Name: air-inflation of murine lungs with vascular perfusion-fixation
Uploaded: 2021-02-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Air-Inflation of Murine Lungs with Vascular Perfusion-Fixation at JoVE.com

Dit werk werd gefinancierd door de National Heart, Lung, and Blood Institute (NHLBI) subsidies HL140039 en HL130938. De auteurs willen Shannon Hott en Jazalle McClendon bedanken voor hun technische expertise.

Alle methoden die in dit protocol worden beschreven, zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van National Jewish Health.
OPMERKING: Het protocol is georganiseerd in drie componenten. Het eerste onderdeel beschrijft de constructie van de luchtinflatie met perfusie-/fixatieapparatuur. In een tweede sectie wordt beschreven hoe u de apparatuur voor een experiment instelt. In het laatste gedeelte wordt beschreven hoe het dier moet worden voorbereid en het experi...

<ol>
	<li>Hsia, C. C. W., Hyde, D. M., Ochs, M., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Official+Research+Policy+Statement+of+the+American+Thoracic+Society/European+Respiratory+Society:+Standards+for+Quantitative+Assessment+of+Lung+Structure.">An Official Research Policy Statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: Standards for Quantitative Assessment of Lung Structure.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 181 (4), 394-418 (2010).</li><li>Weibel, E. R., Limacher, W., Bachofen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electron+microscopy+of+rapidly+frozen+lungs:+evaluation+on+the+basis+of+standard+criteria.">Electron microscopy of rapidly frozen lungs: evaluation on the basis of standard criteria.</a> Journal of Applied Physiology: Respiratory, Environmental and Exercise Physiology. 53 (2), 516-527 (1982).</li><li>Bachofen, H., Ammann, A., Wangensteen, D., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perfusion+fixation+of+lungs+for+structure-function+analysis:+credits+and+limitations.">Perfusion fixation of lungs for structure-function analysis: credits and limitations.</a> Journal of Applied Physiology: Respiratory, Environmental and Exercise Physiology. 53 (2), 528-533 (1982).</li><li>Gil, J., Bachofen, H., Gehr, P., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+volume-surface+area+relation+in+air-+and+saline-filled+lungs+fixed+by+vascular+perfusion.">Alveolar volume-surface area relation in air- and saline-filled lungs fixed by vascular perfusion.</a> Journal of Applied Physiology: Respiratory, Environmental and Exercise Physiology. 47 (5), 990-1001 (1979).</li><li>Harris, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure-Volume+Curves+of+the+Respiratory+System.">Pressure-Volume Curves of the Respiratory System.</a> Respiratory Care. 50 (1), 78-99 (2005).</li><li>Bachofen, H., Sch&#252;rch, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+surface+forces+and+lung+architecture.">Alveolar surface forces and lung architecture.</a> Comparative Biochemistry and Physiology Part A: Molecular &amp; Integrative Physiology. 129 (1), 183-193 (2001).</li><li>Mead, J., Takishima, T., Leith, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stress+distribution+in+lungs:+a+model+of+pulmonary+elasticity.">Stress distribution in lungs: a model of pulmonary elasticity.</a> Journal of Applied Physiology. 28 (5), 596-608 (1970).</li><li>Mariano, C. A., Sattari, S., Maghsoudi-Ganjeh, M., Tartibi, M., Lo, D. D., Eskandari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Mechanical+Strain+Characterization+of+Ventilated+ex+vivo+Porcine+and+Murine+Lung+using+Digital+Image+Correlation.">Novel Mechanical Strain Characterization of Ventilated ex vivo Porcine and Murine Lung using Digital Image Correlation.</a> Frontiers in Physiology. 11, 600492 (2020).</li><li>Braber, S., Verheijden, K. a. T., Henricks, P. a. J., Kraneveld, A. D., Folkerts, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+fixation+methods+on+lung+morphology+in+a+murine+model+of+emphysema.">A comparison of fixation methods on lung morphology in a murine model of emphysema.</a> American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (6), 843-851 (2010).</li><li>Brain, J. D., Gehr, P., Kavet, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airway+Macrophages.">Airway Macrophages.</a> American Review of Respiratory Disease. 129 (5), 823-826 (1984).</li><li>Wheeldon, E. B., Podolin, P. L., Mirabile, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+Macrophage+Distribution+in+a+Mouse+Model:+The+Importance+of+the+Fixation+Method.">Alveolar Macrophage Distribution in a Mouse Model: The Importance of the Fixation Method.</a> Toxicologic Pathology. 43 (8), 1162-1165 (2015).</li><li>Matulionis, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+deformation+and+macrophage+displacement+in+smoke-exposed+and+normal+mice+(Mus+musculus)+following+different+fixation+procedures.">Lung deformation and macrophage displacement in smoke-exposed and normal mice (Mus musculus) following different fixation procedures.</a> Virchows Archiv. A, Pathological Anatomy and Histopathology. 410 (1), 49-56 (1986).</li><li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rodents.">Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents.</a> JoVE (Journal of Visualized Experiments). (65), e3564 (2012).</li><li>Crosfill, M. L., Widdicombe, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+characteristics+of+the+chest+and+lungs+and+the+work+of+breathing+in+different+mammalian+species.">Physical characteristics of the chest and lungs and the work of breathing in different mammalian species.</a> The Journal of Physiology. 158 (1), 1-14 (1961).</li><li>Ramos-Vara, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+and+Methods+of+Immunohistochemistry.">Principles and Methods of Immunohistochemistry.</a> Drug Safety Evaluation: Methods and Protocols. , 115-128 (2017).</li></ol>

Hoewel vaak gebruikt, verdringen intratracheale fixatiemethoden leukocyten uit de luchtwegen en kunnen ze de normale longarchitectuur veranderen. De methode van luchtinflatie met vasculaire perfusie-fixatie die in dit protocol wordt gegeven, overwint deze valkuilen en behoudt nauwkeuriger de longanatomie. De sleutels tot het verkrijgen van hoogwaardig weefsel uit de vasculaire perfusie-fixatiemethode omvatten zorgvuldige monitoring van luchtinflatiedrukken, het vermijden van luchtlekken en het zorgen voor een adequate pe...

Longhestologie vertegenwoordigt de gouden standaard voor het beoordelen van longarchitectuur tijdens gezondheid en ziekte en is een van de meest gebruikte hulpmiddelen door longonderzoekers1. Een van de meest kritische aspecten van deze techniek is de juiste isolatie en behoud van longweefsel, omdat variabiliteit in deze stap kan leiden tot slechte weefselkwaliteit en onjuiste resultaten1,2,3. Bij levende dieren wordt het longvolume bepaald door de balans tussen de naar binnen gerichte elastische terugslag van de long en de naar buiten gerichte krachten die door de borstwand en het middenrif worden overgedragen door oppervlaktespanning. Dienovereenkomstig, wanneer de thorax wordt binnengegaan, gaan de uiterlijke krachten verloren en klapt de long in. Histologische secties bereid uit ingeklapte longen hebben een druk uiterlijk en grenzen tussen anatomische compartimenten (d.w.z. luchtruimen, vasculatuur en interstitium) kunnen moeilijk te onderscheiden zijn. Om deze uitdaging te omzeilen, blazen onderzoekers vaak de longen op tijdens chemische fixatie, zodat de grootte en architectuur van het luchtruim behouden blijven.
Longen kunnen worden opgeblazen met lucht of vloeistof. De druk die nodig is om de longen tot hetzelfde volume op te blazen, verschilt tussen lucht- en vloeistofinflatie als gevolg van intermoleculaire krachten op het lucht-vloeistofinterface. Hogere druk (bijv. 25 cmH2O) is vereist tijdens luchtinflatie dan vloeistofinflatie (bijv. 12 cmH2O) om oppervlaktespanning te overwinnen en de ingeklapte longblaasjes te openen4. Zodra longblaasjes zijn gerekruteerd, kan een lagere druk de longblaasjes openhouden tot hetzelfde volume als de druk-volumecurveplateaus, en de druk egaliseert in de hele long volgens de wet van Pascal4,5,6,7,8.
Er bestaan twee belangrijke methoden voor longinflatie en fixatie om muizenlongen te behouden voor histologie. Meestal zijn de luchtruimen doordrongen van vloeistof - vaak met een fixatief. Het grote voordeel van deze aanpak is dat het relatief eenvoudig is en weinig training vereist. Hoewel intratracheale instillatie van fixatief de voorkeur kan hebben in studies die zich richten op de vasculatuur, heeft vloeistof die via de luchtpijp wordt ingebracht de neiging om proximale luchtwegcellen en mucines in meer distale luchtruimgebieden te duwen, terwijl luchtinflatie niet1,3,4,9,10,11. Bovendien verandert onbedoelde onthechting van leukocyten van het epitheel tijdens vloeibare inflatie hun morfologie, waardoor ze artefactueel een eenvoudig, afgerond uiterlijk krijgen4,10,11,12. Ten slotte kan inflatie van de longen met vloeistof onbedoeld het interstitium4,10,11comprimeren. Samen kunnen deze factoren de normale anatomie en cellulaire verdelingen in de bewaarde longen verstoren, waardoor de techniek wordt beperkt.
Een alternatieve methode voor weefselbehoud is vasculaire perfusie-fixatie. Bij deze methode wordt fixatief via de vena cava of de rechter ventrikel in de pulmonale vasculatuur geperfundeerd. Deze methode behoudt de locatie en morfologie van cellen in het luchtruim lumen. Tenzij de longen echter worden opgeblazen tijdens perfusiefixatie, zal het longweefsel waarschijnlijk instorten.
Luchtinflatie met vasculaire perfusie-fixatie maakt gebruik van sterke punten van elk van de bovenstaande fixatietechnieken. Hierin geven we een protocol voor deze techniek. De benodigde materialen en apparatuur zijn relatief goedkoop en kunnen eenvoudig worden verkregen en gemonteerd. De voltooide opstelling, weergegeven in figuur 1A,zorgt voor een constante luchtwegdruk op de longen door middel van een verstelbare, met vloeistof gevulde kolom, terwijl een peristaltische pomp fixatief levert via de rechter ventrikel. Longen met geconserveerde morfologie kunnen dan verder worden verwerkt voor structuur-functieanalyses.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>00117XF-Stopcock 1 way 100/PK M Luer</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>Mfr # VPB1000050N &#8211; Item # EW-00117-XF</td>
			<td>Stopcock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 60 mL syringe, slip tip</td>
			<td>BD</td>
			<td>309654</td>
			<td>Syringe used to construct the water column</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle 25G x 5/8</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>305122</td>
			<td>Needle for vascular perfusion/fixation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Female Luer Thread Style Panel Mount 1/4-28 UNF to Male Luer</td>
			<td>Nordson Medical</td>
			<td>FTLLBMLRL-1</td>
			<td>Female Luer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3393</td>
			<td>Heparin solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luer-Stub Adapter BD Intramedic 20 Gauge</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>427564</td>
			<td>Luer-Stub Adapter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Male Luer (2) to Female Luer Thread Style Tee</td>
			<td>Nordson Medical</td>
			<td>LT787-9</td>
			<td>Male Luer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene 180 Clear Plastic PVC Tubing</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>8000-9020</td>
			<td>Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde Aqueous Solution - 32%</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>15714-S</td>
			<td>Fixative solution. Diluted to 4% with phosphate buffered saline</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permatex Ultra Blue Multipurpose RTV Silicone Gasket Maker</td>
			<td>Permatex</td>
			<td>81724</td>
			<td>Silicone Gasket Maker for air-tight sealing of chambers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline, 1x Without Calcium and Magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td>Bottle used to construct the air-inflation chamber, and buffer used for heparin and fixative solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilite Ultra Seal 16.0 cup rectangle food storage container</td>
			<td>Sterilite</td>
			<td>0342</td>
			<td>Animal processing container</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

air-inflation of murine lungs with vascular perfusion-fixation

Longhestologie wordt vaak gebruikt om de bijdragen van luchtruimcellen tijdens longhomeostase en pathogenese van ziekten te onderzoeken. Veelgebruikte fixatiemethoden op basis van instillatie kunnen echter luchtruimcellen en slijm in terminale luchtwegen verplaatsen en de weefselmorfologie veranderen. Ter vergelijking: vasculaire perfusie-fixatietechnieken zijn superieur in het behoud van de locatie en morfologie van cellen in luchtruimen en de mucosale bekleding. Als positieve luchtwegdruk echter niet tegelijkertijd wordt toegepast, kunnen delen van de longen instorten en kunnen haarvaten uitpuilen in de alveolaire ruimtes, wat leidt tot vervorming van de longanatomie. Hierin beschrijven we een goedkope methode voor luchtinflatie tijdens vasculaire perfusie-fixatie om de morfologie en locatie van luchtweg- en alveolaire cellen en interstitium in muizenlongen te behouden voor downstream histologische studies. Constante luchtdruk wordt via de luchtpijp aan de longen afgegeven vanuit een afgesloten, met lucht gevulde kamer die de druk handhaaft via een instelbare vloeistofkolom terwijl het fixatief door de rechter ventrikel wordt geperfundeerd.

In een intacte thorax worden de longen opengehouden door naar buiten gerichte krachten die door de borstwand worden uitgeoefend via de pleurale ruimte6,14. Wanneer het diafragma tijdens de dissectie wordt betreden, wordt de integriteit van de pleurale ruimte opgeheven en moeten de longen instorten (Figuur 2A, 2B). Om de longen opnieuw uit te zetten, wordt luchtinflatie uitgevoerd. Als eerste stap wordt 25 cm waterdru...

Watch this Scientific Journal Video about Air-Inflation of Murine Lungs with Vascular Perfusion-Fixation at JoVE.com

Air-Inflation of Murine Lungs with Vascular Perfusion-Fixation

Gepresenteerd is een methode voor luchtinflatie met vasculaire perfusie-fixatie van de longen die de locatie van cellen in luchtwegen, longblaasjes en interstitium behoudt voor structuur-functieanalyses. Constante luchtwegdruk wordt gehandhaafd met een luchtinflatiekamer, terwijl fixatief wordt toegediend via de rechter ventrikel. Longen worden verwerkt voor histologische studies.

Luchtinflatie van muizenlongen met vasculaire perfusie-fixatie

Lung histology is often used to investigate the contributions provided by airspace cells during lung homeostasis and disease pathogenesis. However, ...

Dit is een goedkope methode die de voordelen van luchtinflatie en vasculaire perfusiefixatie combineert voor het behoud van longen voor structurele en functionele analyses. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is het behoud van zowel celmorfologie als locatie binnen het luchtruim van de long. Voorzichtigheid is het nodig om de lokstempadapter in de luchtpijp en de perfusiesnaald in de rechterkamer te plaatsen om voldoende inflatie en fixatie te garanderen.Om het luchtinflatieapparaat in te stellen, plaatst u een spuit voor de waterkolom in een ringhouder en meet u een verticale hoogte van 25 centimeter van het dierenplatform tot 25 centimeter op de waterkolom. Bevestig aan het uiteinde van de waterkolombuis aan de stopkraan op de luchtkamer en bevestig een buis van het vrouwelijke kunstaas van de luchtkamer aan de stopkraan op de dierverwerkingscontainer. Controleer of de dop naar de luchtkamer en de stopkraan aan de buitenkant van de dierverwerkingscontainer gesloten zijn en dat de stopkraan op de buis die van de waterkolom naar de luchtinflatiekamer leidt, open is.Vul vervolgens de spuit met water tot de 25 centimeter markering. Water zal door de spuit en slang in de luchtkamer stromen. Zodra de druk is gelijk gemaakt, zal het water stoppen met stromen.Om de longen voor te bereiden op inflatie, maakt u één laterale incisie in de buikwand onder de ribbenkast van de geëuthanaseerde muis en een tweede laterale buikwandincisie boven de heupen. Knip langs de middellijn van de insnijding naar de superieure incisie en gebruik een stompe schaar om voorzichtig een incisie in de laterale kant van het diafragma te maken. De longen moeten instorten zodra het middenrif wordt doorboord.Snijd dwars langs het diafragma om de thoracale holte te openen en snijd superieur langs het borstbeen van het xiphoid-proces naar de jongleureping en zijdelings boven de ribbenkast om het hart en de longen volledig bloot te leggen. Pin de zijkanten van de ribbenkast vast en maak een middellijnincisie in de nek, boven de luchtpijp. Verwijder de huid, spier, schildklier en bindweefsel rond de luchtpijp en gebruik een gebogen tang om twee stukjes hechtdraad onder de achterste luchtpijp te schuiven.Gebruik een stuk hechtdraad om de opblaasstompadapter op zijn plaats te houden en gebruik een naald van 18 meter bij één inch om een klein gaatje in de luchtpijp te maken. Steek een 20 gauge kunstaas stomp adapter in het gat en bind de hechtdraad rond de luchtpijp onmiddellijk distal naar waar de kunstaas stub adopter het gat binnenkomt. Breng het dier vervolgens over naar de dierverwerkingscontainer en bevestig de kunstaasstruikadapter aan het vrouwelijke kunstaas aan de binnenkant van de dierverwerkingscontainer.Om de longen op te blazen, plaatst u de naald van 25 meter bij 5/8 inch die is bevestigd aan de slang van het perfusieapparaat in de rechterkamer van het hart en snijdt u de abdominale aorta om bloed uit het hart te laten wegvloeien en om de stroom van perfusaat door de longen te bevorderen. Open de stopkraan aan de buitenkant van de dierverwerkingscontainer en blaas de longen gedurende vijf minuten op bij 25 centimeter water, terwijl u ervoor zorgt dat het waterniveau in de spuit niet te snel daalt. Schakel tijdens de laatste minuut van de longinflatie de peristaltische pomp in tot een debiet van 10 milliliter per minuut.Heparine-oplossing moet uit de fles door de slang in het dier stromen. Na het opblazen van de longen gedurende vijf minuten, zet u de pomp uit en schakelt u het perfusaat van heparine naar fixatief. Laat de spuit met waterkolom zakken tot 20 centimeter.Het is normaal dat luchtbellen in de waterkolom bewegen als de druk verandert. Controleer het waterniveau in de spuit. Het moet op het 25 centimeter-teken zijn.Wacht vervolgens een minuut om de longen te laten leeglopen van 25 tot 20 centimeter waterdruk voordat u de pomp opnieuw start met een stroomsnelheid van 6,5 milliliter per minuut gedurende 10 tot 15 minuten, vasculaire fixatieve perfusie. Voor extractie van het opgeblazen en vaste longweefsel bindt u het tweede stuk draad stevig rond de luchtpijp, distale naar de kunstaasstompadapter en verwijdert u de kunstaasstompadapter uit de luchtpijp. Verwijder de naald uit het hart en gebruik een stompe schaar om het bindweefsel, achteraan bij het mediastinum, te knippen om de longen en het hart uit de thoracale holte te bevrijden, zodat de longen niet worden doorboord.Verwijder voorzichtig het hart uit de longen en plaats de longen in 20 tot 25 milliliter fixatief in een conische buis van 50 milliliter. Trek de hechtdraad die de luchtpijp vasthoudt door de opening in de conische buis en zet de hechtdraad vast aan de draden van de dop. Keer vervolgens de buis om om ervoor te zorgen dat de drijvende, luchtopgeblazen longen volledig ondergedompeld blijven in fixatief en verwerk de longen voor histologische studies volgens standaardprotocollen.Wanneer het diafragma tijdens de dissectie wordt betreden, wordt de integriteit van de pleurale ruimte opgeheven en moeten de longen instorten. Bij het aanbrengen van 25 centimeter waterdruk komt lucht via de luchtpijp de longen binnen en moet inflatie gemakkelijk worden waargenomen. Zodra de longen volledig zijn uitgezet, kan de bandenspanning worden verlaagd tot 20 centimeter om de longen opgeblazen te houden zonder overdistensie.De longen moeten opgeblazen blijven na tracheale ligatie en verwijdering uit de thorax. Deflatie kan optreden als de longen worden doorboord tijdens de dierbereiding of longextractie. Histologische analyse van opgeblazen longsecties onthult dat zeer weinig immuuncellen aanwezig zijn in het luchtweglumen van weefsels die zijn gefixeerd met behulp van traditionele op vloeistof gebaseerde inflatie.Daarentegen worden ontstekingscellen bewaard in het luchtruim van weefsels die zijn gefixeerd via vasculaire perfusie met luchtinflatie. Na luchtinflatie met profusiefixatie kan longweefsel worden ingebed in formaline voor weefselsectie en daaropvolgende analyse via histologische technieken, waaronder kleuring, immunohistochemie en immunofluorescente beeldvorming.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Whole Animal Perfusion Fixation for Rodents

Hele Animal Perfusie Fixatie voor knaagdieren

The goal of fixation is to rapidly and uniformly preserve tissue in a life-like state. While placing tissue directly in fixative works well for small ...

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

Beoordeling van de Vasculaire Regeneratie in het CZS met de muis Retina

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

The Corneal Micropocket Assay: A Model of Angiogenesis in the Mouse Eye

De Cornea micropocket Analyse: Een model van angiogenese in de muis Eye

The mouse corneal micropocket assay is a robust and quantitative in vivo assay for evaluating angiogenesis. By using standardized slow-release pellets ...

Quantification of Cerebral Vascular Architecture using Two-photon Microscopy in a Mouse Model of HIV-induced Neuroinflammation

Kwantificering van cerebrale vasculaire architectuur met behulp van twee-foton microscopie in een muismodel van de HIV-geïnduceerde Neuroinflammation

Human Immunodeficiency Virus 1 (HIV-1) infection frequently results in HIV-1 Associated Neurocognitive Disorders (HAND), and is characterized by a chronic ...

Evaluation of Bioenergetic Function in Cerebral Vascular Endothelial Cells

Evaluatie van de Bio-energetische Function in Cerebral vasculaire endotheelcellen

The integrity of the blood-brain-barrier (BBB) is critical to prevent brain injury. Cerebral vascular endothelial (CVE) cells are one of the cell types ...

Retinal Vascular Reactivity as Assessed by Optical Coherence Tomography Angiography

Retinale vasculaire reactiviteit zoals beoordeeld door optische coherentie tomografie Angiografie

The vascular supply to the retina has been shown to dynamically adapt through vasoconstriction and vasodilation to accommodate the metabolic demands of ...

Preparation of Acute Human Hippocampal Slices for Electrophysiological Recordings

Voorbereiding van acute menselijke hippocampal slices voor elektrofysiologische opnames

Epilepsy affects about 1% of the world population and leads to a severe decrease in quality of life due to ongoing seizures as well as high risk for ...

Analysis of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage with High Frequency Transcranial Duplex Ultrasound

Analyse van cerebrale vasospasme in een murien model van subarachnoïdale bloeding met hoogfrequente transcraniële duplex echografie

Cerebral vasospasm that occurs in the weeks after subarachnoid hemorrhage, a type of hemorrhagic stroke, contributes to delayed cerebral ischemia. A ...

Quantification of Vascular Parameters in Whole Mount Retinas of Mice with Non-Proliferative and Proliferative Retinopathies

Kwantificering van vasculaire parameters in whole mount retinas van muizen met niet-proliferatieve en proliferatieve retinopathieën

Retinopathies are a heterogeneous group of diseases that affect the neurosensory tissue of the eye. They are characterized by neurodegeneration, ...

Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents

Volledige cirkel Cauterisatie van limbale vasculaire plexus voor chirurgisch geïnduceerd glaucoom bij knaagdieren

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic ...