Name: systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model
Uploaded: 2021-02-14T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

Forfatterne ønsker å anerkjenne støtte fra NIH-finansiering DK055679, DK089763, DK079392, DK061739, DK072564 og University of Michigan Pathology Slide Scanning Services.

Alle dyreforsøk som er beskrevet ble godkjent av University of Michigan's Committee on the Use and Care of Animals.
1. Vevshøsting
<ol><li>Euthanize mus humant ved hjelp av isofluran anestesi etterfulgt av cervical dislokasjon, i samsvar med godkjente protokoller. For alle dyreforsøk ble godkjenning innhentet av et sertifisert kontrollutvalg i samsvar med nasjonale og institusjonelle retningslinjer for dyrehåndtering.</li>
	<li>Plasser musen på en dissekeringspute i en liggende stilling...

<ol>
	<li>Kagnoff, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+intestinal+epithelium+is+an+integral+component+of+a+communications+network.">The intestinal epithelium is an integral component of a communications network.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (7), 2841-2843 (2014).</li><li>Laukoetter, M. G., Nava, P., Nusrat, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+intestinal+barrier+in+inflammatory+bowel+disease.">Role of the intestinal barrier in inflammatory bowel disease.</a> World Journal of Gastroenterology. 14 (3), 401-407 (2008).</li><li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crohn's+disease.">Crohn's disease.</a> Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li><li>Ordas, I., Eckmann, L., Talamini, M., Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis.">Ulcerative colitis.</a> Lancet. 380 (9853), 1606-1619 (2012).</li><li>Vowinkel, T., Kalogeris, T. J., Mori, M., Krieglstein, C. F., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+dextran+sulfate+sodium+load+on+the+severity+of+inflammation+in+experimental+colitis.">Impact of dextran sulfate sodium load on the severity of inflammation in experimental colitis.</a> Digestive Diseases and Sciences. 49 (4), 556-564 (2004).</li><li>Kitajima, S., Takuma, S., Morimoto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histological+analysis+of+murine+colitis+induced+by+dextran+sulfate+sodium+of+different+molecular+weights.">Histological analysis of murine colitis induced by dextran sulfate sodium of different molecular weights.</a> Experimental Animals. 49 (1), 9-15 (2000).</li><li>Mahler, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis.">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> American Journal of Physiology. 274 (3), 544-551 (1998).</li><li>Wirtz, S., Neufert, C., Weigmann, B., Neurath, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+induced+mouse+models+of+intestinal+inflammation.">Chemically induced mouse models of intestinal inflammation.</a> Nature Protocols. 2 (3), 541-546 (2007).</li><li>Kozlowski, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+entirely+automated+method+to+score+DSS-induced+colitis+in+mice+by+digital+image+analysis+of+pathology+slides.">An entirely automated method to score DSS-induced colitis in mice by digital image analysis of pathology slides.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 6 (3), 855-865 (2013).</li><li>Perse, M., Cerar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dextran+sodium+sulphate+colitis+mouse+model:+traps+and+tricks.">Dextran sodium sulphate colitis mouse model: traps and tricks.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2012, 718617 (2012).</li><li>Mizoguchi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+inflammatory+bowel+disease.">Animal models of inflammatory bowel disease.</a> Progress in Molecular Biology and Translational Science. 105, 263-320 (2012).</li><li>Flemming, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Desmocollin-2+promotes+intestinal+mucosal+repair+by+controlling+integrin-dependent+cell+adhesion+and+migration.">Desmocollin-2 promotes intestinal mucosal repair by controlling integrin-dependent cell adhesion and migration.</a> Molecular Biology of the Cell. 31 (6), 407-418 (2020).</li><li>Luna, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Armed Forces Institute of Pathology (U.S) &amp; Armed Forces Institute of Pathology (U.S.). Manual of Histologic Staining Methods of the Armed Forces Institute of Pathology. 3d edn. , (1968).</li><li>Kelm, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+epithelium-expressed+sialyl+Lewis+glycans+improves+colonic+mucosal+wound+healing+and+protects+against+colitis.">Targeting epithelium-expressed sialyl Lewis glycans improves colonic mucosal wound healing and protects against colitis.</a> The Journal of Clinical Investigation Insight. 5 (12), (2020).</li><li>Reed, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+CD47+is+critical+for+mucosal+repair+in+the+murine+intestine+in+vivo.">Epithelial CD47 is critical for mucosal repair in the murine intestine in vivo.</a> Nature Communications. 10 (1), 5004 (2019).</li><li>Laukoetter, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JAM-A+regulates+permeability+and+inflammation+in+the+intestine+in+vivo.">JAM-A regulates permeability and inflammation in the intestine in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (13), 3067-3076 (2007).</li><li>Khounlotham, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compromised+intestinal+epithelial+barrier+induces+adaptive+immune+compensation+that+protects+from+colitis.">Compromised intestinal epithelial barrier induces adaptive immune compensation that protects from colitis.</a> Immunity. 37 (3), 563-573 (2012).</li></ol>

Vårt Histologiske Colitis Score-system utgjør et pålitelig verktøy for å kvantifisere vevsbetennelse og skade i tarmen. Denne tilnærmingen gir en forbedret forståelse av det histopatologiske tilstanden til hele orgelet uten skjevheten ved å velge små områder eller ufullstendige seksjoner. Blant de kritiske trinnene for å utføre denne protokollen er riktig forberedelse av sveitsiske ruller som tillater analyse av minst 90% av tykktarmens lengde; parallell orientering under parafininnbygging og seksjonering for...

Den gastrointestinale epitelbarrieren spiller en sentral rolle i å skille lysende antigener og patogener fra underliggende vevsrom1. Epitelskade og slimhinnesår sett i patologiske tilstander som inflammatorisk tarmsykdom (IBD), iskemi eller kirurgisk skade er forbundet med kliniske symptomer som inkluderer diaré, vekttap, blod i avføring og magesmerter. Som svar på skade migrerer epitelceller og sprer seg for å re-epitelialisere og reparere mucosal barrierefeil. Oppløsning av betennelse og restitusjon av mucosal integritet er avgjørende for å gjenopprette intestinal mucosal homeostase og funksjon2,3,4.
Ulike dyremodeller har blitt brukt til å studere de underliggende molekylære mekanismene som er forbundet med skaden på tarmepitelbarrieren. Veletablerte og lett anvendelige modeller av kjemisk indusert kolitt er mye brukt, spesielt i studier relatert til inflammatorisk skade som IBD. En vanlig, reproduserbar og pålitelig murin kolitt modell bruker dextran natriumsulfat (DSS) mediert kolonisyreskade og betennelse. Alvorlighetsgraden av sykdommen varierer avhengig av musestamme, dose DSS, lengde på DSS-administrasjon og molekylvekt av DSS5,6,7.
Intestinal slimhinneskade under DSS-kolitt evalueres vanligvis ved hjelp av Disease Activity Index (DAI), en sammensatt poengsum bestemt av vekttap, fekalt blodinnhold og avføringskonsistens. Fekalt blodinnhold kan være mikroskopisk (oppdaget ved hjelp av en avføring guaiac acid test) eller makroskopisk; fekal konsistens er klassifisert som hard, myk eller flytende (dvs. diaré)5,8. Skåring av disse kliniske parametrene kan være subjektiv og kan variere avhengig av brukerens erfaring og skjevhet, selv om dataene generelt gir pålitelig informasjon og dermed er mye brukt av IBD-forskere. Derimot er det ingen allment akseptert metode for histologisk evaluering av slimhinneskade. Vanligvis blir utvalgte områder av tykktarmen inspisert av en trent patolog og scoret basert på flere parametere som vanligvis inkluderer kryptskade og leukocyttinfiltrasjon9,10,11. Men fordi antallet undersøkte parametere og mengden vev som analyseres varierer betydelig mellom individuelle rapporter, er sammenlignbarheten til mange publiserte studier begrenset. For å redusere observatørbias og forbedre konkordansen mellom studiene, bør en ideell histologisk scoringsprotokoll: 1) inkludere hele tykktarmens lengde, da tarmmukosal betennelse oftest er variabel og hopp over lesjoner er vanlig, 2) begrense analysen til spesifikke viktige og lett fortolkelige parametere for å redusere subjektivitet, 3) legge til rette for rask, konsistent behandling av et stort antall prøver, og 4) bruke allment tilgjengelige og rimelige verktøy for datainnsamling, analyse og presentasjon.
Her beskriver vi en teknikk for å behandle hele tykktarmen eller lange segmenter av tynntarmen i en "swiss roll" -konfigurasjon sammen med bruk av et gratis dataassistert skåringssystem for å analysere tarmmukosal betennelse og skade på grunn av DSS-indusert kolitt.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aperio AT2 &#8211; High Volume, Digital Whole Slide Scanning</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>Aperio AT2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent Underpads with waterproof moisture barrier</td>
			<td>VWR International</td>
			<td>56616-032</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>American Line 66-0089 Single Edge Blade, 100 per pkg</td>
			<td>GT Midwest</td>
			<td>TL5837</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Luer-Lok Disposable Syringes without Needles</td>
			<td>Fisher scientific</td>
			<td>14-823-2A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11103-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bonn Strabismus Scissors - ToughCut</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>14084-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11251-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin solution, neutral buffered, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501640-19L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoPrep 70% Ea</td>
			<td>Fisherbran</td>
			<td>70% denatured ethyl alcohol</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageScope</td>
			<td>Aperio</td>
			<td>Version 12.3.3.5039</td>
			<td>http://www.leicabiosystems.com/pathology-imaging/aperio-epathology/integrate/imagescope/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LeakBuster Specimen Containers: Sterile</td>
			<td>Starplex Scientific</td>
			<td>B120210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffere Saline, without calcium &#38; magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Feeding tubes, 20 GA x 30 mm</td>
			<td>Instech</td>
			<td>FTP2030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 20 G x 1 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305176</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PrecisionGlide Needle, Size: 27 G x 1/2 in</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>305109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 10 ml</td>
			<td>BD (Becton, Dickinson and Company)</td>
			<td>302995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unisette Tissue Cassettes</td>
			<td>Simport</td>
			<td>M505-2</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

systematic scoring analysis for intestinal inflammation in a murine dextran sodium sulfate-induced colitis model

Murine kolittmodeller er verktøy som er mye brukt i studier fokusert på å forstå patologien til inflammatoriske tarmsykdommer. Robuste standarder for objektiv og reproduserbar kvantifisering av alvorlighetsgraden av sykdommen gjenstår imidlertid å definere. De fleste kolittanalysemetoder er avhengige av begrenset histologisk skåring av små tarmsegmenter, noe som fører til delvise eller partiske analyser. Her kombinerer vi høyoppløselig bildeoppkjøp og langsgående analyse av hele tykktarmen for å kvantifisere tarmskade og sårdannelse i det dekstranske natriumsulfatet (DSS) indusert modell av murin kolitt. Denne protokollen muliggjør generering av objektive og reproduserbare resultater uten omfattende brukeropplæring. Her gir vi omfattende detaljer om prøvepreparering og bildeanalyse ved hjelp av eksempler på data fra DSS-indusert kolitt. Denne metoden kan lett tilpasses andre modeller av murin kolitt som har betydelig betennelse forbundet med slimhinneskade. Vi viser at brøkdelen av betent/skadet og erodert/sårslimhinne i forhold til den totale lengden på tykktarmen paralleller nøye kliniske funn som vekttap blant DSS-indusert sykdomsprogresjon. Denne histologiske protokollen gir et pålitelig tids- og kostnadseffektivt hjelpemiddel for å standardisere analyser av sykdomsaktivitet på en objektiv måte i DSS-kolitteksperimenter.

For å illustrere påliteligheten til denne histologiske kolitt-scoreanalysen i sammenheng med slimhinneskade etter DSS-utfordring og påfølgende gjenoppretting fra kolitt, administrerte vi 2,5% DSS i drikkevannet til åtte 10 uker gamle mannlige C57BL6 villtypemus i 5 dager etterfulgt av en gjenopprettingsperiode med vanlig vann i 5 dager. Det var ingen endring i kroppsvekt under akutt administrering av DSS, fra dag 0 til 5 (figur 4A). Kroppsvekten ble dram...

Watch this Scientific Journal Video about Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model at JoVE.com

Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model

Systematisk skåring av tarmbetennelse ved hjelp av et gratis dataassistert system er et kraftig verktøy for kvantitativt å sammenligne histopatologiske endringer i kolittmodeller preget av tilstedeværelse av sår og inflammatoriske endringer. Histologisk kolitt score evaluering styrker kliniske observasjoner og letter datatolkning.

Systematisk scoringsanalyse for tarmbetennelse i en murine dekstran natriumsulfatindusert kolittmodell

Murine colitis models are tools that are extensively employed in studies focused on understanding the pathobiology of inflammatory intestinal disorders. ...

Den systematiske scoringsanalysen er en teknikk for å evaluere slimhinneskade, noe som letter histologisk tolkning som kan utføres av trente forskere. De viktigste fordelene med denne metoden er at den er gratis og enkel å bruke. Det tillater kvantitativ analyse av histologiske data hentet fra tarmene til mus med kolitt.Denne protokollen gir en rask og reproduserbar måte å tolke sykdoms alvorlighetsgrad av hele tykktarmen, som er nødvendig for å sammenligne sykdom fra dyr med forskjellig genetisk bakgrunn. For vevsforberedelse er det viktig å organisere alle reagenser og materialer. Begynn med å plassere en euthanized mus på en dissekeringspute i en liggende stilling og immobilisere musens ekstremiteter ved hjelp av 20 gauge 1,5 tommers nåler.Bruk tang og saks, lag et lite snitt på bukhuden og trekk den til siden for å eksponere bukhinnen, og åpne deretter bukhulen med et midtlinje snitt i bukhinnen fra kjønnsbenet til sidene av magen. Fjern forsiktig vev og organer til tykktarmen er visualisert. Klipp bekkenbenet på begge sider av tykktarmen for å visualisere orgelet fullt ut, som strekker seg fra anus mot cecum.Fjern forsiktig fett, små årer og arterier festet til tykktarmen mens du forsiktig dissekerer orgelet, kutter bare proksimalt til anus og distal til cecum. Skyll forsiktig tykktarmen med PBS for å fjerne fekalt innhold ved hjelp av en fleksibel plast gavage nål satt inn gjennom anus. Plasser tykktarmen i en rett linje og åpne langs den mesenteriske arterien.Bisect tykktarmen langsgående fra den distale til den proksimale enden. Bruk halvparten av vevet til histologisk analyse og den andre halvparten for vestlig flekk, PCR, eller rullet inn i en annen sveitsisk rulle for fersk frossen immunfluorescensmikroskopi. Trim ekstra vev fra det proksimale tykktarmen med et barberblad til omtrent samme bredde langs hele tykktarmen oppnås.Juster tykktarmen for å eksponere lumen og flat vevet helt ved hjelp av en fleksibel gavage nål. Tilsett mer PBS om nødvendig for å holde vevet fuktig gjennom hele prosedyren. Fjern overflødig PBS ved hjelp av en papirserviett.Med en sprøyte og gavage nål, tilsett 10% nøytral bufret formalinoppløsning i to til tre minutter for å fikse og flate vevet, bruk deretter rette tang for å ta tak i enden av den distale tykktarmen og vri tykktarmen i konsentriske sirkler fra den distale til proksimale enden. Sett inn en 27 gauge nål for å feste tykktarmen i midten og hold den sveitsiske rulleformen, og plasser deretter den sveitsiske rullen i en innbyggingskassett inne i en histologisk prøvebeholder som orienterer vevet parallelt med kassetten. Fest vevet i 10% nøytral bufret formalinløsning over natten ved fire grader Celsius.Etter overnatting fiksering, vask vevet tre ganger med PBS. Tilsett 70% etanol før parafininnbyggingsprosessen og fjern nålen fra den sveitsiske rullen før du fortsetter. Vevet kan lagres i etanol ved romtemperatur til parafininnstøtning.Når du har åpnet de skannede bildene i bildebehandlingsprogramvaren, kontrollerer du at hele kolonet er synlig, og at det ikke mangler områder i eksemplet. Aktiver etikette imager og skaleringslinje verktøy for å identifisere skannede lysbilder ved å klikke etikett imager. Åpne merknadsverktøyet ved å klikke merknader og opprette tre forskjellige lag ved å klikke på nytt lag for å kvantifisere den totale lengden på den sveitsiske rullen, betennelsen eller skaden, og erosjon eller sårdannelse.Velg en annen farge for hvert lag ved å klikke lagfarge. Mål lengden på hvert lag eller hver kategori ved å klikke pennverktøyet for å tegne en linje etter slimhinnen, og flytt pekeren etter behov for å visualisere det tilstøtende området for analyse. Vis bildet ved 400 mikrometer zoom for å lette tilstrekkelig visualisering av muskelslimhinnen.Hver gang pennen stoppes, genereres et lite nytt lagområde. Den kan visualiseres og redigeres med lagregioner-fanen. Gjennomgå total lengde, betennelse eller skade, og erosjon eller sårdannelse målt ved hjelp av muskelslimhinnen som referanse.Når alle lagene er definert, eksporterer du dataene ved hjelp av knappen eksporter rutenett til tekstfil i alternativene for lagområder. Åpne tekstfilene og kopier dataene til en regnearkprogramvare. Totalt alle segmentene fra hver region og beregne prosentandelen av skade og sårdannelse med hensyn til total lengde.Vurder tre hovedkarakteristikker for å beregne den histologiske kolittscoren og for å evaluere alvorlighetsgraden av sykdommen. Se etter sunn tarmslimhinne, som er preget av organiserte epitelceller i kryptlysaksen, lamina propria med få immunceller og subjacent muscularis mucosa. Deretter må du se etter betennelse eller skade, som er preget av epitelkrypter som er svekket eller delvis mangler epitelceller og slimhinnebetennelse med nøytrofil infiltrasjon i krypter.Til slutt, sjekk for tilstedeværelse av erosjon eller sårdannelse, som er preget av områder uten overflateepite eller områder som helt mangler epitelkrypter med eller uten tilhørende leukocytter. For å illustrere påliteligheten til denne histologiske kolitt score analysen i sammenheng med slimhinneskade, ble 2,5% DSS administrert i drikkevannet til åtte C57BL6 villtype mus i fem dager, etterfulgt av en gjenopprettingsperiode med vanlig vann i fem dager. Kroppsvekten forble konstant under akutt administrering av DSS, men reduserte dramatisk da mus begynte å drikke vanlig vann fra springen.Blod og myke avføring dukket opp etter tre dager med DSS-administrasjon og fortsatte til dag åtte av eksperimentet. Disse observasjonene antydet at de mest skadelige effektene av eksponering for DSS ble observert i utvinningsperioden mellom dag fem og åtte. Måling av kolonlengde på dag 10 bekreftet en betydelig forkortelse på slutten av eksperimentet.Kolon ble høstet på dag null, to, fem, syv, åtte og 10 for å lage parafin sveitsiske ruller. Vevet ble farget med H&E og HD-skanninger ble analysert for å beregne histologisk kolitt score og prosentandel av skade og sårdannelse. Normal kryptarkitektur ble observert hos ubehandlede mus.Etter to dager med DSS-administrasjon ble det observert rekruttering av immunceller. På dag fem virker epitelceller skadet og det var en infiltrasjon av nøytrofiler over epitelet forbundet med epitelskade. Fra dag fem til åtte ble det observert områder med epiteltap med betennelse og sårdannelse.På dag 10 begynte epitelceller å regenerere og repopulate sårerte områder, sakte gjenopprette kolonislimhinnen. Når du prøver denne protokollen, er det viktig å skape en riktig orientert og godt bevart sveitsisk rulle, samt å identifisere slimhinnebetennelse eller skade og sårdannelse eller erosjon riktig. Denne metoden kan brukes til kvantitativ evaluering av skade langs hele lengden av den koloniske slimhinnen i andre modeller av kolitt, for eksempel TMS eller T-celleoverføringsmodell.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris Infection: A Model of Type 2 Immunity and Inflammation in the Gut

Trichuris muris is a natural pathogen of mice and is biologically and antigenically similar to species of Trichuris that 
infect humans and livestock1. ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Analyse av Pulmonal dendrittiske celle modning og migrasjon under Allergisk Airway betennelse

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Den<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mus Modell: Studerer patogen og Host Bidrag til infeksiøs kolitt

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

A Mouse Modell for Patogen Utløst kronisk betennelse på lokale og systemiske nettsteder

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induksjon av murine tarmbetennelse etter adoptiv overføring av Effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Høy</sup&gt; T-celler i immundefekte mus

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

En optimalisert metode for å isolere og utvide Invariant Natural Killer T-celler fra mus Spleen

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dekstran forbedrer Lentiviral signaltransduksjon effektiviteten av Murine og menneskelig primære NK celler

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

Induction and Scoring of Graft-Versus-Host Disease in a Xenogeneic Murine Model and Quantification of Human T Cells in Mouse Tissues using Digital PCR

Induksjon og scoring av pode-versus-host sykdom i en Xenogeneic murine modell og kvantifisering av menneskelige T celler i mus vev ved hjelp av digital PCR

Acute graft-versus-host disease (GVHD) is a significant limitation for patients receiving hematopoietic stem cell transplant as therapy for hematological ...