Name: modeling breast cancer in human breast tissue using a microphysiological system
Uploaded: 2021-04-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System at JoVE.com

Nous tenons à remercier le tulane flow cytometry et le cell sorting core ainsi que le Tulane Histology Core pour leur soutien technique. Ce travail a été soutenu par la southeastern Society of Plastic &Reconstructive Surgeons 2019 Research Grant et la National Science Foundation (EPSCoR Track 2 RII, OIA 1632854).

Tous les tissus humains ont été prélevés conformément au protocole #9189 tel qu’approuvé par le Bureau du Conseil d’examen institutionnel du LSUHSC.
1. Ensemencement de cellules souches dérivées d’adipeux (ASC) pour les feuilles cellulaires
<ol><li>Acheter des CSA de sources commerciales ou isoler du tissu mammaire humain primaire en suivant les protocoles établis8,9. Ensemencer des ASC du sein humain à une densité d...

<ol>
	<li>DeSantis, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+cancer+statistics,+2019.">Breast cancer statistics, 2019.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 69 (6), 438-451 (2019).</li><li>. NIH Categorical Spending -NIH Research Portfolio Online Reporting Tools (RePORT) Available from: <a target="_blank" href="https://report.nih.gov/categorical_spending.aspx">https://report.nih.gov/categorical_spending.aspx</a> (2020)</li><li>Wong, C. H., Siah, K. W., Lo, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+clinical+trial+success+rates+and+related+parameters.">Estimation of clinical trial success rates and related parameters.</a> Biostatistics. 20 (2), 273-286 (2019).</li><li>Sutherland, M. L., Fabre, K. M., Tagle, D. 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Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammary+adipocytes+stimulate+breast+cancer+invasion+through+metabolic+remodeling+of+tumor+cells.">Mammary adipocytes stimulate breast cancer invasion through metabolic remodeling of tumor cells.</a> JCI insight. 2 (4), 87489 (2017).</li><li>Qiu, B., Simon, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BODIPY+493/503+staining+of+neutral+lipid+droplets+for+microscopy+and+quantification+by+flow+cytometry.">BODIPY 493/503 staining of neutral lipid droplets for microscopy and quantification by flow cytometry.</a> Bio-Protocols. 6 (17), 1912 (2016).</li><li>Fotos, J. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implanted+adipose+progenitor+cells+as+physicochemical+regulators+of+breast+cancer.">Implanted adipose progenitor cells as physicochemical regulators of breast cancer.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 109 (25), 9786-9791 (2012).</li><li>Oskarsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+components+in+breast+cancer+progression+and+metastasis.">Extracellular matrix components in breast cancer progression and metastasis.</a> The Breast. 22, 66-72 (2013).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen+1A1+(COL1A1)+promotes+metastasis+of+breast+cancer+and+is+a+potential+therapeutic+target.">Collagen 1A1 (COL1A1) promotes metastasis of breast cancer and is a potential therapeutic target.</a> Discovery Medicine. 25 (139), 211-223 (2018).</li><li>Ahfeldt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programming+human+pluripotent+stem+cells+into+white+and+brown+adipocytes.">Programming human pluripotent stem cells into white and brown adipocytes.</a> Nature Cell Biology. 14 (2), 209-219 (2012).</li><li>Volz, A. -. C., Omengo, B., Gehrke, S., Kluger, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+the+use+of+differentiated+adipose-derived+stem+cells+and+mature+adipocytes+to+model+adipose+tissue+in+vitro.">Comparing the use of differentiated adipose-derived stem cells and mature adipocytes to model adipose tissue in vitro.</a> Differentiation; Research in Biological Diversity. 110, 19-28 (2019).</li><li>Zimta, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+links+between+central+obesity+and+breast+cancer.">Molecular links between central obesity and breast cancer.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (21), 5364 (2019).</li><li>Bousquenaud, M., Fico, F., Solinas, G., R&#252;egg, C., Santamaria-Mart&#237;nez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+promotes+the+expansion+of+metastasis-initiating+cells+in+breast+cancer.">Obesity promotes the expansion of metastasis-initiating cells in breast cancer.</a> Breast Cancer Research. 20 (1), 104 (2018).</li><li>Robado de Lope, L., Alc&#237;bar, O. L., Amor L&#243;pez, A., Hergueta-Redondo, M., Peinado, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour-adipose+tissue+crosstalk:+fuelling+tumour+metastasis+by+extracellular+vesicles.">Tumour-adipose tissue crosstalk: fuelling tumour metastasis by extracellular vesicles.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 373 (1737), 20160485 (2018).</li><li>Insua-Rodr&#237;guez, J., Oskarsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+extracellular+matrix+in+breast+cancer.">The extracellular matrix in breast cancer.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 97, 41-55 (2016).</li><li>Sabol, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+produced+by+obesity-altered+adipose+stem+cells+promotes+metastasis+but+not+tumorigenesis+of+triple-negative+breast+cancer+in+orthotopic+xenograft+and+patient-derived+xenograft+models.">Leptin produced by obesity-altered adipose stem cells promotes metastasis but not tumorigenesis of triple-negative breast cancer in orthotopic xenograft and patient-derived xenograft models.</a> Breast Cancer Research: BCR. 21 (1), 67 (2019).</li><li>Cui, X. D., Gao, D. Y., Fink, B. F., Vasconez, H. C., Pu, L. L. 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L., Wells, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrative+microphysiological+tissue+systems+of+cancer+metastasis+to+the+liver.">Integrative microphysiological tissue systems of cancer metastasis to the liver.</a> Seminars in Cancer Biology. , (2020).</li></ol>

De nouveaux systèmes de modélisation du cancer du sein humain sont nécessaires pour mieux comprendre la maladie. Le développement de systèmes microphysiologiques humains pour modéliser les contextes de la maladie qui incluent des cellules PHY et stromales natives augmentera le pouvoir prédictif des études précliniques. Le modèle BC-MPS présenté ici est un système nouvellement développé qui surmonte les limites des modèles précédents permet l’évaluation de BC dans son environnement HBT natif. Ce syst?...

Chaque année, plus de 40 000 femmes américaines meurent d’un cancer du sein (BC)1. Malgré plus de 700 millions de dollars investis dans la recherche en Colombie-Britannique chaque année, 97 % des médicaments candidats de la Colombie-Britannique échouent aux essais cliniques2,3. De nouveaux modèles sont nécessaires pour améliorer le pipeline de développement de médicaments et notre compréhension de la Colombie-Britannique. Le programme microphysiologique (MPS) des NIH a délimité les caractéristiques requises pour des modèles révolutionnaires visant à améliorer la traduction de la science fondamentale en succès clinique4. Ceux-ci comprenaient l’utilisation de cellules ou de tissus humains primaires, stables en culture pendant 4 semaines, et l’inclusion de l’architecture tissulaire native et de la réponse physiologique.
Les modèles actuels in vitro de BC, tels que la culture bidimensionnelle des variétés de cellule de BC, la co-culture d’insertion de membrane, et les sphéroïdes et organoïdes tridimensionnels, ne répondent pas aux critères de MPS des NIH parce qu’aucun de ces derniers récapitule l’architecture native de tissu de sein. Lorsque la matrice extracellulaire (ECM) est ajoutée à ces systèmes, l’ECM du sein n’est pas utilisée; au lieu de cela, des gels de collagène et des matrices de membrane basale sont utilisés.
Les systèmes in vivo actuels, tels que les xénogreffes dérivées de patients (PDX), ne répondent pas de même aux critères de MPS des NIH parce que les tissus mammaires murins diffèrent considérablement des seins humains. D’ailleurs, les interactions système immunitaire-BC sont de plus en plus reconnues comme clés dans le développement de tumeur, mais les modèles murins immunocompromised utilisés pour générer des tumeurs pdx manquent des cellules T mûres, des cellules de B, et des cellules tueuses naturelles. En outre, tandis que PDX permet aux tumeurs primaires de sein d’être maintenues et développées, les tumeurs de PDX résultantes sont infiltrées avec les cellules stromal murines primaires et l’ECM5.
Pour surmonter ces défis, nous avons développé un nouveau, ex vivo, mps humain tridimensionnel de sein qui répond aux critères de MPS nih. La base de notre MPS mammaire est faite en sandwichant le tissu mammaire humain primaire (HBT) entre deux feuilles de cellules souches dérivées de l’adipose (ASC), également isolées de HBT (Figure 1). Les pistons pour le transfert des feuilles de cellules en sandwich le HBT peuvent être imprimés en 3D ou fabriqués à partir de plastiques acryliques simples(Figure 1H,I). Cette technique adapte notre approche précédemment décrite pour la culture du tissu adipocytaire blanc humain primaire6,7. Le mps de sein peut alors être ensemencé par un modèle de BC de choix, s’étendant des variétés de cellule standard de BC aux tumeurs humaines primaires de sein. Ici, nous montrons que ces BC-MPS sont stables en culture pendant plusieurs semaines (Figure 2) ; inclure des éléments natifs de l’HBT tels que les adipocytes mammaires, l’ECM, l’endothélium, les cellules immunitaires (Figure 3); et récapituler les interactions physiologiques entre BC et HBT telles que la diaphonie métabolique (Figure 4). Enfin, nous montrons que BC-MPS permet l’étude du mouvement amiboïde des cellules BC dans tout HBT (Figure 5).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Accumax</td>
			<td>Innovative Cell Technologies</td>
			<td>1333</td>
			<td>Cell disassoication solution for separation of BC-MPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-058-CI</td>
			<td>Cell detachment solution for passaging of cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BioStor Container 16oz</td>
			<td>National Scientific Supply Co</td>
			<td>MPCE-T016</td>
			<td>For Transport of sterile tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture 75 cm flasks</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430641U</td>
			<td>For culturing ASCs</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Tubes 15mL&#160;</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>339650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved Forceps</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>1631T5</td>
			<td>For maneuvering tissue while mincing&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM low glucose, w/ Glutamax</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10567-014</td>
			<td>For culturing ASCs and BC-MPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS Qualified</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS 10x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14185-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>221465</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc UpCell 6 well plates</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>174901</td>
			<td>Top ASC cell sheet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strep 5,000U</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri Dish 150 cm</td>
			<td>FisherBrand</td>
			<td>FB0875714</td>
			<td>For holding tissue while mincing&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor Blades</td>
			<td>VWR</td>
			<td>55411-055</td>
			<td>Single Edge for mincing tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Strainer 250um&#160;</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>87791</td>
			<td>For separation of BC-MPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture 6 well plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3506</td>
			<td>Bottom ASC cell Sheet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weights/Washers</td>
			<td>BCP Fasteners</td>
			<td>BCP672</td>
			<td>For weighing plungers down 1/2&#34; inner diameter</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling breast cancer in human breast tissue using a microphysiological system

Le cancer du sein (C.-B.) demeure l’une des principales causes de décès chez les femmes. Malgré plus de 700 millions de dollars investis dans la recherche en Colombie-Britannique chaque année, 97 % des médicaments candidats de la Colombie-Britannique échouent aux essais cliniques. Par conséquent, de nouveaux modèles sont nécessaires pour améliorer notre compréhension de la maladie. Le programme de systèmes microphysiologiques (MPS) des NIH a été développé pour améliorer l’application clinique des découvertes scientifiques fondamentales et des nouvelles stratégies thérapeutiques prometteuses. Nous présentons ici une méthode de génération de MPS pour les cancers du sein (BC-MPS). Ce modèle adapte une approche précédemment décrite de culture du tissu adipeux blanc humain primaire (WAT) en prenant en sandwich WAT entre les feuilles de cellules souches adipeuses-dérivées (ASC) s. Les nouveaux aspects de notre BC-MPS comprennent l’ensemencement de cellules BC dans le tissu mammaire humain non malade (HBT) contenant la matrice extracellulaire native, les adipocytes matures, les fibroblastes résidents et les cellules immunitaires; et la prise en sandwich du mélange BC-HBT entre les feuilles ASC dérivées de HBT. Le BC-MPS résultant est stable en culture ex vivo pendant au moins 14 jours. Ce système modèle contient plusieurs éléments du microenvironnement qui influencent la Colombie-Britannique, y compris les adipocytes, les cellules stromales, les cellules immunitaires et la matrice extracellulaire. Ainsi, BC-MPS peut être utilisé pour étudier les interactions entre BC et son microenvironnement. 
Nous démontrons les avantages de notre BC-MPS en étudiant deux comportements de BC connus pour influencer la progression et la métastase de cancer : 1) motilité de BC et 2) diaphonie métabolique de BC-HBT. Tandis que la motilité de BC a été précédemment démontrée utilisant l’imagerie intravital, BC-MPS tient compte de l’imagerie time-lapse à haute résolution utilisant la microscopie de fluorescence pendant plusieurs jours. En outre, tandis que la diaphonie métabolique a été précédemment démontrée utilisant des cellules de BC et des pre-adipocytes murins différenciés en adipocytes non mûrs, notre modèle de BC-MPS est le premier système à démontrer cette diaphonie entre les adipocytes mammaires humains primaires et les cellules de BC in vitro.

Stabilité dans la culture BC-MPS est un système microphysiologique stable qui peut être cultivé in vitro pendant au moins 14 jours. Une image en champ clair des feuilles de cellules ASC a été prise à un grossissement de 100x pour afficher le motif strié de la feuille confluente(Figure 2A). Les feuilles cellulaires ASC sont stables en culture pendant au moins 4 semaines. BC-MPS à 14 jours en culture dans un puits d’une plaque de ...

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Modeling Breast Cancer in Human Breast Tissue using a Microphysiological System

Ce protocole décrit la construction d’un système microphysiologique in vitro pour étudier le cancer du sein utilisant le tissu humain primaire de sein avec les matériaux de commerce.

Modélisation du cancer du sein dans le tissu mammaire humain à l’aide d’un système microphysiologique

Breast cancer (BC) remains a leading cause of death for women. Despite more than $700 million invested in BC research annually, 97% of candidate BC drugs ...

C’est le premier protocole qui permet au tissu mammaire humain d’être maintenu en vie ex vivo pendant des périodes prolongées, permettant directement l’étude des interactions entre le tissu mammaire humain et le cancer du sein humain. Le principal avantage de cette technique est qu’elle permet de maintenir en vie ex vivo des morceaux macroscopiques de tissu mammaire humain, y compris les adipocytes du sein, les cellules immunitaires, les structures vasculaires, les structures canalaires et la matrice extracellulaire. Cette technique a des implications majeures pour plusieurs domaines de la recherche sur le cancer du sein, y compris la médecine personnalisée, le développement pharmaceutique et la physiopathologie de l’initiation tumorale et des processus plus lents du cancer du sein tels que la fibrose et le remodelage de la matrice extracellulaire.Katherine Hebert, une étudiante diplômée de Tulane et Rakesh Gurrala, un étudiant en médecine de Tulane de mon laboratoire, démontrent cette procédure. Pour commencer, faites fondre la solution de gélatine préparée dans un bain-marie à 37 degrés Celsius. Utilisez une pipette sérologique de cinq ou 10 millilitres pour distribuer 2,5 millilitres de cette solution sur chaque piston pour les puits d’une plaque de six puits.Une fois que la gélatine s’est solidifiée, déplacez les plaques ASC codées pNIPAAm vers l’armoire de biosécurité. Placez délicatement les pistons dans les puits de ces plaques afin que la gélatine entre en contact avec les ASC. Placez une rondelle métallique sur le piston pour l’alourdir afin que la gélatine soit en contact direct avec la feuille ASC pendant 30 minutes à température ambiante.Déplacez doucement la plaque avec les pistons dans la boîte stérile de l’armoire de biosécurité et placez le couvercle dessus. Déplacez la boîte dans un réfrigérateur à quatre degrés ou placez l’assiette sur de la glace et un seau à glace dans l’armoire de biosécurité pendant 30 minutes. Dans une armoire de biosécurité, lavez le tissu mammaire humain trois fois avec 10 millilitres de PBS stérile.Utilisez une pince stérile et une lame de rasoir pour hacher grossièrement le BC-MPS et essayez d’enlever autant de fascia et de tissu conjonctif que possible. Une fois que le tissu conjonctif a été enlevé, utilisez une lame de rasoir stérile pour finalement hacher le tissu jusqu’à ce qu’il ait une consistance liquide homogène. Couper la pointe d’une pointe de pipette P1000 pour aider à pipetter le tissu haché.Dans un tube de 1,5 millilitre, combiner le tissu haché, les lignées cellulaires cancéreuses et les milieux BC-MPS comme décrit dans le manuscrit de texte. Déplacez la plaque ACS qui sera utilisée pour la feuille de cellule inférieure de l’incubateur vers l’armoire de biosécurité et aspirez le support de la plaque. Pipettez le mélange de tissu mammaire préparé sur le centre du puits de la plaque ACS inférieure à l’aide de la pointe de la pipette coupée, déplacez la boîte contenant la plaque ACS supérieure avec des pistons vers l’armoire de biosécurité.Retirez délicatement les pistons de gélatine de la plaque enduite de pNIPAAm et placez-les sur le dessus du mélange de tissus. Ajoutez le support BC-MPS au puits et déplacez soigneusement les plaques ACS inférieures avec le mélange BC-MPS et les pistons vers la boîte en plastique stérile. Placez le couvercle de la boîte pour le transport, en prenant soin d’éviter la contamination de la culture.Incuber la plaque inférieure dans la boîte et l’incubateur à 37 degrés Celsius jusqu’à ce que la gélatine soit fondue et que la couche ACS supérieure ait commencé à adhérer à la couche inférieure. Déplacez ensuite la boîte avec les plaques vers l’armoire de biosécurité, retirez doucement les pistons des plaques inférieures pour observer le tissu avec les cellules cancéreuses ancrées au fond du puits. Replacez le couvercle de la plaque de six puits sur la plaque inférieure et incuber à 37 degrés pour faire fondre complètement la gélatine et permettre à la couche supérieure de s’ancrer à la couche inférieure.Déplacez délicatement les plaques vers une armoire de biosécurité et aspirez le support du bord du puits avec une pipette sérologique de 10 millilitres. Ajouter deux millilitres de milieux frais sur le bord de chaque puits pour éviter de délaler le tissu. Maintenir le BC-MPS à 37 degrés Celsius et 5% de dioxyde de carbone pendant la durée souhaitée.Changer les médias tous les deux ou trois jours. Déplacez la plaque vers l’armoire de biosécurité lorsque le BC-MPS est prêt à être analysé. Retirez les supports à l’munis d’une pipette sérologique pour éviter le délogement accidentel de tout tissu.Ajoutez un volume de PBS à chaque puits. Retirez ensuite le PBS avec une pipette sérologique. Ajoutez un millilitre de solution de dissociation cellulaire à chaque puits et déplacez la plaque vers l’incubateur pendant cinq minutes pour permettre à ces cellules de se détacher.Après l’incubation, utilisez un grattoir à cellules pour détacher complètement les cellules et le tissu de la plaque de culture dans une armoire de biosécurité. Transférer la solution avec le tissu dans un tube conique de 15 millilitres et recueillir toutes les cellules restantes en ajoutant deux millilitres de PBS. Enveloppez le tube avec du papier d’aluminium si les cellules sont fluorescentes.Incuber le tube à 37 degrés sous agitation constante dans un agitateur orbital à une fois G pendant 10 à 20 minutes pour dissocier complètement les cellules du tissu. Dans une armoire de biosécurité, utilisez une pipette sérologique pour perturber les touffes de cellules restantes dans le tube. Et filtrer l’échantillon à travers une passoire tissulaire de 250 micromètres dans un nouveau tube de 15 millilitres.Rincez la crépine avec un millilitre de PBS pour recueillir les cellules restantes. Centrifuger les échantillons à 500 fois g à température ambiante pendant cinq minutes pour séparer les adipocytes qui flotteront dans la couche supérieure des cellules cancéreuses et des ASC mélangés ensemble dans une pastille. Transférer la couche d’adipocyte dans un nouveau tube à l’aide d’une pointe de pipette coupée émoussée.Centrifuger à nouveau l’échantillon et utiliser une seringue et une aiguille pour enlever la solution restante sous les adipocytes. Aspirer la solution restante du tube contenant les ASC et les cellules cancéreuses sans perturber la pastille cellulaire. Re-suspendre la pastille dans les milieux PBS ou BC-MPS et utiliser la cytométrie de flux pour trier les cellules en fonction de la fluorescence.Le motif stri-aidé de la feuille ASC confluente est montré ici. Le tissu humain flottant de sein était encore stable ancré par les feuilles de cellules d’ASC au fond du puits après 14 jours de culture. Les images fluorescentes de microscopie démontrent la stabilité du BC-MPS avec MDA-MB-231 exprimant des variétés de cellule de RFP après 14 jours et avec pdx explant triple négatif de tumeur pendant au moins six jours.BC-MPS contenant le tissu de sein a été cultivé in vitro pendant 14 jours, souillé et image pour démontrer les éléments indigènes du tissu au grossissement 100X et 20X. La souillure des marqueurs de macrophage a été employée pour montrer la conservation des macrophages primaires après trois et sept jours dans la culture. L’analyse cytometry d’écoulement des cellules MDA-MB-231 souillées par Bodipy après 14 jours indique l’accumulation minimale de lipide dans la culture 2D et l’accumulation étendue de lipide et bc-MPS.La proportion de cellules MDA-MB-231 positives de lipide était 26,2 fois plus grande dans BC-MPS que la culture 2D. Les cellules cultivées dans BC-MPS ont montré des gouttelettes lipidiques d’augmentation comparées aux cellules cultivées dans la culture 2D standard. Les images de time-lapse de RFP ont marqué BC-MPS avec les cellules MDA-MB-231 ont montré le mouvement amoeboid de 231 cellules avec des pseudo gousses et la motilité élevée.Le tissu mammaire doit être haché assez petit et séparé suffisamment pour être distribué au fond du puits. Le tissu mammaire est très flottant et si les morceaux sont trop gros ou regroupés trop étroitement, les feuilles cellulaires ASC ne pourront pas ancrer le tissu mammaire au fond du puits. Les constructions de cancer du tissu mammaire qui en résultent peuvent subir une digestion enzymatique pour isoler des types particuliers de cellules d’intérêt.Cela permettra de répondre à des questions clés telles que la façon dont les cellules cancéreuses dans le tissu mammaire réagissent différemment à la chimiothérapie par rapport à la culture 2D traditionnelle ou aux organoïdes.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Intra-iliac Artery Injection for Efficient and Selective Modeling of Microscopic Bone Metastasis

Intra-iliaque Artère injection pour la modélisation efficace et sélective des métastases osseuses Microscopique

Intra-iliac artery (IIA) injection is an efficient approach to introduce metastatic lesions of various cancer cells in animals. Compared to the widely ...

Recherche

Recherche en cancérologie

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilisant la génomique fonctionnelle de dépistage pour identifier les cibles de médicaments potentiellement nouveaux dans Cancer Cell Cultures Spheroid

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema

Échographique Évaluation du lymphœdème lié au cancer du sein-

Lymphedema is one of the most common complications after breast cancer surgery. There are many diagnostic tools for lymphedema, but no standard method yet ...

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

Comportement invasif des cellules cancéreuses du sein humain dans Embryonic Zebrafish

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Performing Data Mining And Integrative Analysis Of Biomarker in Breast Cancer Using Multiple Publicly Accessible Databases

L’exploration de données et l’analyse intégrative du biomarqueur dans le cancer du sein à l’aide de plusieurs bases de données accessibles au public

In recent years, emerging databases were designed to lower the barriers for approaching the intricate cancer genomic datasets, thereby, facilitating ...

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Modélisation du cancer du sein par injection intraductale d'adénovirus exprimant la cre dans la glande mammaire de souris

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Obtenir des sphères de cellules souches cancéreuses à partir de tumeurs gynécologiques et du cancer du sein

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Differentiation of Mouse Breast Epithelial HC11 and EpH4 Cells

Différenciation des cellules Epithéliales De l’épithélial de souris HC11 et EpH4

Cadherins play an important role in the regulation of cell differentiation as well as neoplasia. Here we describe the origins and methods of the induction ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Étudier le cancer du sein triple négatif à l’aide d’un modèle orthotopique de cancer du sein

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Transplantation orthotopique de tumeurs mammaires comme modèles précliniques pour le cancer du sein

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...