赫尔姆霍尔茨-曾特鲁姆柏林水晶碎片筛选工作流程和工具

使用X射线晶体学筛选称为碎片的较小有机化合物是识别分子的有效方法，分子是药物发现或生化工具化合物开发的起点。晶体片段筛选不仅揭示了这些碎片的身份，还揭示了这些碎片在研究中蛋白质表面的结合位置和方式。该技术可用于每个生化或医学相关的蛋白质靶点，其中可以种植合适的蛋白质晶体。

结果的质量与样品处理的质量密切相关。我们相信，以下视觉演示将有助于研究人员进行高质量的实验。演示这个程序的将是塔佳娜·巴特尔，一个博士生研究员和博士生在我的实验室。

首先，切开预热至室温的筛选板袋，然后从筛选板中取出盖子和铝箔。在试剂储液中浸泡五毫升溶液。然后使用 12 个通道移液器将 96 个储层中的每一个都装满 40 微升浸泡溶液。

将易于访问的框架放在筛选板的顶部，并通过将夹子滑动到设备的左右两侧来用夹子固定。将筛选板和易于进入的框架放在显微镜下，通过移动框架的丙烯酸玻璃瓦滑开第一口井。使用新鲜的移液器尖端，将 0.4 微升浸泡溶液从储层添加到含有井的碎片中。

确保滴水覆盖干燥的碎片。将包含最大晶体的结晶板放在第二显微镜下，并在其中一口井上切开密封箔。使用适当大小的环，将晶体转移到第一显微镜下的筛选板井中。

在准备好的玻璃斑板中清洗循环，然后轻轻触摸到组织上将其干燥。每次转移后都这样做，以避免交叉污染。使用显微镜确保晶体正确放置。

重复第二个晶体的程序。继续下一口井，重复所有剩余油井的程序。晶体转移到筛选板中的所有 96 口井后，从显微镜下取出筛选板以及易于取出的框架，并将其放在长凳或桌子上。

然后从筛选板中取出易于进入的框架，用密封箔密封筛选板，并将其放置在结晶孵化器或橱柜中，以在先前优化的浸泡时间进行孵化。两个小时的孵化就足够了，但过夜可能更方便。准备乌尼帕克泡沫德瓦尔与三个未吸盖和一半填充液氮，保持它在地面上。

将半满的德瓦尔移到替补席上，并完全填充到边缘。在整个实验过程中，将其填充到上边缘，并频繁更换液氮。从孵化器中取出筛选板并取出其箔。

将易于访问的框架放在顶部。滑开第一口井。从滴中收获一个晶体，通过快速垂直运动在液氮中闪烁冷却。

将样品插入适当的冰球位置，并在样品跟踪表上做相关笔记。重复第二个晶体的程序。进入下一口井，重复其他晶体的定位，直到所有三个冰球都装满为止。

在液氮中预冷却 Unipuck 碱，并将它们添加到盖子顶部。将 Unipucks 存放在运输德瓦尔或德瓦尔存储的存储架中。在低温下将其保存在液氮中，直到测量。

重复相同的过程，将晶体收集并储存在 Unipucks 中，以获取筛选板中的剩余样品。此处显示了进行碎片浸泡和晶体采集后晶体形态的变异性。甚至包括看起来有些恶化的晶体，因为它们仍然产生有用的数据。

数据是在BESSY II同步加速器的光束线14.1和14.2收集的。对每个样本进行了衍射数据收集。数据使用 FragMAXapp 进行分析，重点是用于处理的 XDSAPP、用于结构优化的气管素和用于命中查找的 PenDA 的组合。

这导致使用 DMSO 免费浸泡条件对 AR 蛋白复合物进行 15 次撞击。在之前的 F2X 条目屏幕针对同一目标（包括浸泡状态中的 DMSO）的战役中，发现了 20 次点击。这意味着，如果省略了 DMSO，则可以识别 75% 的点击率。

为了实验的成功，在程序的每一步都正确而仔细地处理晶体至关重要。晶体片段筛选已成熟为一种广泛使用的技术，常应用于学术界和制药业。