Preparation of Quantum-Dot-Labeled DNA Substrate Materials
3:38
Microfluidic Device Construction
5:58
Surface Tethering of Quantum-Dot-Labeled DNA Substrate
7:07
REase-Mediated DNA Cleavage
7:51
Results: Single-Molecule TIRF Experiment for Parallelized Observations of DNA Cleavage Events
9:32
Conclusion
Transcript
בעזרת פרוטוקול זה, אנו יכולים לצפות ישירות בפיצול דנ"א ספציפי לאתר על ידי הגבלת אנדונוקלאזות ברמת המולקולה הבודדת. הגישה המרובבת שלנו מאפשרת לנו למדוד את הזמן שלוקח למאות REases בודדים להשלים את המחזור הקטליטי. ריבוב מאפשר לנו לייצר זמן שהייה מאוכ
Sign in or start your free trial to access this content
באמצעות DNA המסומן בנקודות קוונטיות ומיקרוסקופ פלואורסצנטי של השתקפות פנימית כוללת, אנו יכולים לחקור את מנגנון התגובה של אנדונוקלאזות הגבלה תוך שימוש בחלבון ללא תווית. טכניקה זו של מולקולה בודדת מאפשרת תצפית מאסיבית מרובבת של אינטראקציות חלבון-דנ"א בודדות, וניתן לאסוף נתונים כדי ליצור התפלגות זמן מגורים מאוכלסת היטב.