Name: alternate immersion in glucose to produce prolonged hyperglycemia in zebrafish
Uploaded: 2021-05-05T15:00:00
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Nous tenons à remercier VPC, CJR et MCP pour le développement de ce protocole. EMM a reçu un soutien financier de l’American University College of Arts and Sciences Graduate Student Support pour mener à bien cette recherche. Ce travail a également été soutenu par un prix Mellon de la faculté de l’Université américaine et un financement par l’American University College of Arts and Sciences (tous deux à VPC).

Toutes les procédures ont été approuvées par le Comité institutionnel de protection et d’utilisation des animaux de l’American University.
1. Préparation des réservoirs de solution
<ol><li>Obtenir six réservoirs, deux pour chaque groupe expérimental (glucose, mannitol et eau). Étiquetez l’un des deux réservoirs « réservoir de logement » (il abritera le poisson) et étiquetez l’autre « réservoir de solution » (il contiendra la solution). REMARQUE: Le groupe de ...

<ol>
	<li>Rubinstein, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+from+disease+modeling+to+drug+discovery.">Zebrafish: from disease modeling to drug discovery.</a> Current Opinion in Drug Discovery and Development. 6 (2), 218-223 (2003).</li><li>Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+learning+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Associative learning in zebrafish (Danio rerio).</a> Methods in Cell Biology. 101, 249-270 (2011).</li><li>Goldsmith, J. 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P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+zebrafish+model+of+diabetes+mellitus+and+metabolic+memory.">A zebrafish model of diabetes mellitus and metabolic memory.</a> Journal of Visualized Experiments. (72), e50232 (2013).</li><li>Sarras, M. P., Intine, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+zebrafish+as+a+disease+model+provides+a+unique+window+for+understanding+the+molecular+basis+of+diabetic+metabolic+memory.">Use of zebrafish as a disease model provides a unique window for understanding the molecular basis of diabetic metabolic memory.</a> Research on Diabetes. , (2013).</li><li>Gleeson, M., Connaughton, V., Arneson, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+hyperglycaemia+in+zebrafish+(Danio+rerio)+leads+to+morphological+changes+in+the+retina.">Induction of hyperglycaemia in zebrafish (Danio rerio) leads to morphological changes in the retina.</a> Acta Diabetologica. 44 (3), 157-163 (2007).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycemia+induces+memory+impairment+linked+to+increased+acetylcholinesterase+activity+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Hyperglycemia induces memory impairment linked to increased acetylcholinesterase activity in zebrafish (Danio rerio).</a> Behavioural Brain Research. 274, 319-325 (2014).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+impaired+glucose+metabolism+in+a+zebrafish+hyperglycemia+model.">Persistent impaired glucose metabolism in a zebrafish hyperglycemia model.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 171, 58-65 (2014).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycemia+alters+E-NTPDases,+ecto-5'-nucleotidase,+and+ectosolic+and+cytosolic+adenosine+deaminase+activities+and+expression+from+encephala+of+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Hyperglycemia alters E-NTPDases, ecto-5'-nucleotidase, and ectosolic and cytosolic adenosine deaminase activities and expression from encephala of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Purinergic Signaling. 12 (2), 211-220 (2016).</li><li>Ali, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptor+Degeneration+Accompanies+Vascular+Changes+in+a+Zebrafish+Model+of+Diabetic+Retinopathy.">Photoreceptor Degeneration Accompanies Vascular Changes in a Zebrafish Model of Diabetic Retinopathy.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 61 (2), 43 (2020).</li><li>Wiggenhauser, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Retinal+Angiogenesis+in+Hyperglycemic+pdx1-/-+Mutants.">Activation of Retinal Angiogenesis in Hyperglycemic pdx1-/- Mutants.</a> Diabetes. 69 (5), 1020-1031 (2020).</li><li>Chen, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+HMGB1+mediated+signalling+pathway+in+diabetic+retinopathy:+evidence+from+type+2+diabetic+rats+and+ARPE-19+cells+under+diabetic+condition.">Involvement of HMGB1 mediated signalling pathway in diabetic retinopathy: evidence from type 2 diabetic rats and ARPE-19 cells under diabetic condition.</a> Journal of Ophthalmology. 97, 1598-1603 (2013).</li><li>Costa, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+light+exposure,+pH,+osmolarity,+and+solvent+on+the+retinal+pigment+epithelial+toxicity+of+vital+dyes.">Effects of light exposure, pH, osmolarity, and solvent on the retinal pigment epithelial toxicity of vital dyes.</a> American Journal of Ophthalmology. 155, 705-712 (2013).</li><li>Alvarez, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+cone+photoreceptor+dysfunction+in+a+hyperglycemic+model+of+non-proliferative+diabetic+retinopathy.">Predominant cone photoreceptor dysfunction in a hyperglycemic model of non-proliferative diabetic retinopathy.</a> Disease Models and Mechanisms. 3, 236-245 (2010).</li><li>Fletcher, E. L., Phipps, J. A., Wilkinson-Berka, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfunction+of+retinal+neurons+and+glia+during+diabetes.">Dysfunction of retinal neurons and glia during diabetes.</a> Clinical and Experimental Optometry. 88, 132-145 (2005).</li><li>Fletcher, E. L., Phipps, J. A., Ward, M. M., Puthussery, T., Wilkinson-Berka, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+and+glial+abnormality+as+predictors+of+progression+of+diabetic+retinopathy.">Neuronal and glial abnormality as predictors of progression of diabetic retinopathy.</a> Current Pharmaceutical Design. 13, 2699-2712 (2007).</li><li>Agardh, E., Bruun, A., Agardh, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+glial+cell+immunoreactivity+and+neuronal+cell+changes+in+rats+with+STZ-+induced+diabetes.">Retinal glial cell immunoreactivity and neuronal cell changes in rats with STZ- induced diabetes.</a> Current Eye Research. 23, 276-284 (2001).</li><li>Barber, A. J., Antonetti, D. A., Gardner, T. W., Group, T. P. S. R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+expression+of+retinal+occludin+and+glial+fibrillary+acidic+protein+in+experimental+diabetes.">Altered expression of retinal occludin and glial fibrillary acidic protein in experimental diabetes.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41, 3561-3568 (2000).</li><li>Lieth, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+reactivity+and+impaired+glutamate+metabolism+in+short-term+experimental+diabetic+retinopathy.">Glial reactivity and impaired glutamate metabolism in short-term experimental diabetic retinopathy.</a> Diabetes. 47, 815-820 (1998).</li><li>Rungger-Brandle, E., Dosso, A. A., Leuenberger, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+reactivity,+an+early+feature+of+diabetic+retinopathy.">Glial reactivity, an early feature of diabetic retinopathy.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41, 1971-1980 (2000).</li><li>Zeng, X. X., Ng, Y. K., Ling, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+and+microglial+response+in+the+retina+of+streptozotocin-induced+diabetic+rats.">Neuronal and microglial response in the retina of streptozotocin-induced diabetic rats.</a> Visual Neuroscience. 17, 463-471 (2000).</li><li>Mizutani, M., Gerhardinger, C., Lorenzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muller+cell+changes+in+human+diabetic+retinopathy.">Muller cell changes in human diabetic retinopathy.</a> Diabetes. 47, 445-449 (1998).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+electroretinogram.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic electroretinogram.</a> Disease Models and Mechanisms. 11, (2018).</li><li>Hancock, H. A., Kraft, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potential+analysis+and+ERGs+of+normal+and+diabetic+rats.">Oscillatory potential analysis and ERGs of normal and diabetic rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45, 1002-1008 (2004).</li><li>Layton, C. J., Safa, R., Osborne, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+and+the+b-wave:+partial+masking+and+interdependence+in+dark+adaptation+and+diabetes+in+the+rat.">Oscillatory potentials and the b-wave: partial masking and interdependence in dark adaptation and diabetes in the rat.</a> Graefe's Archives for Clinical and Experimental Ophthalmology. 245, 1335-1345 (2007).</li><li>Li, Q., Zemel, E., Miller, B., Perlman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+retinal+damage+in+experimental+diabetes:+electroretinographical+and+morphological+observations.">Early retinal damage in experimental diabetes: electroretinographical and morphological observations.</a> Experimental Eye Research. 74, 615-625 (2002).</li><li>Kohzaki, K., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+inner+retinal+dysfunction+in+streptozotocin-induced+diabetic+rats.">Early inner retinal dysfunction in streptozotocin-induced diabetic rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49, 3595-3604 (2008).</li><li>Phipps, J. A., Yee, P., Fletcher, E. L., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+photoreceptor+dysfunction+in+diabetes:+activation,+deactivation,+and+dark+adaptation.">Rod photoreceptor dysfunction in diabetes: activation, deactivation, and dark adaptation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47, 3187-3194 (2006).</li></ol>

Le diabète est un problème national. Des études montrent que d’ici 2030, on estime que 400 millions de personnes auront une forme ou une autre de diabète. Dans les modèles de rongeurs, le DM de type 2 est étudié à l’aide de manipulations génétiques. Chez les rats, les rats gras diabétiques zucker (ZDF), et les rats gras Otsuka Long-Evans Tokushima (OLETF), fournissent plus d’informations sur les effets du type 2 DM10. En outre, des régimes riches en graisses ont été utilisés c...

Le poisson zèbre (Danio rerio) devient rapidement un modèle animal largement utilisé pour étudier à la fois la maladie et la cognition1. La facilité de la manipulation génétique et la transparence embryonnaire à travers les premiers stades de développement, en font un candidat de choix pour étudier les maladies humaines avec une base génétique connue. Par exemple, le poisson zèbre a été utilisé pour étudier le syndrome de Holt-Oram, les cardiomyopathies, les maladies rénales glomérulokystiques, la dystrophie musculaire et le diabète sucré (DM) parmi d’autres maladies1. De plus, le modèle du poisson zèbre est idéal en raison de la petite taille de l’espèce, de sa facilité d’entretien et de sa fécondité élevée2,3.
Le pancréas du poisson zèbre est à la fois anatomiquement et fonctionnellement similaire au pancréas des mammifères4. Ainsi, les caractéristiques uniques de taille, de fécondité élevée et de structures endocriniennes similaires font du poisson zèbre un candidat approprié pour étudier les complications liées au DM. Chez le poisson zèbre, il existe deux méthodes expérimentales utilisées pour induire l’hyperglycémie prolongée qui est caractéristique du DM : un afflux de glucose (modélisation de type 2) et l’arrêt de la sécrétion d’insuline (modélisation de type 1)5,6. Expérimentalement, pour arrêter la sécrétion d’insuline, les cellules β pancréatiques peuvent être détruites chimiquement à l’aide d’injections de streptozotocine (STZ) ou d’alloxane. STZ a été utilisé avec succès chez les rongeurs et les poissons zèbres, entraînant des complications associées à la rétinopathie7,8,9,troubles cognitifs10et à la régénération des membres11. Cependant, chez le poisson zèbre, les cellules β se régénèrent après le traitement, ce qui rend nécessaires des « injections de rappel » de STZ pour maintenir des conditions diabétiques12. Alternativement, le pancréas du poisson zèbre peut être enlevé6. Ce sont deux procédures très invasives, en raison des injections multiples, et le temps de récupération étendu.
Réciproquement, l’hyperglycémie peut être induite non envahissante par l’exposition au glucose exogène. Dans ce protocole, les poissons sont immergés dans une solution de glucose hautement concentrée pendant 24 heures5,13 ou continuellement pendant 2 semaines14,15,16. Le glucose exogène est pris par voie transdermique, par ingestion et/ou à travers les branchies, ce qui entraîne une glycémie élevée. Puisque cette technique non envahissante ne manipule pas directement des niveaux d’insuline, elle ne peut pas prétendre induire le DM de type 2. Cependant, il peut être utilisé pour examiner les complications induites par l’hyperglycémie, qui est l’un des principaux symptômes du DM de type 2.
Récemment, le mutant du poisson zèbre pdx1-/- a été développé en manipulant le gène de l’homéobox 1 pancréatique et duodénal, un gène lié à la cause génétique du DM de type 2 chez l’homme. En utilisant ce mutant, les chercheurs ont pu reproduire la perturbation du développement pancréatique, l’hyperglycémie et étudier la rétinopathie diabétique induite par l’hyperglycémie17,18.
En ce document, nous décrivons une méthode non envahissante d’induction d’hyperglycémie qui emploie un protocole alternatif d’immersion. Ce protocole maintient des conditions hyperglycemic pendant jusqu’à 8 semaines avec des complications suivantes observées. En bref, les poissons zèbres adultes sont placés dans une solution de sucre pendant 24 heures, puis dans une solution aqueuse pendant 24 heures. Contrairement à l’immersion continue dans des solutions de glucose externes, l’alternance de jours entre le sucre et l’eau imite la montée et la chute de la glycémie dans le diabète. Un protocole de glucose alternatif permet en outre à l’hyperglycémie d’être induite pendant de plus longues périodes de temps, car les poissons zèbres ne sont pas aussi capables de compenser les conditions de glucose externe élevées. Comme preuve de principe, nous fournissons des données 444 40000 10000.As proof of principle, we provide data showing that hyperglycemia induced using this protocol alters retinal chemistry and physiology.

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		<tr>
			<td>Airline Tubing</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5291863</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airpump</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5094984</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstones</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5149683</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270-5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
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		<tr>
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		<tr>
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		</tr>
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		</tr>
		<tr>
			<td>Tanks</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B0002APZO4</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
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alternate immersion in glucose to produce prolonged hyperglycemia in zebrafish

Le poisson zèbre (Danio rerio) est un excellent modèle pour étudier les effets de l’hyperglycémie chronique, une caractéristique du diabète sucré de type II (DT2). Ce protocole alternatif d’immersion est une méthode non envahissante et pas à pas d’induire l’hyperglycémie pendant jusqu’à huit semaines. Les poissons zèbres adultes sont alternativement exposés au sucre (glucose) et à l’eau pendant 24 heures chacun. Le poisson zèbre commence le traitement dans une solution de glucose à 1% pendant 2 semaines, puis une solution à 2% pendant 2 semaines et enfin une solution à 3% pendant les 4 semaines restantes. Comparé aux contrôles traités à l’eau (stress) et traités au mannitol (osmotique), les poissons zèbres traités au glucose ont des niveaux de sucre dans le sang significativement plus élevés. Le poisson zèbre glucose-traité montre des niveaux de sucre dans le sang de 3 fois celui des contrôles, suggérant qu’après quatre et huit semaines hyperglycémie puisse être réalisée. L’hyperglycémie soutenue a été associée à la protéine acide fibrillaire glial accrue (GFAP) et aux niveaux nucléaires accrus du facteur Kappa B (N-F-kB) dans la rétine et aux réponses physiologiques diminuées, ainsi qu’aux déficits cognitifs suggérant que ce protocole puisse être employé pour modéliser des complications de la maladie.

En utilisant ce protocole(figure 1),les valeurs de sucre dans le sang sont significativement élevées après 4 semaines et 8 semaines de traitement(figure 2A),l’hyperglycémie étant définie comme 3 fois les moyennes de contrôle des groupes traités à l’eau et traités au mannitol. Les témoins traités à l’eau sont transférés quotidiennement dans et hors de l’eau, ce qui fournit un contrôle du stress et de la manipulation. Le mannitol sert de co...

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Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish

Ce protocole induit non envahissantement l’hyperglycémie chez le poisson zèbre pendant jusqu’à 8 semaines. À l’aide de ce protocole, une étude approfondie des effets indésirables de l’hyperglycémie peut être réalisée.

Immersion alternative dans le glucose pour produire une hyperglycémie prolongée chez le poisson zèbre

Zebrafish (Danio rerio) are an excellent model to investigate the effects of chronic hyperglycemia, a hallmark of Type II Diabetes Mellitus (T2DM). This ...

Ce protocole induit l’hyperglycémie chez les poissons zèbres dans un modèle de montée et de chute qui imite l’hyperglycémie qui est vue dans le type deux diabète. Le principal avantage de cette technique est qu’il s’agit d’une technique non invasive qui permet de s’assurer que l’hyperglycémie est la cause de toute altération observée chez les poissons hyperglycémiques. Ce protocole pourrait potentiellement être employé pour explorer des avenues thérapeutiques ou des produits pharmaceutiques qui ciblent des complications de l’hyperglycémie.Ce protocole comporte de nombreuses étapes, mais lorsque les étapes sont suivies correctement et avec soin, il devrait rapidement devenir une seconde nature. N’oubliez pas cependant de toujours traiter les animaux avec douceur et humanité tout au long du protocole. Commencez par mettre en place six réservoirs, deux pour chaque groupe expérimental.Utilisez des réservoirs de deux litres, si le nombre total de poissons est inférieur à 20 et des réservoirs de quatre litres si le nombre total de poissons est supérieur à 20. Étiquetez l’un des deux réservoirs, le réservoir de logement et l’autre réservoir de solution. Gardez les réservoirs dans un bain-marie à 28 à 29 degrés Celsius pour maintenir la température de l’eau.Le premier jour, placez le poisson dans leurs solutions de traitement respectives pendant 24 heures. Le deuxième jour, transférer les poissons de leurs solutions de traitement à l’eau pendant 24 heures. Le troisième jour, transférez le poisson de l’eau vers des solutions de traitement.Poursuivre cette exposition alternée pour le reste de l’expérience. Transfert quotidien des poissons témoins traités à l’eau d’eau à eau. Assurez-vous que les poissons sont nourris et transférés dans la même fenêtre de deux heures chaque jour pendant toute la durée de l’expérience.Transférer les poissons de chaque groupe de traitement du réservoir de logement au réservoir de solution correspondant à l’aide d’un filet à poisson standard. Replacez le réservoir contenant le poisson dans le bain-marie et remplacez la pierre d’air et le couvercle du réservoir. Ce réservoir est maintenant le réservoir de logement et le réservoir qui contenait auparavant le poisson est maintenant le réservoir de solution.Jetez l’ancienne solution et nettoyez le réservoir avec les couvercles du réservoir, les conduites d’air, les pierres d’air et les filets pour éviter l’accumulation de glucose et de mannitol. Utilisez de l’eau et une éponge dédiée pour chaque condition de traitement afin de nettoyer correctement les réservoirs. Séchez les réservoirs de solution nouvellement nettoyés avec une serviette en papier et préparez les solutions pour le lendemain en utilisant ce réservoir.Assurez-vous que les autres articles sont séchés et séparés par des groupes de traitement appropriés. Pour préparer les solutions de sucre, remplissez chaque réservoir de solution avec deux ou quatre litres d’eau système. Mesurez la quantité correcte de glucose et de mannitol à l’aide d’une balance à chargement par le haut et séparez les bateaux de pesage pour chaque produit chimique.Ajouter la partie aliquote de glucose ou de mannitol pesée dans le réservoir de solution propre approprié. Remuer les solutions avec des tiges de verre séparées jusqu’à ce que les sucres soient complètement dissous. Retournez ensuite les réservoirs de solution au bain-marie et couvrez-les de leurs couvercles correspondants.Pour préparer la solution d’eau, remplissez les réservoirs expérimentaux avec de l’eau système Retournez ces réservoirs de solution au bain-marie et couvrez-les de leurs couvercles correspondants. Des valeurs de sucre de sang ont été sensiblement élevées après des traitements de glucose de quatre semaines et de huit semaines. Avec l’hyperglycémie définie comme trois fois les moyennes de contrôle des groupes traités par l’eau et traités par mannitol.Le tissu rétinien rassemblé après quatre semaines d’hyperglycémie a eu une augmentation des niveaux acides fibrillaires glial de protéine ou de GFAP. L’expression de GFAP est observée dans les cellules gliales de Mueller dans la rétine, qui sont altérées dans la rétinopathie diabétique. Cette augmentation de GFAP a été associée à une augmentation des niveaux nucléaires de kappaB de facteur.Suggérant que l’hyperglycémie induite déclenche une réponse inflammatoire et un gliosis réactif. Les enregistrements d’ERG après quatre semaines de traitement ont identifié une réponse diminuée dans les rétines traitées par glucose comparées aux contrôles traités par mannitol. Des amplitudes du photorécepteur et des composants bipolaires de cellules ont été diminuées chez les poissons hyperglycemic.Cette procédure peut être complétée par d’autres tests d’hyperglycémie. Par exemple, un test de mémoire peut être utilisé pour examiner les déficits cognitifs ou enregistrer des réponses visuelles telles que la réponse optomotrice pour évaluer les complications basées sur la vision. Une fois cette technique établie, notre laboratoire a pu l’utiliser pour étudier les complications induites par l’hyperglycémie dans le modèle des poissons zèbres.Nous avons observé ces complications relativement rapidement, après quatre semaines de traitement.

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