Preparation of Quantum-Dot-Labeled DNA Substrate Materials
3:38
Microfluidic Device Construction
5:58
Surface Tethering of Quantum-Dot-Labeled DNA Substrate
7:07
REase-Mediated DNA Cleavage
7:51
Results: Single-Molecule TIRF Experiment for Parallelized Observations of DNA Cleavage Events
9:32
Conclusion
Transcript
이 프로토콜을 사용하면 단일 분자 수준에서 제한 엔도뉴클레아제에 의한 부위 특이적 DNA 절단을 직접 관찰할 수 있습니다. 당사의 다중화 접근 방식을 통해 수백 개의 개별 REase가 촉매 주기를 완료하는 데 걸리는 시간을 측정할 수 있습니다. 멀티플렉싱을 사용하면 감마 확률 분포에 맞출 수 있는 잘 채워진 dwell time to cleavage 분포를 생성하여 DNA cleavage의 메커니즘에 대한 통찰력을 얻을 수 있습니다.
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Using quantum-dot-labeled DNA and total internal reflection fluorescence microscopy, we can investigate the reaction mechanism of restriction endonucleases while using unlabeled protein. This single-molecule technique allows for massively multiplexed observation of individual protein-DNA interactions, and data can be pooled to generate well-populated dwell-time distributions.