임상적으로 사용되는 옴마야 저수지를 모방한 Murine Ommaya는 연구자들이 전임상 모델에서 뇌 전이및 보편적으로 치명적인 렙토멘닝에 대한 다양한 직접 표적 치료법을 테스트할 수 있게 합니다. 이 기술의 장점은 연구원이 혈액-뇌 장벽을 우회하여 중추 신경계 전이를 치료하기 위해 뇌척수액에 직접 약물의 미세 리터 양을 전달할 수 있다는 것입니다. 이 Murine Ommaya 이식 프로토콜은 이 절차의 성공을 보장하기 위해 필수적인 스테레오 전술 수술 경험과 무균 기술 교육을 받은 연구원 또는 기술자를 위해 설계되었습니다.
절차를 보여주는 것은 사우스 플로리다 대학에 비교 의학에서 마지 볼드윈과 미셸 다니엘슨, 빈센트 법률, 모피트 암 센터 및 연구소에서 박사 피터 포지스의 실험실에서 수석 연구 동료가 될 것입니다. 먼저 마우스를 킬로그램당 1밀리그램으로 피하시켜 서성 방출 buprenorphine을 사용 하 여 시작. 마우스를 마취 한 후 수술을 준비하십시오.
절개 부위를 오염시키는 모피를 유지하기에 충분한 국경 영역으로 수술 부위를 잘라냅니다. 머리 표면 전체의 털을 면도하고 멸균 기술을 사용하여 피부를 준비합니다. 그런 다음 부위 중앙에서 주변까지 작용하여 발소성 피부 방부제로 부위를 포화시키고 건조시합니다.
척추가 시스테나 마그나와 함께 수평을 유지되도록 몸을 배치합니다. 꼬리에 약간의 견인력을 바르는 동안, 테이프를 꼬리 베이스에 놓아 고정하십시오. 멸균 커튼 이나 멸균 접착제 지원 플라스틱 드레이프 소재를 적용 하여 수술 부위를 오염으로부터 보호하십시오.
목이 완전히 확장되면, 외과 가위 팁을 하강하여 후수 뼈를 가로 질러 약간의 압력을 가하고 피나 사이에서 시작하십시오. 3~5mm 의 중간 절개를 작게 만지작이 있는 굴착성 위로 약간 높입니다. 세포 현탁액의 5 마이크로리터를 30 게이지 해밀턴 주사기로 그립니다.
1~2밀리미터 팁이 있는 무딘 팁의 집게를 사용하여 시스테나 마그나를 부드럽게 누릅니다. 닫힌 위치에 팁을 소개하고 듀라에 하방 압력을 가하면서 열어 보십시오. 두막이 쉽게 식별되고 관련 혈관이 노출 된 부위에서 볼 수 있습니다 때까지 무딘 해부를 반복하십시오.
주변 근동을 후퇴시키기 위해 포셉을 열어 두면서, 듀라 아래에 30 게이지 비코링 바늘을 도입하여 벨을 시각화하여 바늘이 벨 자체를 넘어만 도입되도록 합니다. 주사기 플런저를 천천히 배치하고 듀라 바로 아래에 셀을 전달합니다. 주사 부위에 누출이 있는 경우 면에 기울어진 어플리케이터로 부드러운 압력을 가하십시오.
상처 클립 이나 피부 접착제의 마이크로 드롭을 적용 하 여 피부를 닫습니다. 첫 주 동안 수술 후 매일 마우스를 모니터링하십시오. 마우스가 통증이나 고통에 있는 것처럼 보이는 경우에, 수의학 상담 및 지시에 근거를 둔 최대 5 일 동안 12 에서 24 시간마다 1kg carprofen 당 10 밀리그램의 피하 주사로 취급하십시오.
25 게이지 소형 사출 포트와 1mm 스페이서 디스크를 사용하여 Murine Ommaya 주입 장치를 조립합니다. 치아노아크라이레이트 멸균 접착제를 사용하여 오른쪽 대뇌 반구로 약 2.5 밀리미터의 금속 캐뉼라가 침투하고 멸균 기술에 따라 피부를 준비합니다. 작은 피부 절개를 하고 두개골을 드러내기 위해 기본 피하 조직의 무딘 해부를 만듭니다.
과산화수소에 담근 면 팁 어플리케이터 스틱을 사용하여 두개골을 건조시십시오. 두개골 0.5 밀리미터 후방에 0.9 밀리미터 버 구멍을 뚫고 브레그마의 1.1 밀리미터 측면으로 두라 물질을 노출시합니다. 마이크로드릴을 옆으로 옮기고 버 구멍을 둘러싼 뼈를 부드럽게 득점합니다.
시아노아크라이레이트 멸균 접착제를 사용하여 두개골에 주입 포트를 부착하고 약 2.5밀리미터 깊이에 삽입합니다. 방해 스티치 패턴 또는 지갑 스트링 봉합사에 4-0 흡수성 나일론 봉합사를 사용하여 절개를 봉합. 회복을 위한 개별 케이지에 있는 집 수술 후 마우스.
마우스를 투여하려면 포트 주입 어댑터와 해밀턴 주사기를 사용하여 Murine Ommaya에 액세스하십시오. 집게를 사용하여 소형 사출 포트의 상단을 잡고 포트 인젝터 어댑터를 포트 중격에 부드럽게 삽입합니다. 주사가 이루어지면 포셉으로 포트 주입 어댑터에서 Murine Ommaya를 분리하십시오.
주입 경로를 시각화하기 위해 2%에반스 블루는 뮤린 옴마야 모델을 통해 주입되었다. 염료는 15분 만에 심실과 뇌에 성공적으로 침투했습니다. 30분 후, 염료는 척수에 보였다.
개념의 증거로, BALB/c 마우스는 루시파라그라스 표지Her2+TUBO 유방암 세포주 내 시세테스테론으로 주입되었고, 뮤린 옴마야는 이식되었다. 주사 후 약 1 주일, 마우스는 LMD를 개발하기 시작했다. 이 마우스는 뮤린 옴마야를 통해 관면 주사 또는 내회경을 통해 전신 요법을 통해 Her2 항체 면역 요법으로 일주일에 한 번 치료되었다.
치료되지 않은 마우스가 19일째사망했지만, 뮤린 옴마야를 통해 자궁 내 치료를 회수한 모든 쥐가 살아남았습니다. 4주차까지 종양의 완전한 회귀가 관찰되었습니다. 전신 요법으로 치료된 마우스와 비교하여, 자궁 내 치료를 받은 마우스는 훨씬 더 긴 전반적인 생존을 가졌습니다.
이 절차를 시도할 때, Murine Ommaya를 놓기 전에 두개골이 건조하는 것이 중요합니다. 소량의 접착제를 사용하고 Murine Ommaya를 약 10초 동안 배치하여 두개골을 부착합니다. 이 기술을 통해 연구자들은 중추 신경계 전이 환자를 위한 합리적인 치료 전략을 설계하는 데 임상적으로 관련된 마우스 모델에서 다양한 암 약물을 탐구할 수 있습니다.
