないため、困難であることが証明されています。ほとんどの真社会性昆虫はまた、コロニー内に生殖個体が非常に少ないため、生産できる子孫の数が制限され、その結果、遺伝子操作のサンプルサイズが制限されます5。さらに、多くの真社会性昆虫は、遺伝学的研究に一般的に使用される昆虫( ショウジョウバエなど)と比較して発生時間が長く、遺伝子系統を確立することが困難になっています5。しかし、一部の真社会性種は、コロニー内で生殖活動的な個体の大部分を生成する可能性があり、これにより課題が軽減され、突然変異株またはトランスジェニック系統を確立する機会が提供されます。
ポネリンアリ種であるハルペグナトスソルテーターの場合、すべての女性労働者は、女王の死または社会的孤立時に生殖活動的になる可能性があります。これらのワーカーは「ゲーマーゲート」と呼ばれ、新しいコロニー6を生成するために使用できます。さらに、コロニー内に複数のゲーマーゲートが存在する可能性があり、したがって子孫の生産が増加する5、7、8。これまでに、ヨーロッパミツバチのApis mellifera、およびアリの種であるH. saltator、Ooceraea biroi、およびSolenopsis invicta 9,10,11,12,13,14,15で変異株および/またはトランスジェニック系統が開発されています。.社会性ミツバチとアリの遺伝子分析は、真社会性のより良い理解への道を開き、遺伝子とそれらが真社会性昆虫の行動とカースト固有の生理学に与える影響を研究する一連の機会を提供しました。
ここでは、H.ソルテーターのCRISPR/Cas9システムを介した遺伝子組み換えのプロトコルを提供します。具体的には、この手法を使用して、すべての匂い受容体(OR)の絶対補助受容体をコードする遺伝子であるorcoに生殖細胞系列変異を生成しました10。膜翅目の真社会性昆虫ではOR遺伝子が著しく拡大しており16、オルコは昆虫の嗅覚に不可欠な役割を果たしています。それがない場合、ORは正常に組み立てられないか機能しません。したがって、オルコ遺伝子の突然変異は、嗅覚、神経発達、および関連する社会的行動を混乱させます9,10。
このプロトコルでは、Cas9タンパク質と低分子ガイドRNA(sgRNA)を、標的遺伝子の突然変異誘発を誘導する目的で、マイクロインジェクションを使用してアリ胚に導入します。ここでは、コロニーや注入された胚のケアに関する指示とともに、マイクロインジェクションの手順について詳しく説明します。これらの方法は、 H. saltator アリの様々な異なる遺伝子における突然変異誘発を誘導するのに適切であり、より広いスペクトルの膜翅目昆虫に適用され得る。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic (100X)</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>15240-062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cas9 protein with NLS, high concentration</td>
			<td>PNA Bio</td>
			<td>CP02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellophane Roll 20 inch X 5 feet</td>
			<td>Hypogloss Products</td>
			<td>B00254CNJA</td>
			<td>The product has many color variations. Purchase it in red for use in making ant nests.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eclipse Ci-S upright microscope&#160;</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Ci-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Featherweight forceps, narrow tip</td>
			<td>BioQuip</td>
			<td>4748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FemtoJet ll microinjector</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>920010504</td>
			<td>This product is no longer sold or supported by Eppendorf. A comparable microinjector may be used instead.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microloader pipette tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>930001007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NCBI database</td>
			<td>National Center for Biotechnology Information</td>
			<td>Gene ID: 105183395&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P-2000 Micropipette Puller</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>P-2000/G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic boxes (19 X 13.5 cm2)</td>
			<td>Pioneer Plastics</td>
			<td>079C&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic boxes (27 X 19 cm2)</td>
			<td>Pioneer Plastics</td>
			<td>195C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic boxes (9.5 X 9.5 cm2)</td>
			<td>Pioneer Plastics</td>
			<td>028C&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quartz glass without filament</td>
			<td>Sutter Instruments</td>
			<td>Q100-50-7.5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors, 8.5 cm</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Winsor &#38; Newton Cotman Water Colour Series 111 Short Handle Synthetic Brush - Round #000</td>
			<td>Winsor and Newton</td>
			<td>5301030</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

embryo injections for crispr-mediated mutagenesis in the ant harpegnathos saltator

社会的行動や生殖分業などの真社会性昆虫のユニークな形質は、その遺伝子システムによって制御されています。遺伝子が社会的形質をどのように制御するかを調べるために、私たちはCRISPR複合体を若い胚の合胞期に送達することを介して変異アリを開発しました。ここでは、顕著な表現型の可塑性を示すポネリンアリ種である ハルペグナトスソルテーターにおけるCRISPRを介した突然変異誘発のプロトコルを提供します。 H.ソルテーター アリは実験室環境で容易に飼育されます。胚は、Cas9タンパク質によるマイクロインジェクションのために収集され、自家製の石英針を使用して in vitro で合成された低分子ガイドRNA(sgRNA)です。注射後の胚はコロニーの外で飼育されます。最初の幼虫の出現後、すべての胚と幼虫は、さらなる発達のために数人の看護労働者と一緒に巣箱に運ばれます。このプロトコルは、アリのカースト特異的な生理学や社会的行動の分析のための突然変異誘発を誘発するのに適していますが、膜翅目や他の昆虫のより広いスペクトルにも適用できます。

ここで提供されるプロトコルを使用して、 ハルペグナトスソルテーター 胚のゲノム編集が正常に実行されました。これらの結果は、ポリメラーゼ連鎖反応と注入された胚から抽出されたDNAのpGEMクローニングとそれに続くDNAシーケンシングによって検証されました。このプロトコルを用いた体細胞突然変異誘発の効率は約40%に達した。F1変異体の雄を野生型の?...

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Embryo Injections for CRISPR-Mediated Mutagenesis in the Ant Harpegnathos saltator

昆虫の真社会性の多くの特徴は、コロニー内のコミュニケーションと分業に依存しています。マイクロインジェクションとCRISPRを介した突然変異誘発によるアリ胚の主要な調節遺伝子の遺伝子操作は、真社会性昆虫の利他的行動の性質に関する洞察を提供します。

アリハルペグナトス塩析装置におけるCRISPRを介した突然変異誘発のための胚注射

The unique traits of eusocial insects, such as social behavior and reproductive division of labor, are controlled by their genetic system. To address how ...

このプロトコルにより、遺伝子組み換えアリを生成して、社会環境におけるコミュニケーションと行動における遺伝子の機能を理解することができます。真社会性昆虫の遺伝システムを操作することは、多くの種が実験室の設定で交尾および繁殖しないため、困難です。アリの鼻腔細胞床における顕著な表現型の可塑性により、CRISPRを介した変異株を確立することができます。手順を実演するのは、研究室の大学院生であるケイリー・シーバーです。H.saltatorの野生型コロニーを、摂氏22〜25度のアリ飼育室の透明なプラスチックの箱に維持し、12時間の明度、12時間の暗照スケジュールで維持します。小さな箱を使用して個々の労働者または小さなコロニーを飼育し、中型または大型の箱を使用して大きなコロニーを飼育します。巣箱を作成するには、石膏を使用して床を作ります。湿った石膏が中型箱と大きな箱の中で乾いているので、箱の後ろから数センチの深さと数センチの石膏にフォームブロックを押して、下の巣の領域を指定します。石膏が乾いたら、指定された巣の領域を正方形のガラス片で覆います。週に2回、生きたコオロギをコロニーに与え、洗浄ボトルを使用してプラスチック製の巣箱の床に定期的に水をかけます。給餌が行われるときはいつでも、ゴミや死んだ人を取り除きます。すべての廃棄物と死んだアリを摂氏マイナス30度で一晩凍結してから、これらの材料を通常のゴミとして処分します。乾燥したおがくずをコロニーに定期的に追加して、幼虫が蛹化を受けるのを助け、労働者が巣箱を清潔に保つのを助けます。マイクロピペットプラーを使用して、ガラスマイクロインジェクションニードルを引きます。使用するガラスがほこりのない清潔な環境で保管されていることを確認してください。2段階のプロセスを使用して、マイクロインジェクションニードルを引きます。最初のステップでは、熱を575、フィラメントを3、速度を35、遅延を145、プルを75に設定します。2番目のステップでは、熱を425、フィラメントを0、速度を15、遅延を128、プルを200に設定します。得られた針のテーパーが2ミリメートル、先端が0.5マイクロメートルであることを確認します。針を抜いた後は、使用するまでほこりのない清潔な環境に保管してください。カゼインタンパク質とin vitro合成低分子ガイドRNAのマイクロインジェクション混合物を調製します。マイクロインジェクションニードルをロードするまで、混合物を氷上に置いておきます。使用しないときは、マイクロインジェクション混合物を摂氏マイナス80度で保管してください。射出パラメータを射出圧力を 140 ヘクトパスカル、一定圧力を 70 ヘクトパスカル、時間0.4 秒に設定します。材料が一方向にのみ流れるように一定の圧力を調整し、針から胚に材料が流れていない場合にのみ注入圧力と時間を調整します。マイクロローダーピペットチップを使用して、2マイクロリットルの混合物をマイクロインジェクションニードルにロードします。混合物をゆっくりと行い、気泡が形成されないようにします。テープの端に沿って針の先端だけを折って、狭いテーパーが維持されるようにします。針が先端が開くのに十分なだけ折れていることを確認してくださいが、テーパーが折れるほどではありません。次に、針をマイクロマニピュレーターに取り付けます。細胞質分裂なしで核が分裂する合胞体期からマイクロインジェクション用の胚を選択します。顕微鏡スライドガラスに貼り付けた両面テープのプレートに胚を並べ、注入中の動きを防ぐためにテープにしっかりと固定されていることを確認します。各胚の外側がテープの端になるように胚を垂直方向に置きます。スライドと裏打ちされた胚を、指定されたマイクロインジェクションワークステーションの顕微鏡のステージに置きます。マイクロマニピュレーターを使用して注射する最初の胚に針を合わせ、顕微鏡下で最初の胚を背側軸または腹側軸に沿って横方向に穿刺します。マイクロインジェクション混合物を注入し、注入された液体による内圧の上昇を示す胚のわずかな動きを探します。さらに、胚の外膜に目に見える痕跡の組織または脂質を含む小さな液滴が形成されるのを観察します。胚から針をそっと外し、顕微鏡スライドの位置を調整して次の胚に進みます。すべての胚が注入されるまで繰り返します。スライド上のすべての胚が正常に注入されたら、スライドを湿潤ボックスに移して1時間、スライドから取り出す前に胚が回復する時間を与えます。インキュベーション後、スライドをエタノールで洗浄し、フェザー級鉗子を使用して注入した胚をテープから静かに取り除き、少量の70%エタノールで満たされたチューブに移します。チューブを数回反転させます。小さくて柔らかい絵筆を使用して、注入したすべての胚を2%抗生物質抗真菌剤を含む1%寒天プレートに移します。プレートを摂氏25度で約4週間インキュベートし、定期的に孵化をチェックします。最初の胚が幼虫に孵化したら、すべての胚と幼虫を巣箱に戻して、孵化したばかりの子ガメの世話をするために数人の若い看護師がいます。以前に実証された方法に従ってコロニーを維持します。このプロトコルは、ハルペグナトス塩析胚のゲノム編集を成功させるために使用されました。結果は、注入された胚から抽出されたDNAのPCRおよびpGEMクローニング、およびそれに続くDNAシーケンシングによって検証されました。このプロトコルを使用した体細胞突然変異誘発の効率は約40%に達しました F1変異オスを野生型のメスと交配させてヘテロ接合型のF2メスを産生し、交配しない場合はF3オスを産生した。変異F3オスをヘテロ接合メスと交配して、F4ホモ接合変異メスを生成しました。突然変異誘発が成功した結果、標的遺伝子の喪失と相関する異常な行動が観察された。Orcoの喪失は、フェロモン感知の喪失、獲物を検出できないこと、繁殖力の低下、およびコロニーからの徘徊に関連しています。このプロトコルを実行する場合、注射中の胚の損傷を最小限に抑える必要があります。これは、針先が大きく開きすぎないようにし、注入時に針をゆっくりと動かすことで行うことができます。同様の技術を使用してトランスジェニックアリを生成および維持することができ、ニューロンの活動および行動を調査するためのより洗練されたツールを提供する。CRISPRを介した神経新生は、ミツバチ、クローン侵入アリ、ヒアリなどの他の真社会性昆虫種で使用されています。遺伝子組み換えは、真社会性昆虫の発生、生理、社会的行動に関する機能的研究を促進します。

Research

JoVE Journal

Genetics

Embryo Injections for CRISPR-Mediated Mutagenesis in the Ant Harpegnathos saltator

Delivery of Nucleic Acids through Embryo Microinjection in the Worldwide Agricultural Pest Insect, Ceratitis capitata

Delivery of Nucleic Acids through Embryo Microinjection in the Worldwide Agricultural Pest Insect, Ceratitis capitata

世界的な農業害虫昆虫における胚のマイクロインジェクションを介して、核酸の送達、<em&gt;チチュウカイミバエ</em

The Mediterranean fruit fly (medfly) Ceratitis capitata (Wiedemann) (Diptera: Tephritidae) is a pest species with extremely high agricultural relevance. ...

遺伝学

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

Optogenetic Random Mutagenesis Using Histone-miniSOG in C. elegans

でヒストンminiSOGを使用した光遺伝学ランダム突然変異誘発<em&gt; C。エレガンス</em

Forward genetic screening in model organisms is the workhorse to discover functionally important genes and pathways in many biological processes. In most ...

Targeted in Situ Mutagenesis of Histone Genes in Budding Yeast

Targeted in Situ Mutagenesis of Histone Genes in Budding Yeast

ターゲットを絞りました<em&gt;その場で</em出芽酵母におけるヒストン遺伝子の&gt;突然変異誘発

We describe a PCR- and homologous recombination-based system for generating targeted mutations in histone genes in budding yeast cells. The resulting ...

Embryo Microinjection and Transplantation Technique for Nasonia vitripennis Genome Manipulation

Embryo Microinjection and Transplantation Technique for Nasonia vitripennis Genome Manipulation

胚のインジェクションと移植キョウソヤドリコバチゲノム操作手法

The jewel wasp Nasonia vitripennis has emerged as an effective model system for the study of processes including sex determination, haplo-diploid sex ...

CRISPR-Mediated Reorganization of Chromatin Loop Structure

クロマチンのループ構造の再編を CRISPR 媒介

Recent studies have clearly shown that long-range, three-dimensional chromatin looping interactions play a significant role in the regulation of gene ...

Gene-targeted Random Mutagenesis to Select Heterochromatin-destabilizing Proteasome Mutants in Fission Yeast

分裂酵母におけるプロテアソーム変異体のヘテロクロマチン不安定を選択するランダムな変異を遺伝子をターゲットとしました。

Random mutagenesis of a target gene is commonly used to identify mutations that yield the desired phenotype. Of the methods that may be used to achieve ...

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

Induction and Evaluation of Inbreeding Crosses Using the Ant, Vollenhovia Emeryi

誘導と近親交配アリ、 Vollenhovia Emeryiを使用しての評価

The genetic and molecular components of the sex-determination cascade have been extensively studied in the honeybee, Apis mellifera, a hymenopteran model ...

CRISPR-mediated Genome Editing of the Human Fungal Pathogen Candida albicans

CRISPR-mediated Genome Editing of the Human Fungal Pathogen Candida albicans

CRISPR を介したゲノム人間病原菌カンジダの編集

This method describes the efficient CRISPR mediated genome editing of the diploid human fungal pathogen Candida albicans. CRISPR-mediated genome editing ...

Characterizing Histone Post-translational Modification Alterations in Yeast Neurodegenerative Proteinopathy Models

酵母神経変性認知症予備モデルにおけるヒストン翻訳後修飾変化の特性

Neurodegenerative diseases, such as amyotrophic lateral sclerosis (ALS) and Parkinson&#39;s disease (PD), cause the loss of hundreds of thousands of lives ...

Embryo Microinjection Techniques for Efficient Site-Specific Mutagenesis in Culex quinquefasciatus

Embryo Microinjection Techniques for Efficient Site-Specific Mutagenesis in Culex quinquefasciatus

キュレックス・キンケファシアトゥスにおける効率的な部位特異的変異誘発のための胚微小注入技術

Culex quinquefasciatus is a vector of a diverse range of vector-borne diseases such as avian malaria, West Nile virus (WNV), Japanese encephalitis, ...