Name: covalent labeling with diethylpyrocarbonate for studying protein higher-order structure by mass spectrometry
Uploaded: 2021-06-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Covalent Labeling with Diethylpyrocarbonate for Studying Protein Higher-Order Structure by Mass Spectrometry at JoVE.com

Författarna bekräftar stöd från National Institutes of Health (NIH) under Grant R01 GM075092. Thermo Orbitrap Fusion masspektrometer som används för att förvärva några av de data som beskrivs här förvärvades med medel från National Institutes of Health grant S10OD010645.

1. Protein- och reagensberedning
Det här protokollet innehåller ett exempelarbetsflöde för att märka ett protein med DEPC. Vissa tillstånd och reagenskoncentrationer som listas kan variera beroende på vilket protein som väljers.
<ol><li>Förbered alla reagenslösningar i 1,5 ml mikrocentrifugrör.</li>
	<li>Förbered en proteinlösning med önskad koncentration, vanligtvis i intervallet tiotals μM, i en 10 mM 3-(N-morpholino)propansulfonsyrabuffert (MOPS) vid pH 7.4. Alternativt ber...

Kritiska steg Flera punkter om experimentell utformning bör övervägas för att säkerställa tillförlitliga märkningsresultat. För det första, för att maximera proteinmärkningen är det nödvändigt att undvika buffertar med starkt nukleofila grupper (t.ex. Tris) eftersom de kan reagera med DEPC och sänka etikettens omfattning. Det är också tänkbart att sådana buffertar skulle kunna reagera med märkta restprodukter, vilket leder till att etiketten tas bort och därför förlust av strukturell i...

Proteiner är viktiga biomolekyler i praktiskt taget alla fysiologiska processer. De olika funktioner som proteiner utför är möjliga på grund av de strukturer de antar och de interaktioner som de har med andra biomolekyler. För att förstå proteinfunktionen på en djupare nivå behövs biokemiska och biofysiska verktyg för att belysa dessa viktiga strukturella egenskaper och interaktioner. Traditionellt har röntgenkristallografi, kryogen elektronmikroskopi och kärnmagnetisk resonansspektroskopi (NMR) gett önskad detalj på atomnivå för att avslöja proteinstrukturen. Många proteinsystem kan dock inte förhöras av dessa tekniker på grund av dåligt kristalliseringsbeteende, begränsad proteintillgänglighet, överdriven prov heterogenitet eller molekylär vikt begränsningar. Följaktligen har nyare analysmetoder dykt upp som övervinner dessa begränsningar. Bland de framväxande teknikerna som kan ge proteinstrukturinformation är masspektrometri.
Masspektrometri (MS) mäter en molekyls massa-till-laddning (m/z) förhållande, så protein högre ordning strukturell information måste erhållas genom kodning av önskad strukturell information i proteinets massa. Flera metoder för att koda denna information har utvecklats, inklusive vätedeuteriumutbyte (HDX)1,2,3,4, kemisk korslänkning (XL)5,6och kovamerad märkning (CL)7,8,9,10. I HDX utbyts ryggraden bland väten av något mer massiva deuteriums i takt som är beroende av lösningsmedelstillgänglighet och H-bindningsgrad. Omfattningen av HDX kan lokaliseras genom att snabbt smälta proteinet i peptidfragment innan dessa fragment separeras och mäts med masspektrometern eller genom att proteinet dissocieras i ett uppifrån och ned-experiment. Att bestämma växelkursen ger ytterligare insikt i proteindynamiken. HDX har visat sig vara ett värdefullt verktyg för att karakterisera proteinstrukturen trots utmaningar i samband med back exchange och behovet av specialiserad utrustning för att maximera reproducerbarheten. I XL-MS reageras proteiner med bifunktionella reagenser som kovavrätt kopplar samman intilliggande rester sidokedjor inom ett visst protein eller mellan två proteiner. På så sätt kan XL-MS ge avståndsbegränsningar som kan användas för att karakterisera proteinstrukturen. De regioner av proteinet som är korslänkade kan identifieras genom proteolytisk matsmältning följt av flytande kromatografi (LC)-MS analys. Medan XL-MS är ett mångsidigt verktyg som har använts för att studera en mängd olika proteinkomplex, inklusive inuti celler, är identifiering av XL-produkterna utmanande och kräver specialiserad programvara.
CL-MS har nyligen dykt upp som ett kompletterande och ibland alternativt MS-baserat verktyg för att studera proteinstruktur och interaktioner. I CL-MS modifieras ett protein- eller proteinkomplex kovaly med ett monofunktionellt reagens som kan reagera med lösningsmedelsexponerade sidokedjor (figur 1). Genom att jämföra modifierings utsträckningerna av ett protein- eller proteinkomplex under olika förhållanden kan konformationsförändringar, bindningsställen och proteinproteingränssnitt avslöjas. Efter CL-reaktionen kan platsspecifik information, ofta på en enda aminosyranivå, erhållas med typiska proteomiska arbetsflöden nedifrån och upp där proteiner proteolytiskt smälts, peptidfragment separeras av LC och modifierade platser identifieras med tandem MS (MS/MS). Biokonjugatkemins rika historia har gjort många reagenser tillgängliga för CL-MS-experiment. CL-reagenser tillhör två allmänna kategorier: i) specifika och ii) icke-specifika. Specifika reagenser reagerar med en enda funktionell grupp (t.ex. fria aminer)8,10 och är lätta att genomföra, men de tenderar att ge begränsad strukturell information. Icke-specifika reagenser reagerar med ett brett spektrum av sidokedjor, men kräver ofta specialiserad utrustning som lasrar eller synkrotronkällor för att producera dessa mycket reaktiva arter. Hydroxylradikaler är det vanligaste icke-specifika reagenset, efter att ha applicerats i hydroxylradikala fotavtryck (HRF)7,11,12,13 experiment för att studera ett brett spektrum av proteiner och proteinkomplex under en mängd olika förhållanden.
Vår forskargrupp har framgångsrikt använt ett annat relativt icke-specifikt reagens som kallas diethylpyrocarbonat (DEPC) för att studera proteinstruktur och interaktioner i samband med CL-MS-experiment14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25. DEPC erbjuder enkelheten hos specifika märkningsreagenser (dvs. ingen specialiserad utrustning är nödvändig för att utföra reaktionerna), samtidigt som den reagerar med upp till 30% aminosyror i det genomsnittliga proteinet. Som ett mycket elektrofilt reagens kan DEPC reagera med N-ändstationen och de nukleofila sidokedjorna cystein, histidin, lysin, tyrosin, serin och treoninrester. Vanligtvis genereras en enda produkt av dessa reaktioner, vilket resulterar i en massökning på 72,02 Da. Denna enda typ av produkt står i kontrast till de upp till 55 olika produkter som kan produceras när proteiner reagerar med hydroxylradikaler7. Sådan enkel kemi underlättar identifiering av märkta platser.
Här tillhandahåller vi protokoll för att använda DEPC-baserade CL-MS för att studera proteinstruktur och interaktioner. Detaljer i samband med reagenspreparat, DEPC- proteinreaktioner, proteinsammanfattning, LC-MS- och MS/MS-parametrar samt dataanalys beskrivs. Vi demonstrerar också nyttan av DEPC-märkning genom att tillhandahålla exempelresultat från protein-metall- och protein-ligand- och proteinproteininteraktioner samt proteiner som genomgår strukturella förändringar vid uppvärmning.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1.5 mL microcentrifuge tube</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>3448</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-(N-morpholino)propanesulfonic acid</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>M1254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-(N-morpholino)propanesulfonic acid sodium salt</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>M9381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acclaim PepMap RSLC C18 Column</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>164537</td>
			<td>300 &#956;m x 15 cm, C18, 2 &#956;m, 100 A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>A998-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethylpyrocarbonate</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>D5758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC-grade water</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>W5-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imidazole</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>I5513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilized chymotrypsin</td>
			<td>ProteoChem</td>
			<td>g4105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immobilized trypsin, TPCK Treated</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>20230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodoacetamide</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>I1149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris(2-carboxyethyl)phosphine</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>C4706</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

covalent labeling with diethylpyrocarbonate for studying protein higher-order structure by mass spectrometry

Att karakterisera ett proteins högre ordningsstruktur är avgörande för att förstå dess funktion. Masspektrometri (MS) har dykt upp som ett kraftfullt verktyg för detta ändamål, särskilt för proteinsystem som är svåra att studera med traditionella metoder. För att studera ett proteins struktur av MS utförs specifika kemiska reaktioner i en lösning som kodar ett proteins strukturella information i sin massa. Ett särskilt effektivt tillvägagångssätt är att använda reagenser som kovalent modifierar lösningsmedel tillgängliga aminosyra sidokedjor. Dessa reaktioner leder till massökningar som kan lokaliseras med restnivåupplösning i kombination med proteolytisk matsmältning och tandemmasspektrometri. Här beskriver vi protokollen i samband med användning av diethylpyrocarbonat (DEPC) som ett kovallt märkningsreagens tillsammans med MS-detektion. DEPC är en mycket elektrofil molekyl som kan märka upp till 30% av resterna i det genomsnittliga proteinet, vilket ger utmärkt strukturell upplösning. DEPC har framgångsrikt använts tillsammans med MS för att erhålla strukturell information för små endomänproteiner, såsom β2-mikroglobulin, till stora multidomänproteiner, såsom monoklonala antikroppar.

Identifiera platser för ändring av tilläggsskydd och ändringsprocent Masstillskott på grund av kovalsmärkning kan mätas vid a) intakt protein och (b) peptidnivåer8,9. På intakt nivå kan en fördelning av proteinarter med olika antal etiketter erhållas genom direkt analys eller LC-MS av märkta proteinprover. För att erhålla strukturell information med högre upplösning (dvs. platsspecifika märkningsdata) måste mätningar utföras på p...

Watch this Scientific Journal Video about Covalent Labeling with Diethylpyrocarbonate for Studying Protein Higher-Order Structure by Mass Spectrometry at JoVE.com

Covalent Labeling with Diethylpyrocarbonate for Studying Protein Higher-Order Structure by Mass Spectrometry

De experimentella förfarandena för att utföra diethylpyrocarbonate-baserade kovalement märkning med massa spektroskopisk detektion beskrivs. Diethylpyrocarbonat blandas helt enkelt med protein- eller proteinkomplexet av intresse, vilket leder till modifiering av lösningsmedelskomliga aminosyrarester. De modifierade resterna kan identifieras efter proteolytisk matsmältning och vätskekromatografi/masspektrometrianalys.

Kovavt märkning med Diethylpyrocarbonate för studier av protein högre order struktur av masspektrometri

Characterizing a protein&#39;s higher-order structure is essential for understanding its function. Mass spectrometry (MS) has emerged as a powerful tool ...

Att karakterisera en proteinstruktur är avgörande för att förstå dess funktion. Masspektrometri har dykt upp som ett kraftfullt verktyg för detta ändamål, särskilt för proteinsystem som är svåra att studera med traditionella metoder. För att studera en proteinstruktur genom massspecifikationer utförs specifika kemiska reaktioner i en lösning som kodar in en proteinstrukturinformation i sin massa.Ett särskilt effektivt tillvägagångssätt är att använda reagenser som kovavellt modifierar lösning av tillgängliga aminosyror sidokedjor. Dessa reaktioner leder till massökningar som kan lokaliseras med restnivåupplösning i kombination med proteolytisk matsmältning och tandemmasspektrometri. Här beskrev vi protokollen i samband med användning av dietyl pyrokarbonat eller DEPC som en kovalent märkning reagens tillsammans med massa spec detektion.DEPC är en mycket elektrofil molekyl som kan märka upp till 30% av resterna i det genomsnittliga proteinet, vilket ger utmärkt strukturell upplösning. DEPC har framgångsrikt använts tillsammans med massspecifikationer för att få strukturell information för många olika proteiner. Börja med att förbereda en buffrad lösning av ditt protein av intresse vid en koncentration i intervallet tiotals mikromolar.Vi använder ofta en 10 millimolar pH 7.4 MOPS buffert. Alternativt kan en befintlig proteinlösning vara buffertutbyte till MOPS eller en annan buffert om det ursprungliga provet innehåller en buffert som har nukleofila funktionella grupper. Det är nödvändigt att bufferten inte har nukleofila funktionella grupper eftersom de kommer att störa DEPC-proteinreaktionen.I ett annat mikrorör, förbered en stamlösning på 100 millimolar DEPC i torr acetonitril. Förberedelse av stamlösningen i torr acetonitril är nödvändig för att förhindra hydrolys av DEPC. I ett nytt mikrorör, förbered lösningen av en molar imidazol i HPLC-klassvatten.Blanda MOPS-bufferten och proteinlösningen i ett nytt mikrorör. Till proteinet och bufferten tillsätt en alikvot av DEPC-stamlösningen och se till att den blandas ordentligt innan reaktionsblandningen placeras i ett 37 grader Celsius vattenbad i en minut. Volymen av DEPC-stamlösningen som används bör väljas baserat på det slutliga DEPC-proteinkoncentrationsförhållandet som önskas.Det finns ingen uppsättning DEPC- och proteinkoncentrationer som fungerar med varje protein, även om den optimala DEPC-koncentrationen kan uppskattas baserat på antalet lösningsmedelsanpassade histidin- och lysinrester som finns i proteinet. Det bör noteras att den tillsatta acetonitrilvolymen, som i själva verket är volymen av den tillsatta DEPC-lösningen, inte bör överstiga 1 % av den totala reaktionsvolymen för att undvika att proteinstrukturen störs under reaktionen. Reaktionstiden är i slutändan upp till användaren, även om en en minut reaktion under exempel villkoret minimerar över märkning av proteinet och hydrolys av DEPC.Efter en minut har gått, släcka reaktionen genom att lägga till imidazol för att rensa de återstående på reagerade DEPC. Se till att den slutliga koncentrationen av imidazol är 50 gånger DEPC-koncentrationen. För att identifiera de rester som har modifierats av DEPC måste proteinet proteolytiskt smältas till peptidfragment.För matsmältningen, välj villkor som är mottagliga för protein av intresse. Vanliga steg som beskrivs här innebär att utveckla protein och sedan minska och alkylera disulfidbindningar så att matsmältningseffektiviteten kan förbättras. Enligt vår erfarenhet förbättrar utfällning av proteinet med en denaturant och värme före matsmältningen matsmältningen matsmältningens effektivitet.Medan protein utvecklas, jämför lösningar av TCEP och jodväxtamid i en lämplig matsmältningsbuffert. TCEP bör användas som reducerande medel i stället för dithiothreitol eller DTT eftersom DTT kan reagera med DEPC-modifierade rester. Alkylering av de resulterande filerna efter minskning är viktigt för att undvika etikettrörning där fria filer och proteinet reagerar med modifierade aminosyror.När det utfällda steget är klart, minska disulfidbindningarna genom att tillsätta TCEP till reaktionsblandningen och låt den reagera i tre minuter vid rumstemperatur. Efter reduktion, tillsätt jodacetamid till reaktionsblandningen, låt den reagera i 30 minuter vid rumstemperatur i mörkret. Uppnås här genom att placera reaktionsblandningen i en låda.Den slutliga koncentrationen av jodväxtamid bör vara dubbelt så hög koncentration som används för TCEP eller 80 gånger proteinkoncentrationen eller disulfidbindningen. Förbered enzymet av intresse, vanligtvis trypsin eller chymotrypsin enligt tillverkarens specifikationer. Efter att ha förberett det valfria enzymet, börja matsmältningen och inkubera reaktionsblandningen vid 37 grader Celsius.Ett 10:1 protein till enzym förhållande med en tre timmars matsmältning med immobiliserade enzymer är vanligtvis ett bra val för DEPC märkta proteiner. Efter matsmältningen ska provet antingen omedelbart analyseras av LC-MS/MS eller blixtfrysas med flytande kväve för att minimera nedbrytningen av provet och etikettförlusten. Standard parametrar för LC-MS/MS för proteomik nedifrån och upp kan användas för att identifiera märkta platser på proteolytiska peptidfragment.Den omvända fasen C18 stationär fas bör användas för att uppnå bästa möjliga separation av peptider. Enligt vår erfarenhet ger kapillär-LC mer tillförlitlig kvantitativ information om modifieringsnivåer än nano-LC på grund av de högre provmängderna som används. En typisk LC-mobilfas som används för att separera DEPC-märkta peptider består av två lösningsmedel.Lösningsmedel A är vatten med 0,1%myrsyra och lösningsmedel B är en acetonitril med 0,1% myrsyra. En övertonings eluering används och separationstiden kan optimeras baserat på provkomplexitet. En masspektrometer som kan göra online LC-MS och MS/MS krävs för att identifiera DEPC modifieringsplatser på peptiderna.I våra experiment har vi framgångsrikt använt flera typer av masspektrometrar. Vi har funnit att en Thermo Orbitrap Fusion ger utmärkta resultat, även om alla masspektrometer som automatiskt kan utföra MS / MS av många peptider under loppet av en LC-MS-analys bör vara lämpliga. HPLC-förhållanden och masspektrometriska parametrar bör ställas in korrekt före mätningen.Om provet har blixtfrysts bör det tinas precis före analys. Gör ditt bästa för att minimera tiden mellan provberedning och HPLC-injektion. Ladda och injicera det smälta märkta proteinprovet i LC-systemet och starta LC-MS/MS-förvärvet eller IDENTIFIERINGEN AV DEPC-etikettplatsen och kvantifiering av toppområdet, det finns flera metoder.På Thermo Fisher instrument, excalibur eller proteome discoverer kanske används. Ange lämpliga parametrar för peptididentifiering i ett program. DEPC-tillsats och karbamidetylering ingår som variabla modifieringar som hjälper rester eller tilldelas.Kromatografiska toppområden av modifierade och oförändrade versioner av peptiderna används för att bestämma restnivåmodifieringsprocent. DEPC-märkning med MS-detektering är också ett värdefullt verktyg för att karakterisera strukturella förändringar av proteiner i högre ordning. Från vår studie kan DEPC kovalemärkning identifiera specifika proteinregioner som genomgår strukturella förändringar vid termisk och oxidativ stress.I figuren visas betydande förändringar i ändringsprocenten i blått för minskningen av märkning och rött för ökningen av märkningen, medan rester utan signifikanta märkningsändringar visas i ljusgrönt. Till exempel, efter beta-2 mikroglobulin utsätts för värmestress, många rester som genomgår betydande minskningar av märkningsgrader, N-ändstation, serin 28, histidin 31, serin 33, serin 55, serin 57 och lysin 58 är närmare än ena sidan av proteinet vilket tyder på att denna region av proteinet genomgår en bekräftelseförändring eller eventuellt förmedlar aggregering. Efter proteinet utsätts för oxidativ stress, olika rester med en minskning av märkning, serin 11, histidin 13, lysin 19, lysin 41 och lysin 94 från ett kluster på en annan fas av proteinet som indikerar att oxidation inducerad konfirmationsförändring sker någon annanstans.Denna studie har viktiga konsekvenser för proteinterapier, som för närvarande är det snabbast växande segmentet på läkemedelsmarknaden. Annat arbete från vår grupp har också visat att DEPC covalent märkning massa spec kan upptäcka och identifiera platser för konfirmationsförändringar i stressade monoklonala antikroppar terapier. Som du kan se är kovamär märkning med DEPC enkel att implementera experimentellt, men kan ändå ge värdefull strukturell information för proteiner.Den strukturella upplösningen som tillhandahålls av DEPC-märkning av massspecifikationer är blygsam jämfört med teknikerna som röntgenkristallografi och NMR, men det är mottagligt för nästan alla protein oavsett storlek eller förmåga att kristalliseras. DEPC covalent märkning massa spec fungerar också med proteinblandningar och kan fungera med mycket komplicerade provtyper, såsom cell lysat och det haCat celler. Efter att ha tittat på den här videon är vi övertygade om att du hittar DEPC som märker ett användbart verktyg för att karakterisera proteinstrukturen.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Analyzing Protein Dynamics Using Hydrogen Exchange Mass Spectrometry

Analysera Protein Dynamics Använda Hydrogen Exchange masspektrometri

All cellular processes depend on the functionality of proteins. Although the functionality of a given protein is the direct consequence of its unique ...

Improved In-gel Reductive &#946;-Elimination for Comprehensive O-linked and Sulfo-glycomics by Mass Spectrometry

Improved In-gel Reductive ÃƒÅ½Ã‚Â²-Elimination for Comprehensive O-linked and Sulfo-glycomics by Mass Spectrometry

Förbättrade I-gel Reduktiva β-Eliminering för omfattande O-kopplade och sulfo-glycomics med masspektrometri

Separation of proteins by SDS-PAGE followed by in-gel proteolytic digestion of resolved protein bands has produced high-resolution proteomic analysis of ...

Mass Spectrometric Approaches to Study Protein Structure and Interactions in Lyophilized Powders

Masspektrometrisk Approaches att studera protein struktur och interaktioner i frystorkad Pulver

Amide hydrogen/deuterium exchange (ssHDX-MS) and side-chain photolytic labeling (ssPL-MS) followed by mass spectrometric analysis can be valuable for ...

A Study of the Complexation of Mercury(II) with Dicysteinyl Tetrapeptides by Electrospray Ionization Mass Spectrometry

A Study of the Complexation of MercuryII with Dicysteinyl Tetrapeptides by Electrospray Ionization Mass Spectrometry

En studie av komplex Merkurius (II) med Dicysteinyl Tetrapeptider från elektrosprayjonisering masspektrometri

In this study we evaluated a method for the characterization of complexes, formed in different relative ratios of mercury(II) to dicysteinyl tetrapeptide, ...

Visualization of Ambient Mass Spectrometry with the Use of Schlieren Photography

Visualisering av Ambient masspektrometri med användning av schlierenfotografering

This manuscript outlines how to visualize mass spectrometry ambient ionization sources using schlieren photography. In order to properly optimize the mass ...

An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry

En HS-MRM analysmetod för kvantifiering av värdcellen proteiner i Protein Biopharmaceuticals genom vätskekromatografi Ion rörlighet QTOF masspektrometri

The analysis of low-level (1-100 ppm) protein impurities (e.g., host-cell proteins (HCPs)) in protein biotherapeutics is a challenging assay requiring ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

Realtid andedräkt analys med hjälp av sekundära Nanoelectrospray jonisering kopplat till hög upplösning masspektrometri

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Analyzing Protein Architectures and Protein-Ligand Complexes by Integrative Structural Mass Spectrometry

Analysera Protein arkitekturer och Protein-Ligand komplex av integrativ strukturella masspektrometri

Proteins are an important class of biological macromolecules that play many key roles in cellular functions including gene expression, catalyzing ...

Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry Approaches for Characterization of the Protein and Metabolite Corona Acquired by Nanomaterials

Kapillärelektrofores masspektrometri metoder för karakterisering av protein och metabolit korona förvärvas av nanomaterial

The adsorption of biomolecules from surrounding biological matrices to the surface of nanomaterials (NMs) to form the corona has been of interest for the ...

Organic Solvent-Based Protein Precipitation for Robust Proteome Purification Ahead of Mass Spectrometry

Organisk lösningsmedelsbaserad proteinutfällning för robust proteomrening före masspektrometri

While multiple advances in mass spectrometry (MS) instruments have improved qualitative and quantitative proteome analysis, more reliable front-end ...