Name: a rat model of ecohiv brain infection
Uploaded: 2021-01-21T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Rat Model of EcoHIV Brain Infection at JoVE.com

Dit werk werd gefinancierd door NIH-subsidies HD043680, MH106392, DA013137 en NS100624.

Alle dierprotocollen werden herzien en goedgekeurd door de Animal Care and Use Committee van de Universiteit van South Carolina (federaal betrouwbaarheidsnummer: D16-00028). Zes volwassen mannelijke F344/N rat werd gekoppeld in een gecontroleerde omgeving onder een 12/12 licht: donkere cyclus met ad libitum toegang tot voedsel en water. Alle dieren werden verzorgd aan de hand van richtlijnen die zijn vastgesteld door de National Institutes of Health in de Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.
<p class="jo...

<ol>
	<li>Illenberger, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+Infection+and+Neurocognitive+Disorders+in+the+Context+of+Chronic+Drug+Abuse:+Evidence+for+Divergent+Findings+Dependent+upon+Prior+Drug+History.">HIV Infection and Neurocognitive Disorders in the Context of Chronic Drug Abuse: Evidence for Divergent Findings Dependent upon Prior Drug History.</a> Journal of Neuroimmune Pharmacology. 15 (4), 715-728 (2020).</li><li>Joseph, S. B., Swanstrom, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolution+of+HIV-1+entry+phenotypes+as+a+guide+to+changing+target+cells.">The evolution of HIV-1 entry phenotypes as a guide to changing target cells.</a> Journal of Leukocyte Biology. 103 (3), 421-431 (2018).</li><li>Potash, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+study+of+systemic+HIV-1+infection,+antiviral+immune+responses,+and+neuroinvasiveness.">A mouse model for study of systemic HIV-1 infection, antiviral immune responses, and neuroinvasiveness.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 102 (10), 3760-3765 (2005).</li><li>Albritton, L. M., Tseng, L., Scadden, D., Cunningham, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+putative+murine+ecotropic+retrovirus+receptor+gene+encodes+a+multiple+membrane-spanning+protein+and+confers+susceptibility+to+virus+infection.">A putative murine ecotropic retrovirus receptor gene encodes a multiple membrane-spanning protein and confers susceptibility to virus infection.</a> Cell. 57, 659-666 (1989).</li><li>Geraghty, P., Hadas, E., Kim, B. H., Dabo, A. J., Volsky, D. J., Foronjy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+infection+model+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease+in+mice.">HIV infection model of chronic obstructive pulmonary disease in mice.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 312 (4), 500-509 (2017).</li><li>Gu, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EcoHIV+infection+of+mice+establishes+latent+viral+reservoirs+in+T+cells+and+active+viral+reservoirs+in+macrophages+that+are+sufficient+for+induction+of+neurocognitive+impairment.">EcoHIV infection of mice establishes latent viral reservoirs in T cells and active viral reservoirs in macrophages that are sufficient for induction of neurocognitive impairment.</a> PLoS Pathogens. 14 (6), 1007061 (2018).</li><li>Ellenbroek, B., Youn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+in+neuroscience+research:+is+it+a+rat+race.">Rodent models in neuroscience research: is it a rat race.</a> Disease Models, Mechanisms. 9 (10), 1079-1087 (2016).</li><li>Feduccia, A. A., Duvauchelle, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+apparatus+and+method+for+drug+reinforcement.">Novel apparatus and method for drug reinforcement.</a> Journal of Visualized Experiments. (42), e1998 (2010).</li><li>Bertrand, S. J., Mactutus, C. F., Harrod, S. B., Moran, L. M., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+proteins+dysregulate+motivational+processes+and+dopamine+circuitry.">HIV-1 proteins dysregulate motivational processes and dopamine circuitry.</a> Scientific Reports. 8 (1), 7869 (2018).</li><li>McGaughy, J., Sarter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+vigilance+in+rats:+task+validation+and+effects+of+age,+amphetamine,+and+benzodiazepine+receptor+ligands.">Behavioral vigilance in rats: task validation and effects of age, amphetamine, and benzodiazepine receptor ligands.</a> Psychopharmacology. 117 (3), 340-357 (1995).</li><li>Li, H., Aksenova, M., Bertrand, S., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+filamentous+actin+(F-actin)+puncta+in+rat+cortical+neurons.">Quantification of filamentous actin (F-actin) puncta in rat cortical neurons.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), (2016).</li><li>McLaurin, K. A., Li, H., Booze, R. M., Mactutus, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+Timing:+NeuroHIV+Progression+in+the+Post-cART+Era.">Disruption of Timing: NeuroHIV Progression in the Post-cART Era.</a> Scientific Reports. 9 (1), 827 (2019).</li><li>McLaurin, K. A., Moran, L. M., Li, H., Booze, R. M., Mactutus, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Power+of+Interstimulus+Interval+for+the+Assessment+of+Temporal+Processing+in+Rodents.">The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (146), e58659 (2019).</li><li>Li, H., McLaurin, K. A., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ballistic+Labeling+of+Pyramidal+Neurons+in+Brain+Slices+and+in+Primary+Cell+Culture.">Ballistic Labeling of Pyramidal Neurons in Brain Slices and in Primary Cell Culture.</a> Journal of Visualized Experiments. (158), (2020).</li><li>Ko, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+but+not+Astrocytes+Harbor+HIV+DNA+in+the+Brains+of+HIV-1-Infected+Aviremic+Individuals+on+Suppressive+Antiretroviral+Therapy.">Macrophages but not Astrocytes Harbor HIV DNA in the Brains of HIV-1-Infected Aviremic Individuals on Suppressive Antiretroviral Therapy.</a> Journal of Neuroimmune Pharmacology. 14 (1), 110-119 (2019).</li><li>Sopper, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+simian+immunodeficiency+virus+infection+in+vitro+and+in+vivo+on+the+cytokine+production+of+isolated+microglia+and+peripheral+macrophages+from+rhesus+monkey.">The effect of simian immunodeficiency virus infection in vitro and in vivo on the cytokine production of isolated microglia and peripheral macrophages from rhesus monkey.</a> Virology. 220 (2), 320-329 (1996).</li><li>Llewellyn, G. N., Alvarez-Carbonell, D., Chateau, M., Karn, J., Cannon, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+infection+of+microglial+cells+in+a+reconstituted+humanized+mouse+model+and+identification+of+compounds+that+selectively+reverse+HIV+latency.">HIV-1 infection of microglial cells in a reconstituted humanized mouse model and identification of compounds that selectively reverse HIV latency.</a> Journal of NeuroVirology. 24 (2), 192-203 (2018).</li></ol>

In dit protocol hebben we een EcoHIV-geïnduceerd HIV-infectiemodel bij ratten vastgesteld. In het bijzonder beschreven we een bilaterale stereotaxic injectie van EcoHIV in de cortex die met succes een actieve HIV-infectie in de rattenhersenen veroorzaakte 7 dagen na de injectie. Bovendien tonen we aan dat EcoHIV-infectie bij ratten een goed biologisch systeem kan zijn om belangrijke aspecten van HAND te bestuderen. Acht weken na de EcoHIV-infectie vertoonden ratten significante neurocognitieve stoornissen, waaronder de ...

Biologische systemen hebben ons begrip van hiv-1 geassocieerde neurocognitieve aandoeningen (HAND) en hun onderliggende neurale mechanismen verbeterd2. Het bepalen welk biologisch systeem het meest geschikt is voor een bepaalde studie is vaak afhankelijk van de kwestie van belang2. De beperking van het scala aan modellen van gastdieren daagt studies uit naar de ontwikkeling van hiv-1-ziekten. Om hiv-1 virale replicatie en pathogenese te onderzoeken, creëerden Potash et al.3 een muismodel van actieve HIV-1-infectie, waarbij het coderingsgebied van HIV-oppervlakte-envelopglycoproteïne, gp120, werd vervangen door ecotropische MLV gp80, wat leidde tot succesvolle virale replicatie bij muizen4. Na staartaderinjecties bij chimerische HIV (EcoHIV) muizen werden veel kenmerken waargenomen die lijken op die van HIV-1 seropositieve personen (bijv. geïnfecteerde lymfocyten en macrofagen, gericht op antivirale immuunresponsen, en ontsteking3,5,6).
Hoewel muizen en ratten beide lid zijn van de Muridae, kunnen fundamentele soortenverschillen hun geschiktheid voor specifieke experimentele vragenbeïnvloeden 7. Daarom zou de uitbreiding van het EcoHIV-infectiemodel tot ratten (vaak gebruikt in studies naar drugsmisbruik en neurocognitieve aandoeningen) voordelig zijn in de studie van neuroHIV. Hun grotere formaat maakt bijvoorbeeld de implantatie van de halskatheter voor zelftoedieningsprocedures van geneesmiddelen praktischer8. Zelftoedieningstechnieken voor geneesmiddelen bij ratten zijn gebruiktom de motivatie bij HIV-19 te evalueren . Bovendien werden veel neurocognitieve / gedragstaken aanvankelijk ontworpen voor ratten10. Hier rapporteren we het gebruik van stereotaxic injecties van EcoHIV bij ratten om het EcoHIV-infectiemodel uit te breiden en een belangrijke kans te bieden om nieuwe vragen met betrekking tot neuroHIV en HAND te beantwoorden.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>293FT cells</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>R70007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic solution</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>30004CI</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning BioCoatGelatin 75cm&#178; Rectangular Canted Neck Cell Culture Flask with Vented Cap</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>354488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning DMEM with L-Glutamine, 4.5 g/L Glucose and Sodium Pyruvate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10013CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>VWR</td>
			<td>637-137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>drill</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Biopur Safe-Lock Tubes</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>22600028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethicon Vicryl Plus Antibacterial, 4-0 Polyglactin 910 Suture, 27in. FS-2</td>
			<td>Med Vet International</td>
			<td>VCP422H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>1701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen Lipofectamine 3000 Transfection Reagent</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>L3000015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>15914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit</td>
			<td>Cell Biolabs, inc.</td>
			<td>VPK-107-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lenti-X Concentrator</td>
			<td>Takara</td>
			<td>PT4421-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11058021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P36930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane</td>
			<td>Merritt Veterinary Supply</td>
			<td>347075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereotaxic apparatus</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>Model 900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperFrost Plus Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-154%</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500086</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rat model of ecohiv brain infection

Het is goed bestudeerd dat het ecoHIV geïnfecteerde muismodel van aanzienlijk nut is bij het onderzoeken van hiv-geassocieerde neurologische complicaties. De vaststelling van het ecoHIV-geïnfecteerde rattenmodel voor studies naar drugsmisbruik en neurocognitieve aandoeningen zou gunstig zijn bij de studie van neuroHIV- en HIV-1-geassocieerde neurocognitieve aandoeningen (HAND). In deze studie tonen we de succesvolle creatie van een rattenmodel van actieve hiv-infectie met chimeric HIV (EcoHIV). Ten eerste werd de lentivirale constructie van EcoHIV gedurende 48 uur verpakt in gekweekte cellen van 293 FT. Vervolgens werd het voorwaardelijke medium geconcentreerd en getiterd. Vervolgens voerden we bilaterale stereotaxic injecties uit van de EcoHIV-EGFP in F344/N rattenhersenweefsel. Een week na infectie werden EGFP-fluorescentiesignalen gedetecteerd in het geïnfecteerde hersenweefsel, wat aangeeft dat EcoHIV met succes een actieve HIV-infectie bij ratten induceert. Bovendien werd immunostaining uitgevoerd voor de microgliale celmarker, Iba1. De resultaten gaven aan dat microglia het overheersende celtype was dat EcoHIV herbergde. Bovendien vertoonden EcoHIV-ratten veranderingen in de temporele verwerking, een potentieel onderliggend neurobehavioral mechanisme van HAND en synaptische disfunctie acht weken na infectie. Gezamenlijk breidt de huidige studie het EcoHIV-model van HIV-1-infectie uit naar de rat die een waardevol biologisch systeem biedt om hiv-1 virale reservoirs in de hersenen te bestuderen, evenals HAND en bijbehorende comorbiditeiten zoals drugsmisbruik.

Het geconditioneerde medium werd verzameld uit lentivirus van EcoHIV-EGFP geïnfecteerde 293FT cellen. Vervolgens werd het geconcentreerd en getiterd, waarna stereotaxisch werd geïnjecteerd in de hersenen (corticale regio) van F344 / N-ratten. Zeven dagen na de injectie werden ratten opgeofferd en werden beelden genomen van coronale hersenschijfjes variërend van bregma 5,64 mm tot bregma -4,68 mm. In figuur 1Azijn er significante EcoHIV-EGFP-signalen in de hersenen, vooral in de cortex en ...

Watch this Scientific Journal Video about A Rat Model of EcoHIV Brain Infection at JoVE.com

A Rat Model of EcoHIV Brain Infection

Hier presenteren we een protocol om een nieuw rattenmodel van actieve hiv-infectie met chimerische hiv (EcoHIV) vast te stellen, wat van cruciaal belang is voor het verbeteren van ons begrip van hiv-1 virale reservoirs in de hersenen en het aanbieden van een systeem om hiv-geassocieerde neurocognitieve aandoeningen en bijbehorende comorbiditeiten (d.w.z. drugsmisbruik) te bestuderen.

Een rattenmodel van EcoHIV-herseninfectie

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. ...

Met behulp van ratten kan dit protocol worden gebruikt om een nieuw model van actieve hiv-infectie met chimerische hiv vast te stellen. met ratten kan de vaststelling van het EcoHIV-infectiemodel voor studies naar drugsmisbruik en neurocognitieve aandoeningen gunstig zijn voor de studie van neuro-hiv en hiv-1 geassocieerde neurocognitieve aandoeningen. De demonstratieprocedure is Hailong Li, een onderzoeksmedewerker van mijn laboratorium.Voor het verpakken van het virus in 293 T-cellen, zaad vijf keer 10 tot de vijfde 293 T-cellen per milliliter DMEM aangevuld met 10% FBS in elk van de twee met gelatine bedekte kolven van 75 vierkante centimeter en incubeer de cellen bij 37 graden Celsius totdat de culturen 50% samenvloeiing bereiken. Verdun op de dag van de transfectie 22,5 microliter transfectiereagens in 750 microliter medium per kolf in een microcentrifugebuis van 1,5 milliliter en draai de oplossing gedurende drie seconden. Verdun 20 microgram van het chimerische EcoHIV plasmide DNA in 750 microliter medium in een tweede microcentrifugebuis van 1,5 milliliter per kolf met grondige menging.Combineer het verdunde DNA met het verdunde transfectiereagens met een zachte menging en incubeer de resulterende oplossing gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur. Voeg aan het einde van de incubatie elke virussuspensie toe aan 10 milliliter dmem-medium vóórwarm en voeg elke virusoplossing toe aan één kolf van 293 T-cellen. Na twee dagen celkweek, pool het supernatant uit de kolven in een enkele 50 milliliter conische buis voor centrifugeren en breng het geklaarde supernatant over naar een nieuwe buis van 50 milliliter.Voeg acht milliliter Lenti-X Concentrator toe aan het geklaarde supernatant en meng met zachte inversie. Na een incubatie van twee dagen bij vier graden Celsius, centrifugeer het mengsel en verwijder voorzichtig het supernatant, resuspend de pellet vervolgens voorzichtig met 100 microliter van 100 millimolar PBS en gebruik een P24 ELISA-kit om de virusconcentratie te titeren. Voor EcoHIV-EGFP-injectie, na het bevestigen van een gebrek aan reactie op pedaalreflex, scheert u het haar uit het hersengebied en steriliseert u de blootgestelde huid twee keer met 70% ethanol en een scrub op basis van chloorhexidine.Zet de rat in een gevoelige positie in een stereotaxisch apparaat en maak een incisie van vijf tot zes centimeter door de huid langs de hoofdhuidmiddenlijn. Markeer één boorpositie op 0,8 millimeter zijdelings en één 1,2 millimeter rostral naar bregma en boor een gat met een diameter van 0,4 millimeter bij elke schedelpositie. Laad 1,04 maal 10 tot de zesde transductie-eenheden per milliliter getiterde EcoHIV Lentivirus-oplossing in een injectiespuit met 10 microliter en bevestig de spuit aan het stereotaxic-apparaat.Beweeg de naald dicht bij het oppervlak van één boorgat en steek de naald 2,5 milliliter in het gat. Infuseer één microliter virusoplossing met een snelheid van 0,2 microliter virus per minuut. Wanneer al het virus is geïnjecteerd, laat u de naald vijf minuten in het injectiegebied staan voordat u de naald langzaam terugtrekt totdat deze zich buiten de schedel van de rat bevindt.Sluit de huidincisie met een 4-0 zijden draad hechtdraad en steriliseer de oplossing met 70% ethanol en plaats de rat vervolgens in een herstelkamer met een verwarmingskussen met bewaking tot ligfiets. Een tot acht weken na virale infusie, na het bevestigen van een gebrek aan reactie op pedaalreflex, fixeer de rat in een liggende positie in een zuurkast en inciseer de huid langs de thoracale middellijn. Snijd het membraan om de borstholte te openen en steek een naald van 20 bij 25 millimeter in de linkerventrikel.Open onmiddellijk het rechter atrium met een schaar en doordrenkt 50 milliliter voorgekoelde 100 millimolar PBS met een debiet van vijf milliliter per minuut. Wanneer alle PBS is geleverd, perfuseren met 100 milliliter koude 4%paraformaldehyde. Wanneer al het fixatief is geleverd, verwijdert u de hersenen uit de schedel en bevestigt u het weefsel 's nachts in verse 4%paraformaldehyde.Plaats het monster de volgende ochtend in 40 milliliter 30% sacharose in 100 millimol PBS in een buis van 50 milliliter gedurende ongeveer drie dagen totdat de hersenen zich op de bodem van de buis nestelen voordat het hersenweefsel twee minuten in methyl butanol wordt bevroren bij min 80 graden Celsius. Gebruik na het invriezen een minus 20 graden Celsius cryostaat en een fijne kwast om 50 micron dikke coronale secties te verkrijgen. Wanneer alle secties zijn verkregen, dek de monsters af met 300 microliter anti-fade medium en monteer ze met 22 coverslips van 50 milliliter.Wanneer het medium is opgedroogd, beeldt u de secties in door confocale microscopie. Zeven dagen na lentivirus injectie, rat coronale hersenen slice beelden onthullen een significante aanwezigheid van EcoHIV-EGFP signalen in het hersenweefsel, vooral in de cortex en de hippocampale dentate gyrus. Dubbele etikettering met en Iba1- en EcoHIV-EGFP-sondes leveren sterk bewijs dat microglia het overheersende celtype zijn dat EcoHIV-expressie in de hersenen herbergt.Acht weken na infectie vertonen ecoHIV geïnjecteerde dieren een relatieve ongevoeligheid voor de manipulatie van het interstimulusinterval, zoals blijkt uit een relatief vlakkere intervalfunctie in vergelijking met zoutoplossingscontroles. Bovendien vertonen ecoHIV geïnjecteerde ratten diepgaande veranderingen in hun dendritische wervelkolommorfologie, zoals blijkt uit een verhoogde relatieve frequentie van kortere dendritische stekels met verhoogde hoofd- en nekdiameters ten opzichte van controledieren. De concentratie en titratie van het conditiemedium vóór stereotaxic injectie is van cruciaal belang om de consistente en reproduceerbare resultaten in experimenten te garanderen.Deze specifieke regionale stereotaxic injectie van EcoHIV zorgt voor een efficiënte HIV-infectie in de hersenen en produceert tijdelijke verwerkingstekorten bij ratten. Het gebruik van stereotaxic HIV-injecties bij ratten om het EcoHIV-infectiemodel uit te breiden, biedt een belangrijke kans om nieuwe vragen met betrekking tot neuro-hiv bij de hand te beantwoorden.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Gene Levering aan Postnatale Rat Brain door niet-ventriculaire Plasmide-injectie en elektroporatie

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Stereotaxic Surgery for Excitotoxic Lesion of Specific Brain Areas in the Adult Rat

Stereotaxische Chirurgie voor excitotoxische laesie van specifieke hersengebieden in de Adult Rat

Many behavioral functions in mammals, including rodents and humans, are mediated principally by discrete brain regions. A common method for discerning the ...

A Protocol for Measuring Cue Reactivity in a Rat Model of Cocaine Use Disorder

Een Protocol voor het meten van Cue reactiviteit in een Rat Model van cocaïne gebruik wanorde

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue ...

A Rat Model of Mild Intrauterine Hypoperfusion with Microcoil Stenosis

Een Model van de Rat van milde uteriene hypoperfusie met Microcoil stenose

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies ...

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

In Vivo eenbeoordeling van de verstoring van de bloed - hersen barrière in een Rat Model van ischemische beroerte

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

A Rat Model of Central Fatigue Using a Modified Multiple Platform Method

Een Rat Model van Centrale vermoeidheid met een gewijzigde methode met verscheidene Platform

In this article, we introduced a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM). The Multiple Platform box was designed ...

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

Een alternatieve benadering te bestuderen van primaire gebeurtenissen in neurodegeneratie Ex Vivo Rat hersenen segmenten gebruiken

Despite&#160;numerous studies that attempt to develop reliable animal models&#160;which reflecting the primary processes underlying neurodegeneration, ...

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

Een roman In Vitro Model van traumatische hersenenverwonding Blast

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the ...

A Benchtop Approach to the Location Specific Blood Brain Barrier Opening using Focused Ultrasound in a Rat Model

Een benchtop benadering van de locatie specifieke bloed hersenbarrière opening met behulp van gerichte echografie in een rat model

Stereotaxic surgery is the gold standard for localized drug and gene delivery to the rodent brain. This technique has many advantages over systemic ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

Een hydrofobe weefselopruimingsmethode voor rattenhersenweefsel

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...