Name: ubiquitous and tissue-specific rna targeting in drosophila melanogaster using crispr/casrx
Uploaded: 2021-02-05T15:00:00
Duration: 6 min 37 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ubiquitous and Tissue-specific RNA Targeting in Drosophila Melanogaster using CRISPR/CasRx at JoVE.com

इस काम को DARPA सुरक्षित जीन कार्यक्रम अनुदान (HR0011-17-2-0047) से वित्त पोषण द्वारा भाग में समर्थित किया गया था, और एनआईएच पुरस्कार (R21RAI149161A, DP2AI152071) O.S.A. को सम्मानित किया गया था।

<ol>
	<li>Adli, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CRISPR+tool+kit+for+genome+editing+and+beyond.">The CRISPR tool kit for genome editing and beyond.</a> Nat Communications. 9, 1911 (2018).</li><li>Abudayyeh, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C2c2+is+a+single-component+programmable+RNA-guided+RNA-targeting+CRISPR+effector.">C2c2 is a single-component programmable RNA-guided RNA-targeting CRISPR effector.</a> Science. 353 (6299), 5573 (2016).</li><li>East-Seletsky, A., O'Connell, M., Burstein, D., Knott, G., Doudna, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+Targeting+by+Functionally+Orthogonal+Type+VI-A+CRISPR-Cas+Enzymes.">RNA Targeting by Functionally Orthogonal Type VI-A CRISPR-Cas Enzymes.</a> Molecular Cell. 66 (3), 373-383 (2017).</li><li>Konermann, S., Lotfy, P., Brideau, N., Oki, J., Shokhirev, M., Hsu, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+Engineering+with+RNA-Targeting+Type+VI-D+CRISPR+Effectors.">Transcriptome Engineering with RNA-Targeting Type VI-D CRISPR Effectors.</a> Cell. 173 (3), 665-676 (2018).</li><li>Buchman, A., Brogan, D., Sun, R., Yang, T., Hsu, P., Akbari, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Programmable+RNA+Targeting+Using+CasRx+in+Flies.">Programmable RNA Targeting Using CasRx in Flies.</a> The CRISPR Journal. 3 (3), 164-176 (2020).</li><li>Kushawah, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR-Cas13d+Induces+Efficient+mRNA+Knockdown+in+Animal+Embryos.">CRISPR-Cas13d Induces Efficient mRNA Knockdown in Animal Embryos.</a> Developmental Cell. 54 (6), 805-817 (2020).</li><li>Abudayyeh, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+targeting+with+CRISPR-Cas13.">RNA targeting with CRISPR-Cas13.</a> Nature. 550, 280-284 (2017).</li><li>Perrimon, N., Ni, J., Perkins, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+RNAi:+today+and+tomorrow.">In vivo RNAi: today and tomorrow.</a> Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 2, 003640 (2010).</li><li>Dietzl, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+transgenic+RNAi+library+for+conditional+gene+inactivation+in+Drosophila.">A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila.</a> Nature. 448, 151-156 (2007).</li><li>Ni, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+resource+of+transgenic+RNAi+lines+for+neurogenetics.">A Drosophila resource of transgenic RNAi lines for neurogenetics.</a> Genetics. 182 (4), 1089-1100 (2009).</li><li>Ni, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-scale+shRNA+resource+for+transgenic+RNAi+in+Drosophila.">A genome-scale shRNA resource for transgenic RNAi in Drosophila.</a> Nature Methods. 8, 405-407 (2011).</li><li>Ni, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vector+and+parameters+for+targeted+transgenic+RNA+interference+in+Drosophila+melanogaster.">Vector and parameters for targeted transgenic RNA interference in Drosophila melanogaster.</a> Nature Methods. 5, 49-51 (2008).</li><li>Heigwer, F., Port, F., Boutros, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA+Interference+(RNAi)+Screening+in+Drosophila.">RNA Interference (RNAi) Screening in Drosophila.</a> Genetics. 208 (3), 853-874 (2018).</li><li>Kulkarni, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+off-target+effects+associated+with+long+dsRNAs+in+Drosophila+melanogaster+cell-based+assays.">Evidence of off-target effects associated with long dsRNAs in Drosophila melanogaster cell-based assays.</a> Nature Methods. 3, 833-838 (2006).</li><li>Ma, Y., Creanga, A., Lum, L., Beachy, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+off-target+effects+in+Drosophila+RNA+interference+screens.">Prevalence of off-target effects in Drosophila RNA interference screens.</a> Nature. 443, 359-363 (2006).</li><li>Perrimon, N., Mathey-Prevot, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matter+arising:+off-targets+and+genome-scale+RNAi+screens+in+Drosophila.">Matter arising: off-targets and genome-scale RNAi screens in Drosophila.</a> Fly. 1 (1), 1-5 (2007).</li><li>Markstein, M., Pitsouli, C., Villalta, C., Celniker, S., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploiting+position+effects+and+the+gypsy+retrovirus+insulator+to+engineer+precisely+expressed+transgenes.">Exploiting position effects and the gypsy retrovirus insulator to engineer precisely expressed transgenes.</a> Nature Genetics. 40, 476-483 (2008).</li><li>Champer, J., Buchman, A., Akbari, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cheating+evolution:+engineering+gene+drives+to+manipulate+the+fate+of+wild+populations.">Cheating evolution: engineering gene drives to manipulate the fate of wild populations.</a> Nature Review Genetics. 17 (3), 146-159 (2016).</li><li>Buchman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Broad+dengue+neutralization+in+mosquitoes+expressing+an+engineered+antibody.">Broad dengue neutralization in mosquitoes expressing an engineered antibody.</a> PLoS Pathogens. 16 (4), 1008103 (2020).</li><li>Mathur, G., Sanchez-Vargas, I., Alvarez, D., Olson, K., Marinotti, O., James, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgene-mediated+suppression+of+dengue+viruses+in+the+salivary+glands+of+the+yellow+fever+mosquito,+Aedes+aegypti.">Transgene-mediated suppression of dengue viruses in the salivary glands of the yellow fever mosquito, Aedes aegypti.</a> Insect Molecular Biology. 19 (6), 753-763 (2011).</li><li>Franz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+RNA+interference-based+resistance+to+dengue+virus+type+2+in+genetically+modified+Aedes+aegypti.">Engineering RNA interference-based resistance to dengue virus type 2 in genetically modified Aedes aegypti.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (11), 4198-4203 (2006).</li><li>Yen, P., James, A., Li, J., Chen, C., Failloux, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+miRNAs+induce+dual+arboviral-resistance+phenotypes+in+the+vector+mosquito+Aedes+aegypti.">Synthetic miRNAs induce dual arboviral-resistance phenotypes in the vector mosquito Aedes aegypti.</a> Communications Biology. 1, 11 (2018).</li><li>Buchman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+resistance+to+Zika+virus+in+transgenic+Aedes+aegypti+expressing+a+polycistronic+cluster+of+synthetic+small+RNAs.">Engineered resistance to Zika virus in transgenic Aedes aegypti expressing a polycistronic cluster of synthetic small RNAs.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 116 (9), 3656-3661 (2019).</li><li>. Addgene Available from: <a target="_blank" href="https://www.addgene.org/protocols/restriction-digest/">https://www.addgene.org/protocols/restriction-digest/</a> (2020)</li><li>Gibson, D., Young, L., Chuang, R., Venter, J., Hutchison, C., Smith, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymatic+assembly+of+DNA+molecules+up+to+several+hundred+kilobases.">Enzymatic assembly of DNA molecules up to several hundred kilobases.</a> Nature Methods. 6 (5), 343-345 (2009).</li><li>. Addgene Available from: <a target="_blank" href="https://www.addgene.org/protocols/pcr/">https://www.addgene.org/protocols/pcr/</a> (2020)</li><li>. Indiana University Bloomington Available from: <a target="_blank" href="https://bdsc.indiana.edu/information/recipes/bloomfood.htmL">https://bdsc.indiana.edu/information/recipes/bloomfood.htmL</a> (2020)</li><li>Dobin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STAR:ultrafast+universal+RNA-seq+aligner.">STAR:ultrafast universal RNA-seq aligner.</a> Bioinformatics. 29 (1), 15-21 (2013).</li><li>Jiang, W., Brueggeman, A., Horken, K., Plucinak, T., Weeks, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+transient+expression+of+Cas9+and+single+guide+RNA+genes+in+Chlamydomonas+reinhardtii.">Successful transient expression of Cas9 and single guide RNA genes in Chlamydomonas reinhardtii.</a> Eukaryotic Cell. 13 (11), 1465-1469 (2014).</li><li>Poe, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robust+CRISPR/Cas9-Mediated+Tissue-Specific+mutagenesis+reveals+gene+redundancy+and+perdurance+in+Drosophila.">Robust CRISPR/Cas9-Mediated Tissue-Specific mutagenesis reveals gene redundancy and perdurance in Drosophila.</a> Genetics. 211 (2), 459-472 (2019).</li><li>Port, F., Chen, H., Lee, T., Bullock, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+CRISPR/Cas+tools+for+efficient+ger+mLine+and+somatic+genome+engineering+in+Drosophila.">Optimized CRISPR/Cas tools for efficient ger mLine and somatic genome engineering in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (29), 2967-2976 (2014).</li><li>Yang, S., Li, S., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shortening+the+Half-Life+of+Cas9+maintains+its+gene+editing+ability+and+reduces+neuronal+toxicity.">Shortening the Half-Life of Cas9 maintains its gene editing ability and reduces neuronal toxicity.</a> Cell Reports. 25 (10), 2653-2659 (2018).</li><li>Port, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+large-scale+resource+for+tissue-specific+CRISPR+mutagenesis+in+Drosophila.">A large-scale resource for tissue-specific CRISPR mutagenesis in Drosophila.</a> eLife. 9, 53865 (2020).</li><li>Zhang, X., Tee, L., Wang, X., Huang, Q., Yang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Off-target+Effects+in+CRISPR/Cas9-mediated+Genome+Engineering.">Off-target Effects in CRISPR/Cas9-mediated Genome Engineering.</a> Molecular Therapy - Nucleic Acids. 4 (17), 264 (2015).</li><li>Huynh, N., Depner, N., Larson, R., King-Jones, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+versatile+toolkit+for+CRISPR-Cas13-based+RNA+manipulation+in+Drosophila.">A versatile toolkit for CRISPR-Cas13-based RNA manipulation in Drosophila.</a> Genome Biology. 21, 279 (2020).</li></ol>

O.S.A. Agragene, Inc. के संस्थापक हैं, एक इक्विटी ब्याज है, और कंपनी के वैज्ञानिक सलाहकार बोर्ड पर कार्य करता है। इस व्यवस्था की शर्तों की समीक्षा की गई है और कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, सैन डिएगो द्वारा अपनी हितों के टकराव की नीतियों के अनुसार अनुमोदित किया गया है। अन्य सभी लेखकों ने कोई प्रतिस्पर्धी हितों की घोषणा नहीं की है।

Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats (CRISPR) प्रौद्योगिकियों के आगमन के बाद से, इस क्षेत्र में अधिकांश ध्यान डीएनए संपादन पर रहा है, जो चिकित्सा और जैव प्रौद्योगिकी में परिवर्तनकारी अनुप्रयोग प्रदान करता है1। डीएनए अनुक्रमों का स्थायी परिवर्तन, हालांकि, नैतिक विचारों के कारण हमेशा वांछित नहीं होता है। इसके प्रकाश में, हाल के अध्ययनों ने आरएनए को लक्षित करने के लिए CRISPR-आधारित उपकरण विकसित करना शुरू कर दिया और दिखाया कि CRISPR प्रौद्योगिकियों का उपयोग वास्तव में विभिन्न प्रकार के जैविक प्रणालियों में आरएनए-लक्ष्यीकरण के लिए किया जा सकता है2,3,4,5,6,7। परीक्षण किए गए इन प्रणालियों में से कई में, आरएनए और ट्रांसक्रिप्ट में कमी को लक्षित करने के लिए वर्तमान व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला दृष्टिकोण आरएनए हस्तक्षेप (आरएनएआई) है, जो सही से बहुत दूर है, अक्सर विवो 8,9,10,11,12,13,14,15,16,17 में उपयोग किए जाने पर विभिन्न प्रभावकारिता और उच्च ऑफ-टारगेट गतिविधि का प्रदर्शन करता है। . इसलिए, इन प्रौद्योगिकियों की स्थिति को देखते हुए, यह आरएनए लक्ष्यीकरण के लिए CRISPR-आधारित उपकरणों की क्षमताओं की खोज करने के लायक है।
एक उल्लेखनीय हाल के अध्ययन ने बताया कि राइबोन्यूक्लिएज CasRx, Cas13d वर्ग का एक सदस्य, मानव सेल संस्कृति में जीन प्रतिलेख के स्तर को कुशलतापूर्वक कम कर सकता है और एक आकर्षक ऑफ-टारगेट प्रोफाइल 4 के पास है। इस खोज ने इस सवाल को जन्म दिया कि क्या यह नया राइबोन्यूक्लिएज जीव स्तर पर आरएनए लक्ष्यीकरण के लिए अपनी प्रभावकारिता और कम ऑफ-टारगेट दर को बनाए रख सकता है। हाल के एक अध्ययन ने इस प्रश्न को संबोधित करते हुए दिखाया कि कैसरक्स प्रणाली का उपयोग ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर 5 में सर्वव्यापी और ऊतक-विशिष्ट जीन ट्रांसक्रिप्ट कमी को प्राप्त करने के लिए किया जा सकता है।
इस हाल ही में प्रकाशित दृष्टिकोण की प्रयोज्यता को सुव्यवस्थित करने के लिए, यह प्रोटोकॉल इस हाल के काम से विधियों का विवरण देता है, जिसमें तीन मुख्य भाग होते हैं: 1) दो-घटक CasRx सिस्टम का उपयोग करके विवो आरएनए लक्ष्यीकरण में सर्वव्यापी; 2) एक तीन घटक CasRx प्रणाली का उपयोग कर विवो बहिर्जात आरएनए लक्ष्यीकरण में सर्वव्यापी; और 3) ऊतक-विशिष्ट विवो आरएनए लक्ष्यीकरण एक तीन घटक CasRx प्रणाली का उपयोग कर.
एक सर्वव्यापी प्रमोटर के नियंत्रण में विभिन्न लक्ष्य जीनों को लक्षित करने वाले गाइड आरएनए (जीआरएनए) को डिजाइन किया गया था और इन जीआरएनए-युक्त निर्माणों को व्यक्त करने वाली फ्लाई लाइनों को उत्पन्न किया गया था। CasRx या तो एक सर्वव्यापी प्रमोटर, या एक सशर्त अपस्ट्रीम सक्रियण अनुक्रम (UASt) प्रमोटर GAL4 प्रतिलेखन कारक द्वारा सक्रिय करने योग्य के नियंत्रण में निर्माण करता है, भी डिजाइन किया गया था और इन CasRx युक्त निर्माणों उत्पन्न harboring लाइनों उड़ान भरने. Catalytically निष्क्रिय CasRx constructs, dCasRx, डिज़ाइन किए गए थे और नकारात्मक नियंत्रण के रूप में उपयोग किए गए थे। मक्खियों में सर्वव्यापी आरएनए लक्ष्यीकरण सर्वव्यापी CasRx-व्यक्त फ्लाई लाइनों के साथ gRNA-व्यक्त फ्लाई लाइनों को पार करके प्राप्त किया जाता है। दोनों gRNA निर्माण एक विशिष्ट जीन प्रतिलेख और CasRx प्रोटीन को लक्षित करने को व्यक्त करने वाली संतानों में लक्षित जीन टेपों की सर्वव्यापी कमी होती है। मक्खियों में ऊतक-विशिष्ट आरएनए लक्ष्यीकरण पहले जीआरएनए-व्यक्त मक्खियों को पार करके प्राप्त किया जाता है, जिसमें यूएएसटी-कैसरक्स मक्खियों को व्यक्त किया जाता है, जो जीआरएनए और यूएएसटी-कैसरक्स दोनों निर्माणों को ले जाने वाले ट्रांसहेटेरोज़िगस मक्खियों को प्राप्त करता है। बदले में इस तरह की मक्खियों को ऊतक-विशिष्ट GAL4-व्यक्त मक्खियों के साथ पार किया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप ऊतक-विशिष्ट CasRx अभिव्यक्ति और मक्खियों में आरएनए-लक्ष्यीकरण की पीढ़ी होती है।
CasRx सिस्टम की प्रोग्राम करने योग्य प्रकृति अनुकूलन और अनुकूलन की संभावना प्रदान करती है ताकि विवो आरएनए लक्ष्यीकरण के लिए उच्च प्रभावकारिता और कम ऑफ-टारगेट गतिविधि प्राप्त करने में मदद मिल सके। CRISPR-आधारित आरएनए-लक्ष्यीकरण के संभावित अनुप्रयोग कई हैं, जिनमें प्रयोगशाला में आरएनएआई को प्रतिस्थापित करना और जंगली में कीट वेक्टर नियंत्रण में योगदान देना शामिल है। उत्तरार्द्ध में से, वैश्विक अपूर्ण आवश्यकताओं में से एक मच्छरों के माध्यम से प्रसारित आरएनए वायरस के संक्रमण का मुकाबला करने के लिए कुशल उपकरणों का विकास है। कई आरएनए वायरस, जैसे डेंगू, जीका और चिकनगुनिया वायरस, मच्छरों के माध्यम से फैलते हैं, मानव स्वास्थ्य को प्रभावित करते हैं, और मृत्यु दर में योगदान देते हैं। रोग की रोकथाम के लिए वायरस प्रतिरोध के साथ इंजीनियरिंग मच्छर आबादी के लिए कई प्रस्ताव किए गए हैं; हालांकि, कोई भी वर्तमान तकनीक मच्छरों को सभी महत्वपूर्ण आरएनए वायरस 18,19,20,21,22,23 के लिए एक साथ प्रतिरोधी बनाने में सक्षम नहीं है। आरएनए-लक्षित कैस सिस्टम सभी मच्छर-जनित आरएनए वायरस को लक्षित करने के लिए एक प्रोग्राम योग्य मंच को सक्षम करके ऐसी तकनीक के लिए एक प्रारंभिक बिंदु प्रदान कर सकता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>100% Grape Juice</td>
			<td>Welch Foods Inc.</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Active Dry Yeast (908g)</td>
			<td>Red Star Yeast Company, LLC</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMC4500 color camera</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DMC4500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-Luciferase Reporter Assay System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1910</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAL4-GMR flies</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>29967</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAL4-y flies</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>44373</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glomax 20/20 Luminometer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E5331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Illumina HiSeq2500 Sequencer</td>
			<td>Illumina, Inc.</td>
			<td>HiSeq2500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>M165FC fluorescent stereomicroscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>M165FC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nanodrop OneC UV-vis spectrophotometer</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>NDONEC-W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NEBNext Ultra II RNA Library Prep Kit</td>
			<td>New England Biolabs, Inc.</td>
			<td>E7770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid # 112686</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>112686</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid # 112688</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>112688</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid # 132416</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>132416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid # 132417</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>132417</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid # 132419</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>132419</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid # 132420</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>132420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid # 132421</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>132421</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid # 132422</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>132422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid # 132425</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>132425</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid # 132426</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>132426</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid # 133304</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>133304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid # 164586</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>164586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid #132418</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>132418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plasmid pJFRC81</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>36432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qiagen RNeasy Mini Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restriction endonucleases AscI</td>
			<td>New England Biolabs Inc.</td>
			<td>R0558L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restriction endonucleases NotI</td>
			<td>New England Biolabs Inc.</td>
			<td>R0189L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restriction endonucleases PacI</td>
			<td>New England Biolabs Inc.</td>
			<td>R0547L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restriction endonucleases PstI</td>
			<td>New England Biolabs Inc.</td>
			<td>R0140L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restriction endonucleases SwaI</td>
			<td>New England Biolabs Inc.</td>
			<td>R0604L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Restriction endonucleases XbaI</td>
			<td>New England Biolabs Inc.</td>
			<td>R0145L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNA 6000 Pico Kit for Bioanalyzer</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>5067-1513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Turbo DNase</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>AM2238</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U6-3:4-gRNA-Fluc flies</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>84125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U6-3:4-gRNA-GFP; OpIE2-GFP flies</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>84986</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U6-3:4-gRNA-N flies</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>84122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U6-3:4-gRNA-w flies</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>84124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U6-3:4-gRNA-y flies</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>84123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UASt-CasRx flies</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>84121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UASt-dCasRx flies</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>84120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ubiq-CasRx flies</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>84118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ubiq-dCasRx flies</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>84119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ubiq-Firefly-T2A-eGFP-Ubiq-Renilla flies</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>84127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zymoclean Gel DNA Recovery Kits</td>
			<td>Zymo Research Corporation</td>
			<td>D4007</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ubiquitous and tissue-specific rna targeting in drosophila melanogaster using crispr/casrx

CasRx, आरएनए-लक्ष्यीकरण Cas13 परिवार का एक सदस्य, सेलुलर और जीव दोनों स्तरों पर एक आकर्षक ऑफ-टारगेट प्रोफ़ाइल के साथ कुशल जीन प्रतिलेख कमी में CRISPR / Cas प्रौद्योगिकियों का एक आशाजनक नया जोड़ है। यह हाल ही में बताया गया है कि CRISPR / CasRx प्रणाली का उपयोग ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में सर्वव्यापी और ऊतक-विशिष्ट जीन प्रतिलेख कमी को प्राप्त करने के लिए किया जा सकता है। यह पेपर हाल के काम से विधियों का विवरण देता है, जिसमें तीन भाग शामिल हैं: 1) दो-घटक CasRx सिस्टम का उपयोग करके विवो अंतर्जात आरएनए लक्ष्यीकरण में सर्वव्यापी; 2) एक तीन घटक CasRx प्रणाली का उपयोग कर विवो बहिर्जात आरएनए लक्ष्यीकरण में सर्वव्यापी; और 3) ऊतक-विशिष्ट विवो आरएनए लक्ष्यीकरण में एक तीन-घटक CasRx प्रणाली का उपयोग कर लक्ष्यीकरण. देखे गए आरएनए लक्ष्यीकरण के प्रभावों में लक्षित जीन विशिष्ट फेनोटाइपिक परिवर्तन, लक्षित आरएनए प्रतिलेख में कमी, और कभी-कभी घातकता फेनोटाइप शामिल हैं जो कैसरक्स प्रोटीन और संपार्श्विक गतिविधि की उच्च अभिव्यक्ति से जुड़े होते हैं। कुल मिलाकर, इन परिणामों से पता चला है कि CasRx प्रणाली एक प्रोग्राम योग्य और कुशल तरीके से जीव स्तर पर आरएनए प्रतिलेख में कमी को लक्षित करने में सक्षम है, यह दर्शाता है कि विवो ट्रांसक्रिप्टोम लक्ष्यीकरण में, और इंजीनियरिंग व्यवहार्य है और विवो CRISPR-आधारित आरएनए लक्ष्यीकरण प्रौद्योगिकियों में भविष्य के लिए नींव रखता है।

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Ubiquitous and Tissue-specific RNA Targeting in Drosophila Melanogaster using CRISPR/CasRx

यह आलेख मक्खियों में आरएनए-लक्ष्यीकरण Cas13D एंजाइम (RfxCas13D) का उपयोग करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल की रूपरेखा तैयार करता है।

CRISPR/CasRx का उपयोग करके ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर में सर्वव्यापी और ऊतक-विशिष्ट आरएनए लक्ष्यीकरण

CasRx, a member of the RNA-targeting Cas13 family, is a promising new addition of the CRISPR/Cas technologies in efficient gene transcript reduction with ...

जैसा कि हमारे प्रोटोकॉल से पता चलता है, CRISPR CasRx प्रौद्योगिकियों का उपयोग फल मक्खियों में सर्वव्यापी और ऊतक विशिष्ट जीन प्रतिलेख कटौती प्राप्त करने के लिए किया जा सकता है। हमारी तकनीक किसी के लिए एक स्टार्टर पैकेज प्रदान करती है जो आगे अनुकूलन और अनुकूलन के साथ संगत होने के दौरान फल मक्खियों में CRISPR-आधारित जीन ट्रांसक्रिप्ट कमी का उपयोग करने में रुचि रखता है। एक दो घटक CasRx प्रणाली का उपयोग कर vivo आरएनए लक्ष्यीकरण में एक सर्वव्यापी स्थापित करने के लिए, ब्याज की homozygous gRNA लाइन से 10 कुंवारी वयस्क महिला मक्खियों और संतुलित विषमयुग्मजी Ubiq CasRx CurlyO से पांच वयस्क पुरुष मक्खियों इकट्ठा.माता-पिता की मक्खियों को 100 माइक्रोग्राम सूखे खमीर पाउडर के साथ पूरक एक शीशी में रखें और 26 डिग्री सेल्सियस पर 48 घंटे के लिए शीशियों को पीछे करें। यह देखने के लिए हर दिन शीशियों का निरीक्षण करें कि क्या कोई नई वयस्क संतान एफ 1 पीढ़ी के जघन से उभरी है और 10 सेकंड के लिए कार्बन डाइऑक्साइड के साथ किसी भी वयस्क को बेहोश करती है। एक बार जब मक्खियां स्थिर हो जाती हैं, तो लगातार कार्बन डाइऑक्साइड के साथ कार्बन डाइऑक्साइड टैंक से जुड़े फ्लाई पैड पर शीशी को खाली कर देती हैं और मक्खियों के फेनोटाइप को स्कोर करने और छवि बनाने के लिए एक फ्लोरोसेंट स्टीरियो माइक्रोस्कोप से जुड़े एक रंगीन कैमरे का उपयोग करती हैं।फिर फ्लोरोसेंट सिग्नल अभिव्यक्ति के अनुसार, विभिन्न फेनोटाइप्स के साथ संतानों की संख्या की गणना करें। मेंडेलियन आनुवांशिकी के आधार पर, 50% संतानों को लक्षित आरएनए व्यक्त करने की उम्मीद है। ध्यान दें कि Ubiq CasRx प्रणाली की विषाक्तता लक्षित आरएनए के अनुपात को कम कर सकती है जो संतानों को 50% से कम तक व्यक्त करती है, तीन-घटक CasRx प्रणाली का उपयोग करके विवो बहिर्जात आरएनए लक्ष्यीकरण में एक सर्वव्यापी स्थापित करने के लिए, आठ से 10 वर्जिन वयस्क मादा मक्खियों को एक दोहरी लूसिफेरस एक्सप्रेसिंग लाइन से इकट्ठा करती है और संतुलित विषमयुग्मजी यूबिक कैसरक्स घुंघराले प्लस टीएम 6 से चार से पांच वयस्क पुरुष मक्खियों को इकट्ठा करती है, एसटीबी लाइन जो सफेद आंखें, घुंघराले पंख, और डीएस लाल प्रतिदीप्ति को एक साथ प्रदर्शित करती है।माता-पिता के कदम को 100 माइक्रोग्राम सूखे खमीर पाउडर के साथ पूरक एक शीशी में एक क्रॉस-बाय रखें और 26 डिग्री सेल्सियस पर 48 घंटे के लिए इस क्रॉस को पीछे करें। इनक्यूबेशन के अंत में, प्रत्येक शीशी से माता-पिता की सभी मक्खियों को हटा दें और कम से कम 14 दिनों के लिए 26 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में शीशियों को वापस कर दें। 14 दिनों के दौरान, जैसा कि पहले उल्लेख किया गया है, तीन बार जीआरएनए लाइन को लक्षित करने वाले होमोजीगस फायरफ्लाई लूसिफेरस से आठ से 10 महिला कुंवारियों को इकट्ठा करें।यह देखने के लिए कि क्या कोई नई वयस्क संतानें प्यूपे से उभरी हैं, कार्बन डाइऑक्साइड के साथ एनेस्थेटाइज़िंग के लिए हर दिन एक क्रॉस शीशियों का निरीक्षण करें, ताकि चार से पांच पुरुष मक्खियों के संग्रह की अनुमति मिल सके जो यूबिक कैसरक्स और दोहरी लूसिफेरस रिपोर्टर दोनों को उपलब्ध के रूप में व्यक्त करते हैं। जीआरएनए लाइन को लक्षित करने वाले फल मक्खी लूसिफेरस से 10 वर्जिन मादाओं के साथ मक्खियों को एक नई शीशी में रखें, और इन चरणों को 48 घंटों के लिए 26 डिग्री सेल्सियस पर रखें। एक और पांच एक दिन पुराने पुरुषों को इकट्ठा करें जो चरण एक क्रॉस शीशियों से यूबिक कैसरक्स और दोहरी लूसिफेरस रिपोर्टर दोनों को व्यक्त करते हैं और उन्हें माइनस 80 डिग्री सेल्सियस भंडारण के लिए 1.5 मिलीलीटर सेंट्रीफ्यूज में स्थानांतरित करने से पहले 26 डिग्री सेल्सियस पर अकेले दो से चार दिनों के लिए मक्खियों को इनक्यूबेट करते हैं।इनक्यूबेशन के अंत में, चरण दो क्रॉस शीशियों में से प्रत्येक से माता-पिता की सभी शीशियों को हटा दें। और शीशियों को कम से कम 20 दिनों के लिए 26 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में वापस कर दें। यह देखने के लिए कि क्या कोई नई वयस्क संतान जघन से उभरी है, कार्बन डाइऑक्साइड के साथ मक्खियों को एनेस्थेटिक करने के लिए हर दिन चरण दो क्रॉस शीशियों का निरीक्षण करें, क्योंकि वे उपलब्ध हो जाते हैं, और प्रदर्शन के रूप में अपने फेनोटाइप को स्कोरिंग और इमेजिंग करते हैं।मेंडेलियन आनुवांशिकी से पता चलता है कि, यदि सभी मक्खियां व्यवहार्य हैं, तो संतानों के 25% को लक्षित आरएनए व्यक्त करना चाहिए। एक लूसिफेरस परख प्रदर्शन करने के लिए, ट्रिपल ट्रांस विषमयुग्मजी मक्खियों के रूप में अच्छी तरह से नियंत्रण मक्खियों के रूप में प्रदर्शित के रूप में उत्पन्न करते हैं। जन्म के समय नर मक्खियों को इकट्ठा करना, और उन्हें तीन दिन की उम्र तक उम्र बढ़ने।1.5 मिलीलीटर सेंट्रीफ्यूज ट्यूबों में तीन दिन पुरानी मक्खियों को स्थानांतरित करें, और उन्हें व्यावसायिक रूप से उपलब्ध लूसिफेरस परख किट से लूसिफेरस लाइसिस बफर में एक बफर का उपयोग करके लाइस करें। फिर प्रत्येक नमूने और luminometer से lysed ऊतक के पांच microliters का उपयोग करने के लिए दोनों फल मक्खियों को मापने के लिए और Luciferase गतिविधि भाग गया, मानक luciferase परख प्रोटोकॉल के अनुसार. F1, ट्रांस विषमयुग्मजी CasRx, ट्रांस विषमयुग्मजी dCasRx मक्खियों की तुलना में काफी कम जीवित रहने की दर है।तीन लक्ष्य जीनों के Ubiq CasRx प्रणाली की विषाक्तता की पुष्टि करते हुए, U6 gRNA Y विषमयुग्मजी मक्खियां अव्यवहार्य हैं और दूसरे इंस्टार लार्वा चरण से परे नहीं बढ़ती हैं। जीवित Ubq CasRx और U6 gRNA W विषमयुग्मजी मक्खियों, एक अलग पूरी तरह से penetrant व्यापक आंखों वाले फेनोटाइप का प्रदर्शन करते हैं। इसके अलावा, तीन लक्ष्य जीनों के लिए लक्ष्य जीन टेपों की एक महत्वपूर्ण कमी भी देखी जाती है।CasRx द्वारा प्रेरित बंद लक्ष्य गतिविधि के सबूत भी मनाया जाता है जब विभेदक व्यक्त प्रतिलेखों CasRx मक्खियों और dCasRx से मक्खियों को व्यक्त करने से नमूनों के बीच व्यक्त टेपों की तुलना कर रहे हैं. दो चरण क्रॉस में, केवल सभी तीन ट्रांस जीनों के संयोजन के परिणामस्वरूप 100% घातकता होती है। जब ऊतक विशिष्ट आरएनए लक्ष्यीकरण एक तीन घटक CasRx सिस्टम डिजाइन का उपयोग कर नियोजित किया जाता है, विषाक्तता का स्तर कम हो जाता है जब समग्र CasRx अभिव्यक्ति Ubiq प्रमोटर की तुलना में UAST प्रमोटर का उपयोग कर कम हो जाता है।सही लिंग और सही फेनोटाइप की मक्खियों का उपयोग करके आनुवंशिक प्रक्रिया को सही ढंग से स्थापित करना महत्वपूर्ण है।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Ubiquitous and Tissue-specific RNA Targeting in Drosophila Melanogaster using CRISPR/CasRx

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

RNAi Screening for Host Factors Involved in Vaccinia Virus Infection using Drosophila Cells

होस्ट में शामिल कारक के लिए आरएनएआई स्क्रीनिंग चेचक वायरस संक्रमण का उपयोग ड्रोसोफिला कक्ष

Viral pathogens represent a significant public health threat; not only can viruses cause natural epidemics of human disease, but their potential use in ...

RNA Interference in Ticks

Ticks में शाही सेना हस्तक्षेप

Ticks are obligate hematophagous ectoparasites of wild and domestic animals and humans, and are considered to be second worldwide to mosquitoes as vectors ...

Using RNA-interference to Investigate the Innate Immune Response in Mouse Macrophages

माउस मैक्रोफेज में सहज प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की जांच करने के लिए आरएनए हस्तक्षेप का प्रयोग

Macrophages are key phagocytic innate immune cells.  When macrophages encounter a pathogen, they produce antimicrobial proteins and compounds to kill the ...

Nucleocapsid Annealing-Mediated Electrophoresis (NAME) Assay Allows the Rapid Identification of HIV-1 Nucleocapsid Inhibitors

Nucleocapsid Annealing-Mediated Electrophoresis NAME Assay Allows the Rapid Identification of HIV-1 Nucleocapsid Inhibitors

Nucleocapsid एनीलिंग की मध्यस्थता वैद्युतकणसंचलन (नाम) परख एचआईवी -1 nucleocapsid inhibitors का तेजी से पहचान की अनुमति देता है

RNA or DNA folded in stable tridimensional folding are interesting targets in the development of antitumor or antiviral drugs. In the case of HIV-1, viral ...

Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster

Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster

प्रणालीगत जीवाणु संक्रमण और प्रतिरक्षा रक्षा phenotypes में<em&gt; ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the premier model organisms for studying the function and evolution of immune defense. Many aspects of ...

In Situ Detection of Bacteria within Paraffin-embedded Tissues Using a Digoxin-labeled DNA Probe Targeting 16S rRNA

In Situ Detection of Bacteria within Paraffin-embedded Tissues Using a Digoxin-labeled DNA Probe Targeting 16S rRNA

-16 RRNA लक्ष्य निर्धारण एक Digoxin लेबल डीएनए जांच का उपयोग आयल एम्बेडेड ऊतकों के भीतर जीवाणुओं की सीटू का पता लगाने में

The presence of bacteria within the pocket epithelium and underlying connective tissue in gingival biopsies from patients with periodontitis has been ...

Targeting Biofilm Associated Staphylococcus aureus Using Resazurin Based Drug-susceptibility Assay

Targeting Biofilm Associated Staphylococcus aureus Using Resazurin Based Drug-susceptibility Assay

लक्ष्य निर्धारण Biofilm एसोसिएटेड<em&gt; स्ताफ्य्लोकोच्चुस</em&gt; का प्रयोग Resazurin आधारित दवा-परख संवेदनशीलता

Most pathogenic bacteria are able to form biofilms during infection, but due to the difficulty of manipulating and assessing biofilms, the vast majority ...

Targeting Cysteine Thiols for in Vitro Site-specific Glycosylation of Recombinant Proteins

Targeting Cysteine Thiols for in Vitro Site-specific Glycosylation of Recombinant Proteins

लक्ष्यीकरण Cysteine Thiols के लिए इन विट्रो साइट-संयोजक प्रोटीन के विशिष्ट ग्लाइकोसिलेशन

Stromal interaction molecule-1 (STIM1) is a type-I transmembrane protein located on the endoplasmic reticulum (ER) and plasma membranes (PM). ER-resident ...

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

माइक्रोबियल संक्रमण और विश्लेषण के लिए Drosophila melanogaster लार्वा से Hemocytes का निष्कर्षण

During the pathogenic infection of Drosophila melanogaster, hemocytes play an important role in the immune response throughout the infection. Thus, the ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

drosophila melanogaster में वायरल संक्रमण और मेजबान वायरस बातचीत के विश्लेषण की स्थापना

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...