Name: alternate immersion in glucose to produce prolonged hyperglycemia in zebrafish
Uploaded: 2021-05-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish at JoVE.com

우리는이 프로토콜의 개발에 대한 VPC, CJR 및 MCP를 인정하고 싶습니다. EMM은 이 연구를 수행하기 위해 미국 예술 과학 대학원 학생 지원 대학에서 재정 지원을 받았습니다. 이 작품은 또한 미국 대학 교수 멜론 상과 예술 과학의 미국 대학 대학을 통해 자금에 의해 지원되었다 (모두 VPC에).

모든 절차는 미국 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 솔루션 탱크 준비
<ol><li>6개의 탱크, 각 실험군(포도당, 매니톨 및 물)에 대해 2개를 얻습니다. 두 탱크 중 하나를 '하우징 탱크'(물고기를 수용할 것)라고 표시하고 다른 '용액 탱크'(솔루션을 보유)라고 표시합니다. 참고: 매니톨 처리 군은 삼투압 대조군이며, 수처리 군은 핸들링/응력 조절?...

<ol>
	<li>Rubinstein, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+from+disease+modeling+to+drug+discovery.">Zebrafish: from disease modeling to drug discovery.</a> Current Opinion in Drug Discovery and Development. 6 (2), 218-223 (2003).</li><li>Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+learning+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Associative learning in zebrafish (Danio rerio).</a> Methods in Cell Biology. 101, 249-270 (2011).</li><li>Goldsmith, J. R., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Think+small:+zebrafish+as+a+model+system+of+human+pathology.">Think small: zebrafish as a model system of human pathology.</a> BioMed Research International. , (2012).</li><li>Moss, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+the+pancreas+in+adult+zebrafish.">Regeneration of the pancreas in adult zebrafish.</a> Diabetes. 58 (8), 1844-1851 (2009).</li><li>Connaughton, V. P., Baker, C., Fonde, L., Gerardi, E., Slack, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternate+immersion+in+an+external+glucose+solution+differentially+affects+blood+sugar+values+in+older+versus+younger+zebrafish+adults.">Alternate immersion in an external glucose solution differentially affects blood sugar values in older versus younger zebrafish adults.</a> Zebrafish. 13 (2), 87-94 (2016).</li><li>Etuk, E. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+studying+diabetes+mellitus.">Animal models for studying diabetes mellitus.</a> Agriculture and Biology Journal of North America. 1 (2), 130-134 (2010).</li><li>Agardh, E., Bruun, A., Agardh, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+glial+cell+immunoreactivity+and+neuronal+cell+changes+in+rats+with+STZ-induced+diabetes.">Retinal glial cell immunoreactivity and neuronal cell changes in rats with STZ-induced diabetes.</a> Current Eye Research. 23 (4), 276-284 (2001).</li><li>Carmo, A., Cunha-Vaz, J. G., Carvalho, A. P., Lopes, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthase+activity+in+retinas+from+non-insulin-dependent+diabetic+Goto-Kakizaki+rats:+correlation+with+blood-retinal+barrier+permeability.">Nitric oxide synthase activity in retinas from non-insulin-dependent diabetic Goto-Kakizaki rats: correlation with blood-retinal barrier permeability.</a> Nitric Oxide. 4 (6), 590-596 (2000).</li><li>Ramsey, D. J., Ripps, H., Qian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+electrophysiological+study+of+retinal+function+in+the+diabetic+female+rat.">An electrophysiological study of retinal function in the diabetic female rat.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47 (11), 5116-5124 (2006).</li><li>Biessels, G. J., Gispen, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+diabetes+on+cognition:+what+can+be+learned+from+rodent+models.">The impact of diabetes on cognition: what can be learned from rodent models.</a> Neurobiology of Aging. 26 (1), 36-41 (2005).</li><li>Intine, R. V., Olsen, A. S., Sarras, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+zebrafish+model+of+diabetes+mellitus+and+metabolic+memory.">A zebrafish model of diabetes mellitus and metabolic memory.</a> Journal of Visualized Experiments. (72), e50232 (2013).</li><li>Sarras, M. P., Intine, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+zebrafish+as+a+disease+model+provides+a+unique+window+for+understanding+the+molecular+basis+of+diabetic+metabolic+memory.">Use of zebrafish as a disease model provides a unique window for understanding the molecular basis of diabetic metabolic memory.</a> Research on Diabetes. , (2013).</li><li>Gleeson, M., Connaughton, V., Arneson, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+hyperglycaemia+in+zebrafish+(Danio+rerio)+leads+to+morphological+changes+in+the+retina.">Induction of hyperglycaemia in zebrafish (Danio rerio) leads to morphological changes in the retina.</a> Acta Diabetologica. 44 (3), 157-163 (2007).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycemia+induces+memory+impairment+linked+to+increased+acetylcholinesterase+activity+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Hyperglycemia induces memory impairment linked to increased acetylcholinesterase activity in zebrafish (Danio rerio).</a> Behavioural Brain Research. 274, 319-325 (2014).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+impaired+glucose+metabolism+in+a+zebrafish+hyperglycemia+model.">Persistent impaired glucose metabolism in a zebrafish hyperglycemia model.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 171, 58-65 (2014).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycemia+alters+E-NTPDases,+ecto-5'-nucleotidase,+and+ectosolic+and+cytosolic+adenosine+deaminase+activities+and+expression+from+encephala+of+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Hyperglycemia alters E-NTPDases, ecto-5'-nucleotidase, and ectosolic and cytosolic adenosine deaminase activities and expression from encephala of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Purinergic Signaling. 12 (2), 211-220 (2016).</li><li>Ali, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptor+Degeneration+Accompanies+Vascular+Changes+in+a+Zebrafish+Model+of+Diabetic+Retinopathy.">Photoreceptor Degeneration Accompanies Vascular Changes in a Zebrafish Model of Diabetic Retinopathy.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 61 (2), 43 (2020).</li><li>Wiggenhauser, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Retinal+Angiogenesis+in+Hyperglycemic+pdx1-/-+Mutants.">Activation of Retinal Angiogenesis in Hyperglycemic pdx1-/- Mutants.</a> Diabetes. 69 (5), 1020-1031 (2020).</li><li>Chen, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+HMGB1+mediated+signalling+pathway+in+diabetic+retinopathy:+evidence+from+type+2+diabetic+rats+and+ARPE-19+cells+under+diabetic+condition.">Involvement of HMGB1 mediated signalling pathway in diabetic retinopathy: evidence from type 2 diabetic rats and ARPE-19 cells under diabetic condition.</a> Journal of Ophthalmology. 97, 1598-1603 (2013).</li><li>Costa, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+light+exposure,+pH,+osmolarity,+and+solvent+on+the+retinal+pigment+epithelial+toxicity+of+vital+dyes.">Effects of light exposure, pH, osmolarity, and solvent on the retinal pigment epithelial toxicity of vital dyes.</a> American Journal of Ophthalmology. 155, 705-712 (2013).</li><li>Alvarez, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+cone+photoreceptor+dysfunction+in+a+hyperglycemic+model+of+non-proliferative+diabetic+retinopathy.">Predominant cone photoreceptor dysfunction in a hyperglycemic model of non-proliferative diabetic retinopathy.</a> Disease Models and Mechanisms. 3, 236-245 (2010).</li><li>Fletcher, E. L., Phipps, J. A., Wilkinson-Berka, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfunction+of+retinal+neurons+and+glia+during+diabetes.">Dysfunction of retinal neurons and glia during diabetes.</a> Clinical and Experimental Optometry. 88, 132-145 (2005).</li><li>Fletcher, E. L., Phipps, J. A., Ward, M. M., Puthussery, T., Wilkinson-Berka, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+and+glial+abnormality+as+predictors+of+progression+of+diabetic+retinopathy.">Neuronal and glial abnormality as predictors of progression of diabetic retinopathy.</a> Current Pharmaceutical Design. 13, 2699-2712 (2007).</li><li>Agardh, E., Bruun, A., Agardh, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+glial+cell+immunoreactivity+and+neuronal+cell+changes+in+rats+with+STZ-+induced+diabetes.">Retinal glial cell immunoreactivity and neuronal cell changes in rats with STZ- induced diabetes.</a> Current Eye Research. 23, 276-284 (2001).</li><li>Barber, A. J., Antonetti, D. A., Gardner, T. W., Group, T. P. S. R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+expression+of+retinal+occludin+and+glial+fibrillary+acidic+protein+in+experimental+diabetes.">Altered expression of retinal occludin and glial fibrillary acidic protein in experimental diabetes.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41, 3561-3568 (2000).</li><li>Lieth, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+reactivity+and+impaired+glutamate+metabolism+in+short-term+experimental+diabetic+retinopathy.">Glial reactivity and impaired glutamate metabolism in short-term experimental diabetic retinopathy.</a> Diabetes. 47, 815-820 (1998).</li><li>Rungger-Brandle, E., Dosso, A. A., Leuenberger, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+reactivity,+an+early+feature+of+diabetic+retinopathy.">Glial reactivity, an early feature of diabetic retinopathy.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41, 1971-1980 (2000).</li><li>Zeng, X. X., Ng, Y. K., Ling, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+and+microglial+response+in+the+retina+of+streptozotocin-induced+diabetic+rats.">Neuronal and microglial response in the retina of streptozotocin-induced diabetic rats.</a> Visual Neuroscience. 17, 463-471 (2000).</li><li>Mizutani, M., Gerhardinger, C., Lorenzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muller+cell+changes+in+human+diabetic+retinopathy.">Muller cell changes in human diabetic retinopathy.</a> Diabetes. 47, 445-449 (1998).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+electroretinogram.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic electroretinogram.</a> Disease Models and Mechanisms. 11, (2018).</li><li>Hancock, H. A., Kraft, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potential+analysis+and+ERGs+of+normal+and+diabetic+rats.">Oscillatory potential analysis and ERGs of normal and diabetic rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45, 1002-1008 (2004).</li><li>Layton, C. J., Safa, R., Osborne, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+and+the+b-wave:+partial+masking+and+interdependence+in+dark+adaptation+and+diabetes+in+the+rat.">Oscillatory potentials and the b-wave: partial masking and interdependence in dark adaptation and diabetes in the rat.</a> Graefe's Archives for Clinical and Experimental Ophthalmology. 245, 1335-1345 (2007).</li><li>Li, Q., Zemel, E., Miller, B., Perlman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+retinal+damage+in+experimental+diabetes:+electroretinographical+and+morphological+observations.">Early retinal damage in experimental diabetes: electroretinographical and morphological observations.</a> Experimental Eye Research. 74, 615-625 (2002).</li><li>Kohzaki, K., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+inner+retinal+dysfunction+in+streptozotocin-induced+diabetic+rats.">Early inner retinal dysfunction in streptozotocin-induced diabetic rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49, 3595-3604 (2008).</li><li>Phipps, J. A., Yee, P., Fletcher, E. L., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+photoreceptor+dysfunction+in+diabetes:+activation,+deactivation,+and+dark+adaptation.">Rod photoreceptor dysfunction in diabetes: activation, deactivation, and dark adaptation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47, 3187-3194 (2006).</li></ol>

당뇨병은 전국적인 문제입니다. 연구에 따르면 2030년까지 약 4억 명이 당뇨병을 앓고 있습니다. 설치류 모델에서, 타입-2 DM은 유전 조작을 사용하여 공부됩니다. 쥐에서는, 주커 당뇨성 지방쥐 (ZDF), 그리고 오츠카 롱 에반스 도쿠시마 지방 쥐 (OLETF), 타입-2 DM10의효력에 대한 자세한 정보를 제공하고 있습니다. 또한, 고지방 식단은 고혈당증을 유도하기 위해 설치류에 사용되어 왔?...

제브라피쉬(다리오리리오)는질병과 인지1을모두 연구하기 위해 널리 사용되는 동물 모델이 되고 있다. 초기 발달 단계를 통해 유전 조작 및 배아 투명성의 용이성, 알려진 유전 적 기초로 인간 질병을 연구 할 수있는 주요 후보만들기. 예를 들어, 제브라피쉬는 홀트-오람 증후군, 심근병증, 구종구성 신장질환, 근이영양증 및 당뇨병 멜리투스(DM)를 연구하는 데 사용되어왔다 1. 또한, 제브라피쉬 모델은 종의 작은 크기, 유지 보수의 용이성, 높은 fecundity2,3때문에 이상적입니다.
제브라피시 췌장은 해부학적으로나 기능적으로 포유류 췌장4와유사하다. 따라서, 크기, 높은 fecundity 및 유사한 내분비 구조의 독특한 특성은 제브라피쉬를 DM 관련 합병증을 연구하기에 적합한 후보로 만듭니다. 제브라피시에서는, DM의 특징인 장기간 고혈당증을 유도하는 데 사용되는 두 가지 실험 방법이 있다: 포도당의 유입(모델링 타입 2) 및 인슐린 분비의 중단(modeling Type 1)5,6. 실험적으로, 인슐린 분비를 중지하기 위하여는, 췌장 β 세포는 연쇄토조토신 (STZ) 또는 알록산 주사를 사용하여 화학적으로 파괴될 수 있습니다. STZ는 설치류 및 제브라피시에 성공적으로 사용되어 망막병증7,8,9,인지 장애10,사지 재생11과관련된 합병증을 초래한다. 그러나, 제브라피시에서, β 세포는 치료 후 재생, 당뇨병 조건을 유지하기 위해 필요한 STZ의 "부스터 주사"를 일으키는12. 또는, 제브라피시의 췌장은6을제거할 수 있다. 이들은 모두 매우 침습적인 절차, 여러 주사 로 인해, 그리고 광범위 한 복구 시간.
반대로, 고혈당증은 외인성 포도당에 노출을 통해 비침습적으로 유도될 수 있다. 본 프로토콜에서,물고기는 24시간5,13또는 2주14,15,16에대해 지속적으로 고농축 포도당 용액에 침수된다. 외인성 포도당은 경피적으로, 섭취에 의해, 및/또는 아가미를 가로질러 올려진 혈당 수치를 초래합니다. 이 비침습적 기술은 인슐린 수준을 직접 조작하지 않기 때문에, 그것은 타입-2 DM을 유도하기 위하여 주장할 수 없습니다. 그러나, 타입-2 DM의 주요 현상의 한개인 고혈당증에 의해 유도된 합병증을 검사하기 위하여 이용될 수 있습니다.
최근에는 제브라피쉬 돌연변이pdx1-/-인간에서 타입-2 DM의 유전적 원인에 연결된 유전자인 췌장 및 십이지장 동종박스 1 유전자를 조작하여 개발되었다. 이 돌연변이를 사용하여, 연구원은 췌장 발달 중단, 높은 혈당을 복제하고, 고혈당 유도 당뇨병 망막증17,18을연구할 수 있었습니다.
이 논문에서는 교대침 침지 프로토콜을 사용하는 비침습적 고혈당 유도 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 후속 합병증이 관찰된 최대 8주 동안 고혈당 상태를 유지합니다. 간단히 말해서, 성인 얼룩말fish는 24 시간 동안 설탕 용액에 넣고 24 시간 동안 물 용액을 넣습니다. 외부 포도당 솔루션에 지속적인 몰입과는 달리 설탕과 물 사이의 교대로 당뇨병에서 혈당의 상승과 하락을 모방합니다. 번갈아 가는 포도당 프로토콜은 제브라피시가 높은 외부 포도당 조건을 보상할 수 없을 만큼 더 긴 기간 동안 고혈당증을 유도할 수 있게 합니다. 원칙의 증거로, 우리는 이 프로토콜을 사용하여 유도된 고혈당증이 망막 화학 및 생리학을 변경한다는 것을 보여주는 데이터를 제공합니다.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Airline Tubing</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5291863</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airpump</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5094984</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstones</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5149683</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270-5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-mannitol</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC125340050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freestyle Lite Meter</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B01LMOMLTU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freestyle Lite Strips</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B074ZN3H2Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Net</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5175115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tanks</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B0002APZO4</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

alternate immersion in glucose to produce prolonged hyperglycemia in zebrafish

Zebrafish(Danio rerio)는만성 고혈당증의 효과를 조사하는 훌륭한 모델이며, 유형 II 당뇨병 멜리투스 (T2DM)의 특징입니다. 이 대체 침지 프로토콜은 최대 8 주 동안 고혈당증을 유도하는 비침습적, 단계별 방법입니다. 성인 얼룩말 물고기는 설탕 (포도당)과 물에 각각 24 시간 동안 번갈아 노출됩니다. 제브라피쉬는 2주 동안 1% 포도당 용액에서 치료를 시작하고, 2주 동안 2% 용액을, 그리고 마지막으로 남은 4주 동안 3%의 용액을 치료합니다. 수처리(스트레스) 및 매니톨 처리(삼투성) 대조군과 비교하여 포도당 처리 된 제브라피쉬는 혈당 수치가 현저히 높습니다. 포도당 처리된 얼룩말fish는 4 주 및 8 주 고혈당증이 모두 달성 될 수 있음을 시사, 대조군의 3 배의 혈당 수치를 보여줍니다. 지속적인 고혈당증은 증가 된 글리아 피동 산성 단백질 (GFAP) 및 망막및 생리적 반응 감소의 증가 핵 인자 카파 B (NF-kB) 수준과 연관되었다, 뿐만 아니라 이 프로토콜을 시사 하는 인지 적자 질병 합병증을 모델링 하는 데 사용할 수 있습니다.

이프로토콜(도 1)을이용하여, 혈당 값은 4주 및 8주 치료(도2A)이후 크게 상승하며, 고혈당증은 수처리 및 매니톨 처리군 모두에서 대조군 평균을 3배로 정의한다. 수처리 제어는 매일 물 안팎으로 이송되어 응력/처리 제어를 제공합니다. 매니톨은 포도당과 같은 6탄소 설탕이지만 세포에 의해 채택되지 않기 때문에 체외 포도당 연구19,<...

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Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish

이 프로토콜은 비침습적으로 최대 8 주 동안 얼룩말 피시의 고혈당을 유도합니다. 이 프로토콜을 사용하여 고혈당증의 부작용에 대한 심층적인 연구가 이루어질 수 있습니다.

제브라피시에서 장기간 고혈당증을 생산하는 포도당에 대체 침수

Zebrafish (Danio rerio) are an excellent model to investigate the effects of chronic hyperglycemia, a hallmark of Type II Diabetes Mellitus (T2DM). This ...

이 프로토콜은 제2형 당뇨병에서 볼 수 있는 고혈당을 모방하는 상승 및 가을 패턴에서 얼룩말 물고기에 있는 고혈당증을 유도합니다. 이 기술의 주요 장점은 고혈당증이 고혈당어에서 관찰되는 변경의 원인이되도록 하는 비침습적 기술이라는 것입니다. 이 프로토콜은 잠재적으로 고혈당증의 합병증을 대상으로 치료 방법 또는 제약을 탐구하는 데 사용할 수 있습니다.이 프로토콜에는 많은 단계가 있지만 단계를 올바르게 수행하고 주의를 기울여 두 번째 특성이 되어야 합니다. 그러나, 항상 전체 프로토콜을 통해 부드럽고 인도적으로 동물을 치료하는 것을 기억하십시오. 먼저 각 실험 그룹에 대해 6개의 탱크를 설정합니다.총 물고기 수가 20리터 미만이고 4리터 탱크가 20리터 미만인 경우 두 리터 탱크를 사용하십시오. 두 탱크, 하우징 탱크 및 다른 용액 탱크 중 하나를 레이블. 수온을 유지하기 위해 탱크를 28 ~29도의 수조에 보관하십시오.첫날에는 물고기를 각각의 치료 용액에 24시간 동안 넣습니다. 둘째 날, 물고기를 치료 용액에서 물로 24 시간 동안 옮기. 셋째 날에는 물고기를 물에서 처리 솔루션으로 옮기습니다.실험의 나머지 부분에 대해 이러한 번갈아 노출을 계속합니다. 매일 물 처리 제어 물고기를 물에서 물로 옮기는 것입니다. 실험 기간 동안 매일 동일한 2시간 기간 내에 물고기를 먹이고 옮기는지 확인합니다.각 처리군에서 물고기를 하우징 탱크에서 표준 어망을 이용하여 해당 용액 탱크로 이송한다. 물고기가 들어 있는 탱크를 수조에 다시 놓고 공기석과 탱크 뚜껑을 교체합니다. 이 탱크는 이제 하우징 탱크이며 이전에 물고기를 잡은 탱크가 이제 솔루션 탱크입니다.오래된 용액을 버리고 탱크 뚜껑, 공기 선, 공기 돌 및 그물과 함께 탱크를 청소하여 포도당과 매니톨이 축적되는 것을 방지하십시오. 각 처리 조건에 물과 전용 스폰지를 사용하여 탱크를 올바르게 청소하십시오. 새로 청소된 용액 탱크를 종이 타월로 건조시키고 이 탱크를 사용하여 다음 날용액을 준비하십시오.다른 품목이 적절한 치료 그룹에 의해 건조되고 분리되었는지 확인하십시오. 설탕 용액을 준비하려면 각 솔루션 탱크에 2~4리터의 시스템 워터를 채웁니다. 최고 적재 스케일을 사용하여 정확한 양의 포도당과 매니톨을 측정하고 각 화학 물질에 대해 별도의 계량 보트를 분리합니다.계량 된 포도당 또는 매니톨 알리쿼트를 적절한 깨끗한 용액 탱크에 추가하십시오. 설탕이 완전히 녹을 때까지 별도의 유리 저어막대로 용액을 저어줍니다. 그런 다음 용액 탱크를 수조에 반환하고 해당 뚜껑으로 덮습니다.물 용액을 준비하려면 실험 용수로 실험 용액 탱크를 수조로 채우고 해당 뚜껑으로 덮습니다. 혈당 값은 4 주 및 8 주 포도 당 치료 후 크게 상승 했다. 고혈당증을 통해 처리된 물과 매니톨 처리군 모두에서 대조군 평균의 3배로 정의됩니다.고혈당증의 4 주 후에 집합된 망막 조직은 신경교 섬유 산성 단백질 또는 GFAP 수준에 있는 증가가 있었습니다. GFAP 발현은 당뇨병 성 망막병증에서 변경되는 망막에 있는 뮬러 신경교 세포에서 관찰됩니다. GFAP의 이러한 증가는 핵인자 카파B 수준의 증가와 관련이 있었습니다.유도된 고혈당증이 염증 반응 및 반응성 글리오증을 유발한다는 것을 시사합니다. ERG 는 4 주 간의 치료 후 기록매니톨 치료 제어에 비해 포도당 치료 망막에서 감소 된 반응을 확인했습니다. 광수용체와 양극성 세포 성분의 진폭은 고혈당어에서 감소하였다.이 절차는 고혈당증의 다른 시험에 의해 보충 될 수있다. 예를 들어, 메모리 분석법은 인지 적자를 보거나 시력 기반 합병증을 평가하기 위해 광두운동 반응과 같은 시각적 기반 반응을 기록하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술이 확립되면, 우리의 실험실은 얼룩말 물고기 모형에 있는 고혈당 유도한 합병증을 연구하기 위하여 그것을 사용할 수 있었습니다.우리는 처리의 4 주 후에, 상대적으로 빨리 이 합병증을 관찰했습니다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Human Fear Conditioning Conducted in Full Immersion 3-Dimensional Virtual Reality

전체 투입 3 차원 가상 현실에서 실시 인간 두려움 컨디셔닝

Fear conditioning is a widely used paradigm in non-human animal research to investigate the neural mechanisms underlying fear and anxiety. A major ...

연구

신경과학

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

개발 Zebrafish Forebrain에 Clonally 관련 신경 전구 세포의 시간 경과 라이브 영상

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

역행 형광 라벨이 확인 된 신경 세포의 표적 세포 외 단일 단위 기록을 허용<em&gt; 생체 내</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

급성 Hippocampal 슬라이스에 Synaptically-evoked Astroglial와 Neuronal 응답의 듀얼 Electrophysiological 레코딩

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust (Schistocerca Americana) Olfactory Circuits

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust Schistocerca Americana Olfactory Circuits

메뚜기에 신경 활동을 특성화하기 위해 다중 단위 기록 방법 (<em&gt; Schistocerca 아메리카나</em&gt;) 강한 회로

Detection and interpretation of olfactory cues are critical for the survival  of many organisms. Remarkably, species across phyla have strikingly similar ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

설치류 중추 신경계에 약물을 직접 심실 배달

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

마우스에 콜드 민감도 및 적응을 결정하기위한 간단하고 저렴한 방법

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

의 시냅틱 변조 분석<em&gt; 노랑 초파리</em&gt; 장시간 빛에 노출 후 광수

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...

A Revised Surgical Approach to Induce Endolymphatic Hydrops in the Guinea Pig

기니 피그에서 내인성 수압을 유도하는 개정 된 외과 접근 법

Endolymphatic hydrops is an enlargement of scala media that is most often associated with Meniere&#39;s disease, though the pathophysiologic mechanism(s) ...

Combining Behavior and EEG to Study the Effects of Mindfulness Meditation on Episodic Memory

행동과 EEG를 결합하여 마음 챙김 명상이 에피소드 기억에 미치는 영향 연구

Although there has been recent interest in how mindfulness meditation can affect episodic memory as well as brain structure and function, no study has ...