Preparation of Quantum-Dot-Labeled DNA Substrate Materials
3:38
Microfluidic Device Construction
5:58
Surface Tethering of Quantum-Dot-Labeled DNA Substrate
7:07
REase-Mediated DNA Cleavage
7:51
Results: Single-Molecule TIRF Experiment for Parallelized Observations of DNA Cleavage Events
9:32
Conclusion
Transcript
Con este protocolo, podemos observar directamente la escisión del ADN específico del sitio mediante endonucleasas de restricción a nivel de una sola molécula. Nuestro enfoque multiplexado nos permite medir el tiempo que tardan cientos de REasas in
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Utilizando ADN marcado con puntos cuánticos y microscopía de fluorescencia de reflexión interna total, podemos investigar el mecanismo de reacción de las endonucleasas de restricción mientras usamos proteínas no marcadas. Esta técnica de una sola molécula permite la observación masiva y multiplexada de las interacciones individuales proteína-ADN, y los datos se pueden agrupar para generar distribuciones de tiempo de permanencia bien pobladas.