Name: a rat model of ecohiv brain infection
Uploaded: 2021-01-21T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Rat Model of EcoHIV Brain Infection at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af NIH tilskud HD043680, MH106392, DA013137, og NS100624.

Alle dyreprotokoller blev gennemgået og godkendt af Animal Care and Use Committee ved University of South Carolina (føderalt sikkerhedsnummer: D16-00028). Seks voksne mandlige F344/N rotte blev parret opstaldet i et kontrolleret miljø under en 12/12 lys: mørk cyklus med ad libitum adgang til mad og vand. Alle dyr blev passet ved hjælp af retningslinjer, der er fastlagt af National Institutes of Health i vejledningen for pleje og brug af forsøgsdyr.
1. Virusemballage i 293 FT-celler
<ol...

<ol>
	<li>Illenberger, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+Infection+and+Neurocognitive+Disorders+in+the+Context+of+Chronic+Drug+Abuse:+Evidence+for+Divergent+Findings+Dependent+upon+Prior+Drug+History.">HIV Infection and Neurocognitive Disorders in the Context of Chronic Drug Abuse: Evidence for Divergent Findings Dependent upon Prior Drug History.</a> Journal of Neuroimmune Pharmacology. 15 (4), 715-728 (2020).</li><li>Joseph, S. B., Swanstrom, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolution+of+HIV-1+entry+phenotypes+as+a+guide+to+changing+target+cells.">The evolution of HIV-1 entry phenotypes as a guide to changing target cells.</a> Journal of Leukocyte Biology. 103 (3), 421-431 (2018).</li><li>Potash, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+study+of+systemic+HIV-1+infection,+antiviral+immune+responses,+and+neuroinvasiveness.">A mouse model for study of systemic HIV-1 infection, antiviral immune responses, and neuroinvasiveness.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 102 (10), 3760-3765 (2005).</li><li>Albritton, L. M., Tseng, L., Scadden, D., Cunningham, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+putative+murine+ecotropic+retrovirus+receptor+gene+encodes+a+multiple+membrane-spanning+protein+and+confers+susceptibility+to+virus+infection.">A putative murine ecotropic retrovirus receptor gene encodes a multiple membrane-spanning protein and confers susceptibility to virus infection.</a> Cell. 57, 659-666 (1989).</li><li>Geraghty, P., Hadas, E., Kim, B. H., Dabo, A. J., Volsky, D. J., Foronjy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+infection+model+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease+in+mice.">HIV infection model of chronic obstructive pulmonary disease in mice.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 312 (4), 500-509 (2017).</li><li>Gu, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EcoHIV+infection+of+mice+establishes+latent+viral+reservoirs+in+T+cells+and+active+viral+reservoirs+in+macrophages+that+are+sufficient+for+induction+of+neurocognitive+impairment.">EcoHIV infection of mice establishes latent viral reservoirs in T cells and active viral reservoirs in macrophages that are sufficient for induction of neurocognitive impairment.</a> PLoS Pathogens. 14 (6), 1007061 (2018).</li><li>Ellenbroek, B., Youn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+in+neuroscience+research:+is+it+a+rat+race.">Rodent models in neuroscience research: is it a rat race.</a> Disease Models, Mechanisms. 9 (10), 1079-1087 (2016).</li><li>Feduccia, A. A., Duvauchelle, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+apparatus+and+method+for+drug+reinforcement.">Novel apparatus and method for drug reinforcement.</a> Journal of Visualized Experiments. (42), e1998 (2010).</li><li>Bertrand, S. J., Mactutus, C. F., Harrod, S. B., Moran, L. M., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+proteins+dysregulate+motivational+processes+and+dopamine+circuitry.">HIV-1 proteins dysregulate motivational processes and dopamine circuitry.</a> Scientific Reports. 8 (1), 7869 (2018).</li><li>McGaughy, J., Sarter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+vigilance+in+rats:+task+validation+and+effects+of+age,+amphetamine,+and+benzodiazepine+receptor+ligands.">Behavioral vigilance in rats: task validation and effects of age, amphetamine, and benzodiazepine receptor ligands.</a> Psychopharmacology. 117 (3), 340-357 (1995).</li><li>Li, H., Aksenova, M., Bertrand, S., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+filamentous+actin+(F-actin)+puncta+in+rat+cortical+neurons.">Quantification of filamentous actin (F-actin) puncta in rat cortical neurons.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), (2016).</li><li>McLaurin, K. A., Li, H., Booze, R. M., Mactutus, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+Timing:+NeuroHIV+Progression+in+the+Post-cART+Era.">Disruption of Timing: NeuroHIV Progression in the Post-cART Era.</a> Scientific Reports. 9 (1), 827 (2019).</li><li>McLaurin, K. A., Moran, L. M., Li, H., Booze, R. M., Mactutus, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Power+of+Interstimulus+Interval+for+the+Assessment+of+Temporal+Processing+in+Rodents.">The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (146), e58659 (2019).</li><li>Li, H., McLaurin, K. A., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ballistic+Labeling+of+Pyramidal+Neurons+in+Brain+Slices+and+in+Primary+Cell+Culture.">Ballistic Labeling of Pyramidal Neurons in Brain Slices and in Primary Cell Culture.</a> Journal of Visualized Experiments. (158), (2020).</li><li>Ko, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+but+not+Astrocytes+Harbor+HIV+DNA+in+the+Brains+of+HIV-1-Infected+Aviremic+Individuals+on+Suppressive+Antiretroviral+Therapy.">Macrophages but not Astrocytes Harbor HIV DNA in the Brains of HIV-1-Infected Aviremic Individuals on Suppressive Antiretroviral Therapy.</a> Journal of Neuroimmune Pharmacology. 14 (1), 110-119 (2019).</li><li>Sopper, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+simian+immunodeficiency+virus+infection+in+vitro+and+in+vivo+on+the+cytokine+production+of+isolated+microglia+and+peripheral+macrophages+from+rhesus+monkey.">The effect of simian immunodeficiency virus infection in vitro and in vivo on the cytokine production of isolated microglia and peripheral macrophages from rhesus monkey.</a> Virology. 220 (2), 320-329 (1996).</li><li>Llewellyn, G. N., Alvarez-Carbonell, D., Chateau, M., Karn, J., Cannon, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+infection+of+microglial+cells+in+a+reconstituted+humanized+mouse+model+and+identification+of+compounds+that+selectively+reverse+HIV+latency.">HIV-1 infection of microglial cells in a reconstituted humanized mouse model and identification of compounds that selectively reverse HIV latency.</a> Journal of NeuroVirology. 24 (2), 192-203 (2018).</li></ol>

I denne protokol etablerede vi en EcoHIV-induceret HIV-infektionsmodel hos rotter. Specifikt beskrev vi en bilateral stereotaxisk injektion af EcoHIV i cortex, som med succes inducerede aktiv HIV-infektion i rottehjernen 7 dage efter injektionen. Derudover viser vi, at EcoHIV-infektion hos rotter kan være et godt biologisk system til at studere centrale aspekter af HÅND. Otte uger efter EcoHIV-infektion udviste rotter betydelige neurokognitive svækkelser, som omfattede ændringer i tidsmæssig behandling og synaptisk ...

Biologiske systemer har forbedret vores forståelse af HIV-1 associerede neurokognitive lidelser (HAND) og deres underliggende neurale mekanismer2. Det er ofte afhænger af spørgsmålet om interesse2, at det afgøres, hvilket biologisk system der er bedst egnet til en given undersøgelse . Begrænsningen af rækken af værtsdyrmodeller udfordrer undersøgelser af hiv-1-sygdomsudvikling. For at undersøge HIV-1 viral replikation og patogenese skabte Potash et al.3 en musemodel af aktiv HIV-1-infektion og erstattede kodningsområdet for HIV-overfladekonvolut glycoprotein, gp120, med ecotropisk MLV gp80, hvilket førte til vellykket viral replikation hos mus4. Efter hale vene injektioner i kimære HIV (EcoHIV) mus, mange egenskaber blev observeret ligner dem af HIV-1 seropositive individer (f.eks inficerede lymfocytter og makrofager, målrettet mod antivirale immunrespons, og inflammation3,5,6).
Selvom mus og rotter begge er medlemmer af Muridae, kan grundlæggende artsforskelle påvirke deres egnethed til specifikke eksperimentelle spørgsmål7. Derfor ville udvidelsen af EcoHIV-infektionsmodellen til rotter (almindeligvis anvendt i undersøgelser af stofmisbrug og neurokognitive lidelser) være fordelagtig i undersøgelsen af neuroHIV. For eksempel gør deres større størrelse jugularkateterimplantation til medicinsk selvadministrationsprocedurer mere praktisk8. Drug self-administration teknikker hos rotter er blevet udnyttet tilat evaluere motivation i HIV-19 . Desuden blev mange neurokognitive / adfærdsmæssige opgaver oprindeligt designet til rotter10. Her rapporterer vi udnyttelsen af stereotaxiske injektioner af EcoHIV hos rotter for at udvide EcoHIV-infektionsmodellen og give en vigtig mulighed for at løse nye spørgsmål relateret til neuroHIV og HAND.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>293FT cells</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>R70007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic solution</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>30004CI</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning BioCoatGelatin 75cm&#178; Rectangular Canted Neck Cell Culture Flask with Vented Cap</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>354488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning DMEM with L-Glutamine, 4.5 g/L Glucose and Sodium Pyruvate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10013CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>VWR</td>
			<td>637-137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>drill</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Biopur Safe-Lock Tubes</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>22600028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethicon Vicryl Plus Antibacterial, 4-0 Polyglactin 910 Suture, 27in. FS-2</td>
			<td>Med Vet International</td>
			<td>VCP422H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>1701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen Lipofectamine 3000 Transfection Reagent</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>L3000015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>15914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit</td>
			<td>Cell Biolabs, inc.</td>
			<td>VPK-107-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lenti-X Concentrator</td>
			<td>Takara</td>
			<td>PT4421-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11058021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P36930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane</td>
			<td>Merritt Veterinary Supply</td>
			<td>347075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereotaxic apparatus</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>Model 900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperFrost Plus Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-154%</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500086</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rat model of ecohiv brain infection

Det er blevet godt undersøgt, at EcoHIV inficeret mus model er af betydelig nytte i at undersøge HIV associerede neurologiske komplikationer. Etablering af EcoHIV-inficeret rottemodel til undersøgelser af stofmisbrug og neurokognitive lidelser ville være gavnlig i undersøgelsen af neuroHIV og HIV-1 tilknyttede neurokognitive lidelser (HAND). I denne undersøgelse demonstrerer vi den vellykkede oprettelse af en rottemodel af aktiv hiv-infektion ved hjælp af kimær HIV (EcoHIV). For det første blev den lentivirale konstruktion af EcoHIV pakket i dyrkede 293 FT-celler i 48 timer. Derefter var det betingede medium koncentreret og titered. Dernæst udførte vi bilaterale stereotaxiske injektioner af EcoHIV-EGFP i F344/N rottehjernevæv. En uge efter infektion blev EGFP-fluorescenssignaler påvist i det inficerede hjernevæv, hvilket indikerer, at EcoHIV med succes fremkalder en aktiv HIV-infektion hos rotter. Derudover blev immunostaining til mikroglial cellemarkøren, Iba1, udført. Resultaterne viste, at microglia var den fremherskende celletype, der husede EcoHIV. Desuden udviste EcoHIV-rotter ændringer i tidsmæssig behandling, en potentiel underliggende neuroadfærdsmekanisme af HÅND samt synaptisk dysfunktion otte uger efter infektion. Kollektivt, denne undersøgelse udvider EcoHIV model af HIV-1 infektion til rotte tilbyder et værdifuldt biologisk system til at studere HIV-1 viral reservoirer i hjernen samt hånd og tilhørende comorbiditeter såsom stofmisbrug.

Det betingede medium blev indsamlet fra lentivirus af EcoHIV-EGFP inficerede 293FT celler. Dernæst var det koncentreret og titered, så stereotaxically injiceres i hjernen (kortikale region) af F344/N rotter. Syv dage efter injektionen blev rotter ofret, og der blev taget billeder fra koronar hjerneskiver fra bregma 5,64 mm til bregma -4,68 mm. I figur 1Aer der betydelige EcoHIV-EGFP-signaler i hele hjernen, især i cortex og hippocampal dentate gyrus. Desuden gav dobbeltmærkning med Iba1-...

Watch this Scientific Journal Video about A Rat Model of EcoHIV Brain Infection at JoVE.com

A Rat Model of EcoHIV Brain Infection

Her præsenterer vi en protokol til at etablere en ny rottemodel for aktiv hiv-infektion ved hjælp af kimær HIV (EcoHIV), som er afgørende for at forbedre vores forståelse af HIV-1 virale reservoirer i hjernen og tilbyde et system til at studere HIV-associerede neurokognitive lidelser og tilknyttede comorbiditeter (dvs. stofmisbrug).

En rottemodel af EcoHIV-hjerneinfektion

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. ...

Ved hjælp af rotter kan denne protokol bruges til at etablere en ny model for aktiv HIV-infektion ved hjælp af kimær HIV. med rotter kan etableringen af EcoHIV-infektionsmodellen for undersøgelser af stofmisbrug og neurokognitive lidelser være gavnlig for undersøgelsen af neuro HIV og HIV-1 tilknyttede neurokognitive lidelser. Demonstration procedure vil blive Hailong Li, en forskningsmedarbejder fra mit laboratorium.Til emballering af virus i 293 T-celler, frø fem gange 10 til den femte 293 T-celler pr milliliter DMEM suppleret med 10% FBS i hver af de to gelatine-belagt 75 kvadratcentimeter kolber og inkubere cellerne ved 37 grader Celsius, indtil kulturerne når 50% sammenløb. På dagen for transfektet fortyndes 22,5 mikroliter transfekturereagens i 750 mikroliter medium pr. kolbe i et 1,5 milliliter mikrocentrifugerør og vortex opløsningen i tre sekunder. Fortynd 20 mikrogram af det kimære EcoHIV plasmid DNA i 750 mikroliter medium i et andet 1,5 milliliter mikrocentrifugerør pr. kolbe med grundig blanding.Kombiner det fortyndede DNA med det fortyndede transfektreagens med blid blanding, og inkuber den resulterende opløsning i 15 minutter ved stuetemperatur. Ved afslutningen af inkubationen tilsættes hver virussuspension til 10 milliliter DMEM-medium før krigen, og hver virus suppleret opløsning til en kolbe på 293 T-celler. Efter to dages cellekultur samles supernatanten fra kolberne i et enkelt 50 milliliter konisk rør til centrifugering og overfører det afklarede supernatant til et nyt 50 milliliter rør.Tilsæt otte milliliter Lenti-X Concentrator til den afklarede supernatant og bland med blid inversion. Efter en to-dages inkubation ved fire grader Celsius, centrifuge blandingen og forsigtigt fjerne supernatant, derefter forsigtigt genbruge pellet med 100 mikroliter af 100 millimolar PBS og bruge en P24 ELISA kit til titer virus koncentrationen. For EcoHIV-EGFP injektion, efter at have bekræftet en manglende reaktion på pedal refleks, barbere håret fra hjernen regionen og sterilisere den udsatte hud to gange med 70% ethanol og en chlorhexidin-baserede krat.Fastgør rotten i en udsat position i et stereotaxisk apparat og lav et fem til seks centimeter snit gennem huden langs hovedbundens midterlinje. Marker en boreposition ved 0,8 millimeter lateral og en 1,2 millimeter rostral til bregma og bor et hul med en diameter på 0,4 millimeter ved hver kranieposition. 1,04 gange 10 indlæses i den sjette transduktionsenhed pr. milliliter titered EcoHIV Lentivirus-opløsning i en 10 mikroliter injektionssprøjte, og fastgør sprøjten til det stereotaxiske apparat.Flyt nålen tæt på overfladen af et borehul og sæt nålen 2,5 milliliter ind i hullet. Infuse en mikroliter virusopløsning med en hastighed på 0,2 mikroliter virus i minuttet. Når al virus er blevet injiceret, skal du lade nålen inde i injektionsområdet i fem minutter, før du langsomt trækker nålen tilbage, indtil den er uden for rottekranken.Luk hudens snit med en 4-0 silketråd sutur og steriliser opløsningen med 70% ethanol, og placer derefter rotten i et genopretningskammer med en varmepude med overvågning indtil recumbency. En til otte uger efter viral infusion, efter at have bekræftet en manglende reaktion på pedalrefleks, fastgør rotten i liggende stilling inde i en røghætte og hæld huden langs brystmidten. Skær mellemgulvet for at åbne brysthulen og indsæt en 20 gauge med 25 millimeter nål i venstre hjertekammer.Åbn straks højre atrium med en saks og perfuse 50 milliliter forkølet 100 millimolar PBS ved en fem milliliter per minut flow hastighed. Når alle PBS er blevet leveret, perfuse med 100 milliliter kold 4%paraformaldehyd. Når alle de fikseringsmiddel er blevet leveret, fjerne hjernen fra kraniet og fastsætte væv natten over i frisk 4%paraformaldehyd.Den næste morgen, placere prøven i 40 milliliter af 30% saccharose i 100 millimolar PBS i en 50 milliliter rør i cirka tre dage, indtil hjernen sætter sig til bunden af røret, før snap frysning hjernevævet i methyl butanol i to minutter på minus 80 grader Celsius. Efter frysning skal du bruge en minus 20 grader Celsius kryostat og en fin pensel til at erhverve 50 mikron tykke koronarsektioner. Når alle sektionerne er opnået, skal prøverne dækkes med 300 mikroliter anti-fade medium og monteres med 22 50-milliliter coverslips.Når mediet er tørret, skal du afbilde sektionerne ved konfokal mikroskopi. Syv dage efter Lentivirus injektion, rotte koronar hjerne skive billeder afslører en betydelig tilstedeværelse af EcoHIV-EGFP signaler i hele hjernevævet, især inden for cortex og hippocampal dentate gyrus. Dobbelt mærkning med og Iba1 og EcoHIV-EGFP sonder giver stærke beviser for, at microglia er den fremherskende celletype huser EcoHIV udtryk i hjernen.Otte uger efter infektion udviser EcoHIV injicerede dyr en relativ ufølsomhed over for manipulation af interstimulusintervallet, som det fremgår af en relativt fladere intervalfunktion sammenlignet med saltvandskontroller. Derudover udviser EcoHIV injicerede rotter dybtgående ændringer i deres dendritiske rygsøjlemorfologi som det fremgår af en øget relativ hyppighed af kortere dendritiske rygsøjler med øgede hoved- og nakkediametre i forhold til kontroldyr. Koncentrationen og titreringen af tilstandsmediet før stereotaxisk injektion er afgørende for at sikre de ensartede og replikerbare resultater på tværs af eksperimenter.Denne specifikke regionale stereoskatiske injektion af EcoHIV giver en effektiv HIV-infektion i hjernen og producerer tidsmæssige behandling underskud hos rotter. Udnyttelsen af stereotaxiske hiv-injektioner hos rotter for at udvide EcoHIV-infektionsmodellen giver en vigtig mulighed for at løse nye spørgsmål relateret til neuro HIV ved hånden.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Stereotaxic Surgery for Excitotoxic Lesion of Specific Brain Areas in the Adult Rat

Stereotaktisk kirurgi for excitotoksiske læsion af specifikke områder i hjernen i den voksne rotte

Many behavioral functions in mammals, including rodents and humans, are mediated principally by discrete brain regions. A common method for discerning the ...

A Protocol for Measuring Cue Reactivity in a Rat Model of Cocaine Use Disorder

En protokol til måling af Cue reaktivitet i en rotte Model af kokain brug lidelse

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue ...

A Rat Model of Mild Intrauterine Hypoperfusion with Microcoil Stenosis

En rotte Model af Mild intrauterin Hypoperfusion med Microcoil stenose

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies ...

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

En In Vivo evaluering af blod - hjerne barrieren forstyrrelser i en rotte Model af iskæmisk slagtilfælde

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

A Rat Model of Central Fatigue Using a Modified Multiple Platform Method

En rotte Model af Central træthed ved hjælp af en modificeret flere Platform metode

In this article, we introduced a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM). The Multiple Platform box was designed ...

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

En alternativ metode til at studere primære begivenheder i Neurodegeneration ved hjælp af Ex Vivo rotte hjernen skiver

Despite&#160;numerous studies that attempt to develop reliable animal models&#160;which reflecting the primary processes underlying neurodegeneration, ...

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

En roman In Vitro Model af Blast traumatisk hjerneskade

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the ...

A Benchtop Approach to the Location Specific Blood Brain Barrier Opening using Focused Ultrasound in a Rat Model

En benchtop tilgang til placeringsspecifik blodhjernebarriereåbning ved hjælp af fokuseret ultralyd i en rottemodel

Stereotaxic surgery is the gold standard for localized drug and gene delivery to the rodent brain. This technique has many advantages over systemic ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

En hydrofobisk vævsclearingmetode til rottehjernevæv

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...