Name: alternate immersion in glucose to produce prolonged hyperglycemia in zebrafish
Uploaded: 2021-05-05T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish at JoVE.com

Bu protokolün geliştirilmesi için VPC, CJR ve MCP'yi kabul etmek istiyoruz. EMM, bu araştırmayı yürütmek için Amerikan Üniversitesi Fen Edebiyat Fakültesi Lisansüstü Öğrenci Desteği'nden finansal destek aldı. Bu çalışma aynı zamanda bir Amerikan Üniversitesi Fakültesi Mellon Ödülü ve Amerikan Üniversitesi Sanat ve Bilim Koleji (her ikisi de VPC'ye) aracılığıyla finanse edildi.

Tüm prosedürler Amerikan Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı.
1. Çözelti Tanklarının Hazırlanması
<ol><li>Her deney grubu için iki tane (glikoz, mannitol ve su) olmak üzere altı tank edinin. İki tanstan birini 'muhafaza tankı' olarak etiketle (balıkları barındıracak) ve diğer 'çözelti tankını' etiketle (çözümü tutacak). NOT: Mannitol arıtma grubu ozmotik kontrol, su arıtma grubu ise elleçleme/stres kontrolüdür. T...

<ol>
	<li>Rubinstein, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+from+disease+modeling+to+drug+discovery.">Zebrafish: from disease modeling to drug discovery.</a> Current Opinion in Drug Discovery and Development. 6 (2), 218-223 (2003).</li><li>Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associative+learning+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Associative learning in zebrafish (Danio rerio).</a> Methods in Cell Biology. 101, 249-270 (2011).</li><li>Goldsmith, J. R., Jobin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Think+small:+zebrafish+as+a+model+system+of+human+pathology.">Think small: zebrafish as a model system of human pathology.</a> BioMed Research International. , (2012).</li><li>Moss, J. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+the+pancreas+in+adult+zebrafish.">Regeneration of the pancreas in adult zebrafish.</a> Diabetes. 58 (8), 1844-1851 (2009).</li><li>Connaughton, V. P., Baker, C., Fonde, L., Gerardi, E., Slack, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternate+immersion+in+an+external+glucose+solution+differentially+affects+blood+sugar+values+in+older+versus+younger+zebrafish+adults.">Alternate immersion in an external glucose solution differentially affects blood sugar values in older versus younger zebrafish adults.</a> Zebrafish. 13 (2), 87-94 (2016).</li><li>Etuk, E. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+studying+diabetes+mellitus.">Animal models for studying diabetes mellitus.</a> Agriculture and Biology Journal of North America. 1 (2), 130-134 (2010).</li><li>Agardh, E., Bruun, A., Agardh, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+glial+cell+immunoreactivity+and+neuronal+cell+changes+in+rats+with+STZ-induced+diabetes.">Retinal glial cell immunoreactivity and neuronal cell changes in rats with STZ-induced diabetes.</a> Current Eye Research. 23 (4), 276-284 (2001).</li><li>Carmo, A., Cunha-Vaz, J. G., Carvalho, A. P., Lopes, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitric+oxide+synthase+activity+in+retinas+from+non-insulin-dependent+diabetic+Goto-Kakizaki+rats:+correlation+with+blood-retinal+barrier+permeability.">Nitric oxide synthase activity in retinas from non-insulin-dependent diabetic Goto-Kakizaki rats: correlation with blood-retinal barrier permeability.</a> Nitric Oxide. 4 (6), 590-596 (2000).</li><li>Ramsey, D. J., Ripps, H., Qian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+electrophysiological+study+of+retinal+function+in+the+diabetic+female+rat.">An electrophysiological study of retinal function in the diabetic female rat.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47 (11), 5116-5124 (2006).</li><li>Biessels, G. J., Gispen, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+diabetes+on+cognition:+what+can+be+learned+from+rodent+models.">The impact of diabetes on cognition: what can be learned from rodent models.</a> Neurobiology of Aging. 26 (1), 36-41 (2005).</li><li>Intine, R. V., Olsen, A. S., Sarras, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+zebrafish+model+of+diabetes+mellitus+and+metabolic+memory.">A zebrafish model of diabetes mellitus and metabolic memory.</a> Journal of Visualized Experiments. (72), e50232 (2013).</li><li>Sarras, M. P., Intine, R. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+zebrafish+as+a+disease+model+provides+a+unique+window+for+understanding+the+molecular+basis+of+diabetic+metabolic+memory.">Use of zebrafish as a disease model provides a unique window for understanding the molecular basis of diabetic metabolic memory.</a> Research on Diabetes. , (2013).</li><li>Gleeson, M., Connaughton, V., Arneson, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+hyperglycaemia+in+zebrafish+(Danio+rerio)+leads+to+morphological+changes+in+the+retina.">Induction of hyperglycaemia in zebrafish (Danio rerio) leads to morphological changes in the retina.</a> Acta Diabetologica. 44 (3), 157-163 (2007).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycemia+induces+memory+impairment+linked+to+increased+acetylcholinesterase+activity+in+zebrafish+(Danio+rerio).">Hyperglycemia induces memory impairment linked to increased acetylcholinesterase activity in zebrafish (Danio rerio).</a> Behavioural Brain Research. 274, 319-325 (2014).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+impaired+glucose+metabolism+in+a+zebrafish+hyperglycemia+model.">Persistent impaired glucose metabolism in a zebrafish hyperglycemia model.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part B: Biochemistry and Molecular Biology. 171, 58-65 (2014).</li><li>Capiotti, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperglycemia+alters+E-NTPDases,+ecto-5'-nucleotidase,+and+ectosolic+and+cytosolic+adenosine+deaminase+activities+and+expression+from+encephala+of+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Hyperglycemia alters E-NTPDases, ecto-5'-nucleotidase, and ectosolic and cytosolic adenosine deaminase activities and expression from encephala of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Purinergic Signaling. 12 (2), 211-220 (2016).</li><li>Ali, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptor+Degeneration+Accompanies+Vascular+Changes+in+a+Zebrafish+Model+of+Diabetic+Retinopathy.">Photoreceptor Degeneration Accompanies Vascular Changes in a Zebrafish Model of Diabetic Retinopathy.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 61 (2), 43 (2020).</li><li>Wiggenhauser, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Retinal+Angiogenesis+in+Hyperglycemic+pdx1-/-+Mutants.">Activation of Retinal Angiogenesis in Hyperglycemic pdx1-/- Mutants.</a> Diabetes. 69 (5), 1020-1031 (2020).</li><li>Chen, X. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+HMGB1+mediated+signalling+pathway+in+diabetic+retinopathy:+evidence+from+type+2+diabetic+rats+and+ARPE-19+cells+under+diabetic+condition.">Involvement of HMGB1 mediated signalling pathway in diabetic retinopathy: evidence from type 2 diabetic rats and ARPE-19 cells under diabetic condition.</a> Journal of Ophthalmology. 97, 1598-1603 (2013).</li><li>Costa, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+light+exposure,+pH,+osmolarity,+and+solvent+on+the+retinal+pigment+epithelial+toxicity+of+vital+dyes.">Effects of light exposure, pH, osmolarity, and solvent on the retinal pigment epithelial toxicity of vital dyes.</a> American Journal of Ophthalmology. 155, 705-712 (2013).</li><li>Alvarez, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+cone+photoreceptor+dysfunction+in+a+hyperglycemic+model+of+non-proliferative+diabetic+retinopathy.">Predominant cone photoreceptor dysfunction in a hyperglycemic model of non-proliferative diabetic retinopathy.</a> Disease Models and Mechanisms. 3, 236-245 (2010).</li><li>Fletcher, E. L., Phipps, J. A., Wilkinson-Berka, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfunction+of+retinal+neurons+and+glia+during+diabetes.">Dysfunction of retinal neurons and glia during diabetes.</a> Clinical and Experimental Optometry. 88, 132-145 (2005).</li><li>Fletcher, E. L., Phipps, J. A., Ward, M. M., Puthussery, T., Wilkinson-Berka, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+and+glial+abnormality+as+predictors+of+progression+of+diabetic+retinopathy.">Neuronal and glial abnormality as predictors of progression of diabetic retinopathy.</a> Current Pharmaceutical Design. 13, 2699-2712 (2007).</li><li>Agardh, E., Bruun, A., Agardh, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+glial+cell+immunoreactivity+and+neuronal+cell+changes+in+rats+with+STZ-+induced+diabetes.">Retinal glial cell immunoreactivity and neuronal cell changes in rats with STZ- induced diabetes.</a> Current Eye Research. 23, 276-284 (2001).</li><li>Barber, A. J., Antonetti, D. A., Gardner, T. W., Group, T. P. S. R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+expression+of+retinal+occludin+and+glial+fibrillary+acidic+protein+in+experimental+diabetes.">Altered expression of retinal occludin and glial fibrillary acidic protein in experimental diabetes.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41, 3561-3568 (2000).</li><li>Lieth, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+reactivity+and+impaired+glutamate+metabolism+in+short-term+experimental+diabetic+retinopathy.">Glial reactivity and impaired glutamate metabolism in short-term experimental diabetic retinopathy.</a> Diabetes. 47, 815-820 (1998).</li><li>Rungger-Brandle, E., Dosso, A. A., Leuenberger, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+reactivity,+an+early+feature+of+diabetic+retinopathy.">Glial reactivity, an early feature of diabetic retinopathy.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 41, 1971-1980 (2000).</li><li>Zeng, X. X., Ng, Y. K., Ling, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+and+microglial+response+in+the+retina+of+streptozotocin-induced+diabetic+rats.">Neuronal and microglial response in the retina of streptozotocin-induced diabetic rats.</a> Visual Neuroscience. 17, 463-471 (2000).</li><li>Mizutani, M., Gerhardinger, C., Lorenzi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muller+cell+changes+in+human+diabetic+retinopathy.">Muller cell changes in human diabetic retinopathy.</a> Diabetes. 47, 445-449 (1998).</li><li>Tanvir, Z., Nelson, R., DeCicco-Skinner, K., Connaughton, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+month+of+hyperglycemia+alters+spectral+responses+of+the+zebrafish+photopic+electroretinogram.">One month of hyperglycemia alters spectral responses of the zebrafish photopic electroretinogram.</a> Disease Models and Mechanisms. 11, (2018).</li><li>Hancock, H. A., Kraft, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potential+analysis+and+ERGs+of+normal+and+diabetic+rats.">Oscillatory potential analysis and ERGs of normal and diabetic rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 45, 1002-1008 (2004).</li><li>Layton, C. J., Safa, R., Osborne, N. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oscillatory+potentials+and+the+b-wave:+partial+masking+and+interdependence+in+dark+adaptation+and+diabetes+in+the+rat.">Oscillatory potentials and the b-wave: partial masking and interdependence in dark adaptation and diabetes in the rat.</a> Graefe's Archives for Clinical and Experimental Ophthalmology. 245, 1335-1345 (2007).</li><li>Li, Q., Zemel, E., Miller, B., Perlman, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+retinal+damage+in+experimental+diabetes:+electroretinographical+and+morphological+observations.">Early retinal damage in experimental diabetes: electroretinographical and morphological observations.</a> Experimental Eye Research. 74, 615-625 (2002).</li><li>Kohzaki, K., Vingrys, A. J., Bui, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+inner+retinal+dysfunction+in+streptozotocin-induced+diabetic+rats.">Early inner retinal dysfunction in streptozotocin-induced diabetic rats.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49, 3595-3604 (2008).</li><li>Phipps, J. A., Yee, P., Fletcher, E. L., Vingrys, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rod+photoreceptor+dysfunction+in+diabetes:+activation,+deactivation,+and+dark+adaptation.">Rod photoreceptor dysfunction in diabetes: activation, deactivation, and dark adaptation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 47, 3187-3194 (2006).</li></ol>

Diyabet ülke çapında bir sorundur. Çalışmalar, 2030'a kadar yaklaşık 400 milyon kişinin bir tür diyabete sahip olacağını göstermektedir. Kemirgen modellerinde, Tip 2 DM genetik manipülasyon kullanılarak incelenir. Sıçanlarda, Zucker diyabetik yağlı sıçanlar (ZDF) ve Otsuka Long-Evans Tokushima yağlı sıçanları (OLETF), Tip 2 DM10'unetkileri hakkında daha fazla bilgi sağlar. Ek olarak, kemirgenlerde hiperglisemiyi teşvik etmek için yüksek yağlı diyetler kullanılmı...

Zebra balığı (Danio rerio) hızla hem hastalığı hem de bilişi incelemek için yaygın olarak kullanılan bir hayvan modeli haline geliyor1. Erken gelişim aşamalarında genetik manipülasyon ve embriyonik şeffaflığın kolaylığı, onları bilinen bir genetik temele sahip insan hastalıklarını incelemek için birincil aday haline getirir. Örneğin, zebra balığı Holt-Oram sendromu, kardiyomiyopatiler, glomerülosit böbrek hastalığı, kas distrofisi ve diabetes mellitus (DM) diğer hastalıkların yanı sıra1. Ek olarak, zebra balığı modeli, türlerin küçük boyutu, bakım kolaylığı ve yüksek doğurganlık2,3nedeniyle idealdir.
Zebra balığı pankreası hem anatomik hem de işlevsel olarakmemelipankreasına benzer 4 . Bu nedenle, büyüklüğün benzersiz özellikleri, yüksek doğurganlık ve benzeri endokrin yapılar zebra balığını DM ile ilgili komplikasyonları incelemek için uygun bir aday haline getirir. Zebra balıklarında, DM'nin karakteristiği olan uzun süreli hiperglisemiyi teşvik etmek için kullanılan iki deneysel yöntem vardır: glikoz akını (modelleme Tip 2) ve insülin salgısının kesilmesi (modelleme Tip 1)5,6. Deneysel olarak, insülin salgısını durdurmak için, pankreas β hücreleri Streptozotocin (STZ) veya Alloxan enjeksiyonları kullanılarak kimyasal olarak yok edilebilir. STZ kemirgenlerde ve zebra balıklarında başarıyla kullanılmıştır, bu da retinopati7, 8,9,bilişsel bozukluklar10ve uzuv yenilenmesi11ile ilişkili komplikasyonlara neden olur. Bununla birlikte, zebra balıklarında, β hücreleri tedaviden sonra yenilenir ve diyabetik koşulları korumak için STZ'nin "güçlendirici enjeksiyonlarının" gerekli olmasına neden olur12. Alternatif olarak, zebra balığının pankreası çıkarılabilir6. Bunlar, çoklu enjeksiyonlar ve kapsamlı iyileşme süresi nedeniyle hem son derece invaziv prosedürlerdir.
Tersine, hiperglisemi eksojen glikoz maruziyeti yoluyla noninvaziv olarak indüklenebilir. Bu protokolde, balıklar 24 saat 5 , 13 veya sürekli olarak 2 haftaboyunca 14 ,15,16için yüksek konsantre bir glikoz çözeltisinebatırılır. Ekzojen glikoz transdermally, yutularak ve/veya solungaçlar boyunca alınarak kan şekeri seviyesinin yükselmesine neden olur. Bu non-invaziv teknik doğrudan insülin seviyelerini manipüle etmediğinden, Tip 2 DM'yi indüklediğini iddia edemez. Bununla birlikte, Tip 2 DM'nin ana semptomlarından biri olan hiperglisemi tarafından indüklenen komplikasyonları incelemek için kullanılabilir.
Son zamanlarda, zebra balığı mutant pdx1-/- insanlarda Tip 2 DM'nin genetik nedeni ile bağlantılı bir gen olan pankreas ve duodenal homeobox 1 geni manipüle ederek geliştirilmiştir. Bu mutant kullanarak, araştırmacılar pankreas gelişimi bozulmasını, yüksek kan şekerini çoğaltabildiler ve hiperglisemi kaynaklı diyabetik retinopatiyi incelemeyi başardılar17,18.
Bu yazıda, alternatif bir daldırma protokolü kullanan noninvaziv hiperglisemi indüksiyon yöntemini açıklıyoruz. Bu protokol, sonraki komplikasyonların gözlenmesiyle hiperglipsemik durumları 8 haftaya kadar korur. Kısacası, yetişkin zebra balıkları 24 saat boyunca bir şeker çözeltisine ve daha sonra 24 saat boyunca bir su çözeltisine yerleştirilir. Dış glikoz çözeltilerine sürekli daldırmanın aksine, şeker ve su arasındaki alternatif günler diyabette kan şekerinin yükselmesini ve düşmesini taklit eder. Alternatif bir glikoz protokolü ayrıca hiperglisemi'nin daha uzun süre indüklenir, çünkü zebra balığı yüksek dış glikoz koşullarını telafi edememektedir. İlke kanıtı olarak, bu protokol kullanılarak indüklenen hipergliseminin retina kimyasını ve fizyolojisini değiştirdiğini gösteren veriler sunuyoruz.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Airline Tubing</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5291863</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airpump</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5094984</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Airstones</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5149683</td>
			<td>This can be used in the tank to circulate air</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270-5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-mannitol</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC125340050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freestyle Lite Meter</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B01LMOMLTU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freestyle Lite Strips</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B074ZN3H2Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Net</td>
			<td>petsmart</td>
			<td>5175115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tanks</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B0002APZO4</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

alternate immersion in glucose to produce prolonged hyperglycemia in zebrafish

Zebra balığı (Danio rerio) Tip II Diabetes Mellitus'un (T2DM) ayırt edici özelliği olan kronik hiperglisemi etkilerini araştırmak için mükemmel bir modeldir. Bu alternatif daldırma protokolü, sekiz haftaya kadar hiperglisemiyi indüklemenin noninvaziv, adım adım bir yöntemidir. Yetişkin zebra balıkları dönüşümlü olarak her biri 24 saat boyunca şekere (glikoz) ve suya maruz kalır. Zebra balığı tedaviye 2 hafta boyunca% 1 glikoz çözeltisinde, daha sonra 2 hafta boyunca% 2 çözeltide ve son olarak kalan 4 hafta için% 3'lük bir çözeltide başlar. Su ile tedavi edilen (stres) ve mannitolle işlenmiş (ozmotik) kontrollerle karşılaştırıldığında, glikozla tedavi edilen zebra balıkları önemli ölçüde daha yüksek kan şekeri seviyelerine sahiptir. Glikozla tedavi edilen zebra balığı, kontrollerin 3 katı kan şekeri seviyesi gösterir ve hem dört hem de sekiz hafta sonra hiperglisemi elde edilebileceğini düşündürmektedir. Sürekli hiperglisemi, retinada glial fibril asidik protein (GFAP) ve artan nükleer faktör Kappa B (NF-kB) düzeyleri ve fizyolojik yanıtların azalmasının yanı sıra bu protokolün hastalık komplikasyonlarını modellemek için kullanılabileceğini düşündüren bilişsel eksikliklerle ilişkiliydi.

Bu protokol kullanılarak (Şekil 1), kan şekeri değerleri hem 4 haftalık hem de 8 haftalık tedaviden sonra önemli ölçüde yükselir (Şekil 2A), hiperglisemi hem su ile arıtılmış hem de mannitol ile işlenmiş gruplardan kontrol ortalamalarının 3 katı olarak tanımlanır. Su ile arıtılması kontroller günlük olarak suya girip çıkar ve dışarı aktarılarak stres/elleçleme kontrolü sağlanmaktadır. Mannitol, in vitro glikoz çalışmalar?...

Watch this Scientific Journal Video about Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish at JoVE.com

Alternate Immersion in Glucose to Produce Prolonged Hyperglycemia in Zebrafish

Bu protokol, zebra balıklarında 8 haftaya kadar hiperglisemiyi noninvaziv olarak indükler. Bu protokol kullanılarak hiperglisemi'nin olumsuz etkilerinin derinlemesine incelenmesi sağlanabilir.

Zebra Balıklarında Uzun Süreli Hiperglisemi Üretmek için Glikozda Alternatif Daldırma

Zebrafish (Danio rerio) are an excellent model to investigate the effects of chronic hyperglycemia, a hallmark of Type II Diabetes Mellitus (T2DM). This ...

Bu protokol, zebra balıklarında tip iki diyabette görülen hiperglisemiyi taklit eden bir yükselme ve düşme düzeninde hiperglisemiye neden olur. Bu tekniğin temel avantajı, hiperglisemi balığında gözlenen herhangi bir değişikliğin nedeninin hiperglisemi olmasını mümkün kılan noninvaziv bir teknik olmasıdır. Bu protokol potansiyel olarak hiperglisemi komplikasyonlarını hedefleyen terapötik yolları veya farmasötikleri keşfetmek için kullanılabilir.Bu protokolün birçok adımı vardır, ancak adımlar doğru ve özenle izlendiğinde, hızla ikinci doğaya dönüşmelidir. Bununla birlikte, tüm protokol boyunca hayvanlara her zaman nazik ve insancıla davranmayı unutmayın. Her deney grubu için iki tane olmak üzere altı tank kurarak başlayın.Toplam balık sayısı 20'den azsa iki litrelik tank ve toplam balık sayısı 20'den fazlaysa dört litrelik tank kullanın. İki tanstan birini, gövde tankını ve diğer çözelti tankını etiketle. Su sıcaklığını korumak için tankları 28 ila 29 santigrat derecede bir su banyosunda tutun.İlk gün, balıkları 24 saat boyunca kendi tedavi çözeltilerine yerleştirin. İkinci gün, balıkları arıtma çözeltilerinden 24 saat boyunca suya aktarın. Üçüncü gün, balıkları sudan arıtma çözeltilerine aktarın.Deneyin geri kalanı için bu alternatif pozlama devam edin. Su arıtılması kontrol balıklarının günlük olarak sudan suya aktarılması. Deney süresince balıkların her gün aynı iki saatlik süre içinde beslendiğinden ve aktarıldığından emin olun.Her tedavi grubundaki balıkları standart bir balık ağı kullanarak muhafaza tankından ilgili çözelti tankına aktarın. Balıkları içeren tankı tekrar su banyosuna yerleştirin ve hava taşı ve tank kapağını değiştirin. Bu tank artık gövde tankı ve daha önce balığı tutan tank artık çözüm tankı.Glikoz ve mannitol birikmesini önlemek için eski çözeltiyi atın ve tankın kapakları, hava hatları, hava taşları ve ağlarla birlikte temizleyin. Tankları düzgün bir şekilde temizlemek için her arıtma durumu için su ve özel bir sünger kullanın. Yeni temizlenen çözelti tanklarını bir kağıt havlu ile kurulayın ve bu tankı kullanarak ertesi güne göre çözeltileri hazırlayın.Diğer eşyaların uygun tedavi grupları tarafından kurutulduğından ve ayrıldığından emin olun. Şeker çözeltilerini hazırlamak için, her çözelti tankını iki veya dört litre sistem suyu ile doldurun. Her kimyasal için üst yükleme ölçeği ve ayrı tartım tekneleri kullanarak doğru miktarda glikoz ve mannitol ölçün.Tartılmış glikoz veya mannitol aliquot'ı uygun temiz çözelti tankına ekleyin. Şekerler tamamen çözünene kadar çözeltileri ayrı cam karıştırma çubuklarıyla karıştırın. Daha sonra çözelti tanklarını su banyosuna geri verin ve ilgili kapaklarıyla örtün.Su çözeltisini hazırlamak için deneysel tankları sistem suyuyla doldurun Bu çözelti tanklarını su banyosuna geri verin ve ilgili kapaklarıyla örtün. Kan şekeri değerleri hem dört haftalık hem de sekiz haftalık glikoz tedavilerinden sonra önemli ölçüde yükselmiştir. Hiperglisemi ile hem su arıtılmış hem de mannitol ile tedavi edilen gruplardan kontrol ortalamalarının üç katı olarak tanımlanır.Dört haftalık hiperglisemi sonrası toplanan retina dokusunda glial fibril asidik protein veya GFAP seviyelerinde artış vardı. GFAP ekspresyolü, diyabetik retinopatide değiştirilen retinadaki Mueller glial hücrelerinde görülür. GFAP'taki bu artış, nükleer faktör kappaB seviyelerindeki artışla ilişkiliydi.İndüklenen hiperglisemi inflamatuar bir yanıtı ve reaktif gliozu tetiklediğini düşündürmektedir. Dört haftalık tedaviden sonra yapılan ERG kayıtlarında, glikozla tedavi edilen retinalarda mannitol ile tedavi edilen kontrollere kıyasla azalmış bir yanıt tespit edildi. Hipergliptik balıklarda hem fotoreceptör hem de bipolar hücre bileşenlerinin genlikleri azaldı.Bu prosedür diğer hiperglisemi testleri ile desteklenebilir. Örneğin, bir bellek testi bilişsel eksikliklere bakmak veya görme tabanlı komplikasyonları değerlendirmek için optomotor yanıtı gibi görsel tabanlı yanıtları kaydetmek için kullanılabilir. Bu teknik kurulduktan sonra laboratuvarımız zebra balık modelinde hiperglisemi kaynaklı komplikasyonları incelemek için kullanabildi.Dört haftalık tedaviden sonra bu komplikasyonları nispeten hızlı bir şekilde gözlemledik.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Human Fear Conditioning Conducted in Full Immersion 3-Dimensional Virtual Reality

Tam Daldırma 3-Boyutlu Sanal Gerçeklik Yapılan İnsan Fear İklimlendirme

Fear conditioning is a widely used paradigm in non-human animal research to investigate the neural mechanisms underlying fear and anxiety. A major ...

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Gelişmekte olan Zebra balığı önbeyin klonal olarak ilişkilidir Sinir Progenitör Hücreler Zaman atlamalı Canlı Görüntüleme

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograd Floresan Etiketleme Belirlenen Nöronlar gelen Hedefli Hücre dışı Tek ünitesi Kayıt izin verir<em&gt; In vivo</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Akut Hipokampal Dilimler içinde Synaptically-uyarılmış astroglial ve Nöronal Cevaplarının İkili Elektrofizyolojik Kayıtlar

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust (Schistocerca Americana) Olfactory Circuits

Multi-unit Recording Methods to Characterize Neural Activity in the Locust Schistocerca Americana Olfactory Circuits

Locust Sinir Aktivitesi Karakterize Multi-ünite Kayıt Yöntemleri (<em&gt; Schistocerca Americana</em&gt;) Olfaktör Devreler

Detection and interpretation of olfactory cues are critical for the survival  of many organisms. Remarkably, species across phyla have strikingly similar ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

Kemirgen Merkezi Sinir Sistemi İlaçların doğrudan Intraventriküler teslim

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Fareler Soğuk Hassasiyeti ve Uyum belirlenmesi için Basit ve ucuz Yöntem

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Analyzing Synaptic Modulation of Drosophila melanogaster Photoreceptors after Exposure to Prolonged Light

Synaptic Modülasyon Analizi<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Uzun süreli ışığa maruz kaldıktan sonra Fotoreseptörler

The nervous system has the remarkable ability to adapt and respond to various stimuli. This neural adjustment is largely achieved through plasticity at ...

A Revised Surgical Approach to Induce Endolymphatic Hydrops in the Guinea Pig

Kobayda Endolenfatik Hidrops İndüklemek için Gözden Geçirilmiş Cerrahi Yaklaşım

Endolymphatic hydrops is an enlargement of scala media that is most often associated with Meniere&#39;s disease, though the pathophysiologic mechanism(s) ...

Combining Behavior and EEG to Study the Effects of Mindfulness Meditation on Episodic Memory

Farkındalık Meditasyonunun Epizodik Hafıza Üzerindeki Etkilerini İncelemek için Davranış ve EEG'yi Birleştirmek

Although there has been recent interest in how mindfulness meditation can affect episodic memory as well as brain structure and function, no study has ...