Name: whole-mount staining, visualization, and analysis of fungiform, circumvallate, and palate taste buds
Uploaded: 2021-02-11T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds at JoVE.com

Doku lekeleme ve circumvallate tat tomurcuklarının görüntülenmesine yaptığı katkılar için Kavisca Kuruparanantha'ya, papillaya innervasyon lekesi ve görüntülemesi için Jennifer Xu'ya, hayvan bakımı ve genotipleme için Kaytee Horn'a ve yumuşak damak tadı tomurcuklarının doku lekesi için Liqun Ma'ya teşekkür ederiz. Bu proje R21 DC014857 ve R01 DC007176 tarafından R.F.K ve F31 DC017660 için L.O.

NOT: Tüm hayvanlar, LABORATUVAR HAYVANLARININ İnsani Bakımı ve Kullanımına ilişkin ABD Halk Sağlığı Hizmet Politikası ve Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için NIH Kılavuzu tarafından belirlenen yönergelere uygun olarak bakıldı. Phox2b-Cre fareleri (MMRRC suşu 034613-UCD, NP91Gsat/Mmcd) veya TrkBCreER fareleri (Ntrk2tm3.1 (cre /ERT2)Ddg) tdTomato muhabir fareleri (Ai14) ile yetiştirildi. AdvillinCreER47 Phox2b-flpo<sup...

Üç ağız boşluğu tat bölgesinden (mantar formu, circumvallate ve damak) bütün tat tomurcuklarını sürekli olarak toplamak ve lekelendirmek için bir yaklaşımın geliştirilmesi, tat dönüştürücü hücreleri analiz etmek, yeni birleştirilmiş hücreleri izlemek, innervasyon ve bu yapılar arasındaki ilişkileri izlemek için önemli iyileştirmeler sağlar. Ek olarak, etiketli bir popülasyonun içinde veya dışında potansiyel bir ikincil nöron işaretleyicisinin lokalizasyonunu kolaylaştırır<sup c...

Tat tomurcukları, ağız boşluğunda bulunan kimyasal tat uyaranlarının alt kümelerini bağlayan 50-100 özel epitel hücresinin koleksiyonlarıdır. Tat dönüştürücü hücrelerin genellikle tip1, 2 ,3,4,5,6,7,8,9, başlangıçta daha sonra moleküler belirteçlerle ilişkili elektron mikroskopi kriterlerine dayanarak var olduğu düşünülmektedir. Tip II hücreleri fosfolipaz C-beta 2 (PLCβ2)2 ve geçici reseptör potansiyel katyon kanalını, M üyesi5 1 alt familyalarını ifade etmekte ve tatlı, acı ve umami 1,10'utransdüse eden hücreleri içerir. Tip III hücreler karbonik anhidraz 4 (Car4)11 ve sinaptozomal ilişkili protein 258'i ifade eder ve öncelikle ekşi tada yanıt veren hücreleri gösterir11. Tuzluluğu transdüse eden hücreler12 , 13,14kadar net bir şekilde tanımlanmış değildir, ancak Potansiyel olarak Tip I, Tip II ve Tip III hücreleri15 , 16,17,18,19içerebilir. Tat alma tomurcuk ortamı karmaşık ve dinamiktir, tat dönüştürücü hücrelerin yetişkinlik boyunca sürekli olarak ters dönmesi ve yerini bazal ataların3,20,21'e bırakmalarıdır. Bu tat dönüştürücü hücreler, beyin sapına tat bilgisi ileten genikül ve petrosal gangliyonlardan gelen sözde tek kutuplu sinir liflerine bağlanır. Bu nöronlar öncelikle taşıdıkları tat bilgilerine göre kategorize edilmiştir22,23 çünkü morfolojileri hakkındaki bilgiler yakın zamana kadarzor 24. Tip II hücreleri kalsiyum homeostaz modülatörü proteini 1 iyon kanalları25aracılığıyla sinir lifleri ile iletişim kurarken, Tip III hücreleri klasik sinapslar aracılığıyla iletişim kurar8,26. Transdükleme hücre tipi soyları, farklılaşmalarını etkileyen faktörler ve çardakların bağlanma yapıları dahil olmak üzere tat tomurcuk hücrelerinin daha fazla karakterizasyonu aktif araştırma alanlarıdır.
Tat alma tomurcukları çalışmaları çeşitli teknik zorluklarla engellenmiştir. Dili oluşturan heterojen ve yoğun dokular immünhistokimya için antikor geçirgenliğini önemli ölçüde azaltır27,28,29. Bu engeller, tat tomurcuklarının bölümler arasında bölünmesiyle sonuçlanan bölümleme protokollerini gerektirdi, böylece ölçümler temsili bölümlere göre yaklaşık olarak veya bölümler arasında toplanır. Daha önce, hem hacim değerlerini hem de dönüştürücü hücre sayılarını30'ayaklaşık olarak görmek için temsili ince bölümler kullanılmıştır. Daha kalın seri kesitleme, tüm tat alma bölümlerinin görüntülenmesini ve her bölümdeki ölçümlerin toplanmış olmasını sağlar31. Bu tür kalın bölümlerin kesilmesi ve sadece bütün tat tomurcuklarının seçilmesi, daha küçük tat tomurcuklarına doğru örneklemeönyargıları 32,33,34. Kesitli tat tomurcuklarından gelen sinir innervasyontahminleri,36 , 37,38'in tamamında ölçülürse,13,35piksel numaralarının analizlerine dayanmaktadır. Bu ölçümler, tek tek sinir çardaklarının yapısını ve sayısını tamamen göz ardı eder, çünkü çardaklar bölünür (ve genellikle kötü etiketlenir). Son olarak, epitelin soyulması tüm tat tomurcuklarının lekeli olmasına izin verse de39,40, ayrıca tat tomurcuk sinir liflerini de giderir ve hücreler arasındaki normal ilişkileri bozabilir. Bu nedenle, lekeleme yaklaşımlarının neden olduğu bu bozulma nedeniyle tat tomurcukları içindeki yapısal ilişkilerin araştırılması sınırlanmıştır.
Tüm yapı koleksiyonu temsili bölümlere olan ihtiyacı ortadan kaldırır ve hacimlerin, hücre sayımlarının ve yapı morfolojilerinin mutlak değer ölçümlerinin belirlenmesine izin verir41. Bu yaklaşım aynı zamanda doğruluğu artırır, önyargıyı sınırlar ve teknik değişkenliği azaltır. Bu son element önemlidir, çünkü tat tomurcukları hem34 , 42hem de43 ,44bölgelerinde önemli biyolojik değişkenlik gösterir ve tüm tat alma tomurcukları analizleri mutlak hücre sayılarının kontrol ve deneysel koşullar arasında karşılaştırılmasını sağlar. Ayrıca, bozulmamış tat tomurcuklarını toplama yeteneği, farklı transdüksiyon hücreleri ve ilişkili sinir lifleri arasındaki fiziksel ilişkilerin analizine izin sağlar. Çünkü tat dönüştürücü hücreler birbirleriyle iletişim kurabilir45 ve sinir lifleri ile iletişim kurabilir46Bu ilişkiler normal fonksiyon için önemlidir. Bu nedenle, işlev kaybı koşulları hücre kaybından değil, hücre ilişkilerindeki değişikliklerden kaynaklanabilir. Burada, hem tat tomurcukları hem de içsellikleri, tat hücresi sayıları ve şekilleri için hacim analizlerini iyileştirmek ve dönüştürücü hücre ilişkilerinin ve sinir-çardak morfolojilerinin analizlerini kolaylaştırmak için mutlak ölçümlerin faydalarını elde etmek için bütün tat tomurcuklarını toplamak için bir yöntem verilmiştir. Doku hazırlama için bu yeni tam montaj yönteminin aşağı doğru iki iş akışı da sunulmaktadır: 1) tat tomurcuk hacmini ve toplam innervasyonu analiz etmek için ve 2) tat nöronlarının seyrek hücreli genetik etiketlemesi için (tat dönüştürücü hücrelerin alt kümeleri etiketli) ve daha sonra tat-sinir çardak morfolojisinin analizleri, tat hücresi türlerinin ve şekillerinin sayısı ve transdükleyici hücreler ile transdüksiyon arasındaki fiziksel ilişkileri analiz etmek için görüntü analizi yazılımının kullanılması hücreler ve sinir çardakları. Birlikte, bu iş akışları doku hazırlamaya ve tüm tat tomurcuklarının analizlerine ve içsel çardaklarının tam morfolojisine yeni bir yaklaşım sağlar.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >2,2,2-Tribromoethanol</td>
			<td >ACROS Organics</td>
			<td >AC421430100</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >2-Methylbutane</td>
			<td>ACROS</td>
			<td>126470025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >AffiniPure Fab Fragment Donkey Anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>711-007-003</td>
			<td>15.5&#956;L/mL</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Alexa Fluor&#174; 647 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG</td>
			<td>Jackson Immuno Research</td>
			<td>712-605-150</td>
			<td>(1:500)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >AutoQuant X3 software</td>
			<td>&#160;Media Cybernetics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Blunt End Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools&#160;</td>
			<td>FST 91100-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Click-iT&#8482; Plus EdU Cell Proliferation Kit</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>C10637</td>
			<td>Follow kit instructions&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Coverglass</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>107242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cytokeratin-8</td>
			<td>Developmental Studies Hybridoma Bank (DSHB), (RRID: AB_531826)&#160;</td>
			<td>Troma1 supernatant</td>
			<td>(1:50, store at 4&#176;C)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection Scissors (coarse)</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5619</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissection Scissors (fine)</td>
			<td>Moria</td>
			<td>MC19B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Donkey anti-Rabbit IgG (H+L) Highly Cross-Adsorbed Secondary Antibody, Alexa Fluor 488</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A21206</td>
			<td>(1:500)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Donkey anti-Rabbit, Alexa Fluor&#174; 555</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>A31572</td>
			<td>(1:500)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DyLight&#8482; 405 AffiniPure Fab Fragment Bovine Anti-Goat IgG</td>
			<td>Jackson Immuno Research</td>
			<td>805-477-008</td>
			<td>(1:500)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluoromount G</td>
			<td>Southern Biotech</td>
			<td>0100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass slides</td>
			<td>Fisher Scientific (Superfrost Plus Miscroscope Slides)</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Goat anti-Car4</td>
			<td>R&#38;D Systems&#160;</td>
			<td>AF2414</td>
			<td>(1:500)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Imaris&#160;</td>
			<td>Bitplane&#160;</td>
			<td>pixel-based image analysis software</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Neurolucida 360 + Explorer</td>
			<td>MBF Biosciences</td>
			<td>3D vector based image analysis software</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Normal Donkey Serum</td>
			<td>Jackson Immuno Research</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Normal Rabbit Serum&#160;</td>
			<td>Equitech-Bio, Inc</td>
			<td>SR30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Olympus FV1000</td>
			<td></td>
			<td >(multi-Argon laser with wavelengths 458, 488, 515 and additional HeNe lasers emitting 543 and 633)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paraformaldehyde</td>
			<td>EMD</td>
			<td>PX0055-3</td>
			<td>4% in 0.1M PB</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Rabbit anti-dsRed</td>
			<td>Living Colors DsRed Polyclonal Antibody; Clontech Clontech Laboratories, Inc. (632496)</td>
			<td>632496</td>
			<td>(1:500)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Rabbit anti-PLC&#946;2&#160;</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>Cat# sc-206</td>
			<td>(1:500)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium Phosphate Dibasic Anhydrous</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP332-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium Phosphate Monobasic</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP330-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >tert-Amyl alcohol</td>
			<td>Aldrich Chemical Company</td>
			<td>8.06193</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tissue Molds</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>70180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tissue-Tek&#174;&#160;O.C.T. Compound</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Triton X-100</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>#161-0407</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Zenon&#8482; Alexa Fluor&#8482; 555 Rabbit IgG Labeling Kit</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>Z25305</td>
			<td>Follow kit instructions&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

whole-mount staining, visualization, and analysis of fungiform, circumvallate, and palate taste buds

Tat tomurcukları, ağız boşluğundaki kimyasal uyaranların alt kümelerini tespit etmek için uzmanlaşmış tat dönüştürücü hücrelerin koleksiyonlarıdır. Bu transdüksiyon hücreleri, bu bilgiyi beyne taşıyan sinir lifleriyle iletişim kurar. Tat alıcı hücreler sürekli olarak öldüğünden ve yetişkinlik boyunca değiştirildiğinden, tat alma ortamı hem karmaşık hem de dinamiktir ve hücre türlerinin, konumlarının ve aralarındaki fiziksel ilişkilerin ayrıntılı analizlerini gerektirir. Ayrıntılı analizler, antikor geçirgenliğini önemli ölçüde azaltan dil-doku heterojenliği ve yoğunluğu ile sınırlanmıştır. Bu engeller, ölçümlerin yalnızca yaklaşık olması ve hücre ilişkilerinin kaybolması için tat tomurcuklarının bölümler arasında bölünmesiyle sonuçlanan bölümleme protokolleri gerektirir. Bu zorlukların üstesinden gelmek için, burada açıklanan yöntemler, üç tat bölgesinden tüm tat tomurcuklarını ve bireysel terminal çardaklarını toplamayı, görüntülemeyi ve analiz etmeyi içerir: mantar biçimi papilla, circumvallate papillae ve damak. Bütün tat tomurcuklarını toplamak önyargıyı ve teknik değişkenliği azaltır ve tat alma hacmi, toplam tat alma iç yüksekliği, dönüştürücü hücre sayıları ve bireysel terminal çardaklarının morfolojisi gibi özellikler için mutlak sayıları bildirmek için kullanılabilir. Bu yöntemin avantajlarını göstermek için, bu makale genel bir tat alma işareti ve tüm tat lifleri için bir etiket kullanarak mantar formu ve circumvallate tat tomurcukları arasındaki tat tomurcukları ve innervasyon hacimlerinin karşılaştırmalarını sağlar. Tat nöronlarının seyrek hücreli genetik etiketlemesinin (tat dönüştürücü hücrelerin etiketli alt kümeleri ile) kullanımı için bir iş akışı da sağlanmaktadır. Bu iş akışı, görüntü analizi yazılımı kullanarak bireysel tat-sinir çardaklarının yapılarını, hücre türü numaralarını ve hücreler arasındaki fiziksel ilişkileri analiz eder. Birlikte, bu iş akışları hem tüm tat tomurcuklarının hem de içsel çardaklarının tam morfolojisinin doku hazırlanması ve analizi için yeni bir yaklaşım sağlar.

Phox2b-Cre:tdTomato farelerinde 10,51(Şekil 3A)hem tüm tat tomurcuklarını hem de tüm tat tomurcuk innervasyonunu etiketleyen dsRed ve keratin-8 'e (genel bir tat alma tomurcukları) karşı antikorlarlalingual epitelin boyanmasını. Bu tat tomurcuklarını gözeneklerinden tabanlarına görüntüleme en yüksek çözünürlüklü x-y düzlem görüntülerini verdi (Şekil 3A,B). Pi...

Watch this Scientific Journal Video about Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds at JoVE.com

Whole-Mount Staining, Visualization, and Analysis of Fungiform, Circumvallate, and Palate Taste Buds

Bu makalede, sürekli olarak bütün ve bozulmamış tat tomurcukları (içlerini saran sinir lifleri dahil) veren ve tat tomurcukları ile çevresindeki papilla içindeki yapılar arasındaki ilişkileri koruyan tüm mantar formu, sirküvallat ve damak tadı tomurcuklarının doku hazırlama, boyama ve analizi için yöntemler açıklanmaktadır.

Mantar Formu, Sirkülasyon ve Damak Tat Tomurcuklarının Bütün Montajlı Boyama, Görselleştirme ve Analizi

Taste buds are collections of taste-transducing cells specialized to detect subsets of chemical stimuli in the oral cavity. These transducing cells ...

Bu tüm montaj diseksiyon ve analiz iş akışı, bireysel tat sinir çardaklarının tam morfolojisini, hücre tipi sayılarını ve hücreler arasındaki fiziksel ilişkileri analiz etmek için yeni bir yaklaşım sağlar. Tüm lingual epitelin toplanması, tüm tat tokası içindeki mutlak hücre sayısını ve innervasyon hacmini ölçmemize izin verir. Bu yaklaşım, teknik değişkenliği azaltan bölümlerden örneklemeye dayalı hücre yapısı tahminlerinden daha doğrudur.Bu aynı zamanda tat alma tomurcuk hücrelerinin innervasyonlarına göre ayrıntılı analizini sağlayan ilk yöntemdir. Bu yöntem, tat alma tomurcuklarındaki potansiyel devrelerin yanı sıra normal tat fonksiyonunu bozan hastalık süreçleri ve kemoterapilerle ilgili incelemeleri artırabilir. Bu vakaların çoğunda, hangi yapının veya ilişkinin bozulduğu belirsizdir, bu nedenle tüm bu faktörlerin bozulmadan sürdürülmesi, tüm analizlerin tek bir hazırlık içinde tutulmasına izin verir.En yaygın hata, epitenin alt tarafına yeterince yakın bir şekilde parçalanmayarak epitelin zarar görmesinden kaçınmaya çalışmaktır. Doku kalıbındaki dokuyu dondurmadan önce mümkün olduğunca alttaki dokuyu çıkarmak zorunludur. Epitelin doku kalıbının dibinde düz bir şekilde uzanmasını sağlamak da önemlidir.Dili 0,1 molar fosfat tamponunda eritip durulayarak başlayın. Daha sonra mantar biçimi papillasını içeren ön dilin 1/2'sini bir diseksiyon mikroskobu altında cam bir kaydırağa yerleştirin. Lingual epitel kavisli olduğu için kası çıkarmak ve dokuyu açık tutmak için künt uçlu epps ve diseksiyon makası kullanın, kaba diseksiyon makasının bıçaklarını epitele paralel tutarak dokunun düz bir yönünü sağlayın.Tat alma tomurcukları içermediği için dilin ventral olmayan keratinize epitelini atın. Daha sonra keratinize epitelin alt kısmına daha yakın diseksiyon için ince diseksiyon makası kullanın. Bir epitel parçasını bir doku kalıbına koymak ve düz bir şekilde uzandığından emin olmak için künt uçlu tokalar kullanın.Daha sonra dokuya bir damla optimum kesme sıcaklığı bileşiği veya OCT ekleyin. Doku kalıbını diseksiyon kapsamı altında daha önce soğutulmuş bir metal tabana yerleştirin, ardından OCT donana kadar dokuya hafifçe dokunmaya devam edin ve dokunun mümkün olduğunca düz donmasını sağlayın. OCT donduktan sonra, hızlı bir şekilde ek OCT ekleyin ve kalıbı donana kadar soğutulmuş 2 metilbütan bir kabın içine yerleştirin.OCT kalıbını kriyostat üzerine monte edin ve 20 mikron bölüme kesin. Her bölümü toplayın ve epitel tabanına yakınlığını değerlendirmek için ışık mikroskobu altında görüntüleyin. Doku epitelin alt tarafından tıraş edildikten sonra, epitelleri çözün ve bir çalkalayıcı üzerinde 0,1 molar PB'de iki kez durulayın.Sert damak ön ön kısmını yumuşak ve sert damak birleştiği yere kesin, ardından yumuşak damağı alttaki dokudan ayırın, kalan kemik parçalarının kesildiğinden emin olun ve ek kas ve bağ dokusunu çıkarın. Damak tadını künt uçlu forsepslerle tutun ve kalan bezleri çıkarın ve jiletle hafifçe kazıyarak bağ dokusunu kaybedin. Phox2b-Cre TdTomato farelerindeki tüm tat tomurcukları ve tüm tat tomurcuk innervasyonu, dil epitelinin DsRed ve keratin sekiz antikorları ile boyanarak etiketlendi.Tat alma tomurcuk hacmi ölçüldü ve mantar formu veya sirkülasyon ölçüm bölgelerindeki tat alma tomurcuk hacimleri ile innervasyon hacimleri arasında hiçbir korelasyon olmadığını ortaya koydu. TrkB CreER TdTomato farelerinde düşük dozda tamoksifen verilmesi gen rekombinasyonuna ve az sayıda nöronun etiketlenmesine neden olur. Burada, tat dönüştürücü hücre belirteçleri karbonik anhidraz dört ve fosfolipaz C beta iki ile boyanmış tam bir tat tokası gösterilmiştir.Bu tat alma tomurcukları, lifleri yeniden yapılandırdıktan sonra çıkarılan tat alma tomurcukları ile gösterilen iki etiketli terminal çardaklara sahiptir. Sinir lifleri ve tat dönüştürücü hücreler arasındaki en yakın yakınlığı belirlemek için hücre pikseli tabanlı görüntüleme yazılımının kullanılması, 19 tat dönüştürücü hücreden mavi terminal çardakının açık mavi karbonik anhidroz dört artı hücrenin 200 nanometresi içinde olduğunu ortaya koydu. Yeşil izleme ile ilişkili terminal çardak macenta olarak gösterilir ve hem açık hem de koyu mavi karbonik anhidraz dört artı hücrenin 200 nanometresi içindedir.Bütün mount keratin sekiz ve 5-etirenil-2'deoksiformridin veya EdU mantar biçimi tat tomurcuklarının lekelenmeleri, EdU etiketli hücrelerin tat tomurcuklarının içinde ve dışında mevcut olduğunu ortaya koydu. Macenta ve mor çekirdekler, tat tomurcukunun keratin sekiz artı sınırının dışında gözlenir. Sarı, deniz mavisi ve mavi hücreler tat alma tomurcuklarının içindeydi.Bu protokolü denerken, doku diseksiyonu ve donma adımları çok önemlidir. Bu doku diseksiyon yöntemleri, hem tat tozu içindeki hem de tat alma tomurcuklarının dışındaki, ancak papilla içindeki ilişkileri analiz etmek için çeşitli hücre ve yapılar için boyama ile takip edilebilir. Bu, tat tokası içindeki tüm tat çardaklarının ilk analizi ve tat dönüştürücü hücrelerle olan ilişkileridir.Bu elementlerin birkaçını tek bir hazırlıkta korumak ve boyamak hem analiz olanaklarını genişletir hem de mümkün olan ölçümleri iyileştirir.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Tüm montaj Embriyonik Sinir Sistemi Görselleştirme Drosophila Embriyolar

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Nörobilim

Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

Retina pigment epiteli Tüm Mount Fare Göz Diseksiyon

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Tüm Dağı Muscle Analizi ile tekrarlanabilir Fare Siyatik Sinir Ezilme ve Rejenerasyon daha sonraki Değerlendirme

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

İnsan Mantar şeklinde Lezzet papilla hücrelerinin izolasyonu ve Kültürü

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Visualization and Genetic Manipulation of Dendrites and Spines in the Mouse Cerebral Cortex and Hippocampus using In utero Electroporation

Kullanarak Fare Serebral Korteks ve Hippocampus Görselleştirme ve Dendritler ve Spine Genetik Manipülasyon<em&gt; Utero olarak</em&gt; Elektroporasyon

In utero electroporation (IUE) has become a powerful technique to study the development of different regions of the embryonic nervous system 1-5. To date ...

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Whole Mount Immunofluorescent Staining of the Neonatal Mouse Retina to Investigate Angiogenesis In vivo

Anjiyogenez Araştırma Yenidoğan Fare Retina Tüm Dağı Immunofluorescent Boyama<em&gt; In vivo</em

Angiogenesis  is the complex process of new blood vessel formation defined by the sprouting  of new blood vessels from a pre-existing vessel network. ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Tüm Montajlı Nöromüsküler Kavşak Analizi için Enine Abdominis Kasının Diseksiyonu

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

In Koku Reseptör Nöronlar Tüm Dağı ile immün<em&gt; Drosophila</em&gt; Anten

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

Fare Embriyo Duyu Akson Projeksiyonlar tüm montaj Görüntüleme

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Whole Mount Labeling of Cilia in the Main Olfactory System of Mice

Fareler Ana Koku Sistemde Cilia Whole Dağı Etiketleme

The mouse olfactory system comprises 6-10 million olfactory sensory neurons in the epithelium lining the nasal cavity. Olfactory neurons extend a single ...