यह विधि इलेक्ट्रॉनिक्स विशेषज्ञता के बिना व्यक्तियों को इस प्रकार के फ्लोरीमीटर जैसे उपकरणों का निर्माण करने की अनुमति देती है, जो कि आणविक निदान के लिए महत्वपूर्ण है। इस तकनीक का मुख्य लाभ यह है कि सिस्टम को कम लागत पर व्यावसायिक रूप से उपलब्ध सामग्रियों और ओपन सोर्स सॉफ्टवेयर से पूरी तरह से इकट्ठा किया जा सकता है। इस फ्लोरीमीटर का उपयोग कई आइसोथर्मल प्रवर्धन विधियों के साथ किया जा सकता है।
यह महत्वपूर्ण है क्योंकि संक्रामक और विरासत में मिली बीमारियों की एक विस्तृत श्रृंखला का पता लगाने के लिए आइसोथर्मल प्रवर्धन विधियों का तेजी से उपयोग किया जाता है। ऑप्टिकल आवास को इकट्ठा करने के लिए, एक 3/16 इंच लंबे 4-40 पिरोया प्रकाशिकी बाड़े नीचे एसटीएल टुकड़ा के शीर्ष पर छेद में डालने जगह है और एक 1/4 इंच लंबे 4-40 पिरोया टुकड़ा के अंय छेद के सभी में डालना जगह है । केंद्र परीक्षण बोर्ड डालें, शीर्ष की ओर सामना करना पड़ पांच पिन और डिवाइस के केंद्र धुरी के निकटतम के साथ आवास के शीर्ष गुहा में और एक 3/16 इंच लंबे 4-40 पेंच के साथ परीक्षण बोर्ड सुरक्षित ।
केंद्र परीक्षण बोर्ड के नीचे अनुभाग में 20 मिलीमीटर फोकल लेंथ लेंस में से एक को डिवाइस के नीचे और परीक्षण बोर्ड से दूर की ओर सामना करने वाले उत्तल पक्ष के साथ रखें। पहला विन्यास बनाने के लिए, 20 मिलीमीटर फोकल लेंथ लेंस के नीचे अगले खंड में लंबे पास फ़िल्टर रखें। दूसरा विन्यास बनाने के लिए, लेंस के नीचे अनुभाग में दो पीले उत्सर्जन फिल्टर पन्नी रखें।
पहला विन्यास बनाने के लिए, निर्माता द्वारा निर्दिष्ट फ़िल्टर ओरिएंटेशन को देखते हुए डिक्रोइक मिरर को एनकेमेंट के केंद्र के पास विकर्ण अनुभाग में रखें। दूसरा विन्यास बनाने के लिए, बीम स्प्लिटर को विकर्ण अनुभाग में रखें। विन्यास के आधार पर डिक्रोइक मिरर या बीम स्प्लिटर के नीचे अनुभाग में एक दूसरे 20 मिलीमीटर फोकल लेंथ लेंस रखें, जिसमें उत्तल पक्ष डिवाइस के शीर्ष की ओर इशारा करता है।
पहला विन्यास बनाने के लिए, डिक्रोइक मिरर के दाईं ओर अनुभाग में एक्सटिटेशन फिल्टर रखें, जिससे यह सुनिश्चित हो सके कि तीर डिक्रोइक मिरर की ओर इशारा करता है। दूसरा विन्यास बनाने के लिए, बीम स्प्लिटर के दाईं ओर एक नीले उत्तेजन फिल्टर फॉइल को अनुभाग में रखें। 15 मिलीमीटर फोकल लेंथ लेंस को डिक्रोइक मिरर का सामना करने वाले उत्तल पक्ष के साथ एक्सटेंशन फिल्टर के दाईं ओर रखें।
और विन्यास के आधार पर डिक्रोइक मिरर या बीम स्प्लिटर की ओर एलईडी का सामना करने वाले एलईडी के साथ प्रिंट के शेष खंड में एक एलईडी रखें। सुनिश्चित करें कि एलईडी से अग्रणी दो तारों को अवकाश चैनलों में डाला जाता है ताकि प्रिंट कसकर बंद हो जाए। और 3डी प्रिंटिंग पीस के दूसरे पक्ष के लिए सेटअप दोहराएं।
फिर ऑप्टिकल घटकों के साथ टुकड़े के खाली पक्ष को बंद करने के लिए एनकेमेंट के निचले आधे हिस्से के खाली खांचे में एनकेमेंट के शीर्ष आधे हिस्से को रखें। और 3/8 इंच लंबे 4-40 शिकंजा के साथ एक साथ भागों को सुरक्षित । इलेक्ट्रॉनिक्स और टच स्क्रीन को इकट्ठा करने के लिए, दो मिनी ब्रेडबोर्ड को कनेक्ट करें और माइक्रोकंट्रोलर को ब्रेडबोर्ड में से एक में रखें, यह सुनिश्चित करते हुए कि माइक्रोकंट्रोलर का माइक्रो-यूएसबी पोर्ट जावक का सामना करे।
एलईडी मॉड्यूलेशन को कनेक्ट करने के लिए, एलईडी + ड्राइवर के सीटीएल पिन को माइक्रोकंट्रोलर के डिजिटल पिन से कनेक्ट करें। और एलईडी ड्राइवर की एलईडी-पिन माइक्रोकंट्रोलर के जीएनडी पिन पर । ब्रेडबोर्ड के पीछे प्लास्टिक कवर निकालें और एलसीडी स्क्रीन धारक एसटीएल मुद्रित टुकड़े के पीछे के हिस्से के अंदर संयुक्त ब्रेडबोर्ड संलग्न करने के लिए 3 डी मुद्रित भाग के लिए ब्रेडबोर्ड के चिपकने वाला समर्थन दबाएं।
1 इंच लंबे 4-40 शिकंजा के साथ ऑप्टिकल बाड़े के अंदर इकट्ठे ब्रेडबोर्ड के साथ एलसीडी स्क्रीन धारक सुरक्षित। एलईडी बिजली सप्लाई को जोड़ने के लिए एलईडी चालक के एलईडी-पॉजिटिव पिन को पहले एलईडी के पॉजिटिव तार से कनेक्ट करें। और ब्रेडबोर्ड पर दूसरी एलईडी के सकारात्मक तार के लिए पहली एलईडी के नकारात्मक तार को कनेक्ट करें।
दूसरी एलईडी के निगेटिव वायर को एलईडी ड्राइवर की एलईडी-पिन से कनेक्ट करें। एलईडी पावर सप्लाई को कनेक्ट करने के लिए, एलईडी ड्राइवर के VIN + और VIN-पिन से 10 वोल्ट बिजली आपूर्ति के सकारात्मक और नकारात्मक तारों को जोड़ने के लिए 2-पिन एडाप्टर के लिए एक बैरल जैक का उपयोग करें। सेंसर टेस्ट बोर्ड पावर सप्लाई और डाटा ट्रांसफर को जोड़ने के लिए 4 पिन वाली महिला को पुरुष जंपर वायर का इस्तेमाल करते हुए लाइट-टू-डिजिटल सेंसर टेस्ट बोर्ड्स पर 4 पिन वाली महिला को एलसीडी होल्डर प्रिंट के टॉप राइट में गैप के जरिए मिनी ब्रेडबोर्ड से कनेक्ट किया जा सके ।
ब्रेडबोर्ड पर इस बात की पुष्टि करें कि माइक्रोकंट्रोलर का 3.3 वोल्ट पिन और दोनों टेस्ट बोर्डों का वीडीयूटी पिन, माइक्रोकंट्रोलर का जीएनडी पिन और दोनों टेस्ट बोर्डों का जीएनडी पिन, माइक्रोकंट्रोलर का एनालॉग 4-पिन और दोनों टेस्ट बोर्डों का एसडीए पिन और माइक्रोकंट्रोलर का एनालॉग 5-पिन , और दोनों टेस्ट बोर्डों के एससीके पिन सभी जुड़े हुए हैं । एलसीडी स्क्रीन धारक पर एकल बोर्ड कंप्यूटर को सुरक्षित करने के लिए चार M2.5 शिकंजा का उपयोग करें, एचडीएमआई और पावर एडाप्टर पोर्ट के साथ ऊपर की ओर सामना करना पड़ रहा है और एकल बोर्ड कंप्यूटर 3 डी मुद्रित भाग पर केंद्रित है। इसके बाद टच स्क्रीन के निर्देशों के मुताबिक टच स्क्रीन डिस्प्ले को सिंगल बोर्ड कंप्यूटर से कनेक्ट करें।
और सिंगल बोर्ड कंप्यूटर के एचडीएमआई पोर्ट को टच स्क्रीन के एचडीएमआई पोर्ट से कनेक्ट करें। वास्तविक समय फ्लोरेसेंस डेटा रिकॉर्ड करने के लिए, गर्मी ब्लॉक चालू होने के बाद और उचित तापमान तक पहुंच गया है, एकल बोर्ड कंप्यूटर पर बिजली और माइक्रोकंट्रोलर से एकल बोर्ड कंप्यूटर को जोड़ने के लिए यूएसबी केबल के लिए एक माइक्रो-यूएसबी का उपयोग करें। टच स्क्रीन पर प्रदान की गई पायथन स्क्रिप्ट खोलें और माप समय बदलें।
प्रोग्राम उत्पन्न डेटा फ़ाइल के नाम पर वेरिएबल आउटपुट फ़ाइल पथ बदलें। और वांछित मूल्यों के लिए धारावाहिक बंदरगाह चर बदल जाते हैं। दो पीसीआर ट्यूब रखें जिसमें प्रतिक्रियाओं को हीट ब्लॉक में निगरानी की जानी है।
और प्रत्येक ऑप्टिकल चैनल से बाहर निकलने वाले चार खूंटे के बीच केंद्रित पीसीआर ट्यूबों के साथ हीट ब्लॉक पर फ्लोरीमीटर रखें। इस बात की पुष्टि करने के बाद कि 3 डी मुद्रित फ्लोरीमीटर जुड़ा हुआ है, एलईडी के लिए बिजली आपूर्ति एडाप्टर में प्लग करें और पायथन प्रोग्राम शुरू करें। दोनों पीसीआर ट्यूबों में वास्तविक समय फ्लोरेसेंस को मापने के लिए एलसीडी स्क्रीन पर एक ग्राफिकल यूजर इंटरफेस दिखाई देगा।
प्रयोग के अंत में, उपयोगकर्ता द्वारा परिभाषित स्थान में सहेजे गए माप और आउटपुट डेटा फ़ाइलों को देखें। एक बार इकट्ठा होने के बाद, फ्लोरीमीटर प्रदर्शन को फिटसी डाई की कमजोर पड़ने वाली श्रृंखला से फ्लोरेसेंस को मापकर मान्य किया जा सकता है। इस प्रतिनिधि विश्लेषण में, फ्लोरीमीटर के दोनों चैनलों ने वांछित सीमा में एक रैखिक प्रतिक्रिया दिखाई।
यहां दिखाया गया है कि रिकॉम्बिनेंटस पॉलीमरेज प्रवर्धन सकारात्मक और फ्लोरीमीटर के दूसरे विन्यास पर मापा गया एक मानक वाणिज्यिक किट की नकारात्मक नियंत्रण प्रतिक्रियाओं की बेसलाइन-घटाया फ्लोरेसेंस हैं। फ्लोरीमीटर के पहले विन्यास पर सार्स-कोविड-2 आरएनए के लिए कस्टम रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन लूप-मध्यस्थता आइसोथर्मल प्रवर्धन प्रतिक्रिया के वास्तविक समय फ्लोरेसेंस माप से पता चलता है कि प्रवर्धन आरएनए कॉपी संख्याओं की चिकित्सकीय प्रासंगिक रेंज पर अपेक्षित होता है। ऐसे समय में जब वैश्विक आपूर्ति श्रृंखला बहुत जोर दिया जाता है, इस फ्लोरीमीटर जैसे उपकरणों के खुले स्रोत टुकड़े हमें महामारी से जुड़े कुछ स्वास्थ्य असमानताओं को कम करने में मदद कर सकते हैं ।