Name: alternate immersion in glucose to produce prolonged hyperglycemia in zebrafish
Uploaded: 2021-05-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish at JoVE.com

हम इस प्रोटोकॉल के विकास के लिए वीपीसी, सीजेआर और एमसीपी को स्वीकार करना चाहते हैं। EMM इस शोध को पूरा करने के लिए अमेरिकन यूनिवर्सिटी कॉलेज ऑफ आर्ट्स एंड साइंसेज ग्रेजुएट स्टूडेंट सपोर्ट से वित्तीय सहायता प्राप्त की । इस काम को अमेरिकन यूनिवर्सिटी फैकल्टी मेलन अवार्ड और अमेरिकन यूनिवर्सिटी कॉलेज ऑफ आर्ट्स एंड साइंसेज (दोनों वीपीसी) के माध्यम से फंडिंग द्वारा भी समर्थन दिया गया था।

सभी प्रक्रियाओं को अमेरिकी विश्वविद्यालय में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया ।
1. समाधान टैंक तैयार करना
<ol><li>छह टैंक प्राप्त करें, प्रत्येक प्रयोगात्मक समूह (ग्?...

<ol>
	<li>Rubinstein, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+from+disease+modeling+to+drug+discovery.">Zebrafish: from disease modeling to drug discovery.</a> Current Opinion in Drug Discovery and Development. 6 (2), 218-223 (2003).</li><li>Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+learning+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Associative learning in zebrafish (Danio rerio).</a> Methods in Cell Biology. 101, 249-270 (2011).</li><li>Goldsmith, J. R., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Think+small:+zebrafish+as+a+model+system+of+human+pathology.">Think small: zebrafish as a model system of human pathology.</a> BioMed Research International. , (2012).</li><li>Moss, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+the+pancreas+in+adult+zebrafish.">Regeneration of the pancreas in adult zebrafish.</a> Diabetes. 58 (8), 1844-1851 (2009).</li><li>Connaughton, V. P., Baker, C., Fonde, L., Gerardi, E., Slack, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternate+immersion+in+an+external+glucose+solution+differentially+affects+blood+sugar+values+in+older+versus+younger+zebrafish+adults.">Alternate immersion in an external glucose solution differentially affects blood sugar values in older versus younger zebrafish adults.</a> Zebrafish. 13 (2), 87-94 (2016).</li><li>Etuk, E. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+studying+diabetes+mellitus.">Animal models for studying diabetes mellitus.</a> Agriculture and Biology Journal of North America. 1 (2), 130-134 (2010).</li><li>Agardh, E., Bruun, A., Agardh, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+glial+cell+immunoreactivity+and+neuronal+cell+changes+in+rats+with+STZ-induced+diabetes.">Retinal glial cell immunoreactivity and neuronal cell changes in rats with STZ-induced diabetes.</a> Current Eye Research. 23 (4), 276-284 (2001).</li><li>Carmo, A., Cunha-Vaz, J. G., Carvalho, A. P., Lopes, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthase+activity+in+retinas+from+non-insulin-dependent+diabetic+Goto-Kakizaki+rats:+correlation+with+blood-retinal+barrier+permeability.">Nitric oxide synthase activity in retinas from non-insulin-dependent diabetic Goto-Kakizaki rats: correlation with blood-retinal barrier permeability.</a> Nitric Oxide. 4 (6), 590-596 (2000).</li><li>Ramsey, D. J., Ripps, H., Qian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+electrophysiological+study+of+retinal+function+in+the+diabetic+female+rat.">An electrophysiological study of retinal function in the diabetic female rat.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47 (11), 5116-5124 (2006).</li><li>Biessels, G. J., Gispen, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+diabetes+on+cognition:+what+can+be+learned+from+rodent+models.">The impact of diabetes on cognition: what can be learned from rodent models.</a> Neurobiology of Aging. 26 (1), 36-41 (2005).</li><li>Intine, R. V., Olsen, A. S., Sarras, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+zebrafish+model+of+diabetes+mellitus+and+metabolic+memory.">A zebrafish model of diabetes mellitus and metabolic memory.</a> Journal of Visualized Experiments. (72), e50232 (2013).</li><li>Sarras, M. P., Intine, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+zebrafish+as+a+disease+model+provides+a+unique+window+for+understanding+the+molecular+basis+of+diabetic+metabolic+memory.">Use of zebrafish as a disease model provides a unique window for understanding the molecular basis of diabetic metabolic memory.</a> Research on Diabetes. , (2013).</li><li>Gleeson, M., Connaughton, V., Arneson, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+hyperglycaemia+in+zebrafish+(Danio+rerio)+leads+to+morphological+changes+in+the+retina.">Induction of hyperglycaemia in zebrafish (Danio rerio) leads to morphological changes in the retina.</a> Acta Diabetologica. 44 (3), 157-163 (2007).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycemia+induces+memory+impairment+linked+to+increased+acetylcholinesterase+activity+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Hyperglycemia induces memory impairment linked to increased acetylcholinesterase activity in zebrafish (Danio rerio).</a> Behavioural Brain Research. 274, 319-325 (2014).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+impaired+glucose+metabolism+in+a+zebrafish+hyperglycemia+model.">Persistent impaired glucose metabolism in a zebrafish hyperglycemia model.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 171, 58-65 (2014).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycemia+alters+E-NTPDases,+ecto-5'-nucleotidase,+and+ectosolic+and+cytosolic+adenosine+deaminase+activities+and+expression+from+encephala+of+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Hyperglycemia alters E-NTPDases, ecto-5'-nucleotidase, and ectosolic and cytosolic adenosine deaminase activities and expression from encephala of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Purinergic Signaling. 12 (2), 211-220 (2016).</li><li>Ali, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptor+Degeneration+Accompanies+Vascular+Changes+in+a+Zebrafish+Model+of+Diabetic+Retinopathy.">Photoreceptor Degeneration Accompanies Vascular Changes in a Zebrafish Model of Diabetic Retinopathy.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 61 (2), 43 (2020).</li><li>Wiggenhauser, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Retinal+Angiogenesis+in+Hyperglycemic+pdx1-/-+Mutants.">Activation of Retinal Angiogenesis in Hyperglycemic pdx1-/- Mutants.</a> Diabetes. 69 (5), 1020-1031 (2020).</li><li>Chen, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+HMGB1+mediated+signalling+pathway+in+diabetic+retinopathy:+evidence+from+type+2+diabetic+rats+and+ARPE-19+cells+under+diabetic+condition.">Involvement of HMGB1 mediated signalling pathway in diabetic retinopathy: evidence from type 2 diabetic rats and ARPE-19 cells under diabetic condition.</a> Journal of Ophthalmology. 97, 1598-1603 (2013).</li><li>Costa, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+light+exposure,+pH,+osmolarity,+and+solvent+on+the+retinal+pigment+epithelial+toxicity+of+vital+dyes.">Effects of light exposure, pH, osmolarity, and solvent on the retinal pigment epithelial toxicity of vital dyes.</a> American Journal of Ophthalmology. 155, 705-712 (2013).</li><li>Alvarez, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+cone+photoreceptor+dysfunction+in+a+hyperglycemic+model+of+non-proliferative+diabetic+retinopathy.">Predominant cone photoreceptor dysfunction in a hyperglycemic model of non-proliferative diabetic retinopathy.</a> Disease Models and Mechanisms. 3, 236-245 (2010).</li><li>Fletcher, E. L., Phipps, J. A., Wilkinson-Berka, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfunction+of+retinal+neurons+and+glia+during+diabetes.">Dysfunction of retinal neurons and glia during diabetes.</a> Clinical and Experimental Optometry. 88, 132-145 (2005).</li><li>Fletcher, E. L., Phipps, J. A., Ward, M. M., Puthussery, T., Wilkinson-Berka, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+and+glial+abnormality+as+predictors+of+progression+of+diabetic+retinopathy.">Neuronal and glial abnormality as predictors of progression of diabetic retinopathy.</a> Current Pharmaceutical Design. 13, 2699-2712 (2007).</li><li>Agardh, E., Bruun, A., Agardh, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+glial+cell+immunoreactivity+and+neuronal+cell+changes+in+rats+with+STZ-+induced+diabetes.">Retinal glial cell immunoreactivity and neuronal cell changes in rats with STZ- induced diabetes.</a> Current Eye Research. 23, 276-284 (2001).</li><li>Barber, A. J., Antonetti, D. A., Gardner, T. W., Group, T. P. S. R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+expression+of+retinal+occludin+and+glial+fibrillary+acidic+protein+in+experimental+diabetes.">Altered expression of retinal occludin and glial fibrillary acidic protein in experimental diabetes.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41, 3561-3568 (2000).</li><li>Lieth, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+reactivity+and+impaired+glutamate+metabolism+in+short-term+experimental+diabetic+retinopathy.">Glial reactivity and impaired glutamate metabolism in short-term experimental diabetic retinopathy.</a> Diabetes. 47, 815-820 (1998).</li><li>Rungger-Brandle, E., Dosso, A. A., Leuenberger, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+reactivity,+an+early+feature+of+diabetic+retinopathy.">Glial reactivity, an early feature of diabetic retinopathy.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41, 1971-1980 (2000).</li><li>Zeng, X. X., Ng, Y. K., Ling, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+and+microglial+response+in+the+retina+of+streptozotocin-induced+diabetic+rats.">Neuronal and microglial response in the retina of streptozotocin-induced diabetic rats.</a> Visual Neuroscience. 17, 463-471 (2000).</li><li>Mizutani, M., Gerhardinger, C., Lorenzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muller+cell+changes+in+human+diabetic+retinopathy.">Muller cell changes in human diabetic retinopathy.</a> Diabetes. 47, 445-449 (1998).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+electroretinogram.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic electroretinogram.</a> Disease Models and Mechanisms. 11, (2018).</li><li>Hancock, H. A., Kraft, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potential+analysis+and+ERGs+of+normal+and+diabetic+rats.">Oscillatory potential analysis and ERGs of normal and diabetic rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45, 1002-1008 (2004).</li><li>Layton, C. J., Safa, R., Osborne, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+and+the+b-wave:+partial+masking+and+interdependence+in+dark+adaptation+and+diabetes+in+the+rat.">Oscillatory potentials and the b-wave: partial masking and interdependence in dark adaptation and diabetes in the rat.</a> Graefe's Archives for Clinical and Experimental Ophthalmology. 245, 1335-1345 (2007).</li><li>Li, Q., Zemel, E., Miller, B., Perlman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+retinal+damage+in+experimental+diabetes:+electroretinographical+and+morphological+observations.">Early retinal damage in experimental diabetes: electroretinographical and morphological observations.</a> Experimental Eye Research. 74, 615-625 (2002).</li><li>Kohzaki, K., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+inner+retinal+dysfunction+in+streptozotocin-induced+diabetic+rats.">Early inner retinal dysfunction in streptozotocin-induced diabetic rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49, 3595-3604 (2008).</li><li>Phipps, J. A., Yee, P., Fletcher, E. L., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+photoreceptor+dysfunction+in+diabetes:+activation,+deactivation,+and+dark+adaptation.">Rod photoreceptor dysfunction in diabetes: activation, deactivation, and dark adaptation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47, 3187-3194 (2006).</li></ol>

मधुमेह एक राष्ट्रव्यापी समस्या है। अध्ययनों से पता चलता है कि २०३० तक, एक अनुमान के अनुसार ४००,०,० लोगों को मधुमेह के कुछ फार्म का होगा । कृंतक मॉडल में, टाइप 2 डीएम आनुवंशिक हेरफेर का उपयोग करके अध्ययन क?...

जेब्राफिश (डैनियो रेरियो) रोग और अनुभूति दोनों का अध्ययन करने के लिए जल्दी से एक व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला पशु मॉडल बन रहा है1। प्रारंभिक विकासात्मक चरणों के माध्यम से आनुवंशिक हेरफेर और भ्रूणीय पारदर्शिता की आसानी, उन्हें एक ज्ञात आनुवंशिक आधार के साथ मानव रोगों का अध्ययन करने के लिए एक प्रमुख उम्मीदवार बनाती है। उदाहरण के लिए, जेब्राफिश का उपयोग अन्य बीमारियों के बीच होल्ट-ओरम सिंड्रोम, कार्डियोमायोपैथी, ग्लोमेरुलोसिस्टिक किडनी रोग, मस्कुलर डिस्ट्रॉफी और मधुमेह मेलिटस (डीएम) का अध्ययन करने के लिए किया गया है1। इसके अलावा, जेब्राफिश मॉडल प्रजातियों के छोटे आकार, रखरखाव में आसानी और उच्च फेकुंदिटी2,3के कारण आदर्श है।
जेब्राफिश अग्न्याशय दोनों शारीरिक रूप से और कार्यात्मक रूप से स्तनधारी अग्न्याशय4के समान है । इस प्रकार, आकार, उच्च fecundity, और इसी तरह के अंतःस्रावी संरचनाओं की अनूठी विशेषताएं जेब्राफिश को डीएम से संबंधित जटिलताओं का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त उम्मीदवार बनाती हैं। जेब्राफिश में, लंबे समय तक हाइपरग्लाइसेमिया को प्रेरित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले दो प्रयोगात्मक तरीके हैं जो डीएम की विशेषता है: ग्लूकोज (मॉडलिंग टाइप 2) की आमद और इंसुलिन स्राव (मॉडलिंग टाइप 1)5,6की समाप्ति। प्रायोगिक रूप से, इंसुलिन स्राव को रोकने के लिए, अग्नाशय β-कोशिकाओं को रासायनिक रूप से या तो स्ट्रेप्टोज़ोसिन (एसटीजेड) या एलोक्सन इंजेक्शन का उपयोग करके नष्ट किया जा सकता है। एसटीजेड का उपयोग कृंतक और जेब्राफिश में सफलतापूर्वक किया गया है, जिसके परिणामस्वरूप रेटिनोपैथी7,8,9,संज्ञानात्मक हानि 10 और अंग उत्थान11से जुड़ी जटिलताएं हैं। हालांकि, ज़ेब्राफ़िश में, β-कोशिकाएं उपचार के बाद पुनर्जीवित होती हैं, जिससे एसटीजेड के "बूस्टर इंजेक्शन" मधुमेह की स्थिति को बनाए रखने के लिए आवश्यक हो जाते हैं12। वैकल्पिक रूप से, जेब्राफिश के अग्न्याशय को6हटाया जा सकता है। ये दोनों अत्यधिक आक्रामक प्रक्रियाएं हैं, कई इंजेक्शन के कारण, और व्यापक वसूली समय।
इसके विपरीत, हाइपरग्लाइसीमिया को बहिर्जात ग्लूकोज के संपर्क में आने के माध्यम से गैर-भेदभावपूर्ण रूप से प्रेरित किया जा सकता है। इस प्रोटोकॉल में, मछली 24 घंटे 5, 13 या लगातार 2सप्ताह14,15,16 के लिए एक अत्यधिक केंद्रित ग्लूकोज समाधान में डूबेहुएहैं। बहिर्जात ग्लूकोज को ट्रांसडर्मल रूप से, घूस द्वारा, और/या गहरे नाले के पार ले जाया जाता है जिसके परिणामस्वरूप रक्त शर्करा का स्तर ऊंचा हो जाता है । चूंकि यह गैर-आक्रामक तकनीक सीधे इंसुलिन के स्तर में हेरफेर नहीं करती है, इसलिए यह टाइप 2 डीएम को प्रेरित करने का दावा नहीं कर सकती है। हालांकि, इसका उपयोग हाइपरग्लाइसेमिया द्वारा प्रेरित जटिलताओं की जांच करने के लिए किया जा सकता है, जो टाइप 2 डीएम के मुख्य लक्षणों में से एक है।
हाल ही में, ज़ेब्राफिश उत्परिवर्ती pdx1-/-अग्नाशय और duodenal होमोबॉक्स 1 जीन, मनुष्यों में टाइप 2 डीएम के आनुवंशिक कारण से जुड़े एक जीन में हेरफेर करके विकसित किया गया था । इस उत्परिवर्ती का उपयोग करते हुए, शोधकर्ता अग्नाशय के विकास व्यवधान, उच्च रक्त शर्करा को दोहराने और हाइपरग्लाइसेमिया-प्रेरित मधुमेह रेटिनोपैथी17, 18का अध्ययन करने में सक्षम रहे हैं।
इस पेपर में, हम एक नॉनइनवेसिव हाइपरग्लिसेमिया प्रेरण विधि का वर्णन करते हैं जो एक वैकल्पिक विसर्जन प्रोटोकॉल का उपयोग करता है। यह प्रोटोकॉल बाद की जटिलताओं के साथ 8 सप्ताह तक हाइपरग्लीसेमिक स्थितियों को बनाए रखता है। संक्षेप में, वयस्क जेब्राफिश को 24 घंटे के लिए चीनी समाधान में रखा जाता है और फिर 24 घंटे के लिए पानी का समाधान किया जाता है। बाहरी ग्लूकोज समाधानों में निरंतर विसर्जन के विपरीत, चीनी और पानी के बीच बारी-बारी से मधुमेह में रक्त शर्करा के उदय और गिरावट की नकल करता है। एक वैकल्पिक ग्लूकोज प्रोटोकॉल अतिरिक्त रूप से हाइपरग्लिसेमिया को लंबे समय तक प्रेरित करने की अनुमति देता है, क्योंकि जेब्राफिश उच्च बाहरी ग्लूकोज की स्थिति की भरपाई करने में सक्षम नहीं है। सिद्धांत के प्रमाण के रूप में, हम यह दिखाते हुए डेटा प्रदान करते हैं कि इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके प्रेरित हाइपरग्लाइसीमिया रेटिना रसायन और शरीर विज्ञान को बदल देता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Airline Tubing</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5291863</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airpump</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5094984</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstones</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5149683</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270-5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-mannitol</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC125340050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freestyle Lite Meter</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B01LMOMLTU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freestyle Lite Strips</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B074ZN3H2Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Net</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5175115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tanks</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B0002APZO4</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

alternate immersion in glucose to produce prolonged hyperglycemia in zebrafish

ज़ेब्राफिश(डैनियो रेरियो)क्रोनिक हाइपरग्लिशेमिया के प्रभावों की जांच करने के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल है, जो टाइप II डायबिटीज मेलिटस (टी2डीएम) की एक बानगी है। यह वैकल्पिक विसर्जन प्रोटोकॉल आठ सप्ताह तक हाइपरग्लाइसेमिया को प्रेरित करने का एक गैर-भेदभावपूर्ण, स्टेप-वार विधि है। वयस्क जेब्राफिश बारी-बारी से चीनी (ग्लूकोज) और पानी के लिए 24 घंटे प्रत्येक के लिए उजागर कर रहे हैं । ज़ेब्राफ़िश 2 सप्ताह के लिए 1% ग्लूकोज समाधान में उपचार शुरू करता है, फिर 2 सप्ताह के लिए 2% समाधान, और अंत में शेष 4 सप्ताह के लिए 3% समाधान। पानी का इलाज (तनाव) और मैनिटोल-उपचारित (ओस्मोटिक) नियंत्रण की तुलना में, ग्लूकोज-उपचारित जेब्राफिश में रक्त शर्करा का स्तर काफी अधिक होता है। ग्लूकोज का इलाज करने वाली जेब्राफिश नियंत्रण के 3 गुना के रक्त शर्करा के स्तर को दिखाती है, जिससे यह सुझाव दिया जाता है कि चार और आठ सप्ताह के हाइपरग्लाइसीमिया दोनों के बाद हासिल किया जा सकता है । निरंतर हाइपरग्लिमिया बढ़ी हुई ग्लियल फिब्रिलरी अम्लीय प्रोटीन (जीएफएपी) और रेटिना में परमाणु कारक कापा बी (एनएफ-केबी) के स्तर में वृद्धि और शारीरिक प्रतिक्रियाओं में कमी के साथ जुड़ा हुआ था, साथ ही इस प्रोटोकॉल का सुझाव देने वाले संज्ञानात्मक घाटे का उपयोग रोग जटिलताओं को मॉडल करने के लिए किया जा सकता है।

इस प्रोटोकॉल(चित्रा 1)का उपयोग करना, रक्त शर्करा मूल्यों को 4 सप्ताह और 8-सप्ताह के उपचार(चित्रा 2 ए)के बाद काफी ऊंचा किया जाता है, जिसमें हाइपरग्लाइसीमिया को 3x के रूप में परिभाषित कि?...

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Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish

यह प्रोटोकॉल गैर-8 सप्ताह तक जेब्राफिश में हाइपरग्लाइसेमिया को प्रेरित करता है। इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके, हाइपरग्लाइसीमिया के प्रतिकूल प्रभावों का गहन अध्ययन किया जा सकता है।

जेब्राफिश में लंबे समय तक हाइपरग्लिमिया का उत्पादन करने के लिए ग्लूकोज में वैकल्पिक विसर्जन

Zebrafish (Danio rerio) are an excellent model to investigate the effects of chronic hyperglycemia, a hallmark of Type II Diabetes Mellitus (T2DM). This ...

यह प्रोटोकॉल जेब्रा मछली में हाइपरग्लाइसेमिया को वृद्धि और गिरावट पैटर्न में प्रेरित करता है जो टाइप टू डायबिटीज में देखे जाने वाले हाइपरग्लाइसेमिया की नकल करता है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि यह एक गैर-विकासात्मक तकनीक है जो यह सुनिश्चित करना संभव बनाती है कि हाइपरग्लाइसेमिया हाइपरग्लाइसेमिक मछली में देखे गए किसी भी परिवर्तन का कारण है। इस प्रोटोकॉल का उपयोग संभावित रूप से चिकित्सीय रास्ते या फार्मास्यूटिकल्स का पता लगाने के लिए किया जा सकता है जो हाइपरग्लाइसेमिया की जटिलताओं को लक्षित करते हैं।इस प्रोटोकॉल में बहुत सारे कदम हैं, लेकिन जब कदमों का सही ढंग से पालन किया जाता है और देखभाल के साथ, यह जल्दी से दूसरी प्रकृति बन जाना चाहिए। हालांकि याद रखें, हमेशा पूरे प्रोटोकॉल के दौरान जानवरों के साथ धीरे और मानवीय व्यवहार करने के लिए। छह टैंकों की स्थापना से शुरू, प्रत्येक प्रयोगात्मक समूह के लिए दो ।दो लीटर टैंक का प्रयोग करें, यदि मछली की कुल संख्या 20 से कम है और चार लीटर टैंक यदि मछली की कुल संख्या 20 से अधिक है। दो टैंकों में से एक, हाउसिंग टैंक और दूसरा समाधान टैंक लेबल करें। पानी का तापमान बनाए रखने के लिए टंकियों को 28 से 29 डिग्री सेल्सियस पर पानी स्नान में रखें।एक दिन, मछली को 24 घंटे के लिए अपने संबंधित उपचार समाधानों में रखें। दूसरे दिन, मछली को उनके उपचार समाधानों से 24 घंटे के लिए पानी में स्थानांतरित करें। तीन दिन, मछली को पानी से उपचार समाधान में स्थानांतरित करें।प्रयोग के शेष के लिए इस बारी जोखिम जारी रखें। पानी से पानी के लिए पानी के लिए दैनिक नियंत्रण मछली स्थानांतरित । सुनिश्चित करें कि मछली को खिलाया जाता है और प्रयोग की अवधि के दौरान प्रत्येक दिन एक ही दो घंटे की खिड़की के भीतर स्थानांतरित कर दिया जाता है।एक मानक मछली नेट का उपयोग कर इसी समाधान टैंक के लिए आवास टैंक से प्रत्येक उपचार समूह में मछली हस्तांतरण। मछली युक्त टैंक को पानी के स्नान में वापस रखें और एयर स्टोन और टैंक ढक्कन को बदल दें। यह टैंक अब आवास टैंक है और टैंक है कि पहले मछली आयोजित अब समाधान टैंक है ।पुराने घोल को त्यागें और टैंक के ढक्कन, एयर लाइंस, एयर स्टोन्स और जाल के साथ टैंक को साफ करें ताकि ग्लूकोज और मैनिटॉल के बिल्डअप को रोका जा सके। टैंकों को ठीक से साफ करने के लिए प्रत्येक उपचार स्थिति के लिए पानी और एक समर्पित स्पंज का उपयोग करें। एक कागज तौलिया के साथ नए साफ समाधान टैंक सूखी और अगले दिन के लिए इस टैंक का उपयोग कर समाधान तैयार करते हैं ।सुनिश्चित करें कि अन्य वस्तुओं को उचित उपचार समूहों द्वारा सुखा और अलग किया गया है। चीनी समाधान तैयार करने के लिए, प्रत्येक समाधान टैंक को दो या चार लीटर सिस्टम पानी से भरें। प्रत्येक रसायन के लिए एक शीर्ष लोडिंग पैमाने और अलग वजन नौकाओं का उपयोग कर ग्लूकोज और mannitol की सही मात्रा को मापने ।उचित स्वच्छ समाधान टैंक में तौला ग्लूकोज या मैनिटॉल aliquot जोड़ें। जब तक शर्करा पूरी तरह से भंग न हो जाए तब तक समाधानों को अलग-अलग ग्लास हलचल छड़ के साथ हिलाएं। फिर पानी स्नान करने के लिए समाधान टैंक वापस और उनके इसी lids के साथ उन्हें कवर।पानी के समाधान को तैयार करने के लिए, सिस्टम पानी के साथ प्रयोगात्मक टैंकों को भरें इन समाधान टैंकों को पानी स्नान में वापस करें और उन्हें उनके संबंधित ढक्कन से कवर करें। रक्त शर्करा मूल्यों को काफी दोनों चार सप्ताह और आठ सप्ताह ग्लूकोज उपचार के बाद ऊंचा किया गया । हाइपरग्लिसेमिया के साथ पानी का इलाज और मैनिटॉल उपचारित समूहों दोनों से नियंत्रण औसत से तीन गुना नियंत्रण औसत के रूप में परिभाषित किया गया है।हाइपरग्लाइसीमिया के चार सप्ताह के बाद एकत्र रेटिना ऊतक में ग्लियल फिब्रिलरी अम्लीय प्रोटीन या जीएफएपी के स्तर में वृद्धि हुई थी। रेटिना में म्यूलर ग्लियल कोशिकाओं में जीएफएपी अभिव्यक्ति देखी जाती है, जो मधुमेह रेटिनोपैथी में बदल जाती है। जीएफएपी में यह वृद्धि परमाणु कारक कापाब स्तर में वृद्धि से जुड़ी थी ।सुझाव है कि प्रेरित हाइपरग्लाइसीमिया एक भड़काऊ प्रतिक्रिया और प्रतिक्रियाशील ग्लियोसिस को ट्रिगर करता है। उपचार के चार सप्ताह के बाद ईआरजी रिकॉर्डिंग ने मैनिटोल उपचारित नियंत्रणों की तुलना में ग्लूकोज उपचारित रेटिना में कम प्रतिक्रिया की पहचान की। हाइपरग्लाइसेमिक मछली में फोटोरिसेप्टर और बाइपोलर सेल घटकों दोनों के आयामों में कमी आई थी।इस प्रक्रिया को हाइपरग्लाइसीमिया के अन्य परीक्षणों द्वारा पूरक किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, एक स्मृति परख का उपयोग संज्ञानात्मक घाटे को देखने या दृष्टि-आधारित जटिलताओं का आकलन करने के लिए ऑप्टोमोटर प्रतिक्रिया जैसे दृश्य आधारित प्रतिक्रियाओं को रिकॉर्ड करने के लिए किया जा सकता है। एक बार इस तकनीक की स्थापना की थी, हमारी प्रयोगशाला जेब्रा मछली मॉडल में हाइपरग्लिसेमिया प्रेरित जटिलताओं का अध्ययन करने के लिए इसका इस्तेमाल करने में सक्षम था ।हमने उपचार के चार सप्ताह के बाद अपेक्षाकृत जल्दी इन जटिलताओं को देखा।

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Human Fear Conditioning Conducted in Full Immersion 3-Dimensional Virtual Reality

मानव भय पूर्ण विसर्जन 3 आयामी आभासी वास्तविकता में आयोजित कंडीशनिंग

Fear conditioning is a widely used paradigm in non-human animal research to investigate the neural mechanisms underlying fear and anxiety. A major ...

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

समय चूक विकास Zebrafish अग्रमस्तिष्क में Clonally संबंधित तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं की लाइव इमेजिंग

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

प्रतिगामी फ्लोरोसेंट लेबलिंग पहचाने गए न्यूरॉन्स से लक्षित कोशिकी एकल इकाई रिकॉर्डिंग के लिए अनुमति देता है<em&gt; विवो में</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

तीव्र hippocampal स्लाइस में Synaptically पैदा Astroglial और neuronal प्रतिक्रियाएँ की दोहरी electrophysiological रिकॉर्डिंग

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust (Schistocerca Americana) Olfactory Circuits

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust Schistocerca Americana Olfactory Circuits

बहु इकाई रिकॉर्डिंग Locust में तंत्रिका गतिविधि विशेषताएँ तरीके (<em&gt; Schistocerca Americana</em&gt;) घ्राण सर्किट

Detection and interpretation of olfactory cues are critical for the survival  of many organisms. Remarkably, species across phyla have strikingly similar ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

कृंतक केन्द्रीय तंत्रिका तंत्र के लिए ड्रग्स का प्रत्यक्ष intraventricular डिलिवरी

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

चूहे में ठंड संवेदनशीलता और अनुकूलन के निर्धारण के लिए एक सरल और सस्ता तरीका

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

के Synaptic मॉड्यूलेशन का विश्लेषण<em&gt; ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em&gt; लंबे समय तक प्रकाश के संपर्क के बाद फोटोरिसेप्टर

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...

A Revised Surgical Approach to Induce Endolymphatic Hydrops in the Guinea Pig

गिनी पिग में एंडोलिम्फेटिक हाइड्रोप्स को प्रेरित करने के लिए एक संशोधित सर्जिकल दृष्टिकोण

Endolymphatic hydrops is an enlargement of scala media that is most often associated with Meniere&#39;s disease, though the pathophysiologic mechanism(s) ...

Combining Behavior and EEG to Study the Effects of Mindfulness Meditation on Episodic Memory

एपिसोडिक मेमोरी पर माइंडफुलनेस मेडिटेशन के प्रभावों का अध्ययन करने के लिए व्यवहार और ईईजी का संयोजन

Although there has been recent interest in how mindfulness meditation can affect episodic memory as well as brain structure and function, no study has ...