Name: alternate immersion in glucose to produce prolonged hyperglycemia in zebrafish
Uploaded: 2021-05-05T15:00:00
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Nos gustaría dar las gracias a VPC, CJR y MCP por el desarrollo de este protocolo. EMM recibió apoyo financiero de la American University College of Arts and Sciences Graduate Student Support para llevar a cabo esta investigación. Este trabajo también fue apoyado por un Premio Mellon de la Facultad de la Universidad Americana y la financiación a través de la American University College of Arts and Sciences (ambos a VPC).

Todos los procedimientos fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de american university.
1. Preparación de los tanques de solución
<ol><li>Obtenga seis tanques, dos para cada grupo experimental (glucosa, manitol y agua). Etiquete uno de los dos tanques como "tanque de alojamiento" (albergará el pescado) y etiquete el otro "tanque de solución" (sostendrá la solución). NOTA: El grupo de tratamiento de manitol es el control osmótico, y el grupo de tr...

<ol>
	<li>Rubinstein, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+from+disease+modeling+to+drug+discovery.">Zebrafish: from disease modeling to drug discovery.</a> Current Opinion in Drug Discovery and Development. 6 (2), 218-223 (2003).</li><li>Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+learning+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Associative learning in zebrafish (Danio rerio).</a> Methods in Cell Biology. 101, 249-270 (2011).</li><li>Goldsmith, J. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+hyperglycaemia+in+zebrafish+(Danio+rerio)+leads+to+morphological+changes+in+the+retina.">Induction of hyperglycaemia in zebrafish (Danio rerio) leads to morphological changes in the retina.</a> Acta Diabetologica. 44 (3), 157-163 (2007).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycemia+induces+memory+impairment+linked+to+increased+acetylcholinesterase+activity+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Hyperglycemia induces memory impairment linked to increased acetylcholinesterase activity in zebrafish (Danio rerio).</a> Behavioural Brain Research. 274, 319-325 (2014).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+impaired+glucose+metabolism+in+a+zebrafish+hyperglycemia+model.">Persistent impaired glucose metabolism in a zebrafish hyperglycemia model.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 171, 58-65 (2014).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycemia+alters+E-NTPDases,+ecto-5'-nucleotidase,+and+ectosolic+and+cytosolic+adenosine+deaminase+activities+and+expression+from+encephala+of+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Hyperglycemia alters E-NTPDases, ecto-5'-nucleotidase, and ectosolic and cytosolic adenosine deaminase activities and expression from encephala of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Purinergic Signaling. 12 (2), 211-220 (2016).</li><li>Ali, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptor+Degeneration+Accompanies+Vascular+Changes+in+a+Zebrafish+Model+of+Diabetic+Retinopathy.">Photoreceptor Degeneration Accompanies Vascular Changes in a Zebrafish Model of Diabetic Retinopathy.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 61 (2), 43 (2020).</li><li>Wiggenhauser, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Retinal+Angiogenesis+in+Hyperglycemic+pdx1-/-+Mutants.">Activation of Retinal Angiogenesis in Hyperglycemic pdx1-/- Mutants.</a> Diabetes. 69 (5), 1020-1031 (2020).</li><li>Chen, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+HMGB1+mediated+signalling+pathway+in+diabetic+retinopathy:+evidence+from+type+2+diabetic+rats+and+ARPE-19+cells+under+diabetic+condition.">Involvement of HMGB1 mediated signalling pathway in diabetic retinopathy: evidence from type 2 diabetic rats and ARPE-19 cells under diabetic condition.</a> Journal of Ophthalmology. 97, 1598-1603 (2013).</li><li>Costa, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+light+exposure,+pH,+osmolarity,+and+solvent+on+the+retinal+pigment+epithelial+toxicity+of+vital+dyes.">Effects of light exposure, pH, osmolarity, and solvent on the retinal pigment epithelial toxicity of vital dyes.</a> American Journal of Ophthalmology. 155, 705-712 (2013).</li><li>Alvarez, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+cone+photoreceptor+dysfunction+in+a+hyperglycemic+model+of+non-proliferative+diabetic+retinopathy.">Predominant cone photoreceptor dysfunction in a hyperglycemic model of non-proliferative diabetic retinopathy.</a> Disease Models and Mechanisms. 3, 236-245 (2010).</li><li>Fletcher, E. L., Phipps, J. A., Wilkinson-Berka, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfunction+of+retinal+neurons+and+glia+during+diabetes.">Dysfunction of retinal neurons and glia during diabetes.</a> Clinical and Experimental Optometry. 88, 132-145 (2005).</li><li>Fletcher, E. L., Phipps, J. A., Ward, M. M., Puthussery, T., Wilkinson-Berka, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+and+glial+abnormality+as+predictors+of+progression+of+diabetic+retinopathy.">Neuronal and glial abnormality as predictors of progression of diabetic retinopathy.</a> Current Pharmaceutical Design. 13, 2699-2712 (2007).</li><li>Agardh, E., Bruun, A., Agardh, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+glial+cell+immunoreactivity+and+neuronal+cell+changes+in+rats+with+STZ-+induced+diabetes.">Retinal glial cell immunoreactivity and neuronal cell changes in rats with STZ- induced diabetes.</a> Current Eye Research. 23, 276-284 (2001).</li><li>Barber, A. J., Antonetti, D. A., Gardner, T. W., Group, T. P. S. R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+expression+of+retinal+occludin+and+glial+fibrillary+acidic+protein+in+experimental+diabetes.">Altered expression of retinal occludin and glial fibrillary acidic protein in experimental diabetes.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41, 3561-3568 (2000).</li><li>Lieth, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+reactivity+and+impaired+glutamate+metabolism+in+short-term+experimental+diabetic+retinopathy.">Glial reactivity and impaired glutamate metabolism in short-term experimental diabetic retinopathy.</a> Diabetes. 47, 815-820 (1998).</li><li>Rungger-Brandle, E., Dosso, A. A., Leuenberger, P. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+and+microglial+response+in+the+retina+of+streptozotocin-induced+diabetic+rats.">Neuronal and microglial response in the retina of streptozotocin-induced diabetic rats.</a> Visual Neuroscience. 17, 463-471 (2000).</li><li>Mizutani, M., Gerhardinger, C., Lorenzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muller+cell+changes+in+human+diabetic+retinopathy.">Muller cell changes in human diabetic retinopathy.</a> Diabetes. 47, 445-449 (1998).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+electroretinogram.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic electroretinogram.</a> Disease Models and Mechanisms. 11, (2018).</li><li>Hancock, H. A., Kraft, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potential+analysis+and+ERGs+of+normal+and+diabetic+rats.">Oscillatory potential analysis and ERGs of normal and diabetic rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45, 1002-1008 (2004).</li><li>Layton, C. J., Safa, R., Osborne, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+and+the+b-wave:+partial+masking+and+interdependence+in+dark+adaptation+and+diabetes+in+the+rat.">Oscillatory potentials and the b-wave: partial masking and interdependence in dark adaptation and diabetes in the rat.</a> Graefe's Archives for Clinical and Experimental Ophthalmology. 245, 1335-1345 (2007).</li><li>Li, Q., Zemel, E., Miller, B., Perlman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+retinal+damage+in+experimental+diabetes:+electroretinographical+and+morphological+observations.">Early retinal damage in experimental diabetes: electroretinographical and morphological observations.</a> Experimental Eye Research. 74, 615-625 (2002).</li><li>Kohzaki, K., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+inner+retinal+dysfunction+in+streptozotocin-induced+diabetic+rats.">Early inner retinal dysfunction in streptozotocin-induced diabetic rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49, 3595-3604 (2008).</li><li>Phipps, J. A., Yee, P., Fletcher, E. L., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+photoreceptor+dysfunction+in+diabetes:+activation,+deactivation,+and+dark+adaptation.">Rod photoreceptor dysfunction in diabetes: activation, deactivation, and dark adaptation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47, 3187-3194 (2006).</li></ol>

La diabetes es un problema nacional. Los estudios muestran que para 2030, se estima que 400 millones de personas tendrán algún tipo de diabetes. En modelos de roedores, la DM tipo 2 se estudia mediante manipulación genética. En ratas, las ratas grasas diabéticas de Zucker (ZDF), y las ratas grasas de Otsuka Long-Evans Tokushima (OLETF), están proporcionando más información sobre los efectos del tipo - 2 DM10. Además, las dietas altas en grasas se han utilizado en roedores para inducir hip...

El pez cebra(Danio rerio)se está convirtiendo rápidamente en un modelo animal ampliamente utilizado para estudiar tanto la enfermedad como la cognición1. La facilidad de la manipulación genética y la transparencia embrionaria a través de las primeras etapas del desarrollo, los convierten en un candidato principal para estudiar enfermedades humanas con una base genética conocida. Por ejemplo, el pez cebra se ha utilizado para estudiar el síndrome de Holt-Oram, las cardiomiopatías, la enfermedad renal glomerulocística, la distrofia muscular y la diabetes mellitus (DM) entre otras enfermedades1. Además, el modelo de pez cebra es ideal debido al pequeño tamaño de la especie, la facilidad de mantenimiento y la alta fecundidad2,3.
El páncreas del pez cebra es anatómica y funcionalmente similar al páncreas demamíferos 4. Por lo tanto, las características únicas de tamaño, alta fecundidad y estructuras endocrinas similares hacen del pez cebra un candidato adecuado para estudiar las complicaciones relacionadas con la DM. En el pez cebra, existen dos métodos experimentales utilizados para inducir la hiperglucemia prolongada que es característica de la DM: una afluencia de glucosa (modelado tipo 2) y el cese de la secreción de insulina (modelado tipo 1)5,6. Experimentalmente, para parar la secreción de la insulina, las β-células pancreáticas se pueden destruir químicamente usando las inyecciones del Streptozotocin (STZ) o del Alloxan. STZ se ha utilizado con éxito en roedores y pez cebra, dando lugar a complicaciones asociadas conla retinopatía 7,8,9,deterioro cognitivo10,y la regeneración de extremidades11. Sin embargo, en el pez cebra, las células β se regeneran después del tratamiento, haciendo que las "inyecciones de refuerzo" de STZ sean necesarias para mantener las condiciones diabéticas12. Alternativamente, el páncreas del pez cebra se puede extirpar6. Estos son procedimientos altamente invasivos, debido a las múltiples inyecciones, y un extenso tiempo de recuperación.
Inversamente, la hiperglucemia se puede inducir no invasor con la exposición a la glucosa exógena. En este protocolo, los peces se sumergen en una solución de glucosa altamente concentrada durante 24 horas5,13 o continuamente durante 2 semanas14,15,16. La glucosa exógena se toma por vía transdérmica, por ingestión, y /o a través de las branquias, lo que resulta en niveles elevados de azúcar en la sangre. Dado que esta técnica no invasiva no manipula directamente los niveles de insulina, no puede pretender inducir dm tipo 2. Sin embargo, se puede utilizar para examinar las complicaciones inducidas por la hiperglucemia, que es uno de los principales síntomas de la DM tipo 2.
Recientemente, el mutante de pez cebra pdx1-/- fue desarrollado mediante la manipulación del gen homeobox 1 pancreático y duodenal, un gen vinculado a la causa genética del tipo 2 DM en humanos. Usando este mutante, los investigadores han podido replicar la interrupción del desarrollo pancreático, el alto nivel de azúcar en la sangre y estudiar la retinopatía diabética inducida por hiperglucemia17,18.
En este papel, describimos un método no invasor de la inducción de la hiperglucemia que utilice un protocolo de la inmersión que se alterna. Este protocolo mantiene condiciones hyperglycemic por hasta 8 semanas con las complicaciones subsecuentes observadas. En resumen, los peces cebra adultos se colocan en una solución de azúcar durante 24 horas y luego en una solución de agua durante 24 horas. A diferencia de la inmersión continua en soluciones externas de glucosa, la alternancia de días entre el azúcar y el agua imita el aumento y la caída del azúcar en la sangre en la diabetes. Un protocolo de glucosa alterna, además, permite que la hiperglucemia sea inducida por períodos de tiempo más largos, ya que el pez cebra no es tan capaz de compensar las altas condiciones externas de glucosa. Como prueba del principio, proporcionamos los datos que muestran que la hiperglucemia inducida usando este protocolo altera química y fisiología retinianas.

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		<tr>
			<td>Airline Tubing</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5291863</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airpump</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5094984</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstones</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5149683</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270-5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-mannitol</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC125340050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freestyle Lite Meter</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B01LMOMLTU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freestyle Lite Strips</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B074ZN3H2Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Net</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5175115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tanks</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B0002APZO4</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

alternate immersion in glucose to produce prolonged hyperglycemia in zebrafish

Los peces cebra(Danio rerio)son un excelente modelo para investigar los efectos de la hiperglucemia crónica, un sello distintivo de la Diabetes Mellitus Tipo II (DM2). Este protocolo alternativo de inmersión es un método no invasivo y gradual para inducir la hiperglucemia hasta por ocho semanas. Los peces cebra adultos se exponen alternativamente al azúcar (glucosa) y al agua durante 24 horas cada uno. El pez cebra comienza el tratamiento en una solución de glucosa al 1% durante 2 semanas, luego una solución al 2% durante 2 semanas y, finalmente, una solución al 3% durante las 4 semanas restantes. En comparación con los controles tratados con agua (estrés) y manitol (osmóticos), el pez cebra tratado con glucosa tiene niveles de azúcar en la sangre significativamente más altos. El pez cebra tratado con glucosa muestran niveles de azúcar en la sangre de 3 veces el de los controles, lo que sugiere que después de cuatro y ocho semanas se puede lograr la hiperglucemia. La hiperglucemia continua fue asociada a la proteína ácida fibrilosa glial creciente (GFAP) y a los niveles nucleares crecientes de la Kappa B (N-F-kB) del factor en retina y a respuestas fisiológicas disminuidas, así como los déficits cognoscitivos que sugerían que este protocolo se puede utilizar para modelar complicaciones de la enfermedad.

Utilizando este protocolo(Figura 1),los valores de azúcar en sangre se elevan significativamente después de 4 semanas y 8 semanas de tratamiento(Figura 2A),con hiperglucemia definida como 3 veces los promedios de control de los grupos tratados con agua y manitol. Los controles tratados con agua se transfieren dentro y fuera del agua diariamente, proporcionando un control de estrés / manejo. El manitol sirve como un control osmótico en estudios de glucosa in ...

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Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish

Este protocolo no invasiva induce hiperglucemia en el pez cebra durante un tiempo de hasta 8 semanas. Usando este protocolo, un estudio profundizado de los efectos nocivos de la hiperglucemia puede ser hecho.

Inmersión alternativa en glucosa para producir hiperglucemia prolongada en el pez cebra

Zebrafish (Danio rerio) are an excellent model to investigate the effects of chronic hyperglycemia, a hallmark of Type II Diabetes Mellitus (T2DM). This ...

Este protocolo induce hiperglucemia en pescados de la cebra en un patrón de la subida y de la caída que mímico la hiperglucemia que se considera en el tipo diabetes dos. La principal ventaja de esta técnica es que se trata de una técnica no invasiva que permite asegurar que la hiperglucemia es la causa de las alteraciones observadas en los peces hiperglucémicos. Este protocolo se podría potencialmente utilizar para explorar las avenidas terapéuticas o los productos farmacéuticos que apuntan complicaciones de la hiperglucemia.Este protocolo tiene muchos pasos, pero cuando los pasos se siguen correctamente y con cuidado, debería convertirse rápidamente en una segunda naturaleza. Recuerde, sin embargo, siempre tratar a los animales con suavidad y humanidad a lo largo de todo el protocolo. Comience por establecer seis tanques, dos para cada grupo experimental.Utilice tanques de dos litros, si el número total de peces es inferior a 20 y tanques de cuatro litros si el número total de peces es superior a 20. Etiquete uno de los dos tanques, el tanque de alojamiento y el otro tanque de solución. Mantenga los tanques en un baño de agua a 28 a 29 grados Centígrados para mantener la temperatura del agua.El primer día, coloque los peces en sus respectivas soluciones de tratamiento durante 24 horas. El segundo día, transfiera los peces de sus soluciones de tratamiento al agua durante 24 horas. El tercer día, transfiera los peces del agua a las soluciones de tratamiento.Continúe con esta exposición alterna durante el resto del experimento. Transferencia diaria de peces de control tratados con agua de agua a agua. Asegúrese de que los peces sean alimentados y transferidos dentro de la misma ventana de dos horas cada día durante la duración del experimento.Transfiera los peces de cada grupo de tratamiento del tanque de alojamiento al tanque de solución correspondiente utilizando una red de pescado estándar. Coloque el tanque que contiene los peces de nuevo en el baño de agua y reemplace la piedra de aire y la tapa del tanque. Este tanque es ahora el tanque de alojamiento y el tanque que anteriormente contenía el pez es ahora el tanque de solución.Deseche la solución vieja y limpie el tanque junto con las tapas del tanque, las líneas de aire, las piedras de aire y las redes para evitar la acumulación de glucosa y manitol. Use agua y una esponja dedicada para cada condición de tratamiento para limpiar adecuadamente los tanques. Seque los tanques de solución recién limpiados con una toalla de papel y prepare las soluciones para el día siguiente usando este tanque.Asegúrese de que los demás elementos estén secos y separados por los grupos de tratamiento apropiados. Para preparar las soluciones de azúcar, llene cada tanque de solución con dos o cuatro litros de agua del sistema. Mida la cantidad correcta de glucosa y manitol usando una báscula de carga superior y botes de pesaje separados para cada producto químico.Agregue la alícuota de glucosa o manitol pesada al tanque de solución limpia apropiado. Revuelva las soluciones con barras de agitación de vidrio separadas hasta que los azúcares se disuelvan por completo. A continuación, devuelva los tanques de solución al baño de agua y cúbralos con sus tapas correspondientes.Para preparar la solución de agua, llene los tanques experimentales con agua del sistema Devuelva estos tanques de solución al baño de agua y cúbralos con sus tapas correspondientes. Los valores del azúcar de sangre fueron elevados perceptiblemente después de tratamientos de la glucosa de cuatro semanas y de ocho semanas. Con hiperglucemia definida como tres veces los promedios de control de los grupos tratados con agua y manitol tratados.El tejido retiniano recogido después de cuatro semanas de hiperglucemia tenía un aumento en niveles ácidos fibrilosos glial de la proteína o de GFAP. La expresión de GFAP se observa en las células gliales de Mueller en la retina, que se alteran en la retinopatía diabética. Este aumento en GFAP fue asociado a un aumento en niveles nucleares del kappaB del factor.Sugiriendo que la hiperglucemia inducida acciona una respuesta inflamatoria y un gliosis reactivo. Las grabaciones del ERGIO después de cuatro semanas del tratamiento identificaron una respuesta disminuida en las retinas tratadas glucosa comparadas a los controles tratados manitol. Las amplitudes del fotorreceptor y de los componentes bipolares de la célula fueron disminuidas en pescados hyperglycemic.Este procedimiento se puede complementar con otras pruebas de hiperglucemia. Por ejemplo, un ensayo de memoria se puede utilizar para observar los déficits cognitivos o registrar respuestas basadas en la visión, como la respuesta optomotora para evaluar las complicaciones basadas en la visión. Una vez establecida esta técnica, nuestro laboratorio pudo utilizarla para estudiar complicaciones inducidas por hiperglucemia en el modelo de pez cebra.Observamos estas complicaciones relativamente rápidamente, después de cuatro semanas del tratamiento.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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