Name: a step-by-step guide to mosquito electroantennography
Uploaded: 2021-03-10T14:30:00
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도움이 되는 토론을 해주신 클레망 비나거(Clément Vinauger) 박사와 제프리 리프펠(Jeffrey Riffell) 박사에게 감사드립니다. 다음의 시약은 BEI Resources, NIAID, NIH를 통해 입수하였다: Anopheles stephensi, 균주 STE2, MRA-128, Mark Q. Benedict에 의해 기여됨; Aedes aegypti, Strain ROCK, MRA-734, David W. Severson 제공; Culex quinquefasciatus, 균주 JHB, 계란, NR-43025. 저자는 Culex quinquefasciatus 및 Anopheles stephensi (균주 : Liston) 모기 알을 제공 한 Jake Tu 박사, Nisha Duggal 박사, James Weger 박사 및 Jeffrey Marano에게 감사드립니다. Aedes albopictus 와 Toxorhynchites rutilus septentrionalis 는 저자가 New River Valley 지역 (VA, USA)에서 수집 한 들판 모기에서 파생됩니다. 이 연구는 생화학과와 Fralin Life Science Institute의 지원을 받았습니다.

1. 식염수 준비
<ol><li>식염수를 미리 준비하여 냉장고에 보관하십시오.</li>
	<li>Beyenbach와 Masia26 을 따라 솔루션을 준비합니다. 참고: mM 단위의 식염수 제조법: 150.0 NaCl, 25.0 HEPES, 5.0 포도당, 3.4 KCl, 1.8 NaHCO3, 1.7 CaCl 2 및 1.0 MgCl2. pH는 1M NaOH로 7.1로 조정됩니다. 선반 보관을 늘리기 위해 이때 포도당이나 자당을 준비에 첨가하지 마십시오. EAG를 실행하기 직?...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=World+health+statistics+2019:+monitoring+health+for+the+SDGs,+sustainable+development+goals.">World health statistics 2019: monitoring health for the SDGs, sustainable development goals.</a> World Health Organization. , (2019).</li><li>Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+olfaction+in+host-seeking+of+mosquitoes:+a+review.">The role of olfaction in host-seeking of mosquitoes: a review.</a> International Journal of Tropical Insect Science. 12 (1-2-3), 287-295 (1991).</li><li>Zwiebel, L. J., Takken, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+regulation+of+mosquito-host+interactions.">Olfactory regulation of mosquito-host interactions.</a> Insect Biochemistry and Molecular Biology. 34 (7), 645-652 (2004).</li><li>Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stop+the+biting:+targeting+a+mosquito's+sense+of+smell.">Stop the biting: targeting a mosquito's sense of smell.</a> Cell. 156 (5), 878-881 (2014).</li><li>Paluch, G., Bartholomay, L., Coats, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosquito+repellents:+a+review+of+chemical+structure+diversity+and+olfaction.">Mosquito repellents: a review of chemical structure diversity and olfaction.</a> Pest Management Science. 66 (9), 925-935 (2010).</li><li>Schneider, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+investigation+on+the+antennal+receptors+of+the+silk+moth+during+chemical+and+mechanical+stimulation.">Electrophysiological investigation on the antennal receptors of the silk moth during chemical and mechanical stimulation.</a> Experientia. 13 (2), 89-91 (1957).</li><li>Raguso, R. A., Light, D. M., Pickersky, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+responses+of+Hyles+lineata+(Sphingidae:+Lepidoptera)+to+volatile+compounds+from+Clarkia+breweri+(Onagraceae)+and+other+moth-pollinated+flowers.">Electroantennogram responses of Hyles lineata (Sphingidae: Lepidoptera) to volatile compounds from Clarkia breweri (Onagraceae) and other moth-pollinated flowers.</a> Journal of Chemical Ecology. 22 (10), 1735-1766 (1996).</li><li>Schweitzer, E. S., Sanes, J. R., Hildebrand, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+electroantennogram+responses+in+the+moth,+Manduca+sexta.">Ontogeny of electroantennogram responses in the moth, Manduca sexta.</a> Journal of Insect Physiology. 22 (7), 955-960 (1976).</li><li>Martel, V., Anderson, P., Hansson, B. S., Schlyter, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+modulation+of+olfaction+by+physiological+state+in+the+Egyptian+leaf+worm+Spodoptera+littoralis+(Lepidoptera:+Noctuidae).">Peripheral modulation of olfaction by physiological state in the Egyptian leaf worm Spodoptera littoralis (Lepidoptera: Noctuidae).</a> Journal of Insect Physiology. 55 (9), 793-797 (2009).</li><li>Spaethe, J., Brockmann, A., Halbig, C., Tautz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+determines+antennal+sensitivity+and+behavioral+threshold+to+odors+in+bumblebee+workers.">Size determines antennal sensitivity and behavioral threshold to odors in bumblebee workers.</a> Naturwissenschaften. 94 (9), 733-739 (2007).</li><li>Suchet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Floral+scent+variation+in+two+Antirrhinum+majus+subspecies+influences+the+choice+of+na&#239;ve+bumblebees.">Floral scent variation in two Antirrhinum majus subspecies influences the choice of na&#239;ve bumblebees.</a> Behavioral Ecology and Sociobiology. 65 (5), 1015-1027 (2011).</li><li>De Jong, R., Pham-Del&#232;gue, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+responses+related+to+olfactory+conditioning+in+the+honeybee+(Apis+mellifera+ligustica).">Electroantennogram responses related to olfactory conditioning in the honeybee (Apis mellifera ligustica).</a> Journal of Insect Physiology. 37 (4), 319-324 (1991).</li><li>Patte, F., Etcheto, M., Marfaing, P., Laffort, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+stimulus-response+curves+for+59+odourants+in+the+honeybee,+Apis+mellifica.">Electroantennogram stimulus-response curves for 59 odourants in the honeybee, Apis mellifica.</a> Journal of Insect Physiology. 35 (9), 667-675 (1989).</li><li>Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+electroantennogram+in+Drosophila+melanogaster+and+its+use+for+identifying+olfactory+capture+and+transduction+mutants.">Characterization of the electroantennogram in Drosophila melanogaster and its use for identifying olfactory capture and transduction mutants.</a> Journal of Neurophysiology. 65 (3), 702-714 (1991).</li><li>Park, K. C., Ochieng, S. A., Zhu, J., Baker, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+discrimination+using+insect+electroantennogram+responses+from+an+insect+antennal+array.">Odor discrimination using insect electroantennogram responses from an insect antennal array.</a> Chemical Senses. 27 (4), 343-352 (2002).</li><li>Du, Y. J., Millar, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+oviposition+bioassay+responses+of+Culex+quinquefasciatus+and+Culex+tarsalis+(Diptera:+Culicidae)+to+chemicals+in+odors+from+Bermuda+grass+infusions.">Electroantennogram and oviposition bioassay responses of Culex quinquefasciatus and Culex tarsalis (Diptera: Culicidae) to chemicals in odors from Bermuda grass infusions.</a> Journal of Medical Entomology. 36 (2), 158-166 (1999).</li><li>Costantini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+behavioural+responses+of+the+malaria+vector+Anopheles+gambiae+to+human-specific+sweat+components.">Electroantennogram and behavioural responses of the malaria vector Anopheles gambiae to human-specific sweat components.</a> Medical and Veterinary Entomology. 15 (3), 259-266 (2001).</li><li>Collins, L. E., Blackwell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+studies+of+potential+oviposition+attractants+for+Toxorhynchites+moctezuma+and+T.+amboinensis+mosquitoes.">Electroantennogram studies of potential oviposition attractants for Toxorhynchites moctezuma and T. amboinensis mosquitoes.</a> Physiological Entomology. 23 (3), 214-219 (1998).</li><li>Seenivasagan, T., Sharma, K. R., Sekhar, K., Ganesan, K., Prakash, S., Vijayaraghavan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram,+flight+orientation,+and+oviposition+responses+of+Aedes+aegypti+to+the+oviposition+pheromone+n-heneicosane.">Electroantennogram, flight orientation, and oviposition responses of Aedes aegypti to the oviposition pheromone n-heneicosane.</a> Parasitology Research. 104 (4), 827-833 (2009).</li><li>Puri, S. N., Mendki, M. J., Sukumaran, D., Ganesan, K., Prakash, S., Sekhar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroantennogram+and+behavioral+responses+of+Culex+quinquefasciatus+(Diptera:+Culicidae)+females+to+chemicals+found+in+human+skin+emanations.">Electroantennogram and behavioral responses of Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) females to chemicals found in human skin emanations.</a> Journal of Medical Entomology. 43 (2), 207-213 (2014).</li><li>Cooperband, M. F., McElfresh, J. S., Millar, J. G., Carde, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attraction+of+female+Culex+quinquefasciatus+Say+(Diptera:+Culicidae)+to+odors+from+chicken+feces.">Attraction of female Culex quinquefasciatus Say (Diptera: Culicidae) to odors from chicken feces.</a> Journal of Insect Physiology. 54 (7), 1184-1192 (2008).</li><li>Dekker, T., Ignell, R., Ghebru, M., Glinwood, R., Hopkins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+mosquito+repellent+odours+from+Ocimum+forskolei.">Identification of mosquito repellent odours from Ocimum forskolei.</a> Parasites &amp; Vectors. 4 (1), 183 (2011).</li><li>Choo, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+chemical+ecology+approach+for+the+identification+of+an+oviposition+attractant+for+Culex+quinquefasciatus.">Reverse chemical ecology approach for the identification of an oviposition attractant for Culex quinquefasciatus.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (4), 714-719 (2018).</li><li>Wolff, G. H., Lahond&#232;re, C., Vinauger, C., Riffell, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromodulation+and+differential+learning+across+mosquito+species.">Neuromodulation and differential learning across mosquito species.</a> bioRxiv. , 755017 (2019).</li><li>Lahond&#232;re, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+olfactory+basis+of+orchid+pollination+by+mosquitoes.">The olfactory basis of orchid pollination by mosquitoes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 117 (1), 708-716 (2020).</li><li>Beyenbach, K., Masia, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+conductances+of+principal+cells+in+Malpighian+tubules+of+Aedes+aegypti.">Membrane conductances of principal cells in Malpighian tubules of Aedes aegypti.</a> Journal of Insect Physiology. 48, 375-386 (2002).</li><li>Oesterle, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Pipette Cookbook. , (2018).</li><li>R Core Team. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=R:+A+language+and+environment+for+statistical+computing.">R: A language and environment for statistical computing.</a> R Foundation for Statistical Computing. , (2018).</li><li>Afify, A., Betz, J. F., Riabinina, O., Lahond&#232;re, C., Potter, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Commonly+used+insect+repellents+hide+human+odors+from+Anopheles+mosquitoes.">Commonly used insect repellents hide human odors from Anopheles mosquitoes.</a> Current Biology. 29 (21), 3669-3680 (2019).</li><li>Martin, F., Riveron, J., Alcorta, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+temperature+modulates+olfactory+reception+in+Drosophila+melanogaster.">Environmental temperature modulates olfactory reception in Drosophila melanogaster.</a> Journal of Insect Physiology. 57 (12), 1631-1642 (2011).</li><li>Qiu, Y. T., Gort, G., Torricelli, R., Takken, W., van Loon, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+blood-feeding+on+olfactory+sensitivity+of+the+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae:+application+of+mixed+linear+models+to+account+for+repeated+measurements.">Effects of blood-feeding on olfactory sensitivity of the malaria mosquito Anopheles gambiae: application of mixed linear models to account for repeated measurements.</a> Journal of Insect Physiology. 59 (11), 1111-1118 (2013).</li><li>Taylor, B., Jones, M. D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+circadian+rhythm+of+flight+activity+in+the+mosquito+Aedes+aegypti+(L.):+the+phase-setting+effects+of+light-on+and+light+off.">The circadian rhythm of flight activity in the mosquito Aedes aegypti (L.): the phase-setting effects of light-on and light off.</a> Journal of Experimental Biology. 51 (1), 59-70 (1969).</li><li>Eilerts, D. F., VanderGiessen, M., Bose, E. A., Broxton, K., Vinauger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor-specific+daily+rhythms+in+the+olfactory+sensitivity+and+behavior+of+Aedes+aegypti+mosquitoes.">Odor-specific daily rhythms in the olfactory sensitivity and behavior of Aedes aegypti mosquitoes.</a> Insects. 9 (4), 147 (2018).</li><li>Krishnan, B., Dryer, S. E., Hardin, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythms+in+olfactory+responses+of+Drosophila+melanogaster.">Circadian rhythms in olfactory responses of Drosophila melanogaster.</a> Nature. 400 (6742), 375-378 (1999).</li><li>Pelletier, J., Guidolin, A., Syed, Z., Cornel, A. J., Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Knockdown+of+a+mosquito+odorant-binding+protein+involved+in+the+sensitive+detection+of+oviposition+attractants.">Knockdown of a mosquito odorant-binding protein involved in the sensitive detection of oviposition attractants.</a> Journal of Chemical Ecology. 36 (3), 245-248 (2010).</li></ol>

후각 매개 행동은 생리적(예: 연령, 시간) 및 환경(예: 온도, 상대 습도)을 포함한 많은 요인의 영향을 받습니다30. 따라서 EAG를 수행 할 때 동일한 생리적 상태 (즉, 연령 모니터링, 굶주림, 짝짓기)에있는 곤충을 사용하는 것이 필수적입니다 31 건조를 피하기 위해 준비 주변에 따뜻하고 습한 환경을 유지하는 것이 필수적입니다. 약 25 °C의 온도가 이상적이며 주?...

모기는 지구상에서 가장 치명적인 유기체로, 연간 백만 명 이상의 목숨을 앗아가고 세계 인구의 절반 이상을 그들이 전염시키는 병원체에 노출될 위험에 처하게합니다. 이 곤충들은 먹이를 먹을 숙주(식물과 동물 모두)를 찾고, 짝짓기와 산란을 하고, 애벌레와 성충 단계 모두에서 포식자를 피하기 위해 광범위한 단서(즉, 열, 시각, 기계, 후각, 청각)에 의존한다 2,3. 이러한 감각 중에서, 후각은 위에서 언급한 행동, 특히 냄새 분자 2,3의 중장거리 검출에 중요한 역할을 한다. 숙주 또는 산란 부위에서 방출되는 냄새는 모기, 족근 및 더듬이에 위치한 다양한 특정 후각 수용체(예: GR, OR, IR)에 의해 감지됩니다 2,3.
후각은 숙주 탐색(식물과 동물), 짝짓기 및 산란 행동의 핵심 구성 요소이기 때문에 모기 방제를 위한 새로운 도구를 개발하기 위한 이상적인 목표가 된다4. 모기 퇴치제(예: DEET, IR3535, 피카리딘)와 미끼(예: BG 센티넬 인간 미끼)에 대한 연구는 매우 풍부하지만5, 현재 모기 방제의 과제(예: 살충제저항성, 침입종)로 인해 모기 생물학에 입각한 새롭고 효율적인 방제 방법을 개발하는 것이 필수적이다.
많은 기술(예: 후각계, 착륙 분석, 전기생리학)이 모기에서 화합물 또는 화합물 혼합물의 생체 활성을 평가하는 데 사용되었습니다. 그 중에서도 electroantennography (또는 electroantennograms (EAG))를 사용하여 냄새 물질이 모기 안테나에 의해 감지되는지 여부를 결정할 수 있습니다. 이 기술은 Schneider6에 의해 처음 개발 되었으며 그 이후로 나방 7,8,9, 땅벌10,11, 꿀벌 12,13, 초파리14,15를 포함하여 다양한 곤충 속에서 사용되었습니다. Electroantennography는 또한 모기 16,17,18,19,20,21,22,23,24,25의 단일 또는 다중 안테나를 포함하여 다양한 프로토콜을 사용하여 사용되었습니다.
모기는 비교적 작고 섬세한 곤충으로 다소 얇은 안테나를 가지고 있습니다. 나방이나 땅벌과 같은 더 큰 곤충에 대해 EAG를 수행하는 것은 크기가 크고 안테나가 두껍기 때문에 비교적 쉽지만 모기에서 EAG를 수행하는 것은 어려울 수 있습니다. 특히, 우수한 신호 대 잡음비를 유지하고 지속적인 응답 준비는 데이터 재현성과 신뢰성을 위한 두 가지 주요 요구 사항입니다.
여기에 제안 된 저소음 EAG에 대한 단계별 가이드는 이러한 한계에 대한 솔루션을 직접 제공하고이 프로토콜을 Aedes, Anopheles, Culex 및 Toxorhynchites를 포함한 다양한 속의 여러 모기 종에 적용 할 수 있도록하고 여성과 남성 모두를위한 기술을 설명합니다. Electroantennography는 행동 분석을 통해 원자가를 결정한 후 미끼 개발에 활용할 수 있는 생리 활성 화합물을 스크리닝하고 결정하는 빠르고 신뢰할 수 있는 방법을 제공합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Air table Clean Bench</td>
			<td>TMC</td>
			<td>https://www.techmfg.com/products/labtables/cleanbench63series/accessoriess</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analog-to-digital board</td>
			<td>National Instruments</td>
			<td>BNC-2090A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop Flowbuddy Complete</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>59-122BC</td>
			<td>To anesthesize mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosillicate glass capillary</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>B100-78-10</td>
			<td>To make the recording and references capillaries</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chemicals</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Benzaldehyde: 418099-100 mL; Butyric acid: B103500-100mL; 1-Hexanol: 471402-100mL; Mineral oil: M8410-1L</td>
			<td>Chemicals used for the experiments presented here</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2</td>
			<td>Airgas or Praxair</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To anesthesize mosquitoes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold Light Source</td>
			<td>Volpi</td>
			<td>NCL-150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>1 mL (309628)&#160; / 3 mL (309657)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode cables</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>5371</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode gel salt free</td>
			<td>Parkerlabs</td>
			<td>12-08-Spectra-360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday cage</td>
			<td>TMC</td>
			<td>https://www.techmfg.com/products/electric-and-magnetic-field-cancellation/faradaycages</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flowmeters</td>
			<td>Bel-art</td>
			<td>65 mm (H40406-0010) / 150 mm (H40407-0075)</td>
			<td>One of each</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GCMS vials and caps</td>
			<td>Thermo-fisher scientific</td>
			<td>2-SVWKA8-CPK</td>
			<td>To prepare odorant dilutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass syringes (Fortuna)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z314307</td>
			<td>For odor delivery to the EAG prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humbug</td>
			<td>Quest Scientific</td>
			<td>http://www.quest-sci.com/</td>
			<td>Noise reducer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mm Jack Holder, Narrow, 90 deg., With Wire</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>675748</td>
			<td>Electrode holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic bases</td>
			<td>Kanetec</td>
			<td>MB-FX</td>
			<td>x 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB + Toolboxes</td>
			<td>Mathworks</td>
			<td>https://www.mathworks.com/products/matlab.html</td>
			<td>For delivering the pulses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical air</td>
			<td>Airgas or Praxair</td>
			<td>N/A</td>
			<td>For main airline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikkon</td>
			<td>SMZ-800N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulators Three-Axis Coarse/Fine Compact Micromanipulator</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>MHW-3</td>
			<td>x 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode amplifier with headstage</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>Model 1800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mosquito rearing supplies</td>
			<td>Bioquip</td>
			<td>https://www.bioquip.com/Search/WebCatalog.asp</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>25G (305127) / 21G (305165)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pasteur pipettes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-678-6A</td>
			<td>For odor delivery to the EAG prep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE Tubing of different diameters</td>
			<td>Mc Master Carr</td>
			<td>N/A</td>
			<td>To connect solenoid valve, flowmeter, airline ect.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30V/5A DC Power Supply</td>
			<td>Dr. Meter</td>
			<td>PS-305DM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>R version 3.5.1</td>
			<td>R project</td>
			<td>https://www.r-project.org/</td>
			<td>For data analyses</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Relay for solenoid valve</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Custom made</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver wire 0.01&#8221;</td>
			<td>A-M Systems</td>
			<td>782500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solenoid valve (3-way)</td>
			<td>The Lee Company</td>
			<td>LHDA0533115H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>WinEDR software</td>
			<td>Strathclyde Electrophysiology Software</td>
			<td>WinEDR V3.9.1</td>
			<td>For EAG recording</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Whatman paper</td>
			<td>Cole Parmer</td>
			<td>UX-06648-03</td>
			<td>To load chemical in glass syringe / Pasteur pipette</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a step-by-step guide to mosquito electroantennography

암컷 모기는 지구상에서 가장 치명적인 동물로, 혈액 식사를 할 때 전염되는 병원체로 인해 매년 100만 명이 넘는 사람들의 목숨을 앗아갑니다. 먹이를 먹을 숙주를 찾기 위해 모기는 시각적, 기계적, 열적, 후각적 등 다양한 감각 신호에 의존합니다. 이 연구는 연구자들이 모기가 농도에 따라 개별 화학 물질과 화학 물질의 혼합을 감지 할 수 있는지 여부를 평가할 수있는 전기 전기 검사 (EAG) 기술에 대해 자세히 설명합니다. 가스 크로마토 그래피 (GC-EAG)와 결합 할 때,이 기술은 안테나를 전체 헤드 스페이스 / 복잡한 혼합물에 노출시키고 모기가 검출 할 수있는 관심있는 샘플에 존재하는 화학 물질을 결정합니다. 이것은 숙주의 체취뿐만 아니라 식물 꽃다발 또는 기타 생태학적으로 관련된 냄새(예: 산란 부위 냄새 물질)에 적용할 수 있습니다. 여기에서 우리는 긴 기간의 준비 반응 시간을 허용하고 Aedes, Culex, Anopheles 및 Toxorhynchites 모기를 포함한 여러 속의 암컷 및 수컷 모기 모두에 적용할 수 있는 프로토콜을 설명했습니다. 후각은 일반적으로 모기 숙주 상호 작용 및 모기 생물학에서 중요한 역할을하기 때문에 EAG 및 GC-EAG는 새로운 질병 벡터 제어 전략 (예 : 미끼)의 개발을위한 관심 화합물을 밝힐 수 있습니다. 행동 분석으로 보완하면 각 화학 물질의 원자가 (예 : 유인 물질, 기피제)를 결정할 수 있습니다.

Electroantennography는 곤충 안테나에 의해 화학 물질 또는 화학 물질 혼합물이 감지되는지 여부를 결정하는 강력한 도구입니다. 또한 농도의 점진적인 증가를 사용하여 주어진 화학 물질에 대한 검출 역치를 결정하는 데 사용할 수 있습니다(즉, 용량 곡선 반응, 그림 4B). 또한, 숙주 관련 악취에 대한 반응에 대한 방충제의 효과를 시험하는 것이 유용하다(29)....

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A Step-by-Step Guide to Mosquito Electroantennography

이 기사는 암컷과 수컷을 포함한 여러 속의 모기에서 성공적이고 저소음 근위전도를 위한 단계별 프로토콜을 자세히 설명합니다.

모기 전기 조영술에 대한 단계별 가이드

Female mosquitoes are the deadliest animals on earth, claiming the lives of more than 1 million people every year due to pathogens they transmit when ...

electroantennography의 경우, 구체적이고 일관된 생리 학적 상태의 모기를 사용하는 것이 신뢰할 수있는 결과를 얻는 데 중요합니다. 단계별 프로토콜은 모기에서 지속적인 전기 기록을 허용합니다. 이 방법은 여러 모기 종과 수컷과 암컷 모두에서 사용할 수 있습니다.electroantennographic 기술은 또한 딱정벌레, 파리, 키스 벌레 및 개미를 포함한 다른 곤충 모델로 전치 될 수 있습니다. 시작하려면 분해를 방지하기 위해 보관된 섭씨 20도 냉동고에서 냄새 혼합물과 용매 제어 장치가 들어 있는 1.5밀리리터 호박색 바이알을 꺼냅니다. 다음으로, 10 마이크로 리터의 냄새 발생기 용액을 라벨이 붙은 유리 주사기 내부에로드 된 여과지 조각에 피펫팅합니다.실험 당일 모기를 분리하십시오. 현미경으로 작업하면서 한 쌍의 집게를 사용하여 필라멘트로 두 개의 붕규산 모세관 끝을 부드럽게 부수십시오. electroantennography 또는 EAG 실험을 실행하기 전에 전극 홀더가 붕규산 파편없이 내부가 깨끗한지 확인하십시오.그런 다음 전극 홀더의 은색 와이어를 순수한 표백제에 5분 동안 담가 와이어가 어둡고 무광택 회색으로 변할 때까지 염소화를 수행합니다. 그런 다음 전선을 헹굽니다. 고무 마개를 풀고 20게이지 바늘을 사용하여 모세관 내부를 식염수로 채웁니다.모세관을 헹구고 두 모세관에 와이어를 삽입합니다. 와이어의 끝을 모세관의 끝에서 1mm 미만으로 유지하십시오. 모세관을 전극 홀더 내부의 고무 링에 깨지지 않고 통과시키고 기포가 없는지 확인한 후 고무 마개를 부드럽게 조입니다.기준 전극 홀더의 더 넓은 개구부와 기록 전극 홀더의 더 작은 개구부가 있는 모세관을 사용하십시오. 헤드를 장착할 준비가 될 때까지 팁이 마르지 않도록 두 개의 장착된 전극 홀더를 습식 청소 물티슈에 그대로 두십시오. 에어 테이블이 위로 올라갔는지 확인하십시오.항공사에 막힘이 없으며 공기가 켜져 있습니다. 실험 도중 교체를 방지하기 위해 의료용 공기 탱크가 가득 찼는지 확인하고 가습기의 기포를 확인하십시오. 컴퓨터, 소프트웨어 응용 프로그램 및 밸브 전원 공급 장치를 켭니다.인터넷 연결을 확인한 후 제어 펄스를 전달하여 펄스를 전달하는 밸브가 작동하는지 확인합니다. 알루미늄 판을 얼음 위에 놓고 그 위에 습식 세정 물티슈를 바르고 모서리에 작은 전극 젤 덩어리를 놓습니다. 모기를 식히기 위해 얼음 위에 모기 컵을 놓습니다.모기의 각 안테나 끝을 마이크로 가위로 자릅니다. 집게를 사용하여 전극 젤 덩어리 옆에 모기를 끌고 각 안테나의 끝을 젤에 부드럽게 담그십시오. 집게를 사용하여 모기 안테나를 당겨서 서로 옆에 두십시오.마이크로 가위를 사용하여 모기의 머리를 자릅니다. 기준 전극의 끝을 젤에 부드럽게 담그고 목에 닿아 머리가 달라붙도록 합니다. 기준 헤드 전극을 마이크로 매니퓰레이터에 놓습니다.두 전극 홀더를 앰프에 연결합니다. 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 녹음 전극을 안테나 팁에 최대한 가깝게 배치합니다. 그런 다음 안테나 팁을 녹음 전극에 삽입합니다.항공사 튜브를 모기 머리 준비물 가까이에 1cm 정도 놓습니다. 켜기 ampliifier와 노이즈 감속기를 사용하고 베이스라인 신호에 잡음이 없는지 확인합니다. 소음 수준이 만족스러우면 첫 번째 냄새 주사기를 에어라인 구멍에 삽입하여 테스트를 수행하고 패러데이 케이지를 닫습니다.그런 다음 EAG 소프트웨어에서 녹음을 클릭하여 펄스를 전달합니다. EAG 반응을 밀리 볼트 단위의 진폭으로 측정 한 후 다음 냄새 또는 농도로 진행하십시오. 이 실험은 모기 종이 다른 화학 물질에 대해 다양한 후각 반응을 나타낼 수 있음을 성공적으로 보여줍니다.음성 대조군으로 사용된 미네랄 오일에 대한 반응이 없었습니다. 전기적 노이즈로 인한 결과의 오류는 악어 클립을 사용하여 패러데이 케이지에 요소를 접지하여 줄일 수 있습니다. 동일한 냄새 물질에 대한 반응 역치는 모기 종에 따라 크기가 다를 수 있습니다.예를 들어, Toxorhynchites rutilus septentrionalis 모기는 Aedes aegypti, Anopheles stephensi 및 Culex quinquefasciatus에 비해 매우 큰 EAG를 생산합니다. 양성 대조군인 벤즈알데히드에 대한 반응으로 큰 편향이 관찰되었습니다. 음성 대조군에 대한 반응이 부족한 반면, 미네랄 오일.이러한 평균 안테나 응답은 막대 다이어그램에 표시됩니다. 추가적으로, 각 모기 종에 대한 특정 화학 물질을 검출하는 임계 값은 안테나를 제시하고, 화학 물질의 농도를 증가시키고, 용량 반응 곡선을 플로팅함으로써 결정되었다. 머리가 잘리고 장착 된 후 가능한 한 빨리 녹음을 시작하여 준비의 큰 반응을 보장하는 것이 중요합니다.EAG는 모기 안테나가 주어진 농도에서 주어진 화학 물질에 반응하는지 여부를 결정할 수 있습니다. 그러나이 화학 물질의 균형을 결정할 수는 없습니다. 예를 들어, 그것이 유인제인지 회개인지.

Research

JoVE Journal

Biology

Protocol for Mosquito Rearing (A. gambiae)

Protocol for Mosquito Rearing A. gambiae

모스키토 리어링 (A. gambiae)에 대한 프로토콜

This protocol describes mosquito rearing in the insectary. The insectary rooms are maintained at 28&deg;C and ~80% humidity, with a 12 hr. day/night ...

연구

생물학

Building a Better Mosquito: Identifying the Genes Enabling Malaria and Dengue Fever Resistance in A. gambiae and A. aegypti Mosquitoes

더 나은 모스키토 구축 : A. gambiae 및 A. aegypti 모기에 말라리아와 뎅그열 발열 저항을 사용 유전자를 확인

In this interview, George Dimopoulos focuses on the physiological mechanisms used by mosquitoes to combat Plasmodium falciparum and dengue virus ...

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