Name: covalent labeling with diethylpyrocarbonate for studying protein higher-order structure by mass spectrometry
Uploaded: 2021-06-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Covalent Labeling with Diethylpyrocarbonate for Studying Protein Higher-Order Structure by Mass Spectrometry at JoVE.com

저자는 그랜트 R01 GM075092에서 건강의 국립 연구소 (NIH)의 지원을 인정합니다. 여기에 설명된 데이터 중 일부를 취득하는 데 사용되는 열 궤도 랩 퓨전 질량 분광계는 국립 보건 원 보조금 S10OD010645의 기금으로 획득되었습니다.

1. 단백질 및 시약 제제
참고: 이 프로토콜에는 DEPC로 단백질을 라벨링하기 위한 예제 워크플로우가 포함됩니다. 나열된 일부 조건 및 시약 농도는 선택의 단백질에 따라 다를 수 있습니다.
<ol><li>1.5 mL 마이크로센심분리기 튜브에 모든 시약 솔루션을 준비합니다.</li>
	<li>pH 7.4에서 10mM 3-(N-morpholino)의 프로파네설포닉산(MOPS) 완충제에서, 일반적으로 수십 개의 μM 범위에서 원하?...

중요한 단계 신뢰할 수 있는 라벨링 결과를 보장하기 위해 실험 설계에 관한 몇 가지 사항을 고려해야 합니다. 첫째, 단백질 라벨링을 최대화하기 위해, DEPC와 반응하고 라벨링 범위를 낮출 수 있기 때문에 강력한 뉴클레오필성 그룹(예를 들어, Tris)을 가진 완충을 피할 필요가 있다. 또한 이러한 버퍼가 라벨이 부착된 잔류물로 반응하여 라벨을 제거하여 구조 정보의 손실을 초래할 수 있?...

단백질은 거의 모든 생리 학적 과정에서 필수적인 생체 분자입니다. 단백질이 수행하는 다양한 기능은 그들이 채택하는 구조와 다른 생체 분자와의 상호 작용 때문에 가능합니다. 더 깊은 수준에서 단백질 기능을 이해하려면 생화학 적 및 생물리학적 도구가 이러한 중요한 구조적 특징과 상호 작용을 해명해야합니다. 전통적으로 X선 결정학, 극저온 전자 현미경 검사법 및 핵 자기 공명(NMR) 분광기는 단백질 구조를 드러내기 위해 원하는 원자 수준의 세부 사항을 제공했습니다. 그러나, 수많은 단백질 시스템은 가난한 결정화 행동, 제한된 단백질 가용성, 과도한 샘플 이질성 또는 분자량 제한 때문에 이러한 기술에 의해 심문될 수 없습니다. 따라서 이러한 한계를 극복하는 새로운 분석 방법이 등장했습니다. 단백질 구조 정보를 제공할 수 있는 새로운 기술 중에는 질량 분석법이 있습니다.
질량 분석법(MS)은 분자의 질량 대전(m/z) 비율을 측정하므로 단백질의 질량에 원하는 구조 정보를 인코딩하여 단백질 고차 구조 정보를 얻어야 합니다. 이 정보를 인코딩하기 위한 몇 가지 접근법이 개발되었으며, 여기에는 수소-중수소 교환(HDX)1,2,3,4,화학적 교차연결(XL)5,6,및 공유 라벨링(CL)7,8,9,10을포함한다. HDX에서 백본 아마이드 수소는 용매 접근성 및 H 결합 정도에 의존하는 비율로 약간 더 대규모 중음판으로 교환됩니다. HDX의 범위는 질량 분광계에 의해 이러한 단편을 분리하고 측정하기 전에 펩티드 단편으로 단백질을 빠르게 소화하거나 하향식 실험에서 단백질을 해리시킴으로써 국소화될 수 있다. 교환 속도를 결정하는 것은 단백질 역학에 대한 추가 통찰력을 제공합니다. HDX는 백 교환과 관련된 과제와 재현성을 극대화하기 위한 특수 장비의 필요성에도 불구하고 단백질 구조를 특성화하는 데 유용한 도구로 입증되었습니다. XL-MS에서 단백질은 주어진 단백질 내 또는 두 단백질 사이 인접한 잔류물 측사슬을 공유적으로 연결하는 양기능 시약으로 반응합니다. 이를 통해 XL-MS는 단백질 구조를 특성화하는 데 사용할 수 있는 거리 제약조건을 제공할 수 있습니다. 교차 연결된 단백질의 영역은 액체 크로마토그래피(LC)-MS 분석 뒤에 단백질 분해성 소화에 의해 확인될 수 있다. XL-MS는 내부 세포를 포함하여 다양한 단백질 복합체를 연구하는 데 사용되어 온 다목적 도구이지만 XL 제품의 식별은 어렵고 특수 소프트웨어가 필요합니다.
CL-MS는 단백질 구조와 상호 작용을 연구하기 위하여 상호 보완적이고 때때로 대체MS 기지를 둔 공구로 최근에 등장했습니다. CL-MS에서 단백질 또는 단백질 복합체는 용매 에 노출된 측망(도1)과반응할 수 있는 모노 기능 시약으로 공유적으로 변형된다. 상이한 조건하에서 단백질 또는 단백질 복합체의 변형 정도를 비교함으로써, 형태 변화, 결합 부위 및 단백질 단백질 계면이 드러나게 될 수 있다. CL 반응 후, 현장별 정보는 종종 단일 아미노산 수준에서 단백질이 프로테오틸리티로 소화되고, 펩티드 단편이 LC에 의해 분리되고, 변형된 부위가 탠덤 MS(MS/MS)를 사용하여 식별되는 전형적인 상향식 프로테오믹스 워크플로우를 사용하여 얻을 수 있다. 바이오콩주게이트 화학의 풍부한 역사는 CL-MS 실험에 사용할 수있는 수많은 시약을 만들었습니다. CL 시약은 (i) 특정 및 (ii) 비특이적 두 가지 일반적인 범주로 나뉩니다. 특정 시약은 단일 기능 군(예: 무료아민)8,10과 반응하여 구현하기 쉽지만 제한된 구조 정보를 제공하는 경향이 있다. 비특이적 시약은 광범위한 측면 사슬과 반응하지만, 종종 레이저 나 싱크로트론 소스와 같은 특수 장비가 이러한 반응성 종을 생산해야합니다. 하이드록실 라디칼은 하이드록실 라디칼 발자국(HRF)7,11,12,13실험에서 다양한 조건하에서 다양한 단백질 및 단백질 복합체를 연구하기 위해 가장 일반적으로 사용되는 비특이적 시약이다.
우리의 연구 그룹은 성공적으로 CL-MS 실험의 맥락에서 단백질 구조 및 상호 작용을 연구하기 위해 영양 hylpyrocarbonate (DEPC)라는 또 다른 상대적으로 비특이적 시약을 사용하였다14,15,16,17,18,19,21,22, 23,24,24,25. DEPC는 특정 라벨링 시약의 단순성(즉, 반응을 수행하기 위해 특수 장비가 필요하지 않습니다)을 제공하며 평균 단백질에서 아미노산의 최대 30%와 반응합니다. 고전기성 시약으로서 DEPC는 시스테인, 히스티딘, 라이신, 티로신, 세린 및 투레오닌 잔류물의 N-terminus 및 뉴클레오필측사슬에 반응할 수 있습니다. 전형적으로, 이러한 반응의 단일 생성물이 생성되어 72.02 Da의 질량 증가가 발생합니다. 이 단일 유형의 제품은 단백질이 하이드록실 라디칼7과반응할 때 생성될 수 있는 최대 55가지 제품과 대조된다. 이러한 간단한 화학은 라벨이 부착 된 사이트의 식별을 용이하게합니다.
여기에서, 우리는 단백질 구조 및 상호 작용을 공부하기 위하여 DEPC 기지를 둔 CL-MS를 사용하기 위한 프로토콜을 제공합니다. 시약 제제, DEPC 단백질 반응, 단백질 소화 조건, LC-MS 및 MS/MS 파라미터 및 데이터 분석과 관련된 세부 사항이 설명되어 있습니다. 우리는 또한 단백질 금속, 단백질 리간드 및 단백질 단백질 상호 작용뿐만 아니라 가열 시 구조적 변화를 겪고있는 단백질의 예제 결과를 제공하여 DEPC 라벨링의 유용성을 입증합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>3448</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-(N-morpholino)propanesulfonic acid</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>M1254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-(N-morpholino)propanesulfonic acid sodium salt</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>M9381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acclaim PepMap RSLC C18 Column</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>164537</td>
			<td>300 &#956;m x 15 cm, C18, 2 &#956;m, 100 A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A998-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethylpyrocarbonate</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D5758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC-grade water</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>W5-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>I5513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilized chymotrypsin</td>
			<td>ProteoChem</td>
			<td>g4105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilized trypsin, TPCK Treated</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>20230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodoacetamide</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>I1149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(2-carboxyethyl)phosphine</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C4706</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

covalent labeling with diethylpyrocarbonate for studying protein higher-order structure by mass spectrometry

단백질의 고차 구조를 특성화하는 것은 그 기능을 이해하는 데 필수적입니다. 질량 분석법 (MS)는 특히 전통적인 방법으로 연구하기 어려운 단백질 시스템을 위해이 목적을위한 강력한 도구로 부상했습니다. MS에 의해 단백질의 구조를 연구하기 위해 단백질의 구조적 정보를 질량에 인코딩하는 용액에서 특정 화학 반응이 수행됩니다. 특히 효과적인 한 가지 접근법은 용매접근 가능한 아미노산 측망을 공유적으로 수정하는 시약을 사용하는 것입니다. 이러한 반응은 프로테오리스틱 소화 및 탠덤 질량 분광과 결합될 때 잔류물 수준의 해상도로 국소화될 수 있는 질량 증가로 이어집니다. 여기에서는 MS 검출과 함께 공유 라벨링 시약으로 디틸피로카보네이트(DEPC)를 사용하는 것과 관련된 프로토콜을 설명합니다. DEPC는 평균 단백질에 잔류물의 최대 30%까지 라벨을 부착할 수 있는 고전기분자로, 우수한 구조적 분해능을 제공한다. DEPC는 MS와 함께 β2-마이크로글로불린과 같은 작은 단일 도메인 단백질에 대한 구조적 정보를 단일 클론 항체와 같은 대형 다중 도메인 단백질에 성공적으로 사용하였다.

DEPC 수정 사이트 식별 및 수정 비율 공유 라벨링에 의한 질량 첨가는 (a) 그대로 단백질 및 (b) 펩티드 수준8,9에서측정될 수 있다. 그대로 수준에서, 라벨의 다른 수를 가진 단백질 종의 분포는 표지된 단백질 샘플의 직접 분석 또는 LC-MS에서 얻을 수 있다. 고해상도 구조 정보(즉, 사이트 별 라벨링 데이터)를 얻으려면 펩타이드 수준에서 측정을 ?...

Watch this Scientific Journal Video about Covalent Labeling with Diethylpyrocarbonate for Studying Protein Higher-Order Structure by Mass Spectrometry at JoVE.com

Covalent Labeling with Diethylpyrocarbonate for Studying Protein Higher-Order Structure by Mass Spectrometry

질량 분광 검출을 가진 영양 절이로카보네이트 기지를 둔 공유 라벨을 수행하기 위한 실험 절차가 설명됩니다. Diethylpyrocarbonate는 단순히 관심있는 단백질 또는 단백질 복합체와 혼합되어 용매접근 가능한 아미노산 잔류물의 변형으로 이어집니다. 상기 변형된 잔류물은 프로테오리스틱 소화 및 액체 크로마토그래피/질량 분석 후 확인할 수 있다.

질량 분광법에 의한 단백질 고차 구조를 연구하기 위한 디틸피로카보네이트와 공유 라벨링

Characterizing a protein&#39;s higher-order structure is essential for understanding its function. Mass spectrometry (MS) has emerged as a powerful tool ...

단백질 구조를 특성화하는 것은 그 기능을 이해하는 데 필수적입니다. 질량 분석법은 특히 전통적인 방법으로 연구하기 어려운 단백질 시스템을 위해 이 목적을 위한 강력한 도구로 부상했습니다. 질량 사양에 의한 단백질 구조를 연구하기 위해 단백질 구조 정보를 질량에 인코딩하는 용액에서 특정 화학 반응이 수행됩니다.특히 효과적인 한 가지 방법은 접근 가능한 아미노산 사이드 체인을 해결하는 데 크게 수정하는 시약을 사용하는 것입니다. 이러한 반응은 촉매 소화 및 탠덤 질량 분광과 결합될 때 잔류물 수준 해상도로 국소화될 수 있는 질량 증가로 이어집니다. 여기서, 우리는 질량 사양 검출과 함께 공유 라벨 시약으로 diethyl 파이로카보네이트 또는 DEPC의 사용과 관련된 프로토콜을 설명했다.DEPC는 평균 단백질에 잔류물의 최대 30%까지 라벨링할 수 있는 고전기분자로, 우수한 구조적 분해능을 제공한다. DEPC는 대량 사양과 함께 성공적으로 사용되어 다양한 단백질에 대한 구조적 정보를 얻고 있습니다. 먼저 수십 개의 마이크로몰라 범위의 농도에서 관심 있는 단백질의 완충된 용액을 준비하십시오.우리는 일반적으로 10 밀리모어 pH 7.4 MOPS 버퍼를 사용합니다. 대안적으로, 기존 단백질 용액은 원래 시료가 뉴클레오필성 작용기가 있는 완충액을 포함하는 경우 MOPS 또는 다른 완충제로 완충교환될 수 있다. 그들은 DEPC 단백질 반응을 방해하기 때문에 버퍼는 뉴클레오필성 기능 성 단이 없는 것이 필요하다.다른 마이크로튜브에서는 건조 아세토닐릴에 100 밀리머 DEPC의 스톡 솔루션을 준비합니다. DEPC의 가수 분해를 방지하기 위해 건조 아세토닐릴로 재고 용액을 준비하는 것이 필요합니다. 새로운 마이크로튜브에서 HPLC 급수에서 하나의 어금니 이미다졸의 솔루션을 준비하십시오.새로운 마이크로튜브에서 MOPS 버퍼와 단백질 용액을 혼합합니다. 단백질과 버퍼에 1분 동안 37°C의 수조에 반응 혼합물을 넣기 전에 제대로 혼합되도록 DEPC 스톡 용액의 알리쿼트를 첨가합니다. 사용되는 DEPC 스톡 용액의 부피는 원하는 최종 DEPC 단백질 농도 비율을 기준으로 선택되어야 한다.모든 단백질과 함께 작동하는 DEPC 및 단백질 농도의 한 세트는 없습니다, 최적의 DEPC 농도는 단백질에 존재하는 용매 접근 히스티딘과 리신 잔류물의 수에 따라 추정 될 수 있지만. 아세토나이트의 부피는 첨가되어, 이는 효과적으로 첨가된 DEPC 용액의 부피가 반응 중에 단백질 구조의 교란을 피하기 위해 전체 반응량의 1%를 초과해서는 안 된다는 점에 유의해야 한다. 반응 시간은 궁극적으로 사용자에게 달려 있지만, 예조건 하에서 1분 반응은 DEPC의 단백질 및 가수분해의 라벨링을 최소화한다.1분이 지나간 후, 이미다졸을 추가하여 반응한 DEPC에 남은 것을 청소하여 반응을 해소한다. 이미다졸의 최종 농도가 DEPC 농도의 50배인지 확인합니다. DEPC에 의해 수정된 잔류물을 확인하기 위해 단백질은 펩티드 단편으로 프로테오리티로 소화되어야 합니다.소화를 위해 관심 있는 단백질에 적합한 조건을 선택하십시오. 여기에 설명되는 일반적인 단계는 단백질을 전개한 다음 소화 효율을 개선할 수 있도록 이황화 결합을 감소시키고 알킬 수 있습니다. 우리의 경험에서, 소화 전에 데나탈과 열로 단백질을 펼치면 소화의 효율이 향상됩니다.단백질이 전개되는 동안 적절한 소화 완충제에서 TCEP및 요오도아세타미드의 솔루션을 비교하십시오. DTT가 DEPC 변형 잔류물과 반응할 수 있으므로 TCEP는 디티오스레이톨 또는 DTT 대신 환원제로 사용해야 합니다. 감소 후 결과 파일의 알킬레이션은 무료 파일과 단백질이 수정된 아미노산과 반응하는 라벨 스크램블링을 피하기 위해 필수적입니다.전개 단계가 완료되면 반응 혼합물에 TCEP를 추가하여 이황화물 결합을 줄이고 실온에서 3 분 동안 반응하게하십시오. 감소 후, 반응 혼합물에 요오도아세타미드를 첨가하고, 어둠 속에서 실온에서 30분 동안 반응하게 한다. 반응 혼합물을 상자에 배치하여 여기에서 달성했습니다.요오도아세타미드의 최종 농도는 TCEP에 사용되는 농도의 두 배 또는 단백질 농도 또는 이황화물 결합의 80배이어야 한다. 관심있는 효소, 일반적으로 제조업체의 사양에 따라 트립신 또는 chymotrypsin을 준비하십시오. 선택한 효소를 준비한 후 소화를 시작하고 반응 혼합물을 섭씨 37도에서 배양합니다.10:1 단백질 대 효소 비3 시간 소화를 사용 하 여 고정 된 효소를 사용 하 여 일반적으로 DEPC 라벨 단백질에 대 한 좋은 선택. 소화 후, 샘플은 LC-MS/MS에 의해 즉시 분석되거나 액체 질소로 동결된 플래시를 샘플링하고 라벨 손실을 최소화해야 한다. 상향식 프로테오믹스를 위한 표준 LC-MS/MS 파라미터를 사용하여 프로테오리틱 펩티드 단편상 표지된 부위를 식별할 수 있다.역상 C18 고정 상펩티드의 최상의 분리를 달성하기 위해 사용되어야 한다. 우리의 경험에서, 모세관 LC는 사용되는 높은 샘플 양 때문에 나노 LC보다 수정 수준에 대한 보다 더 신뢰할 수있는 정량 정보를 제공합니다. DEPC 표지 펩티드를 분리하는 데 사용되는 전형적인 LC 이동상은 두 개의 용매로 구성된다.용매 A는 0.1%의 포믹산과 용매 B를 가진 물은 0.1%의 포믹산을 가진 아세토닐릴이다. 그라데이션 용출이 사용되고 분리 시간은 샘플 복잡성에 따라 최적화될 수 있습니다. 펩티드에서 DEPC 수정 부위를 식별하려면 온라인 LC-MS 및 MS/MS를 수행할 수 있는 질량 분광계가 필요합니다.실험에서 우리는 여러 유형의 질량 분광계를 성공적으로 사용했습니다. 우리는 열 궤도 랩 퓨전이 우수한 결과를 제공한다는 것을 것을을 발견했습니다, LC-MS 분석의 과정에서 많은 펩티드의 MS/MS를 자동으로 능력을 발휘할 수 있는 질량 분광계는 적당해야 하지만. HPLC 조건 및 질량 분광 파라미터는 측정 전에 올바르게 설정해야 합니다.샘플이 플래시가 고정된 경우 분석 직전에 해동해야 합니다. 샘플 준비와 HPLC 주입 사이의 시간을 최소화하기 위해 최선을 다하십시오. LC 시스템에 소화된 라벨단백질 샘플을 적재하고 주입하고 LC-MS/MS 획득 또는 DEPC 라벨 사이트 식별 및 피크 영역 정량화를 시작하여 여러 가지 방법이 존재한다.열 피셔 악기에, 엑스 칼리버 또는 proteome 발견자는 어쩌면 사용. 프로그램에서 펩티드 식별에 적합한 매개 변수를 설정합니다. DEPC 첨가 및 카르바미도메틸화는 잔류물을 지원하거나 할당하는 가변 수정으로 포함됩니다.펩타이드의 수정 및 수정되지 않은 버전의 크로마토그래피 피크 영역은 잔류물 수준 수정 비율을 결정하는 데 사용됩니다. MS 검출을 갖춘 DEPC 라벨링은 단백질에 대한 더 높은 수주 구조 적 변화를 특성화하는 데 중요한 도구이기도 합니다. 우리의 연구에서, DEPC 공유 라벨열 및 산화 스트레스에 구조적 변화를 겪고 특정 단백질 영역을 식별할 수 있습니다.그림에서, 변형 비율의 중요한 변화는 라벨링의 증가에 대한 라벨링과 빨간색의 감소에 대한 파란색으로 표시되며, 중요한 라벨 변경사항이없는 잔류물은 옅은 녹색으로 표시됩니다. 예를 들어, 베타-2 마이크로글로불린이 열 스트레스에 노출된 후, 라벨링 정도, N-terminus, 세린 28, 히스티딘 31, 세린 33, 세린 55, 세린 57, 라이신 58이 단백질의 한 쪽보다 더 가깝거나 리신 58이 단백질의 변화 또는 이 부위의 골망을 가지는 단백질의 한 쪽보다 가깝습니다. 단백질이 산화 스트레스에 노출된 후, 라벨링의 감소와 다른 잔류물, 세린 11, 히스티딘 13, 리신 19, 라이신 41, 리신 94 등의 다른 단계의 군집으로부터 산화 유도 확인 변화가 다른 곳에서 발생함을 나타낸다.이 연구는 단백질 치료에 대 한 중요 한 의미를 가지고, 현재, 제약 시장의 가장 빠르게 성장 세그먼트. 우리 그룹의 다른 연구는 또한 DEPC 공유 라벨 질량 사양 감지 하 고 스트레스 단일 클 론 항체 치료에 확인 변화의 사이트를 식별할 수 있습니다 나타났습니다. 보시다시피 DEPC를 사용하여 공유 라벨링은 실험적으로 구현하기가 간단하지만 단백질에 대한 귀중한 구조 정보를 제공할 수 있습니다.DEPC 라벨링 질량 사양에 의해 제공되는 구조적 해상도는 X 선 결정학 및 NMR과 같은 기술과 비교할 때 겸손하지만 크기 나 결정화 능력에 관계없이 거의 모든 단백질에 대한 준수입니다. DEPC 공유 라벨링 질량 사양은 단백질 혼합물과 함께 작동하며 세포 리세이트와 같은 매우 복잡한 샘플 유형과 haCat 세포로 작동 할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후, 우리는 당신이 단백질 구조를 특성화하기위한 유용한 도구를 라벨 DEPC를 찾을 수 있다고 확신합니다.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Analyzing Protein Dynamics Using Hydrogen Exchange Mass Spectrometry

수소 환율 질량 분석을 사용하여 단백질의 역학 분석

All cellular processes depend on the functionality of proteins. Although the functionality of a given protein is the direct consequence of its unique ...

연구

화학

Improved In-gel Reductive &#946;-Elimination for Comprehensive O-linked and Sulfo-glycomics by Mass Spectrometry

Improved In-gel Reductive ÃƒÅ½Ã‚Â²-Elimination for Comprehensive O-linked and Sulfo-glycomics by Mass Spectrometry

질량 분석에 의해 - 겔 개선 환원 적 β-제거 포괄적 인 O가 연결된과에 대한 설포 글라 이코믹스

Separation of proteins by SDS-PAGE followed by in-gel proteolytic digestion of resolved protein bands has produced high-resolution proteomic analysis of ...

Mass Spectrometric Approaches to Study Protein Structure and Interactions in Lyophilized Powders

질량 분석은 동결 건조 분말에서 단백질의 구조와 상호 작용을 연구하는 접근

Amide hydrogen/deuterium exchange (ssHDX-MS) and side-chain photolytic labeling (ssPL-MS) followed by mass spectrometric analysis can be valuable for ...

A Study of the Complexation of Mercury(II) with Dicysteinyl Tetrapeptides by Electrospray Ionization Mass Spectrometry

A Study of the Complexation of MercuryII with Dicysteinyl Tetrapeptides by Electrospray Ionization Mass Spectrometry

전자 분무 이온화 질량 분석에 의해 Dicysteinyl Tetrapeptides와 수은 (II)의 복합체 형성에 관한 연구

In this study we evaluated a method for the characterization of complexes, formed in different relative ratios of mercury(II) to dicysteinyl tetrapeptide, ...

Visualization of Ambient Mass Spectrometry with the Use of Schlieren Photography

슐 리렌 사진의 사용과 주변 질량 분석의 시각화

This manuscript outlines how to visualize mass spectrometry ambient ionization sources using schlieren photography. In order to properly optimize the mass ...

An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry

액체 크로마토그래피 이온 이동성 QTOF 질량 분석에 의해 단백질 바이오에 주인 세포 단백질의 정량화에 대 한 HS MRM 분석 결과

The analysis of low-level (1-100 ppm) protein impurities (e.g., host-cell proteins (HCPs)) in protein biotherapeutics is a challenging assay requiring ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

고 분해능 질량 분석을 결합 하는 보조 Nanoelectrospray 이온화를 사용 하 여 실시간 호흡 분석

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Analyzing Protein Architectures and Protein-Ligand Complexes by Integrative Structural Mass Spectrometry

단백질 구조와 통합 구조 질량 분석, 단백질-리간드 단지 분석

Proteins are an important class of biological macromolecules that play many key roles in cellular functions including gene expression, catalyzing ...

Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry Approaches for Characterization of the Protein and Metabolite Corona Acquired by Nanomaterials

나노 물질에 의해 획득 된 단백질과 대사 산물 코로나특성화를위한 모세관 전기 전구 질량 분광법 접근법

The adsorption of biomolecules from surrounding biological matrices to the surface of nanomaterials (NMs) to form the corona has been of interest for the ...

Organic Solvent-Based Protein Precipitation for Robust Proteome Purification Ahead of Mass Spectrometry

While multiple advances in mass spectrometry (MS) instruments have improved qualitative and quantitative proteome analysis, more reliable front-end ...