Name: a rat model of ecohiv brain infection
Uploaded: 2021-01-21T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Rat Model of EcoHIV Brain Infection at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av NIH-tilskudd HD043680, MH106392, DA013137 og NS100624.

Alle dyreprotokoller ble gjennomgått og godkjent av Animal Care and Use Committee ved University of South Carolina (føderalt forsikringsnummer: D16-00028). Seks voksne menn F344/N rotte ble paret plassert i et kontrollert miljø under en 12/12 lys: mørk syklus med ad libitum tilgang til mat og vann. Alle dyrene ble tatt vare på ved hjelp av retningslinjer fastsatt av National Institutes of Health i Guide for care and use of Laboratory Animals.
1. Virusemballasje i 293 FT-celler
<ol><li>K...

<ol>
	<li>Illenberger, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+Infection+and+Neurocognitive+Disorders+in+the+Context+of+Chronic+Drug+Abuse:+Evidence+for+Divergent+Findings+Dependent+upon+Prior+Drug+History.">HIV Infection and Neurocognitive Disorders in the Context of Chronic Drug Abuse: Evidence for Divergent Findings Dependent upon Prior Drug History.</a> Journal of Neuroimmune Pharmacology. 15 (4), 715-728 (2020).</li><li>Joseph, S. B., Swanstrom, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+evolution+of+HIV-1+entry+phenotypes+as+a+guide+to+changing+target+cells.">The evolution of HIV-1 entry phenotypes as a guide to changing target cells.</a> Journal of Leukocyte Biology. 103 (3), 421-431 (2018).</li><li>Potash, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+study+of+systemic+HIV-1+infection,+antiviral+immune+responses,+and+neuroinvasiveness.">A mouse model for study of systemic HIV-1 infection, antiviral immune responses, and neuroinvasiveness.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U S A. 102 (10), 3760-3765 (2005).</li><li>Albritton, L. M., Tseng, L., Scadden, D., Cunningham, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+putative+murine+ecotropic+retrovirus+receptor+gene+encodes+a+multiple+membrane-spanning+protein+and+confers+susceptibility+to+virus+infection.">A putative murine ecotropic retrovirus receptor gene encodes a multiple membrane-spanning protein and confers susceptibility to virus infection.</a> Cell. 57, 659-666 (1989).</li><li>Geraghty, P., Hadas, E., Kim, B. H., Dabo, A. J., Volsky, D. J., Foronjy, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+infection+model+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease+in+mice.">HIV infection model of chronic obstructive pulmonary disease in mice.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 312 (4), 500-509 (2017).</li><li>Gu, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EcoHIV+infection+of+mice+establishes+latent+viral+reservoirs+in+T+cells+and+active+viral+reservoirs+in+macrophages+that+are+sufficient+for+induction+of+neurocognitive+impairment.">EcoHIV infection of mice establishes latent viral reservoirs in T cells and active viral reservoirs in macrophages that are sufficient for induction of neurocognitive impairment.</a> PLoS Pathogens. 14 (6), 1007061 (2018).</li><li>Ellenbroek, B., Youn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+in+neuroscience+research:+is+it+a+rat+race.">Rodent models in neuroscience research: is it a rat race.</a> Disease Models, Mechanisms. 9 (10), 1079-1087 (2016).</li><li>Feduccia, A. A., Duvauchelle, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+apparatus+and+method+for+drug+reinforcement.">Novel apparatus and method for drug reinforcement.</a> Journal of Visualized Experiments. (42), e1998 (2010).</li><li>Bertrand, S. J., Mactutus, C. F., Harrod, S. B., Moran, L. M., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+proteins+dysregulate+motivational+processes+and+dopamine+circuitry.">HIV-1 proteins dysregulate motivational processes and dopamine circuitry.</a> Scientific Reports. 8 (1), 7869 (2018).</li><li>McGaughy, J., Sarter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+vigilance+in+rats:+task+validation+and+effects+of+age,+amphetamine,+and+benzodiazepine+receptor+ligands.">Behavioral vigilance in rats: task validation and effects of age, amphetamine, and benzodiazepine receptor ligands.</a> Psychopharmacology. 117 (3), 340-357 (1995).</li><li>Li, H., Aksenova, M., Bertrand, S., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+filamentous+actin+(F-actin)+puncta+in+rat+cortical+neurons.">Quantification of filamentous actin (F-actin) puncta in rat cortical neurons.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), (2016).</li><li>McLaurin, K. A., Li, H., Booze, R. M., Mactutus, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+Timing:+NeuroHIV+Progression+in+the+Post-cART+Era.">Disruption of Timing: NeuroHIV Progression in the Post-cART Era.</a> Scientific Reports. 9 (1), 827 (2019).</li><li>McLaurin, K. A., Moran, L. M., Li, H., Booze, R. M., Mactutus, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Power+of+Interstimulus+Interval+for+the+Assessment+of+Temporal+Processing+in+Rodents.">The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents.</a> Journal of Visualized Experiments. (146), e58659 (2019).</li><li>Li, H., McLaurin, K. A., Mactutus, C. F., Booze, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ballistic+Labeling+of+Pyramidal+Neurons+in+Brain+Slices+and+in+Primary+Cell+Culture.">Ballistic Labeling of Pyramidal Neurons in Brain Slices and in Primary Cell Culture.</a> Journal of Visualized Experiments. (158), (2020).</li><li>Ko, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+but+not+Astrocytes+Harbor+HIV+DNA+in+the+Brains+of+HIV-1-Infected+Aviremic+Individuals+on+Suppressive+Antiretroviral+Therapy.">Macrophages but not Astrocytes Harbor HIV DNA in the Brains of HIV-1-Infected Aviremic Individuals on Suppressive Antiretroviral Therapy.</a> Journal of Neuroimmune Pharmacology. 14 (1), 110-119 (2019).</li><li>Sopper, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+simian+immunodeficiency+virus+infection+in+vitro+and+in+vivo+on+the+cytokine+production+of+isolated+microglia+and+peripheral+macrophages+from+rhesus+monkey.">The effect of simian immunodeficiency virus infection in vitro and in vivo on the cytokine production of isolated microglia and peripheral macrophages from rhesus monkey.</a> Virology. 220 (2), 320-329 (1996).</li><li>Llewellyn, G. N., Alvarez-Carbonell, D., Chateau, M., Karn, J., Cannon, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV-1+infection+of+microglial+cells+in+a+reconstituted+humanized+mouse+model+and+identification+of+compounds+that+selectively+reverse+HIV+latency.">HIV-1 infection of microglial cells in a reconstituted humanized mouse model and identification of compounds that selectively reverse HIV latency.</a> Journal of NeuroVirology. 24 (2), 192-203 (2018).</li></ol>

I denne protokollen etablerte vi en EcoHIV-indusert HIV-infeksjonsmodell hos rotter. Spesielt beskrev vi en bilateral stereotaxisk injeksjon av EcoHIV i cortex som med hell induserte aktiv HIV-infeksjon i rottehjernen 7 dager etter injeksjon. Futhermore, vi viser at EcoHIV infeksjon hos rotter kan være et godt biologisk system for å studere viktige aspekter av HAND. Åtte uker etter EcoHIV-infeksjon viste rotter betydelige nevrokognitive svekkelser, som inkluderte endringene i tidsbehandling og synaptisk dysfunksjon ho...

Biologiske systemer har forbedret vår forståelse av HIV-1 assosierte nevrokognitive lidelser (HAND) og deres underliggende nevrale mekanismer2. Å bestemme hvilket biologisk system som passer best for en gitt studie, er ofte avhengig av spørsmålet om interesse2. Begrensningen i utvalget av vertsdyrmodeller utfordrer studier av HIV-1 sykdomsutvikling. For å undersøke HIV-1 viral replikasjon og patogenese opprettet Potash et al.3 en musemodell av aktiv HIV-1-infeksjon, og erstattet kodingsområdet for HIV-overflatekonvolutt glykoprotein, gp120, med økotropisk MLV gp80, noe som førte til vellykket viral replikasjon hos mus4. Etter hale vene injeksjoner i chimeric HIV (EcoHIV) mus, mange egenskaper ble observert som ligner de av HIV-1 seropositive individer (f.eks. infiserte lymfocytter og makrofager, rettet mot antivirale immunresponser, og betennelse3,5,6).
Selv om mus og rotter begge er medlemmer av Muridae, kan grunnleggende artsforskjeller påvirke deres egnethet for spesifikke eksperimentelle spørsmål7. Derfor vil utvidelsen av EcoHIV-infeksjonsmodellen til rotter (ofte brukt i studier av narkotikamisbruk og nevrokognitive lidelser) være fordelaktig i studiet av nevroHIV. For eksempel gjør deres større størrelse jugularkateterimplantasjon for selvadbemanningsprosedyrer for legemidler mer praktisk8. Selvadberettigede teknikker for narkotika hos rotter har blitt brukt til å evaluere motivasjon i HIV-19. Videre ble mange nevrokognitive / atferdsoppgaver opprinnelig designet for rotter10. Her rapporterer vi bruken av stereotaksiske injeksjoner av EcoHIV hos rotter for å utvide EcoHIV-infeksjonsmodellen og har råd til en nøkkelmulighet til å ta opp nye spørsmål relatert til neuroHIV og HAND.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>293FT cells</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>R70007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antibiotic-Antimycotic solution</td>
			<td>Cellgro</td>
			<td>30004CI</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning BioCoatGelatin 75cm&#178; Rectangular Canted Neck Cell Culture Flask with Vented Cap</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>354488</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning DMEM with L-Glutamine, 4.5 g/L Glucose and Sodium Pyruvate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10013CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass</td>
			<td>VWR</td>
			<td>637-137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>drill</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #5 Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14095</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #7 Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>14097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Snap-Cap Microcentrifuge Biopur Safe-Lock Tubes</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>22600028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethicon Vicryl Plus Antibacterial, 4-0 Polyglactin 910 Suture, 27in. FS-2</td>
			<td>Med Vet International</td>
			<td>VCP422H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>1701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Invitrogen Lipofectamine 3000 Transfection Reagent</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>L3000015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>15914</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500216</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit</td>
			<td>Cell Biolabs, inc.</td>
			<td>VPK-107-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lenti-X Concentrator</td>
			<td>Takara</td>
			<td>PT4421-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11058021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong Gold</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>P36930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane</td>
			<td>Merritt Veterinary Supply</td>
			<td>347075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereotaxic apparatus</td>
			<td>Kopf Instruments</td>
			<td>Model 900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperFrost Plus Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-154%</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500086</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a rat model of ecohiv brain infection

Det har blitt godt studert at EcoHIV-infisert musemodell er av betydelig nytte i å undersøke HIV-assosierte nevrologiske komplikasjoner. Etablering av EcoHIV-infisert rottemodell for studier av narkotikamisbruk og nevrokognitive lidelser, ville være gunstig i studiet av nevroHIV og HIV-1 assosierte nevrokognitive lidelser (HAND). I den nåværende studien demonstrerer vi vellykket opprettelse av en rottemodell av aktiv HIV-infeksjon ved hjelp av chimerisk HIV (EcoHIV). For det første ble lentiviral konstruksjon av EcoHIV pakket i dyrkede 293 FT-celler i 48 timer. Deretter ble det betingede mediet konsentrert og titert. Deretter utførte vi bilaterale stereotaksiske injeksjoner av EcoHIV-EGFP i F344 / N rotte hjernevev. En uke etter infeksjon ble EGFP fluorescenssignaler oppdaget i det infiserte hjernevevet, noe som indikerer at EcoHIV med hell induserer en aktiv HIV-infeksjon hos rotter. I tillegg ble immunostaining for den mikrogliale cellemarkøren, Iba1, utført. Resultatene indikerte at mikroglia var den dominerende celletypen som inneholdt EcoHIV. Videre viste EcoHIV-rotter endringer i tidsbehandling, en potensiell underliggende nevrobehavioral mekanisme for HAND samt synaptisk dysfunksjon åtte uker etter infeksjon. Samlet utvider den nåværende studien EcoHIV-modellen for HIV-1-infeksjon til rotten som tilbyr et verdifullt biologisk system for å studere HIV-1 virusreservoarer i hjernen, samt HÅND og tilhørende komorbiditeter som narkotikamisbruk.

Det betingede mediet ble samlet inn fra lentivirus av EcoHIV-EGFP-infiserte 293FT-celler. Deretter ble den konsentrert og titerert, deretter stereotaxically injisert i hjernen (kortikale regionen) av F344 / N rotter. Syv dager etter injeksjon ble rotter ofret og bilder ble tatt fra koronal hjerneskiver fra bregma 5,64 mm til bregma -4,68 mm. I figur 1Aer det betydelige EcoHIV-EGFP-signaler i hele hjernen, spesielt i cortex og hippocampal dentate gyrus. Videre ga dobbeltmerking med Iba1 og Ec...

Watch this Scientific Journal Video about A Rat Model of EcoHIV Brain Infection at JoVE.com

A Rat Model of EcoHIV Brain Infection

Her presenterer vi en protokoll for å etablere en ny rottemodell av aktiv HIV-infeksjon ved hjelp av chimerisk HIV (EcoHIV), som er avgjørende for å styrke vår forståelse av HIV-1-virusreservoarer i hjernen og tilby et system for å studere HIV-assosierte nevrokognitive lidelser og tilhørende komorbiditeter (dvs. narkotikamisbruk).

En rottemodell av EcoHIV hjerneinfeksjon

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. ...

Ved hjelp av rotter kan denne protokollen brukes til å etablere en ny modell for aktiv HIV-infeksjon ved hjelp av chimerisk HIV. med rotter, kan etableringen av EcoHIV-infeksjonsmodellen for studier av narkotikamisbruk og nevrokognitive lidelser være gunstig for studiet av nevro HIV og HIV-1 assosierte nevrokognitive lidelser. Demonstrerende prosedyre vil være Hailong Li, en forskningsmedarbeider fra laboratoriet mitt.For pakking av viruset i 293 T-celler, frø fem ganger 10 til femte 293 T-celler per milliliter DMEM supplert med 10% FBS i hver av de to gelatinbelagte 75 kvadratcentimeter kolber og inkubere cellene ved 37 grader Celsius til kulturene når 50% samløp. På dagen for transfeksjonen fortynner du 22,5 mikroliter transfeksjonsreagens i 750 mikroliter medium per kolbe i et 1,5 milliliter mikrosentermikrosenterrør og virveler løsningen i tre sekunder. Fortynn 20 mikrogram av det chimeriske EcoHIV plasmid-DNA-et i 750 mikroliter medium i et andre mikrocentrifugerør på 1,5 milliliter per kolbe med grundig blanding.Kombiner det fortynnede DNA-et med det fortynnede transfeksjonsreagenset med skånsom blanding og inkuber den resulterende løsningen i 15 minutter ved romtemperatur. På slutten av inkubasjonen legger du til hver virusfjæring til 10 milliliter førkrigs DMEM-medium og legger til hver virussupplert løsning i en kolbe på 293 T-celler. Etter to dager med cellekultur, kan du samle supernatanten fra kolber i et enkelt 50 milliliter konisk rør for sentrifugering og overføre den avklarte supernatanten til et nytt 50 milliliterrør.Tilsett åtte milliliter Lenti-X konsentrator til den klargjorte supernatanten og bland med mild inversjon. Etter en to-dagers inkubasjon ved fire grader Celsius, sentrifuger blandingen og fjern forsiktig supernatanten, og resuspender deretter pellet forsiktig med 100 mikroliter 100 millimolar PBS og bruk et P24 ELISA-sett for å titere viruskonsentrasjonen. For EcoHIV-EGFP injeksjon, etter å ha bekreftet mangel på respons på pedalrefleks, barber håret fra hjerneregionen og steriliser den eksponerte huden to ganger med 70% etanol og en klorhexidinbasert skrubb.Sikre rotten i en utsatt posisjon i et stereotaxisk apparat og gjør et fem til seks centimeter snitt gjennom huden langs hodebunnen midtlinjen. Merk en boreposisjon på 0,8 millimeter lateral og en 1,2 millimeter rostral til bregma og bor et hull med en diameter på 0,4 millimeter ved hver skalleposisjon. Legg 1,04 ganger 10 til den sjette transduksjonsenheten per milliliter titert EcoHIV Lentivirus-oppløsning i en 10 mikroliter injeksjonssprøyte og fest sprøyten til det stereotaktiske apparatet.Flytt nålen nær overflaten av ett borehull og sett nålen 2,5 milliliter inn i hullet. Tilsett en mikroliter virusløsning med en hastighet på 0,2 mikroliter virus per minutt. Når alt viruset er injisert, la nålen inne i injeksjonsområdet i fem minutter før du sakte trekker nålen tilbake til den er utenfor rotteskallen.Lukk hudsnittet med en 4-0 silketråd sutur og steriliser løsningen med 70% etanol, og plasser deretter rotten i et gjenopprettingskammer med en varmepute med overvåking til heftelse. En til åtte uker etter viral infusjon, etter å ha bekreftet mangel på respons på pedalrefleks, fest rotten i en liggende stilling inne i en avtrekkshette og brenn huden langs thoracic midline. Klipp membranen for å åpne thoracic hulrommet og sett inn en 20 gauge med 25 millimeter nål i venstre ventrikel.Åpne umiddelbart riktig atrium med saks og perfuse 50 milliliter forhåndskjølt 100 millimolar PBS med en strømningshastighet på fem milliliter per minutt. Når hele PBS er levert, parfymerer du med 100 milliliter kald 4% paraformaldehyd. Når alt fikseringsmiddelet er levert, fjern hjernen fra skallen og fest vevet over natten i frisk 4% paraformaldehyd.Neste morgen, plasser prøven i 40 milliliter 30% sukrose i 100 millimolar PBS i et 50 milliliterrør i omtrent tre dager til hjernen legger seg til bunnen av røret før snap fryser hjernevevet i metyl butanol i to minutter ved minus 80 grader Celsius. Etter frysing, bruk en minus 20 grader Celsius kryostat og en fin pensel for å skaffe 50 mikron tykke koronal seksjoner. Når alle seksjonene er oppnådd, dekk prøvene med 300 mikroliter anti-fade medium og monter dem med 22 50 milliliter deksler.Når mediet har tørket, bilde seksjonene ved konfikal mikroskopi. Syv dager etter Lentivirus injeksjon, rotte coronal hjerne skiver bilder avslører en betydelig tilstedeværelse av EcoHIV-EGFP signaler gjennom hjernevevet, spesielt innenfor cortex og hippocampal dentate gyrus. Dobbel merking med og Iba1- og EcoHIV-EGFP-sonder gir sterke bevis på at mikroglia er den dominerende celletypen som skjuler EcoHIV-uttrykket i hjernen.Åtte uker etter infeksjon viser EcoHIV injiserte dyr en relativ ufølsomhet overfor manipulering av interstimulusintervall som det fremgår av en relativt flatere intervallfunksjon sammenlignet med saltvannskontroller. I tillegg viser EcoHIV injiserte rotter dype endringer i deres dendritiske ryggmorfologi som det fremgår av en økt relativ frekvens av kortere dendrittiske spines med økte hode- og nakkediametre i forhold til kontrolldyr. Konsentrasjonen og titreringen av tilstandsmediet før stereotaxisk injeksjon er avgjørende for å sikre konsistente og replikerbare resultater på tvers av eksperimenter.Denne spesifikke regionale stereotoksiske injeksjonen av EcoHIV gir en effektiv HIV-infeksjon i hjernen og produserer tidsmessige behandlingsunderskudd hos rotter. Utnyttelsen av stereotaksiske HIV-injeksjoner hos rotter for å utvide EcoHIV-infeksjonsmodellen gir en nøkkelmulighet til å ta opp nye spørsmål knyttet til nevro HIV for hånden.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Gene Delivery to Postnatal Rat Brain by Non-ventricular Plasmid Injection and Electroporation

Creation of transgenic animals is a standard approach in studying functions of a gene of interest in vivo. However, many knockout or transgenic animals ...

Stereotaxic Surgery for Excitotoxic Lesion of Specific Brain Areas in the Adult Rat

Stereotaxic Kirurgi for Excitotoxic lesjon i spesifikke hjerneområder i Adult Rat

Many behavioral functions in mammals, including rodents and humans, are mediated principally by discrete brain regions. A common method for discerning the ...

A Protocol for Measuring Cue Reactivity in a Rat Model of Cocaine Use Disorder

En protokoll for å måle Cue reaktivitet i en rotte modell av kokain bruk lidelse

Cocaine use disorder (CUD) follows a trajectory of repetitive self-administration during which previously neutral stimuli gain incentive value. Cue ...

A Rat Model of Mild Intrauterine Hypoperfusion with Microcoil Stenosis

En rotte modell av Mild Intrauterine Hypoperfusion med Microcoil stenose

Intrauterine hypoperfusion/ischemia is one of the major causes of intrauterine/fetal growth restriction, preterm birth, and low birth weight. Most studies ...

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

Bedømme i Vivo blod - hjerne barrieren avbrudd i en rotte modell av iskemiske hjerneslag

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

A Rat Model of Central Fatigue Using a Modified Multiple Platform Method

En rotte modell av sentral Fatigue bruker en modifisert flere plattform-metoden

In this article, we introduced a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM). The Multiple Platform box was designed ...

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

An Alternative Approach to Study Primary Events in Neurodegeneration Using Ex Vivo Rat Brain Slices

En alternativ tilnærming til studere primære hendelser i Neurodegeneration bruker Ex Vivo rotte hjernen skiver

Despite&#160;numerous studies that attempt to develop reliable animal models&#160;which reflecting the primary processes underlying neurodegeneration, ...

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

Romanen In Vitro modell for Blast traumatisk hjerneskade

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the ...

A Benchtop Approach to the Location Specific Blood Brain Barrier Opening using Focused Ultrasound in a Rat Model

En benchtop tilnærming til plasseringen spesifikke blod hjernebarriere åpning ved hjelp av fokusert ultralyd i en rotte modell

Stereotaxic surgery is the gold standard for localized drug and gene delivery to the rodent brain. This technique has many advantages over systemic ...

A Hydrophobic Tissue Clearing Method for Rat Brain Tissue

En hydrofob vevsryddingsmetode for rottehjernevev

Hydrophobic tissue clearing methods are easily adjustable, fast, and low-cost procedures that allows for the study of a molecule of interest in unaltered ...