Name: a syngeneic murine model of endometriosis using naturally cycling mice
Uploaded: 2020-11-24T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить членов лаборатории Рейзеса за их критический обзор и понимание во время подготовки рукописи, а также ядра визуализации и гистологии в Научно-исследовательском институте Лернера за их помощь в сборе и анализе данных. Эта работа была поддержана за счет внутреннего грантового финансирования через Комитет по исследовательской программе в клинике Кливленда и внешнего гранта через Общество репродуктивных исследований и Bayer. Исследования в лаборатории Рейзеса также финансируются через VeloSano Bike to Cure, Центр передового опыта в области гинекологического рака и через кафедру Лоры Дж. Клиника Кливленда владеет авторским правом на Рисунок 1 и Рисунок 2.

ПРИМЕЧАНИЕ: Использование животных в этом исследовании было одобрено Институциональным комитетом по уходу за животными и их использованию (IACUC) в Кливлендском научно-исследовательском институте клиники Лернера. Все общедоступные стандарты ухода за животными и их использования были в...

<ol>
	<li>Zondervan, K. T., Becker, C. M., Missmer, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> England Journal of Medicine. 382 (13), 1244-1256 (2020).</li><li>Schwartz, K., Llarena, N. C., Rehmer, J. M., Richards, E. G., Falcone, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+pharmacotherapy+in+the+treatment+of+endometriosis+across+the+lifespan.">The role of pharmacotherapy in the treatment of endometriosis across the lifespan.</a> Expert Opinion on Pharmacotherapy. 21 (8), 893-903 (2020).</li><li>Giudice, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice.+Endometriosis.">Clinical practice. Endometriosis.</a> New England Journal of Medicine. 362 (25), 2389-2398 (2010).</li><li>D'Hooghe, T. M., Debrock, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis,+retrograde+menstruation+and+peritoneal+inflammation+in+women+and+in+baboons.">Endometriosis, retrograde menstruation and peritoneal inflammation in women and in baboons.</a> Human Reproduction Update. 8 (1), 84-88 (2002).</li><li>Ahn, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+and+immune+dysfunction+in+endometriosis.">Pathophysiology and immune dysfunction in endometriosis.</a> BioMed Research International. 2015, (2015).</li><li>Falcone, T., Flyckt, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+management+of+endometriosis.">Clinical management of endometriosis.</a> Obstetrics and Gynecology. 131 (3), 557-571 (2018).</li><li>Vercellini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+between+endometriosis+stage,+lesion+type,+patient+characteristics+and+severity+of+pelvic+pain+symptoms:+a+multivariate+analysis+of+over+1000+patients.">Association between endometriosis stage, lesion type, patient characteristics and severity of pelvic pain symptoms: a multivariate analysis of over 1000 patients.</a> Human Reproduction. 22 (1), 266-271 (2007).</li><li>Bulun, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometriosis.">Endometriosis.</a> Endocrine Reviews. 40 (4), 1048-1079 (2019).</li><li>Brueggmann, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+three-dimensional+in+vitro+models+of+ovarian+endometriosis.">Novel three-dimensional in vitro models of ovarian endometriosis.</a> Journal of Ovarian Research. 7, 17 (2014).</li><li>Dodds, K. N., Beckett, E. A. H., Evans, S. F., Hutchinson, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lesion+development+is+modulated+by+the+natural+estrous+cycle+and+mouse+strain+in+a+minimally+invasive+model+of+endometriosis.">Lesion development is modulated by the natural estrous cycle and mouse strain in a minimally invasive model of endometriosis.</a> Biology of Reproduction. 97 (6), 810-821 (2017).</li><li>Martinez, J., Bisbal, V., Marin, N., Cano, A., G&#243;mez, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+monitoring+of+lesion+size+in+a+heterologous+mouse+model+of+endometriosis.">Noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (144), (2019).</li><li>Pelch, K. E., Sharpe-Timms, K. L., Nagel, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+surgically-induced+endometriosis+by+auto-transplantation+of+uterine+tissue.">Mouse model of surgically-induced endometriosis by auto-transplantation of uterine tissue.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (59), e3396 (2012).</li><li>Nishimoto-Kakiuchi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+endometriosis+in+cynomolgus+monkeys+as+a+clinically+relevant+experimental+model.">Spontaneous endometriosis in cynomolgus monkeys as a clinically relevant experimental model.</a> Human Reproduction. 33 (7), 1228-1236 (2018).</li><li>Nair, H. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+model+of+human+endometriosis+by+induced+unopposed+estrogenicity+in+baboons.">An efficient model of human endometriosis by induced unopposed estrogenicity in baboons.</a> Oncotarget. 7 (10), 10857-10869 (2016).</li><li>Lagan&#224;, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translational+animal+models+for+endometriosis+research:+a+long+and+windy+road.">Translational animal models for endometriosis research: a long and windy road.</a> Annals of Translational Medicine. 6 (22), 431 (2018).</li><li>Bellofiore, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=First+evidence+of+a+menstruating+rodent:+the+spiny+mouse+(Acomys+cahirinus).">First evidence of a menstruating rodent: the spiny mouse (Acomys cahirinus).</a> Amercian Journal of Obstetrics and Gynecology. 216 (1), 1-11 (2017).</li><li>Bruner-Tran, K. L., Mokshagundam, S., Herington, J. L., Ding, T., Osteen, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+experimental+endometriosis:+identifying+mechanisms+of+disease+and+therapeutic+targets.">Rodent models of experimental endometriosis: identifying mechanisms of disease and therapeutic targets.</a> Current Women's Health Reviews. 14 (2), 173-188 (2018).</li><li>Bilotas, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interplay+between+endometriosis+and+pregnancy+in+a+mouse+model.">Interplay between endometriosis and pregnancy in a mouse model.</a> PloS One. 10 (4), 0124900 (2015).</li><li>Peterse, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+women:+a+laparoscopic+mouse+model+for+endometriosis.">Of mice and women: a laparoscopic mouse model for endometriosis.</a> Journal of Minimally Invasive Gynecology. 25 (4), 578-579 (2018).</li><li>Richards, E. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KLF11+is+an+epigenetic+mediator+of+DRD2/dopaminergic+signaling+in+endometriosis.">KLF11 is an epigenetic mediator of DRD2/dopaminergic signaling in endometriosis.</a> Reproductive Sciences. 224 (8), 1129-1138 (2017).</li><li>Jones, R. L., Lang, S. A., Kendziorski, J. A., Greene, A. D., Burns, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+Mouse+Model+of+Experimentally+Induced+Endometriosis+to+Evaluate+and+Compare+the+Effects+of+Bisphenol+A+and+Bisphenol+AF+Exposure.">Use of a Mouse Model of Experimentally Induced Endometriosis to Evaluate and Compare the Effects of Bisphenol A and Bisphenol AF Exposure.</a> Environmental Health Perspectives. 126 (12), 127004 (2018).</li><li>Greaves, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+endometriosis+mimics+human+phenotype+and+reveals+insights+into+the+inflammatory+contribution+of+shed+endometrium.">A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium.</a> The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).</li><li>Nothnick, W. B., Graham, A., Holbert, J., Weiss, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-451+deficiency+is+associated+with+altered+endometrial+fibrinogen+alpha+chain+expression+and+reduced+endometriotic+implant+establishment+in+an+experimental+mouse+model.">miR-451 deficiency is associated with altered endometrial fibrinogen alpha chain expression and reduced endometriotic implant establishment in an experimental mouse model.</a> PloS One. 9 (6), 100336 (2014).</li></ol>

Наше исследование показывает, что эндометриоз может быть надежно индуцирован у мышей, не требуя использования овариэктомии и / или операции по выживанию, и что внематочные поражения эндометрия могут быть идентифицированы и количественно определены с ?...

Эндометриоз является загадочным заболеванием женского репродуктивного тракта со значительным финансовым и оздоровительным бременем для женщин1,2. Этиология эндометриоза не полностью понята, и было предложено множество объяснений, включая целовую метаплазию, эмбриональные остатки Мюллера, набор клеток-прогениторов костного мозга и ретроградную менструацию3. Хотя могут быть задействованы многочисленные аспекты этих предлагаемых механизмов, и ни одно объяснение не может объяснить все формы заболевания, ведущей моделью патогенеза эндометриоза является ретроградная менструация. Ретроградная менструация – это прохождение менструальных стоков по фаллопиевым трубам и в брюшинную полость; Подсчитано, что 90% менструаций женщин регулярно подвергаются ретроградным менструациям4,5. Учитывая это обыденное явление ретроградной менструации, почему эндометриоз развивается только у подгруппы женщин, неясно5. Чтобы лучше понять этиологию этого заболевания, прямые исследования на людях невозможны, и исследования на животных оправданы.
Эндометриоз является проблемой как для лечения, так и для изучения. Распространенность заболевания неизвестна, но оценивается в 10%1. В то время как некоторые продвинутые типы эндометриоза могут быть точно идентифицированы с помощью неинвазивной визуализации, окончательный диагноз достигается только путем гистопатологического анализа хирургически полученных образцов биопсии; поражения, которые визуально кажутся больными, на самом деле могут быть фиброзом или рубцеванием от других причин6. Тяжесть и степень заболевания не коррелирует с симптоматикой7.
Поражения эндометриоза состоят из гетерогенных типов клеток и популяций, которые взаимодействуют сложными способами в микросреде, что ограничивает полезность клеточных моделей8,9. Модели in vivo существуют, но они имеют присущие им проблемы и ограничения10,11,12. Модели приматов идеальны, но часто неосуществимы13,14,15. Немногие млекопитающие, не являющиеся приматами, менструают и у них развивается эндометриоз спонтанно16. Модели эндометриоза на грызунах существуют, но каждая из них имеет ограничения17. Многие из этих моделей требуют операции по выживанию для наложения швов или имплантации ткани эндометрия в стенку донора-реципиента или кишечник, добавляя техническую сложность, потребность в анестезии и смешивая иммунные факторы от самой операции18,19,20. Кроме того, многие модели требуют овариэктомии и добавок эстрогена; увеличивая выход поражения, это увеличивает время, затраты и дополнительную операцию по выживанию. Модели внутрибрюшинных (IP) инъекций не требуют анестезии или операции по выживанию, и эти модели логически имитируют ретроградную менструацию лучше, чем шовные модели21,22,23. Однако большинство моделей ИС подвержены большей изменчивости в месте поражения из-за случайного рассеивания фрагментов эндометрия после инъекции и, следовательно, большей погрешности в идентификации и измерении поражения.
Здесь мы представляем мышиную модель эндометриоза, которая объединяет несколько особенностей существующих моделей эндометриоза в новую, упрощенную и эффективную систему, которая опирается на микроскопическую количественную оценку вместо субъективной классификации.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Supplies for injecting PMSG into donor mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Tuberculin syringe with 27G needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-87</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pregnant mare serum gonadotropin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>9002-70-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for necropsy of donor mouse and tissue processing</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6&#8221; serrated forceps, curved tip</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72993-6C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol solution</td>
			<td>Pharmco</td>
			<td>33000HPLCCS4L</td>
			<td>70% solution dilute ethyl acetate 200 proof</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical balance</td>
			<td>Mettler Toledo</td>
			<td>ME54TE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon dioxide</td>
			<td>TriGas Supplier</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissecting tray</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S14000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>No. 10 disposable scalpel</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC9999403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, curved</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72941</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors, straight</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72940</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Leica SE 4</td>
			<td>For tissue dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Institutional core facility supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical instrument sterilization tray</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>66112-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing dishes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-202-103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for injecting into recipient mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 cc syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>301025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18 G needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>148265d</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 uL pipette tip</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-707-422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double distilled water</td>
			<td>Institutional core facility supplies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Latex bulb</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-448-21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro cover glass slip</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48366-067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope slide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard light microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DM IL</td>
			<td>For evaluating vaginal cytology smears</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplies for harvesting tissue from recipient mouse</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Buffered formalin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SF100-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy foam pads</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-038-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Precision Digital Calipers</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>62065-40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Processing/embedding cassettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-272416</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a syngeneic murine model of endometriosis using naturally cycling mice

Эндометриоз является основной причиной тазовых болей и бесплодия. Определяется наличием ткани эндометрия во внематочном расположении. Разработка новых методов лечения и диагностических инструментов для эндометриоза была ограничена отчасти из-за проблем в изучении заболевания. За пределами приматов немногие млекопитающие менструают, и ни у одного из них не развивается спонтанный эндометриоз. Модели грызунов популярны, но требуют искусственной индукции эндометриоза, причем многие из них используют либо иммунокомпрометированных мышей, либо хирургически индуцированное заболевание. В последнее время больше внимания уделяется моделям, включающим внутрибрюшинную инъекцию. Мы представляем мышиную модель эндометриоза, которая объединяет несколько особенностей существующих моделей эндометриоза в новую, упрощенную систему, которая опирается на микроскопическую количественную оценку вместо субъективной оценки. В этой модели мы выполняем гормональную стимуляцию мышей-доноров, внутрибрюшинную инъекцию, систематическое абдоминальное обследование и сбор тканей, а также гистологическую количественную оценку, которая может быть выполнена и проверена в любое время после некропсии. Эта модель требует минимальных ресурсов и обучения; не требует экспертизы лаборантов в хирургии выживания мысов или в выявлении грубых эндометриотических поражений; может быть использован у иммунокомпрометированных, иммунокомпетентных и/или мутантных мышей; и надежно создает эндометриотические поражения, которые гистологически согласуются с эндометриотической болезнью человека.

Для первоначального экспериментального доказательства концепции донорский эндометрий от мышей RFP вводили мышам-реципиентам дикого типа. Окрашивание H&E выявило гистопатологическое подтверждение классической архитектуры поражения эндометриозом(рисунок 3А). Флуоресце...

Watch this Scientific Journal Video about A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice at JoVE.com

A Syngeneic Murine Model of Endometriosis using Naturally Cycling Mice

Многие модели эндометриоза на грызунах ограничены технической сложностью, воспроизводимостью и / или потребностью в животных с ослабленным иммунитетом или специальных мышах-репортерах. Мы представляем упрощенную систему индукции поражения с использованием любой экспериментальной мыши с независимо проверяемой, объективной системой оценки и без необходимости овариэктомии или операции по выживанию.

Сингенная мышиная модель эндометриоза с использованием естественно циклических мышей

Endometriosis is a leading cause of pelvic pain and infertility. It is defined by the presence of endometrial tissue in extrauterine locations. The ...

Our mirroring model of endometriosis is a simplified and efficient system that integrates the best features of existing models. And perhaps most importantly, relies on microscopic quantification in lieu of subjective grading. Modeling endometriosis can be difficult because there can be many confounding factors and sources of bias.In our approach, endometriosis is induced without ovariectomy or survival surgery. And the endometrial lesions are objectively quantified. These Innovations provide a highly reliable and reproducible animal model of endometriosis that can be used to further endometriosis disease research.To facilitate ongoing estrous cycling, place urine soaked bedding from a male mouse cage into the recipient female mouse cage periodically throughout development, and again at 72 hours before endometrial tissue transplant. When the donor female mice are between 22 to 24 days old, use a one milliliter syringe equipped with a 25 to 27 gauge needle to subcutaneously inject two international units of pregnant mare serum gonadotropin in 200 microliters of sterile saline into the lower mouse abdomen. 38 to 42 hours after injection, use dissecting scissors to make a shallow transverse incision through the skin and subcutaneous tissue of the euthanized mouse at the midline and use blunt traction to open the skin on either side of the incision.Before removing the uterus, trim the adjacent connective tissue and transact each uterine horn just below its respective fallopian tubes, then transect the cervix to allow removal of the entire uterus and block. Inspect the uterus carefully, removing any additional peripheral fat or connective tissue and place the uterus in a droplet of cold PBS on a Petri dish for weighing. Transect each horn across the uterine fundus as close to the fundus as possible and place the dish under a dissecting microscope.Placing one blade of the dissecting scissors inside the lumen of the first horn, cut along the major axis of the tube keeping in mind, which side is this serosa and which side is the epithelium. Then use forceps to grasp and peel away the endometrial layer and mince the tissue into 10 to 12, one by one millimeter fragments. Alternatively, mince the tissue into one by one millimeter pieces without separating off the myometrium.Then place the tissues into 500 microliters of saline in a new Petri dish and harvest the endometrium from the second uterine horn as demonstrated. For peritoneal delivery of the tissue fragments into the recipient animal, use the blunt end of a one milliliter syringe to collect the tissue pieces. A total volume of one milliliter of tissue and saline should be collected.Attach an 18 gauge needle to the syringe and gently depress the plunger to load the fluid into the needle. A mock injection into the Petri dish can be performed to ensure that all of the tissue will pass through the needle tip. Either before or after the injection, use a bulb syringe to administer 10 microliters of saline to obtain a vaginal smear of the recipient animal for estrous cycle documentation.Holding the syringe at a 45 degree angle, intraperitoneally inject the fragments. If fragments remain after the injection, draw an additional 200 microliters of saline into the syringe to allow the rest of the pragmatists to be injected. Once you're assured of no bleeding or complications, place the mouse back in the home cage with a normal diet.Approximately 21 days after fragment injection, spray the recipient mouse abdomen was 70%ethanol, intent the skin to allow creation of a superficial subcutaneous incision to bluntly open the abdomen. Perform a complete survey of the abdominal wall and peritoneum, pancreas and mesenteric fat and para uterine connective fat and tissue for gross lesions. Harvest each region of tissue entirely and place the dissected tissue samples into an appropriate labeled cassette for formalin fixation and processing according to standard protocols.Then section the formalin blocks onto two slides per tissue area at two uniform depths. To score the endometriosis lesions, scan the tissue sections at a 40 times magnification and archive the slides. After scanning, use an appropriate digital slide reading software program to define and mark the longest distance between the edges of each endometriosis lesion.A continuous lesion is defined by glands surrounded by stroma. The line does not necessarily traverse only the endometriosis tissue, but the two end points must be connected by continuous stroma and or glands. Make a second line, 90 degrees across the first line as demonstrated.If multiple non-contiguous lesions are encountered, give each their own X and Y measurements. Calculate the final score for each slide as the summation of the areas of each lesion and use the larger of the scores from the two sections on each slide as the final score for that tissue region. Then total the scores from each region to give the final microscopic score for that animal.In this representative sample, histopathologic analysis after donor endometrium injection revealed a classic architecture of endometriosis lesion. Fluorescent microscopy of the tissue sample confirmed that the lesion originated from the donor. It is important to note that the macroscopic examination for lesions alone is not sufficient for the quantification of the endometriosis disease burden as the gross lesions observed in these representative samples were ultimately determined not to be endometriosis upon histological examination.Collection of all the tissue within the designated regions reduces bias by allowing for a systematic, objective approach to lesion quantification. Once this reliable and reproducible model has been achieved, researchers can use it to investigate a multitude of endometriosis pathways and therapies.

Research

JoVE Journal

Medicine

Mouse Model of Surgically-induced Endometriosis by Auto-transplantation of Uterine Tissue

Мышиной модели индуцированного хирургического Эндометриоз через Авто-трансплантации тканей матки

Endometriosis is a chronic, painful disease whose etiology remains unknown. Furthermore, treatment of endometriosis can require laparoscopic removal of ...

Murine Model of Wound Healing

Мышиной модели заживления ран

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Мышиный шейки Трансплантация сердца Модель с использованием модифицированного манжеты Техника

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

A Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Мышиной модели субарахноидального кровоизлияния

In this video publication a standardized mouse model of subarachnoid  hemorrhage (SAH) is presented. Bleeding is induced by endovascular Circle of  Willis ...

A Preclinical Murine Model of Hepatic Metastases

Доклинические мышиной модели метастазами в печени

Numerous murine models have been developed to study human cancers and advance the understanding of cancer treatment and development. Here, a preclinical, ...

A "Patient-Like" Orthotopic Syngeneic Mouse Model of Hepatocellular Carcinoma Metastasis

А &quot;Пациент-лайк&quot; Ортотопическая Сингенная мышь Модель гепатоцеллюлярной карциномы Метастазы

The majority of cancer-related deaths are caused by the metastasis of the cancer rather than the primary tumor itself. Yet, the underlying mechanisms of ...

Injection of Syngeneic Murine Melanoma Cells to Determine Their Metastatic Potential in the Lungs

Инъекция Сингенная мышиной меланомы клеток с целью определения их метастатического потенциала в Легких

Approximately 90% of human cancer deaths are linked to metastasis.  Despite the prevalence and relative harm of metastasis, therapeutics for treatment or ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Мышиных дистальной колостомы, Роман модель колита утечки в мышей C57BL/6

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Изометрические сократимости измерение верхней брыжеечной артерии мыши, с помощью проволоки миография

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique

Murine цервикальной аорты трансплантации модель с использованием модифицированных non-Suture манжеты Техника

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. ...