Name: serial block-face scanning electron microscopy (sbf-sem) of biological tissue samples
Uploaded: 2021-03-26T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy SBF-SEM of Biological Tissue Samples at JoVE.com

Vi vil takke Dr. Sam Hanlon, Evelyn Brown og Margaret Gondo for deres utmerkede tekniske assistanse. Denne forskningen ble delvis støttet av National Institutes of Health (NIH) R01 EY-018239 og P30 EY007551 (National Eye Institute), delvis av Lion's Foundation for Sight, og delvis av NIH 1R15 HD084262-01 (National Institute of Child Health &Human Development).

Alle dyr ble håndtert i henhold til retningslinjene beskrevet i Association for Research in Vision and Ophthalmology Statement for the Use of Animals in Vision and Ophthalmic Research og University of Houston College of Optometry animal handling guidelines. Alle dyreprosedyrer ble godkjent av institusjonene der de ble håndtert: Mus, rotte, kanin, marsvin og ikke-menneskelige primatprosedyrer ble godkjent av University of Houston Animal Care and Use Committee, sebrafiskprosedyrer ble godkjent av DePauw University Animal...

Hensikten med dette metodepapiret er å fremheve vevsforberedelses- og bildemetodikken som har gjort det mulig for laboratoriet vårt å fange opp høyoppløselige serielle elektronmikroskopibilder på en pålitelig måte, og å påpeke kritiske trinn som fører til dette resultatet, samt potensielle fallgruver som kan oppstå når du utfører SBF-SEM-avbildning. Suksess ved hjelp av denne protokollen krever riktig fiksering av vev, impregnering av tungmetaller i prøven, modifikasjoner av innebyggingsharpiksen for å re...

Seriell blokk ansiktsskanning elektronmikroskopi (SBF-SEM) ble først beskrevet av Leighton i 1981 hvor han formet et skanningselektronmikroskop forsterket med en innebygd mikrotom som kunne kutte og bilde tynne deler av vev innebygd i harpiks. Dessverre begrenset tekniske begrensninger bruken til ledende prøver, da ikke-ledende prøver som biologisk vev akkumulerte uakseptable ladenivåer (elektronoppbygging i vevsprøven)1. Mens belegg blokk-ansikt mellom kutt med fordampet karbon redusert vev lading, dette sterkt økt bildebehandling oppkjøpstid og bildelagring forble et problem som datateknologi på den tiden var utilstrekkelig til å administrere de store filstørrelsene som er opprettet av enheten. Denne metodikken ble revidert av Denk og Horstmann i 2004 ved hjelp av en SBF-SEM utstyrt med et variabelt trykkkammer2. Dette tillot innføring av vanndamp til bildekammeret som reduserer lading i prøven, noe som gjør avbildning av ikke-ledende prøver levedyktig, om enn med tap av bildeoppløsning. Ytterligere forbedringer i vevsforberedelse og avbildningsmetoder tillater nå avbildning ved hjelp av høyt vakuum, og SBF-SEM-avbildning er ikke lenger avhengig av vanndamp for å spre lading3,4,5,6,7,8,9. Mens SBF-SEM har sett en eksponentiell økning i bruk de siste årene, er tekniske aspekter som riktig vevsforberedelse og avbildningsparametere avgjørende for suksessen til denne bildemodaliteten.
SBF-SEM tillater automatisert innsamling av tusenvis av serieregistrerte elektronmikroskopibilder, med planaroppløsning så liten som 3-5 nm10,11. Vev, impregnert med tungmetaller og innebygd i harpiks, er plassert i et skanningselektronmikroskop (SEM) som inneholder en ultramikrotomi utstyrt med en diamantkniv. En flat overflate er kuttet med diamantkniven, kniven trekkes tilbake, og overflaten av blokken skannes i et rastermønster med en elektronstråle for å skape et bilde av vev ultrastruktur. Blokken heves deretter en bestemt mengde (f.eks. 100 nm) i z-aksen, kjent som et "z-trinn", og en ny overflate kuttes før prosessen gjentas. På denne måten produseres en 3-dimensjonal (3D) blokk med bilder når vevet kuttes bort. Dette bildesystemet drar ytterligere nytte av enhetens automatiserte natur, slik at man kan forlate mikroskopet uten tilsyn under bildebehandlingsprosessen, med den automatiserte samlingen av hundrevis av bilder mulig på en enkelt dag.
Mens SBF-SEM-avbildning primært bruker backscattered elektroner for å danne et bilde av blokkflaten, genereres sekundære elektroner under bildebehandlingsprosessen12. Sekundære elektroner kan akkumuleres, sammen med backscattered og primærstråleelektroner som ikke unnslipper blokken, og produserer "vevslading", noe som kan føre til et lokalisert elektrostatisk felt ved blokkflaten. Denne elektronakkumuleringen kan forvrenge bildet eller føre til at elektroner kastes ut av blokken og bidrar til signalet som samles inn av backscatter-detektoren, og reduserer signal-til-støy-forholdet13. Mens nivået av vevslading kan reduseres ved å redusere elektronstrålespenningen eller intensiteten, eller redusere strålebotiden, resulterer dette i et redusert signal-til-støy-forhold14. Når en elektronstråle med lavere spenning eller intensitet brukes, eller strålen bare har lov til å bo innenfor hvert pikselrom i en kortere periode, blir mindre backscattered elektroner kastet ut av vevet og fanget av elektrondetektoren, noe som resulterer i et svakere signal. Denk og Horstmann håndterte dette problemet ved å introdusere vanndamp i kammeret, og dermed redusere ladningen i kammeret og på blokkflaten på bekostning av bildeoppløsning. Med et kammertrykk på 10-100 Pa er en del av elektronstrålen spredt og bidrar til bildestøy og tap av oppløsning, men dette produserer også ioner i prøvekammeret som nøytraliserer ladningen i prøveblokken2. Nyere metoder for nøytralisering av ladningen i prøveblokken bruker brenngassinjeksjon av nitrogen over blokkflaten under avbildning, eller introduserer negativ spenning til SBF-SEM-trinnet for å redusere sondestråle-lading energi og øke signalet samlet inn6,7,15. I stedet for å introdusere stadiumskjevhet, kammertrykk eller lokalisert nitrogeninjeksjon for å redusere ladningsoppbyggingen på blokkoverflaten, er det også mulig å øke reduktiviteten til harpiksen ved å introdusere karbon til harpiksblandingen, noe som gir mer aggressive bildebehandlingsinnstillinger16. Følgende generelle protokoll er en tilpasning av Deerinck et al. protokollen publisert i 2010 og dekker modifikasjoner på vevsforberedelse og avbildningsmetoder vi fant nyttige for å minimere vevslading samtidig som vi opprettholder høyoppløselig bildeoppkjøp3,17,18,19. Mens den tidligere nevnte protokollen fokuserte på vevsbehandling og tungmetallimpregnering, gir denne protokollen innsikt i bildebehandlings-, dataanalyse- og rekonstruksjonsarbeidsflyten som er knyttet til SBF-SEM-studier. I vårt laboratorium har denne protokollen blitt vellykket og reprodusert påført et bredt utvalg av vev, inkludert hornhinne og fremre segmentstrukturer, øyelokk, lacrimal og hardere kjertel, netthinne og optisk nerve, hjerte, lunge og luftvei, nyre, lever, cremaster muskel, og cerebral cortex / medulla, og i en rekke arter, inkludert mus, rotte, kanin, marsvin, fisk, monolayer og stratifiserte cellekulturer, gris, ikke-menneskelig primat, samt menneskelig20,21,22,23. Selv om små endringer kan være verdt for spesifikke vev og applikasjoner, har denne generelle protokollen vist seg å være svært reproduserbar og nyttig i sammenheng med vårt kjerneavbildningsanlegg.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1/16 x 3/8 Aluminum Rivets</td>
			<td>Industrial Rivet &#38; Fastener Co.</td>
			<td>6N37RFLAP/1100</td>
			<td>Used as specimen pins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5mm Flathead Screwdriver</td>
			<td>Wiha Quality Tools</td>
			<td>27225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>RT 10000</td>
			<td>Used to dilute silver paint.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspartic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8949</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conductive Silver Paint</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>16062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denton Desk-II Vacuum Sputtering Device equipped with standard gold foil target</td>
			<td>Denton Vacuum</td>
			<td>N/A</td>
			<td>This is the gold-sputtering device used by the authors, alternates are acceptable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double-edged Razors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-949-411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embed 812</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>14120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gatan 3View2 mounted in a Tescan Mira3 Field emission SEM</td>
			<td>Gatan &#38; Tescan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>This is the SBF-SEM device used by the authors, alternates are acceptable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Shell Vials, 0.5 DRAM (1.8 ml)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72630-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gluteraldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>16320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gorilla Super Glue - Impact Tough</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>Refered to as cyanoacrylate glue in text.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketjen Black</td>
			<td>HM Royal</td>
			<td>EC-600JD</td>
			<td>Refered to as carbon black in text.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOH</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>18-605-593</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead Nitrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>L62-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave</td>
			<td>Pelco</td>
			<td>BioWave Pro</td>
			<td>This is the microwave used by the authors, alternates are acceptable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium Tetroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>201030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Ferrocyanide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9387</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Embedding Mold</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>10504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Cacodylate Trihydrate</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>12300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Samco Transfer Pipette</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>202</td>
			<td>Used to make specimen pin storage tubes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swiss Pattern Needle Files</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>62115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiocarbohydrazide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>223220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl Acetate</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>21447-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reconstruction Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amira Software</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Used to create the reconstructions found in figures 5-7 and 9.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji (Fiji is Just ImageJ)</td>
			<td>ImageJ.net</td>
			<td>N/A</td>
			<td>TrakEM2 can be added to Fiji to asist in manual segmentation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopy Image Browser (MIB)</td>
			<td>University of Helsinki, Institute of Biotechnology</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reconstuct Software</td>
			<td>Neural Systems Lab</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuRVoS Workbench</td>
			<td>Diamond Light Source &#38; The University of Nottingham</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SyGlass</td>
			<td>IstoVisio, Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Allows for reconstruction in virtual reality and histogram-based reconstruction methods.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

serial block-face scanning electron microscopy (sbf-sem) of biological tissue samples

Seriell blokk-ansikt skanning elektronmikroskopi (SBF-SEM) gjør det mulig å samle hundrevis til tusenvis av serieregistrerte ultrastrukturelle bilder, og tilbyr en enestående tredimensjonal visning av vevsmikroanatomi. Mens SBF-SEM har sett en eksponentiell økning i bruk de siste årene, er tekniske aspekter som riktig vevsforberedelse og avbildningsparametere avgjørende for suksessen til denne bildemodaliteten. Dette bildesystemet drar nytte av enhetens automatiserte natur, slik at man kan forlate mikroskopet uten tilsyn under bildebehandlingsprosessen, med den automatiserte samlingen av hundrevis av bilder mulig på en enkelt dag. Men uten passende vev forberedelse cellulær ultrastruktur kan endres på en slik måte at feil eller villedende konklusjoner kan trekkes. I tillegg genereres bilder ved å skanne blokksiden av en harpiks-innebygd biologisk prøve, og dette gir ofte utfordringer og hensyn som må tas. Opphopning av elektroner i blokken under avbildning, kjent som "vevslading", kan føre til tap av kontrast og manglende evne til å sette pris på cellulær struktur. Videre, mens økende elektronstråleintensitet / spenning eller synkende stråleskanningshastighet kan øke bildeoppløsningen, kan dette også ha den uheldige bivirkningen av å skade harpiksblokken og forvrenge etterfølgende bilder i bildeserien. Her presenterer vi en rutinemessig protokoll for fremstilling av biologiske vevsprøver som bevarer cellulær ultrastruktur og reduserer vevslading. Vi tar også hensyn til bildebehandling for rask anskaffelse av seriebilder av høy kvalitet med minimal skade på vevsblokken.

Mus Hornhinnen Denne protokollen har blitt brukt mye på musen hornhinnen. Ved hjelp av SBF-SEM-avbildning ble det vist seg at et nettverk av elastinfrie mikrofibrilbunter (EFMB-er) var til stede i den voksne mushinnen. Det ble tidligere antatt at dette nettverket bare var til stede under embryonal og tidlig postnatal utvikling. SBF-SEM avslørte et omfattende EFMB-nettverk i hele hornhinnen, med individuelle fibre funnet å være 100-200 nm i diameter når de måles i tverrsnitt. Det ble også funnet...

Watch this Scientific Journal Video about Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy SBF-SEM of Biological Tissue Samples at JoVE.com

Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy SBF-SEM of Biological Tissue Samples

Denne protokollen skisserer en rutinemessig metode for bruk av seriell blokk-ansikt skanning elektronmikroskopi (SBF-SEM), en kraftig 3D-bildeteknikk. Vellykket påføring av SBF-SEM hengsler på riktig fiksering og vevsfargingsteknikker, samt nøye vurdering av bildebehandlingsinnstillinger. Denne protokollen inneholder praktiske hensyn for hele denne prosessen.

Seriell blokk-ansiktsskanning elektronmikroskopi (SBF-SEM) av biologiske vevsprøver

Serial block-face scanning electron microscopy (SBF-SEM) allows for the collection of hundreds to thousands of serially-registered ultrastructural images, ...

Seriell blokk-ansikt skanning elektronmikroskopi gir en enestående visning av tredimensjonale vev ultra strukturer, og kan svare på en rekke spørsmål tidligere umulig eller overmåte vanskelig å forfølge. Denne teknikken tillater rask og reproduserbar produksjon av tredimensjonale datasett med minimal vevslading og artefakter. Og viktigst av alt, det tillater automatisert fangst av tusenvis av bilder daglig.Standard transmisjonselektronmikroskopi gir utmerket cellulær ultrastruktur. Disse bildene mangler imidlertid tredimensjonal kontekst, og kan være vanskelige å tolke. Seriell blokk-ansikt skanning elektronmikroskopi gir den tredimensjonale konteksten, slik at tolkningen av komplekse prosesser.Selv om denne protokollen er pålitelig og reproduserbar, krever visse trinn presisjon og er kritisk viktige for suksessen til denne metoden. Denne videoen vil demonstrere disse kritiske trinnene i detalj. Etter å ha fikset prøver i 0,1 molar natriumkakrodylatbuffer, som inneholder 2,5% glutaraldehyd og to millimolar kalsiumklorid, bør prøver kuttes i blokker som ikke er større enn to millimeter kubert, og vaskes med 0,1 molar natriumkakroodylatbuffer som inneholder to millimolar kalsiumklorid.Vevet blir deretter sekvensielt farget med osmium ferrocyanid, tiokarbohydrazid og osmium tetroxide. Etter osmium tetroksid inkubasjon, behandle vevet med 1% vandig uranylacetat ved fire grader Celsius over natten. Neste morgen oppløses 0,066 gram blynitrat i 10 milliliter 0,03 molar aspartinsyreoppløsning, og bruk et normalt kaliumhydroksid for å justere pH i Waltons bly aspartatløsning til 5,5.Etter oppvarming av løsningen i ovnen, vask vevet fem ganger i tre minutter per vask i romtemperatur, dobbeltdestillert vann, før du overfører vevet til en 60 grader Celsius oppvarmet Waltons bly aspartatløsning i 30 minutter ved 60 grader Celsius. På slutten av inkubasjonen, vask vevet og dehydrer det i en stigende, iskald acetonserie, etterfulgt av en 10-minutters inkubasjon i romtemperaturaceton. Plasser deretter vevet i et 1:3-forhold mellom hardblandet harpiks i aceton i fire timer med infiltrasjon på en roterende plattform, etterfulgt av en åtte timers eller over natten infiltrasjon i et 1:1-forhold mellom harpiks og acetonoppløsning på en roterende plattform, deretter en infiltrasjon over natten i et 3: 1-forhold mellom harpiks og aceton på den roterende plattformen.Neste morgen infiltrerer vevet i frisk 100% harpiks for en fire til åtte timer, en over natten og en fire timers infiltrasjon ved romtemperatur på en roterende plattform. Neste morgen, bruk en trepinne for å blande en liten mengde harpiks med karbonsvart pulver til harpiksen er mettet med pulveret, men er fortsatt flytende og ikke blir kornete. Boligen skal ligne tykk blekk, og kunne sakte dryppe uten synlige klumper Plasser vevsprøven i en silikongummiform, og ta et bilde for senere referanse av prøveretningen i harpiksblokken.Når prøven er på plass, dekk vevet i karbonsvart mettet harpiks på spissen av silikonformen, med etiketten som indikerer eksperimentelle og vevsdetaljer i formen i motsatt ende av harpiksen. Plasser deretter formen i en 65 graders Celsius-ovn i en skråning i omtrent en time. Når karbonsvart infundert harpiks har tilstrekkelig herdet, fjern formen fra ovnen, og begynn med en tom brønn, fyll resten av formen med klar harpiks, pass på at etiketten forblir synlig.Når prøven er dekket med klar harpiks, legg silikonformen tilbake i 65 grader Celsius-ovnen, ikke på en skråning, i 48 timer, og fjern deretter formen. For å klargjøre blokken for avbildning, plasser den harpiks-innebygde prøven på en mikrotom chuck med den koniske enden som stikker omtrent fem til seks millimeter ut av chucken. Lås prøven på plass med settskruen, og plasser prøven under en varmelampe.Etter flere minutter plasserer du chucken i en stereomikroskopholder, og bruker et nytt, dobbeltkantet barberblad for å gjøre tynne seksjoner parallelle med blokkflaten til vevet er synlig, noe som vil være mindre reflekterende og granulært sammenlignet med delene av harpiksen som er blottet for vev. Fest en aluminiumsprøvepinne i festepinnen, og lag flere dype, kryssende riper i ansiktet på pinnen for å gi et større overflateareal for limet som brukes til å holde prøven på plass. Plasser prøven under en varmelampe, og skyv barberhøvelen en til to millimeter rett ned i harpiksblokken før du lager et sekund, vinkelrett kutt av lik dybde i blokken, for å trimme bort overflødig harpiks fra vevsprøven slik at blokken er omtrent tre millimeter i diameter med to til tre millimeter i høyden.Etter denne første trimmingen, varm blokken under varmelampen igjen, og bruk et nytt, dobbeltkantet barberblad for å kutte av toppen av harpiksblokken omtrent en millimeter under den trimmede delen i et enkelt, glatt kutt. Plasser trimmepinneholderen, som inneholder den kuttede aluminiumspinnen, i stereomikroskopbeholderen, og påfør et tynt lag cyanoacrylatlim på pinneflaten slik at den helt dekker pinnen uten å danne en synlig menisk. Bruk tang til å trykke den trimmede vevsblokken på midten av prøvestiftflaten i flere sekunder, og la limet stilles inn i flere minutter.Når limet har tørket grundig, finn vevet på den hevede delen av harpiksblokken, og bruk en dobbeltkantet barberhøvel for å trimme den hevede delen av harpiksen som inneholder vevsprøven til et område som ikke er større enn en kvadratmillimeter. Fjern sakte og forsiktig så mye overflødig harpiks som mulig, la blokken være litt lengre i en dimensjon, og bruk en endelig metallfil for å vinkle overflødig harpiks i området utenfor den hevede delen som inneholder vevsprøven ned mot kanten av pinnen. Fjern harpikspartikler og støv fra den forberedte prøven før du påfører et tynt lag med sølvmaling og gullsprut på hele prøveblokkoverflaten.Etter belegg, trim overflødig sølvmaling fra blokkflatene, og plasser den monterte og trimmede blokken i den pæreformede enden av et skreddersydd overføringspipetterør med riktig etikett festet. Ved hjelp av SBF-SEM-avbildning er det identifisert et nettverk av elastinfrie mikrofibrilbunter i hornhinnen for voksne mus. Dette nettverket er organisert i forskjellige lag, med fibrene nært forbundet med keratocytter, selv ligger innenfor grunne invaginasjoner på keratocyttoverflaten.Anvendelsen av denne protokollen har ført til oppdagelsen av en tidligere ukjent populasjon av sentrale hornhinnener som smelter sammen med basale epitelceller ved den stromale epitelgrensen. SBF-SEM-avbildning av den sentrale hornhinnen avslører tilstedeværelsen av limbal vaskulatur, nervebunter og tilhørende celler som kan segmenteres manuelt for 3D-rekonstruksjon. Noen fallgruver i denne bildebehandlingsprosedyren inkluderer bruk av en for lang pikselboetid, noe som kan føre til at etterfølgende bilder blir bølget og forvrengt, små utslipp av elektroner fra blokkflaten, noe som fører til raske kontrastendringer i linjer, kniv riper på blokkflaten på grunn av en skadet kniv eller ruskakkumulering på kanten av kniven. , artefakter fra en utvidet elektronstråle fokuserer på blokkflaten mens prøven fortsatt er i bildekammeret, feil vevsfiksering, noe som fører til separasjon av cellulære strukturer og bindevev, og bildehopping som følge av en stor mengde lading i vevs- eller harpiksblokken.Når du kutter vevsblokken, er det viktig å ha en god forståelse av hvor vevet ligger i blokken, For ikke å ved et uhell trimme bort viktige prøveregioner. Hvis det ønskes bilder med høyere oppløsning av spesifikke cellulære strukturer eller interaksjoner, kan bildet stoppes, blokken fjernes fra mikroskopet, og seksjoner kuttes på en ultramikrotomi der de kan ses i et transmisjonselektronmikroskop Seriell blokk-ansiktsskanning elektronmikroskopi gir et helt unikt syn på biologisk vev. Ved hjelp av denne protokollen har vi raskt vært i stand til å skaffe kvalitetsdatasett, og for å utvide spekteret av vev vi kan utforske.

Research

JoVE Journal

Biology

Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy (SBF-SEM) of Biological Tissue Samples

Fundamental Technical Elements of Freeze-fracture/Freeze-etch in Biological Electron Microscopy

Fundamental Teknisk Elements of Freeze-brudd / Freeze-etch i biologisk Elektronmikroskopi

Freeze-fracture/freeze-etch describes a process whereby specimens, typically biological or nanomaterial in nature, are frozen, fractured, and replicated ...

Scanning Electron Microscopy of Macerated Tissue to Visualize the Extracellular Matrix

Skanning elektronmikroskopi av oppmalte Tissue å visualisere den ekstracellulære matriks

Fibrosis is a component of all forms of heart disease regardless of etiology, and while much progress has been made in the field of cardiac matrix ...

Studying the Supramolecular Organization of Photosynthetic Membranes within Freeze-fractured Leaf Tissues by Cryo-scanning Electron Microscopy

Studerer Supramolecular Organisering av foto Membraner innen Freeze frakturerte Leaf Vev av Cryo-scanning elektronmikroskopi

Cryo-scanning electron microscopy (SEM) of freeze-fractured samples allows investigation of biological structures at near native conditions. Here, we ...

Scanning Electron Microscopy (SEM) Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

Scanning Electron Microscopy SEM Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

Skanning elektronmikroskopi (SEM) Protokoller for Problema Plant, eggsporesopper, og Fungal Samples

Common problems in the processing of biological samples for observations with the scanning electron microscope (SEM) include cell collapse, treatment of ...

Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography

Utarbeidelse og Observasjon av Thick biologiske prøver av Scanning Transmission Electron Tomography

This report describes a protocol for preparing thick biological specimens for further observation using a scanning transmission electron microscope. It ...

Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy (SEM)

Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy SEM

Utarbeidelse av Prokaryotic og Eukaryotic organismer med kjemiske tørking for morfologisk analyse skanning elektronmikroskop (SEM)

Scanning electron microscopy (SEM) is a widely available technique that has been applied to study biological specimens ranging from individual proteins to ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Biologiske utvalg forberedelse av høytrykks fryser, mikrobølgeovn-assistert kontrast ekstrautstyr og Minimal harpiks innebygging volum Imaging

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Targeted Studies Using Serial Block Face and Focused Ion Beam Scan Electron Microscopy

Målrettede studier ved hjelp av seriell blokk ansikt og fokusert ion Beam Scan Electron mikroskopi

This protocol allows for the efficient and effective imaging of cell or tissue samples in three dimensions at the resolution level of electron microscopy. ...

Array Tomography Workflow for the Targeted Acquisition of Volume Information using Scanning Electron Microscopy

Matrisetomografiarbeidsflyt for målrettet anskaffelse av voluminformasjon ved hjelp av skanningselektronmikroskopi

Electron microscopy is applied in biology and medicine for imaging of cellular and structural details at nanometer resolution. Historically, Transmission ...