Name: serial block-face scanning electron microscopy (sbf-sem) of biological tissue samples
Uploaded: 2021-03-26T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy SBF-SEM of Biological Tissue Samples at JoVE.com

Gostaríamos de agradecer ao Dr. Sam Hanlon, Evelyn Brown e Margaret Gondo por sua excelente assistência técnica. Esta pesquisa foi apoiada em parte pelos Institutos Nacionais de Saúde (NIH) R01 EY-018239 e P30 EY007551 (National Eye Institute), em parte pela Lion's Foundation for Sight, e em parte pelo NIH 1R15 HD084262-01 (Instituto Nacional de Saúde Infantil & Desenvolvimento Humano).

Todos os animais foram manuseados de acordo com as diretrizes descritas na Declaração de Visão e Oftalmologia da Associação de Pesquisa em Visão e Oftalmologia para o Uso de Animais em Visão e Pesquisa Oftalmológica e nas diretrizes de manejo animal da Faculdade de Optometria da Universidade de Houston. Todos os procedimentos de animais foram aprovados pelas instituições em que foram tratados: procedimentos de rato, rato, coelho, cobaia e primatas não humanos foram aprovados pelo Comitê de Cuidados e Uso de A...

O objetivo deste artigo de métodos é destacar a metodologia de preparação e imagem de tecidos que permitiu ao nosso laboratório capturar de forma confiável imagens de microscopia eletrônica serial de alta resolução, e apontar passos críticos que levam a esse resultado, bem como potenciais armadilhas que podem ocorrer ao realizar imagens SBF-SEM. O sucesso com este protocolo requer fixação adequada do tecido, impregnação de metais pesados na amostra, modificações da resina de incorporação para reduzir o ...

A microscopia eletrônica de varredura facial de blocos seriais (SBF-SEM) foi descrita pela primeira vez por Leighton em 1981, onde ele criou um microscópio eletrônico de varredura aumentado com um microtome embutido que poderia cortar e imagem fina seções de tecido embutido na resina. Infelizmente, limitações técnicas restringiram seu uso a amostras condutoras, pois amostras não condutoras como tecido biológico acumularam níveis inaceitáveis de carregamento (acúmulo de elétrons dentro da amostra de tecido)1. Embora o revestimento da face do bloco entre os cortes com o carregamento de tecido reduzido de carbono evaporado, este tempo de aquisição de imagens muito maior e o armazenamento de imagens permaneceu um problema, pois a tecnologia de computador na época era insuficiente para gerenciar os grandes tamanhos de arquivos criados pelo dispositivo. Esta metodologia foi revisitada por Denk e Horstmann em 2004 usando um SBF-SEM equipado com uma câmara de pressão variável2. Isso permitiu a introdução de vapor de água na câmara de imagem que reduz o carregamento dentro da amostra, tornando viável a imagem de amostras não condutoras, embora com perda de resolução de imagem. Melhorias adicionais nos métodos de preparação e imagem de tecidos agora permitem imagens usando alto vácuo, e a imagem SBF-SEM não depende mais de vapor de água para dissipar o carregamento3,4,5,6,7,8,9. Embora a SBF-SEM tenha visto um aumento exponencial no uso nos últimos anos, aspectos técnicos como a preparação adequada do tecido e parâmetros de imagem são primordiais para o sucesso dessa modalidade de imagem.
O SBF-SEM permite a coleta automatizada de milhares de imagens de microscopia eletrônica registradas em série, com resolução planar tão pequena quanto 3-5 nm10,11. O tecido, impregnado com metais pesados e embutido em resina, é colocado dentro de um microscópio eletrônico de varredura (SEM) contendo um ultramicrotome equipado com uma faca de diamante. Uma superfície plana é cortada com a faca de diamante, a faca é retraída, e a superfície do bloco é escaneada em um padrão raster com um feixe de elétrons para criar uma imagem de ultraestrutura tecidual. O bloco é então levantado uma quantidade especificada (por exemplo, 100 nm) no eixo z, conhecido como "passo z", e uma nova superfície é cortada antes que o processo seja repetido. Desta forma, um bloco de imagens tridimensionais (3D) é produzido à medida que o tecido é cortado. Este sistema de imagem beneficia ainda mais a natureza automatizada do dispositivo, permitindo que se deixe o microscópio desacompanhado durante o processo de imagem, com a coleta automatizada de centenas de imagens possíveis em um único dia.
Enquanto a imagem SBF-SEM usa principalmente elétrons encarnicados para formar uma imagem do rosto do bloco, elétrons secundários são gerados durante o processo de imagem12. Elétrons secundários podem se acumular, ao lado de elétrons de feixe primário e requesque-a-pena que não escapam do bloco, e produzem "carregamento de tecido", o que pode levar a um campo eletrostático localizado na face do bloco. Esse acúmulo de elétrons pode distorcer a imagem ou fazer com que os elétrons sejam ejetados do bloco e contribuam para o sinal coletado pelo detector de backscatter, diminuindo a relação sinal-ruído13. Embora o nível de carga tecidual possa ser diminuído reduzindo a tensão ou intensidade do feixe de elétrons, ou reduzindo o tempo de moradia do feixe, isso resulta em uma diminuição da relação sinal-ruído14. Quando um feixe de elétrons de menor tensão ou intensidade é usado, ou o feixe só é permitido habitar dentro de cada espaço de pixel por um período mais curto de tempo, elétrons menos encalulados são ejetados do tecido e capturados pelo detector de elétrons resultando em um sinal mais fraco. Denk e Horstmann lidaram com esse problema introduzindo vapor de água na câmara, reduzindo assim a carga na câmara e na face do bloco ao custo da resolução de imagem. Com uma pressão de câmara de 10-100 Pa, uma porção do feixe de elétrons é espalhada contribuindo para o ruído da imagem e uma perda de resolução, porém isso também produz íons na câmara de espécimes que neutraliza a carga dentro do bloco de amostra2. Métodos mais recentes para neutralizar a carga dentro do bloco de amostra usam injeção de gás focal de nitrogênio sobre a face do bloco durante a imagem, ou introduzindo tensão negativa ao estágio SBF-SEM para diminuir a energia de embarque de feixes de sonda e aumentar o sinal coletado6,7,15. Em vez de introduzir viés de palco, pressão de câmara ou injeção de nitrogênio localizada para diminuir o acúmulo de carga na superfície do bloco, também é possível aumentar a condutividade da resina introduzindo carbono na mistura de resina permitindo configurações de imagem mais agressivas16. O protocolo geral a seguir é uma adaptação do protocolo Deerinck et al. publicado em 2010 e abrange modificações nas metodologias de preparação e imagem de tecidos que consideramos úteis para minimizar o carregamento de tecidos, mantendo a aquisição de imagens de alta resolução3,17,18,19. Embora o protocolo mencionado anteriormente tenha focado no processamento de tecidos e na impregnação de metais pesados, este protocolo fornece uma visão sobre o fluxo de trabalho de imagem, análise de dados e reconstrução inerente aos estudos da SBF-SEM. Em nosso laboratório, este protocolo tem sido aplicado com sucesso e reprodutivelmente a uma grande variedade de tecidos, incluindo córneas e estruturas de segmentos anteriores, pálpebras, glândulas lacrimais e mais duras, retina e nervo óptico, coração, pulmão e vias aéreas, rim, fígado, músculo cremaster e córtex cerebral/medula, e em uma variedade de espécies incluindo rato, rato, coelho, cobaia, peixe, monocamada e culturas celulares estratificadas, porco, primata não humano, bem como humano20,21,22,23. Embora pequenas mudanças possam valer a pena para tecidos e aplicações específicas, este protocolo geral tem se mostrado altamente reprodutível e útil no contexto de nossa instalação de imagem principal.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>1/16 x 3/8 Aluminum Rivets</td>
			<td>Industrial Rivet &#38; Fastener Co.</td>
			<td>6N37RFLAP/1100</td>
			<td>Used as specimen pins.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.5mm Flathead Screwdriver</td>
			<td>Wiha Quality Tools</td>
			<td>27225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>RT 10000</td>
			<td>Used to dilute silver paint.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aspartic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8949</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>C79-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conductive Silver Paint</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>16062</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denton Desk-II Vacuum Sputtering Device equipped with standard gold foil target</td>
			<td>Denton Vacuum</td>
			<td>N/A</td>
			<td>This is the gold-sputtering device used by the authors, alternates are acceptable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double-edged Razors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-949-411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embed 812</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>14120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gatan 3View2 mounted in a Tescan Mira3 Field emission SEM</td>
			<td>Gatan &#38; Tescan</td>
			<td>N/A</td>
			<td>This is the SBF-SEM device used by the authors, alternates are acceptable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass Shell Vials, 0.5 DRAM (1.8 ml)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72630-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gluteraldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>16320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gorilla Super Glue - Impact Tough</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>Refered to as cyanoacrylate glue in text.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketjen Black</td>
			<td>HM Royal</td>
			<td>EC-600JD</td>
			<td>Refered to as carbon black in text.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KOH</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>18-605-593</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead Nitrate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>L62-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave</td>
			<td>Pelco</td>
			<td>BioWave Pro</td>
			<td>This is the microwave used by the authors, alternates are acceptable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium Tetroxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>201030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Ferrocyanide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9387</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone Embedding Mold</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>10504</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Cacodylate Trihydrate</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>12300</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Samco Transfer Pipette</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>202</td>
			<td>Used to make specimen pin storage tubes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swiss Pattern Needle Files</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>62115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thiocarbohydrazide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>223220</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl Acetate</td>
			<td>Polysciences, Inc.</td>
			<td>21447-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reconstruction Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amira Software</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Used to create the reconstructions found in figures 5-7 and 9.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji (Fiji is Just ImageJ)</td>
			<td>ImageJ.net</td>
			<td>N/A</td>
			<td>TrakEM2 can be added to Fiji to asist in manual segmentation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscopy Image Browser (MIB)</td>
			<td>University of Helsinki, Institute of Biotechnology</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reconstuct Software</td>
			<td>Neural Systems Lab</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuRVoS Workbench</td>
			<td>Diamond Light Source &#38; The University of Nottingham</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SyGlass</td>
			<td>IstoVisio, Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Allows for reconstruction in virtual reality and histogram-based reconstruction methods.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

serial block-face scanning electron microscopy (sbf-sem) of biological tissue samples

A microscopia eletrônica de varredura em bloco serial (SBF-SEM) permite a coleta de centenas a milhares de imagens ultraestruturais registradas em série, oferecendo uma visão tridimensional sem precedentes da microanato tecidual. Embora a SBF-SEM tenha visto um aumento exponencial no uso nos últimos anos, aspectos técnicos como a preparação adequada do tecido e parâmetros de imagem são primordiais para o sucesso dessa modalidade de imagem. Este sistema de imagem se beneficia da natureza automatizada do dispositivo, permitindo que se deixe o microscópio desacompanhado durante o processo de imagem, com a coleta automatizada de centenas de imagens possíveis em um único dia. No entanto, sem a preparação adequada da ultraestrutura celular de preparação tecidual pode ser alterada de tal forma que conclusões incorretas ou enganosas possam ser tiradas. Além disso, as imagens são geradas pela varredura da face do bloco de uma amostra biológica incorporada à resina e isso muitas vezes apresenta desafios e considerações que devem ser abordadas. O acúmulo de elétrons dentro do bloco durante a imagem, conhecido como "carregamento de tecido", pode levar a uma perda de contraste e uma incapacidade de apreciar a estrutura celular. Além disso, enquanto o aumento da intensidade/tensão do feixe de elétrons ou a diminuição da velocidade de varredura do feixe pode aumentar a resolução da imagem, isso também pode ter o infeliz efeito colateral de danificar o bloco de resina e distorcer imagens subsequentes na série de imagens. Aqui apresentamos um protocolo de rotina para a preparação de amostras de tecido biológico que preserva a ultraestrutura celular e diminui o carregamento de tecidos. Também fornecemos considerações de imagem para a rápida aquisição de imagens seriais de alta qualidade com danos mínimos ao bloco tecidual.

Córnea-de-rato Este protocolo foi aplicado extensivamente à córnea do rato. Utilizando imagens SBF-SEM, uma rede de pacotes de microfibril sem elastina (EFMBs) mostrou-se presente dentro da córnea do rato adulto. Acreditava-se anteriormente que essa rede só estava presente durante o desenvolvimento pós-natal embrionário e precoce. A SBF-SEM revelou uma extensa rede EFMB em toda a córnea, com fibras individuais encontradas com 100-200 nm de diâmetro quando medidas em seção transversal. Verif...

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Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy SBF-SEM of Biological Tissue Samples

Este protocolo descreve um método de rotina para o uso de microscopia eletrônica de varredura em bloco serial (SBF-SEM), uma poderosa técnica de imagem 3D. A aplicação bem sucedida do SBF-SEM depende de técnicas adequadas de fixação e coloração de tecidos, bem como cuidadosa consideração das configurações de imagem. Este protocolo contém considerações práticas para a totalidade deste processo.

Microscopia eletrônica de varredura de blocos de bloco serial (SBF-SEM) de amostras de tecido biológico

Serial block-face scanning electron microscopy (SBF-SEM) allows for the collection of hundreds to thousands of serially-registered ultrastructural images, ...

A microscopia eletrônica de varredura em bloco serial fornece uma visão sem precedentes das estruturas ultra-dimensionais do tecido tridimensional, e pode responder a uma série de perguntas antes impossíveis ou extremamente difíceis de perseguir. Esta técnica permite a produção rápida e reprodutível de conjuntos de dados tridimensionais com carregamento mínimo de tecido e artefatos. E, importante, permite a captura automatizada de milhares de imagens diariamente.A microscopia eletrônica de transmissão padrão fornece excelente estrutura ultra celular. No entanto, essas imagens não têm contexto tridimensional, e podem ser difíceis de interpretar. A microscopia eletrônica de varredura em bloco serial fornece esse contexto tridimensional, permitindo a interpretação de processos complexos.Embora este protocolo seja confiável e reprodutível, certas etapas requerem precisão e são criticamente importantes para o sucesso desta metodologia. Este vídeo demonstrará essas etapas críticas em detalhes. Após a fixação de amostras em tampão de cacodilato de sódio molar 0,1, contendo 2,5% glutaraldeído, e dois cloreto de cálcio milialar, as amostras devem ser cortadas em blocos não maiores que dois milímetros cúbicos, e lavadas com tampão de cacodila de sódio molar de 0,1 molar contendo dois cloreto de cálcio milimolar.O tecido é então sequencialmente manchado com ferrocidato de ósmio, tiocarbohydrazida e tetroxida de ósmio. Após a incubação do tetroxida de ósmio, trate o tecido com acetato de urâncio 1%aquoso a quatro graus Celsius durante a noite. Na manhã seguinte, dissolva 0,066 gramas de nitrato de chumbo em 10 mililitros de solução de ácido aspartc molar de 0,03 molar, e use um hidróxido de potássio normal para ajustar o pH da solução de aspartato de chumbo do Walton para 5,5.Depois de aquecer a solução no forno, lave o tecido cinco vezes por três minutos por lavagem em temperatura ambiente, água duplamente destilada, antes de transferir o tecido para uma solução de aspartato de chumbo de 60 graus Celsius aqueceu a solução de aspartato de chumbo de Walton por 30 minutos a 60 graus Celsius. No final da incubação, lave o tecido e desidrate-o em uma série ascendente de acetona gelada, seguida de uma incubação de 10 minutos em acetona de temperatura ambiente. Em seguida, coloque o tecido em uma proporção de 1:3 de resina dura mista em acetona para quatro horas de infiltração em uma plataforma rotativa, seguido de uma infiltração de oito horas ou durante a noite em uma proporção de 1:1 de solução de resina para acetona em uma plataforma rotativa, então, uma infiltração durante a noite em uma razão de 3:1 de resina para acetona na plataforma rotativa.Na manhã seguinte, infiltrar-se no tecido em resina fresca de 100% por uma de quatro a oito horas, uma durante a noite, e uma infiltração de quatro horas à temperatura ambiente em uma plataforma rotativa. Na manhã seguinte, use uma vara de madeira para misturar uma pequena quantidade de resina com pó preto carbono até que a resina esteja saturada com o pó, mas ainda é fluida e não se torna granulada. A residência deve se assemelhar a tinta grossa, e ser capaz de gotejar lentamente sem aglomerados visíveis Coloque a amostra de tecido em um molde de borracha de silicone, e capture uma imagem para referência posterior da orientação da amostra dentro do bloco de resina.Quando a amostra estiver no lugar, cubra o tecido da resina saturada preta de carbono na ponta do molde de silicone, com o rótulo indicando os detalhes experimentais e teciduais no molde na extremidade oposta da resina. Em seguida, coloque o molde em um forno Celsius de 65 graus em uma inclinação por aproximadamente uma hora. Quando a resina infundida preta de carbono tiver curado suficientemente, remova o molde do forno e, começando com um poço vazio, encha o restante do molde com resina clara, tomando cuidado para que o rótulo permaneça visível.Quando a amostra estiver coberta com resina clara, coloque o molde de silicone de volta no forno Celsius de 65 graus, não em uma inclinação, por 48 horas, depois remova o molde. Para preparar o bloco para a imagem, coloque a amostra embutida de resina em um mandril de microtómeo com a extremidade afilada furando aproximadamente cinco a seis milímetros do mandril. Bloqueie a amostra no lugar com o parafuso definido e coloque a amostra sob uma lâmpada de calor.Depois de vários minutos, coloque o mandril em um suporte de microscópio estéreo, e use uma nova lâmina de barbear de dois gumes para fazer seções finas paralelas à face do bloco até que o tecido seja visível, que será menos reflexivo e granular em comparação com as porções da resina que são desprovidas de tecido. Fixar um pino de alumínio no suporte do pino de corte, e fazer vários arranhões profundos e cruzados na face do pino para fornecer uma área de superfície maior para a cola usada para manter o espécime no lugar. Coloque a amostra sob uma lâmpada de calor, e empurre a navalha de uma a duas milímetros direto para baixo no bloco de resina antes de fazer um segundo corte perpendicular de igual profundidade no bloco, para cortar o excesso de resina da amostra de tecido para que o bloco seja de aproximadamente três milímetros de diâmetro por dois a três milímetros de altura.Após este corte inicial, aqueça o bloco sob a lâmpada de calor novamente, e use uma nova lâmina de barbear de dois gumes para cortar a parte superior do bloco de resina cerca de um milímetro abaixo da porção aparada em um único corte suave. Coloque o suporte do pino de corte, contendo o pino de alumínio cortado, no recipiente de estereomicroscópio, e aplique uma fina camada de cola cianoacrilato na face do pino de tal forma que cubra completamente o pino sem formar um menisco visível. Use fórceps para pressionar o pedaço de tecido aparado no centro da face do pino da amostra por vários segundos, e deixe a cola definir por vários minutos.Quando a cola estiver completamente seca, localize o tecido na porção levantada do bloco de resina e use uma navalha de dois gumes para aparar a porção levantada da resina contendo a amostra de tecido em uma área não maior que um milímetro quadrado. Devagar e com cuidado, remova o máximo de excesso de resina possível, deixando o bloco um pouco mais longo em uma dimensão, e use um arquivo de metal final para angular o excesso de resina na área fora da porção levantada contendo a amostra de tecido em direção à borda do pino. Remova partículas de resina e poeira da amostra preparada antes de aplicar uma fina camada de tinta prateada e sputtering de ouro em toda a superfície do bloco de amostra.Após o revestimento, corte qualquer tinta de prata em excesso das superfícies faciais do bloco e coloque o bloco montado e aparado na extremidade bulbosa de um tubo de pipeta de transferência personalizado com a etiqueta apropriada anexada. Usando imagens SBF-SEM, uma rede de pacotes de microfibril sem elastina foram identificados dentro da córnea do rato adulto. Esta rede é organizada em camadas distintas, com as fibras intimamente associadas com ceratocitos, mesmo deitadas dentro de invaginações rasas na superfície do queatocito.A aplicação deste protocolo levou à descoberta de uma população até então desconhecida de nervos córneas centrais que se fundem com células epiteliais basais na fronteira estromal-epitelial. A imagem SBF-SEM da córnea central revela a presença de vasculatura limbal, feixes nervosos e células associadas que podem ser segmentadas manualmente para reconstrução 3D. Algumas armadilhas deste procedimento de imagem incluem o uso de um tempo de moradia de pixel muito longo, o que pode fazer com que imagens subsequentes sejam onduladas e distorcidas, pequenas descargas de elétrons da face do bloco, levando a mudanças rápidas de contraste nas linhas, arranhões de faca na face do bloco devido a uma faca danificada ou acúmulo de detritos na borda da faca , artefatos de um feixe de elétrons estendidos se concentram na face do bloco enquanto a amostra ainda está na câmara de imagem, fixação inadequada de tecido, levando à separação de estruturas celulares e tecido conjuntivo, e pular imagem como resultado de uma grande quantidade de carregamento dentro do tecido ou bloco de resina.Ao cortar o bloco tecidual, é importante ter uma boa compreensão de onde o tecido está dentro do bloco, de modo a não cortar acidentalmente nenhuma região amostral importante. Se forem desejadas imagens de maior resolução de estruturas ou interações celulares específicas, a imagem pode ser interrompida, o bloco removido do microscópio e seções cortadas em um ultramicrotome onde podem ser vistas em um microscópio eletrônico de transmissão A microscopia eletrônica de varredura de rosto de bloco serial permite uma visão totalmente única dos tecidos biológicos. Usando este protocolo, conseguimos rapidamente adquirir conjuntos de dados de qualidade e expandir a gama de tecidos que podemos explorar.

Research

JoVE Journal

Biology

Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy (SBF-SEM) of Biological Tissue Samples

Fundamental Technical Elements of Freeze-fracture/Freeze-etch in Biological Electron Microscopy

Fundamental Elements Técnica de Freeze-fratura / Freeze-etch em Biológica de Microscopia Eletrônica

Freeze-fracture/freeze-etch describes a process whereby specimens, typically biological or nanomaterial in nature, are frozen, fractured, and replicated ...

Biologia

Scanning Electron Microscopy of Macerated Tissue to Visualize the Extracellular Matrix

Microscopia Eletrônica de Varredura do Tecido macerado para visualizar a matriz extracelular

Fibrosis is a component of all forms of heart disease regardless of etiology, and while much progress has been made in the field of cardiac matrix ...

Studying the Supramolecular Organization of Photosynthetic Membranes within Freeze-fractured Leaf Tissues by Cryo-scanning Electron Microscopy

Estudar a Organização supramolecular de fotossintéticas membranas dentro de tecidos foliares Freeze-fraturados por Cryo-Microscopia Eletrônica de Varredura

Cryo-scanning electron microscopy (SEM) of freeze-fractured samples allows investigation of biological structures at near native conditions. Here, we ...

Scanning Electron Microscopy (SEM) Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

Scanning Electron Microscopy SEM Protocols for Problematic Plant, Oomycete, and Fungal Samples

Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV) Protocolos para a Problemática da planta, oomiceto e amostras fúngicas

Common problems in the processing of biological samples for observations with the scanning electron microscope (SEM) include cell collapse, treatment of ...

Preparation and Observation of Thick Biological Samples by Scanning Transmission Electron Tomography

Preparação e observação de amostras biológicas Grosso por Scanning Transmission Electron Tomografia

This report describes a protocol for preparing thick biological specimens for further observation using a scanning transmission electron microscope. It ...

Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy (SEM)

Preparation of Prokaryotic and Eukaryotic Organisms Using Chemical Drying for Morphological Analysis in Scanning Electron Microscopy SEM

Preparação de organismos procariotas e eucariotas, utilizando secagem química para análise morfológica em microscopia eletrônica (SEM)

Scanning electron microscopy (SEM) is a widely available technique that has been applied to study biological specimens ranging from individual proteins to ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Preparação de amostras biológicas por congelamento de alta pressão, realce de contraste assistida por microondas e resina mínima incorporação para a imagem latente de Volume

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...

Targeted Studies Using Serial Block Face and Focused Ion Beam Scan Electron Microscopy

Estudos alvejados usando a cara de bloco de série e a microscopia focalizada da varredura do feixe de íon

This protocol allows for the efficient and effective imaging of cell or tissue samples in three dimensions at the resolution level of electron microscopy. ...

Array Tomography Workflow for the Targeted Acquisition of Volume Information using Scanning Electron Microscopy

Fluxo de trabalho de tomografia de array para a aquisição direcionada de informações de volume usando microscopia eletrônica de varredura

Electron microscopy is applied in biology and medicine for imaging of cellular and structural details at nanometer resolution. Historically, Transmission ...