L'attuale lavoro di ricerca sono impalcature composite collagene-chitosano cariche di doxiciclina per la guarigione accelerata delle ferite diabetiche. Il diabete è una malattia metabolica cronica caratterizzata da elevati livelli di glucosio nel sangue. Più a lungo l'individuo ha il diabete, maggiore è il rischio di complicanze, come malattie cardiovascolari, nefropatia, neuropatia, retinopatia e danni ai piedi, eccetera.
Il danno nervoso ai piedi e anche lo scarso flusso sanguigno ai piedi aumentano il rischio di varie complicazioni del piede. Se non trattate, queste ferite possono richiedere alla fine amputazioni delle dita dei piedi, del piede o delle gambe. All'incirca, il 25% dei pazienti con diabete mellito ha l'opportunità di accumulare una ferita diabetica nel corso della loro vita.
La gestione terapeutica delle ferite diabetiche rimane un ostacolo che deve essere superato alla fine. Anche se la fisiopatologia della ferita diabetica è multifattoriale, si ritiene che il trattamento locale con farmaci antinfiammatori potrebbe ridurre gli elevati livelli di MMP-9 e ristabilire la disposizione del quadro dell'omeostasi cutanea e provoca la guarigione nelle ferite diabetiche. La doxiciclina, l'inibitore dell'MMP-9, è stata scelta in questo studio per sopprimere questi elevati livelli di MMP-9, una delle principali molecole infiammatorie responsabili della continua infiammazione delle ferite diabetiche.
D'altra parte, i biomateriali hanno affascinato gli esseri umani per diversi decenni e sono stati al centro di molte scoperte mediche rivoluzionarie per la somministrazione efficiente di farmaci e macromolecolari e lo sviluppo di dispositivi biomedici su misura. Quindi, con questa breve introduzione, abbiamo preparato un'impalcatura collagene-chitosano caricata di doxiciclina per attenuare, per accelerare la guarigione ritardata nelle ferite diabetiche. Questo è Bharat Kumar Reddy, ricercatore del Dipartimento di Farmacologia, JSS College of Pharmacy, Ooty, India.
Oggi siamo qui per esaminare la procedura, come preparare l'impalcatura collagene-chitosano caricata di doxiciclina per la guarigione accelerata delle ferite diabetiche. Diamo un'occhiata alla procedura, come prepararci. Prepareremo l'1,2% della soluzione di collagene, per la quale stiamo assumendo 1,2 grammi di collagene di tipo I, che proviene dall'origine della coda del ratto.
A questo, stiamo aggiungendo 100 ml di acqua di Millipore e l'abbiamo tenuta da parte per mezz'ora per consentire al collagene di rigonfiarsi in acqua. Nella fase successiva è stato preparato lo 0,8% della soluzione di chitosano, per la quale stiamo assumendo 0,8 grammi di chitosano di peso molecolare medio, che è stato mescolato con 100 ml di acido acetico all'1%. Anche questa soluzione ci siamo tenuti da parte per mezz'ora.
Dopo mezz'ora, entrambe le soluzioni sono state sottoposte a agitazione meccanica durante la notte ad un rpm del 2000. Alla soluzione di collagene mescolato durante la notte stiamo lentamente aggiungendo un grammo di doxiciclina. E la soluzione contenente questo collagene e doxiciclina è stata sottoposta per mezz'ora di agitazione ad un rpm del 2000.
A questa soluzione stiamo lentamente aggiungendo una soluzione chitosan stimolata durante la notte. E questo, assicuratevi che sia etichettato come miscela fisica che contiene doxiciclina, collagene, chitosano. Questa miscela fisica che abbiamo sottoposto per un'altra mezz'ora di agitazione ad un rpm del 2000.
Dopo mezz'ora queste miscele fisiche sono state trasferite nei rispettivi stampi in alluminio, che ha una dimensione di due in due centimetri e uno spessore di 0,5 centimetri. Più tardi, questi stampi furono trasferiti in un contenitore di metallo. Questi contenitori metallici erano contenenti gli stampi in alluminio, sono stati sottoposti a congelamento profondo.
Dopo 24 ore, possiamo vedere chiaramente la miscela fisica solidificata contenente doxiciclina, collagene e chitosano. Queste miscele fisiche solidificate sono state ulteriormente sottoposte a litofilia. La lëfilizzazione è stata eseguita a meno 85 gradi più o meno quattro gradi Celsius per 72 ore.
Dopo 72 ore, il materiale licofilizzato è stato prelevato dal licofilizzatore. E qui possiamo vedere chiaramente la miscela fisica completamente essiccata, che non è altro che nota come impalcatura collagene-chitosano carica di doxiciclina. Queste impalcature sono state sottoposte a reti incrociate Al fine di eseguire il crosslinking, inizialmente, il buffer MES è stato preparato prelevando 0,488 grammi di MES e 15 ml di acqua, da cui stiamo esingendo 20 ml di tampone MES e trasferendo separatamente nel becher.
A questi 20 ml di becher sono stati aggiunti 50 mg di collagene-chitosano caricato con doxiciclina. E l'ammollo di questa impalcatura è stato eseguito per mezz'ora. Dopo mezz'ora, l'impalcatura collagene-chitosano caricata di doxiciclina è stata prelevata dal tampone MES da 20 ml.
Inoltre, è stato immerso in una soluzione contenente 19,5 ml di tampone MES, 0,1264 grammi di EDC e 0,014 grammi di NHS. L'ammollo è stato eseguito per quattro ore di intervallo di tempo per il completamento del crosslinking. Dopo il crosslinking, l'impalcatura collagene-chitosano caricata con doxiciclina incrociata è stata prelevata dalla soluzione e trasferita in un contenitore, che è stato dettagliato nella procedura precedente, ed è stata asciugata separatamente.
Qui possiamo vedere chiaramente l'impalcatura non reticorata e retittata, insieme alle stesse immagini. Dalle immagini è chiaro che il collegamento incrociato dell'impalcatura ha comportato una diminuzione delle dimensioni dei pori a causa della formazione di forti legami intramolecolari. Il ratto Wistar maschio è stato preso e il segno dei due centimetri è stato disegnato sulla regione toracica dorsale.
La ferita da escissione è stata creata intorno al marchio e il tracciamento della ferita è stato preso su un foglio OHP. La traccia della ferita è stata misurata con l'aiuto di un metodo grafico. La ferita creata sull'animale era di circa 176 mm.
Successivamente, la ferita creata è stata trattata con impalcatura collagene-chitosano caricata con reticeria retitica e monitorata per 21 giorni. Una volta che l'animale è stato recuperato dall'anestesia, ogni animale è stato in gabbia individualmente. E questi animali sono stati nutriti con dieta e acqua normali.
Tutti gli animali, dopo aver creato la ferita, sono stati divisi in tre gruppi in cui ogni gruppo conteneva sei animali. Qui possiamo vedere chiaramente la differenza tra zero giorno e sette giorni in cui la riduzione della ferita da impalcatura reticata caricata di doxiciclina era di circa il 48%E in questa immagine possiamo vedere chiaramente la differenza tra il giorno 14 e il giorno. 21 di tutti i gruppi in cui l'impalcatura reticata di collagene caricata da doxiciclina è stata guarita intorno al 99%L'area guarita è stata isolata e lavorata per studi istopologici con l'aiuto della colorazione HMB. Qui possiamo vedere chiaramente l'epidermide reepithelizzata, il giorno 21, nell'impalcatura chitosa di collagene caricata di doxiciclina.
Mentre nel controllo e nell'impalcatura incrociata, nient'altro che placebo, doveva ancora formare l'epidermide. Come il nostro studio, le impalcature incrociate in doxiciclina preparate hanno mostrato molte proprietà ideali, come una buona resistenza meccanica, biocompatibilità, assorbimento prolungato dell'acqua a rilascio, insieme a proprietà antibatteriche e antinfiammatorie. Queste impalcature possono essere una forma dosis ideale per il trattamento delle ferite diabetiche.
