Name: circulating tumor cell lines: an innovative tool for fundamental and translational research
Uploaded: 2021-12-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Circulating Tumor Cell Lines: an Innovative Tool for Fundamental and Translational Research at JoVE.com

Dit onderzoeksproject in het Pannequin lab werd ondersteund door een onderzoekssubsidie van het SIRIC: Grant « INCa-DGOS-Inserm 6045 ». De proefschriften van Guillaume Belthier en Zeinab Homayed werden ondersteund door de anti-kanker liga/Ligue contre le Cancer. Het salaris van Céline Bouclier werd gefinancierd door "regio Occitanie". Met dank aan Julian Venables voor de Engelse redactie.

Alle in vivo protocollen werden goedgekeurd door de dierenethische instanties.
1. CTC-versterking in 3D-cultuuromstandigheden
<ol><li>Om CTC's in suspensie te kweken, eerste zaad CTC's in putten van een Ultra-Low Attachment (ULA) 24-well plaat bij de maximale concentratie van 5 cellen / μL en in 1 ml M12-medium (d.w.z. geavanceerde DMEM-F12 aangevuld met 2 mM l-glutamine, 100 eenheid / ml penicilline en streptomycine, N2-supplement, 20 ng / ml epidermale groeifactor en 10 n...

<ol>
	<li>Wittekind, C., Neid, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+invasion+and+metastasis.">Cancer invasion and metastasis.</a> Oncology. 69, 14-16 (2005).</li><li>Eger, A., Mikulits, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+epithelial-mesenchymal+transition.">Models of epithelial-mesenchymal transition.</a> Drug Discovery Today: Disease Models. 2, 57-63 (2005).</li><li>Palmirotta, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+biopsy+of+cancer:+a+multimodal+diagnostic+tool+in+clinical+oncology.">Liquid biopsy of cancer: a multimodal diagnostic tool in clinical oncology.</a> Therapeutic Advances in Medical Oncology. 10, (2018).</li><li>Hong, B., Zu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detecting+circulating+tumor+cells:+current+challenges+and+new+trends.">Detecting circulating tumor cells: current challenges and new trends.</a> Theranostics. 3, 377-394 (2013).</li><li>vander Toom, E. E., Verdone, J. E., Gorin, M. A., Pienta, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technical+challenges+in+the+isolation+and+analysis+of+circulating+tumor+cells.">Technical challenges in the isolation and analysis of circulating tumor cells.</a> Oncotarget. 7, 62754-62766 (2016).</li><li>Jin, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+diagnostic+value+of+circulating+tumor+cells+with+CytoSorter&#174;+CTC+capture+system+in+patients+with+breast+cancer.">Evaluation of the diagnostic value of circulating tumor cells with CytoSorter&#174; CTC capture system in patients with breast cancer.</a> Cancer Medicine. 9, 1638-1647 (2020).</li><li>Huang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+between+circulating+tumor+cells+and+tumor+response+in+colorectal+cancer+patients+treated+with+chemotherapy:+a+meta-analysis.">Relationship between circulating tumor cells and tumor response in colorectal cancer patients treated with chemotherapy: a meta-analysis.</a> BMC Cancer. 14, 976 (2014).</li><li>Yu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+culture+of+circulating+breast+tumor+cells+for+individualized+testing+of+drug+susceptibility.">Ex vivo culture of circulating breast tumor cells for individualized testing of drug susceptibility.</a> Science. 345, 216-220 (2014).</li><li>Aceto, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+Tumor+Cell+Clusters+are+Oligoclonal+Precursors+of+Breast+Cancer+Metastasis.">Circulating Tumor Cell Clusters are Oligoclonal Precursors of Breast Cancer Metastasis.</a> Cell. 158, 1110-1122 (2014).</li><li>Grillet, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumour+cells+from+patients+with+colorectal+cancer+have+cancer+stem+cell+hallmarks+in+ex+vivo+culture.">Circulating tumour cells from patients with colorectal cancer have cancer stem cell hallmarks in ex vivo culture.</a> Gut. 66, 1802-1810 (2017).</li><li>Lee, W. Y., Hong, H. K., Ham, S. K., Kim, C. I., Cho, Y. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Colorectal+Cancer+in+Differentially+Established+Liver+Metastasis+Models.">Comparison of Colorectal Cancer in Differentially Established Liver Metastasis Models.</a> Anticancer Research. 34, 3321-3328 (2014).</li><li>Giraud, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progastrin+production+transitions+from+Bmi1+/Prox1++to+Lgr5high+cells+during+early+intestinal+tumorigenesis.">Progastrin production transitions from Bmi1+/Prox1+ to Lgr5high cells during early intestinal tumorigenesis.</a> Translational Oncology. 14, (2020).</li><li>Xu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+and+Evaluation+of+a+Novel+Size+Based+Circulating+Tumor+Cell+Isolation+System.">Optimization and Evaluation of a Novel Size Based Circulating Tumor Cell Isolation System.</a> PLoS One. 10, 0138032 (2015).</li><li>Beije, N., Jager, A., Sleijfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+tumor+cell+enumeration+by+the+CellSearch+system:+the+clinician's+guide+to+breast+cancer+treatment.">Circulating tumor cell enumeration by the CellSearch system: the clinician's guide to breast cancer treatment.</a> Cancer Treatment Reviews. 41, 144-150 (2015).</li><li>Karabacak, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic,+marker-free+isolation+of+circulating+tumor+cells+from+blood+samples.">Microfluidic, marker-free isolation of circulating tumor cells from blood samples.</a> Nature Protocols. 9, 694-710 (2014).</li><li>Ozkumur, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inertial+Focusing+for+Tumor+Antigen-Dependent+and+-Independent+Sorting+of+Rare+Circulating+Tumor+Cells.">Inertial Focusing for Tumor Antigen-Dependent and -Independent Sorting of Rare Circulating Tumor Cells.</a> Science Translational Medicine. 5, (2013).</li></ol>

Het hierboven beschreven protocol werd aanvankelijk gebruikt voor colorectale CTC functionele karakterisering, maar het kan worden gebruikt voor andere soorten kanker zoals borstkanker en kan worden aangepast voor muismodellen.
De echte beperkende factor is het aantal CTC's in het bloedmonster en de efficiëntie van de techniek die wordt gebruikt om ze te isoleren en uit te breiden. Verschillende CTC-isolatietechnieken zijn beschreven op basis van specifieke CTC-eigenschappen zoals de Parsorti...

Ondanks recente verbeteringen in vroege kankerdiagnose en in therapeutische strategie, is meer dan negentig procent van de kankermorbiditeit nog steeds te wijten aan metastase1. Het metastatische proces is een cascade van meerdere stappen die begint met de lokale loslating van cellen van de primaire tumor en hun toegang tot de bloedbaan waar ze circulerende tumorcellen (CTC's) worden om uiteindelijk verre locaties zoals lever en longen te koloniseren, in het geval van colorectale kanker (CRC)2. Onlangs is er een groeiende aandacht voor vloeibare biopsieën, die een niet-invasief hulpmiddel zijn om met name CTC's uit bloedmonsters van patiënten te detecteren en op te sommen. Intratumor genetische heterogeniteit is een belangrijke oorzaak van resistentie tegen geneesmiddelen; het isoleren van representatieve cellen uit tumormateriaal vormt dus een veelbelovend hulpmiddel voor gepersonaliseerde geneeskunde3.
Ondanks de lage frequentie van CTC's in het bloed (1 CTC per 106 - 107 leukocyten)4, werden verschillende detectie- en isolatietechnieken ontwikkeld op basis van eigenschapsverschillen tussen CTC's en andere componenten van het bloed5. Het aantal CTC's in bloedmonsters van patiënten kan alleen al informatie geven over het stadium van maligniteit, behandelingsrespons en ziekteprogressie6,7. CTC-isolatie is dus een cruciaal hulpmiddel voor translationele studies om genetische heterogeniteit te beoordelen of geneesmiddelenscreening uit te voeren, evenals voor fundamentele studies om deze invasieve cellen te karakteriseren, omdat zij de belangrijkste actoren zijn van gemetastaseerde inductie8,9. Inderdaad, vergeleken met commercieel gevestigde kankercellijnen die in de loop van de tijd duizenden mutaties hebben verzameld, delen verse CTC's de belangrijkste kenmerken van de oorspronkelijke primaire tumor, waaronder een krachtig vermogen om te metastaseren, en ze zijn een betere weerspiegeling van de ziekte. Deze kenmerken maken ze een robuust hulpmiddel voor fundamentele studies, vooral in knock-out experimenten van voorspelde sleutelfactoren die betrokken zijn bij metastase. De uitkomst van deze experimenten kan in vivoworden gevalideerd , op muizen, zoals hieronder beschreven.
Zodra CTC's zijn geïsoleerd, kunnen ze worden uitgebreid in niet-adherente kweekomstandigheden en vervolgens kunnen ze worden gemanipuleerd, net als elke beschikbare kankercellijn, d.w.z. ze kunnen ook worden gekweekt in aanhankelijke omstandigheden of ingebed in Matrigel, afhankelijk van de wetenschappelijke vraag10. Om bijvoorbeeld de expressie en lokalisatie van een interessant eiwit te testen, kunnen CTC-bollen in suspensieconditie worden gekweekt en in Histogel worden ingebed om immunofluorescentie op bolsecties uit te voeren. Bovendien, als het eiwit vliezig is, kan de expressie ervan op levende cellen worden gemeten door cytometrie.
Voor functionele studies, om de rol van een eiwit van belang te testen dat een rol kan spelen bij leverkolonisatie, kunnen CTC's met genen bewerkt, door shRNA of CRISPR / Cas9, worden geïnjecteerd in de milt van immunodeficiënte muizen. Dit laatste experiment is een krachtig model om levermetastasekolonisatie na te bootsen11.
Het vermogen van CTC's om tumoren te initiëren kan worden beoordeeld door een zeer klein aantal cellen in immuno-deficiënte muizen te injecteren. Aangezien tumorinitiatie een kenmerk is van kankerstamcellen (CSC's), zal deze test het percentage CSC's binnen CTC-lijnen aangeven. Dit stamcelfenotype maakt circulerende tumorcellijnen resistent tegen sommige goudstandaard kankertherapieën. Uitgebreide CTC's kunnen daarom worden gebruikt om geneesmiddelen te screenen en de beste potentiële efficiënte behandeling voor de patiënt te bepalen; CTC-respons op de behandeling kan bijvoorbeeld in vitro worden getest met behulp van een luminescentie-levensvatbaarheidstest.
In een langetermijnperspectief kan geneesmiddelenscreening op vers geïsoleerde en versterkte CTC's worden gebruikt als een nieuw hulpmiddel voor gepersonaliseerde geneeskunde om te helpen bij het kiezen van de meest efficiënte en aangepaste behandeling voor patiënten.
In dit artikel worden protocollen voor het kweken van CTC-lijnen, voor het kleuren van specifieke eiwitten via immunostaining en cytometrie, voor het uitvoeren van cytotoxiciteitstests en in vivo xenograftexperimenten met CTC gedetailleerd beschreven.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Accumax solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F-12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12634028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G7570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Matrigel Growth Factor Reduced (GFR) Basement Membrane Matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>354230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Costar 24-well Clear Flat Bottom Ultra-Low Attachment Multiple Well Plates,</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3473</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histiogel Specimen Medium</td>
			<td>LabStorage</td>
			<td>HG-4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human EGF, premium grade</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-097-751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human FGF-2, premium grade</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-564</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (200 mM)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (5,000 U/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15070063</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

circulating tumor cell lines: an innovative tool for fundamental and translational research

Metastase is een belangrijke doodsoorzaak van kanker. Ondanks verbeteringen in behandelingsstrategieën heeft uitgezaaide kanker een slechte prognose. We worden dus geconfronteerd met een dringende behoefte om de mechanismen achter de ontwikkeling van metastase te begrijpen en zo efficiënte behandelingen voor gevorderde kanker voor te stellen. Gemetastaseerde kankers zijn moeilijk te behandelen, omdat biopsieën invasief en ontoegankelijk zijn. Onlangs is er veel belangstelling geweest voor vloeibare biopsieën, waaronder zowel celvrij circulerend desoxyribonucleïnezuur (DNA) als circulerende tumorcellen uit perifeer bloed en we hebben verschillende circulerende tumorcellijnen van gemetastaseerde colorectale kankerpatiënten vastgesteld om deel te nemen aan hun karakterisering. Inderdaad, om deze zeldzame en slecht beschreven cellen functioneel te karakteriseren, is de cruciale stap om ze uit te breiden. Eenmaal vastgesteld, kunnen circulerende tumorcellijnen (CTC) vervolgens worden gekweekt in suspensie of aanhankelijke omstandigheden. Op moleculair niveau kunnen CTC-lijnen verder worden gebruikt om de expressie van specifieke markers van belang (zoals differentiatie, epitheliale of kankerstamcellen) te beoordelen door immunofluorescentie of cytometrie-analyse. Bovendien kunnen CTC-lijnen worden gebruikt om de gevoeligheid van geneesmiddelen voor chemotherapieën met een gouden standaard en voor gerichte therapieën te beoordelen. Het vermogen van CTC-lijnen om tumoren te initiëren kan ook worden getest door subcutane injectie van CTC's in immunodeficiënte muizen.
Ten slotte is het mogelijk om de rol van specifieke genen van belang die betrokken kunnen zijn bij de verspreiding van kanker te testen door CTC-genen te bewerken, door korte haarspeld ribonucleïnezuur (shRNA) of Crispr / Cas9. Gemodificeerde CTC's kunnen dus worden geïnjecteerd in immunodeficiënte muizenpleten, om experimenteel een deel van het metastatische ontwikkelingsproces in vivona te bootsen.
Kortom, CTC-lijnen zijn een kostbaar hulpmiddel voor toekomstig onderzoek en voor gepersonaliseerde geneeskunde, waar ze voorspelling van de efficiëntie van de behandeling mogelijk maken met behulp van de cellen die oorspronkelijk verantwoordelijk zijn voor metastase.

Zowel EpCAM- als CD26-expressies waargenomen door respectievelijk IF(Figuur 1A rechterpaneel)en FACS(Figuur 1B)geven aan dat de CTC-lijn epitheelachtig is en een van de CSC-kenmerken10vertoont. Deze epitheliale eigenschap kan verder worden gekenmerkt door kleuring met antilichamen gericht tegen andere epitheliale en mesenchymale markers. Daardoor zou het mogelijk kunnen zijn om ongeveer te weten waar de CTC-lijn zich lang...

Watch this Scientific Journal Video about Circulating Tumor Cell Lines: an Innovative Tool for Fundamental and Translational Research at JoVE.com

Circulating Tumor Cell Lines: an Innovative Tool for Fundamental and Translational Research

Het kweken van CTC's maakt een diepere functionele karakterisering van kanker mogelijk, door specifieke markerexpressie te testen en resistentie tegen geneesmiddelen en het vermogen om de lever te koloniseren te beoordelen, naast andere mogelijkheden. Over het algemeen zou de CTC-cultuur een veelbelovend klinisch hulpmiddel kunnen zijn voor gepersonaliseerde geneeskunde om de uitkomst van de patiënt te verbeteren.

Circulerende tumorcellijnen: een innovatief hulpmiddel voor fundamenteel en translationeel onderzoek

Metastasis is a leading cause of cancer death. Despite improvements in treatment strategies, metastatic cancer has a poor prognosis. We thus face an ...

Metastase is een belangrijke oorzaak van kankergerelateerde sterfgevallen. Dit fenomeen treedt op wanneer kankercellen zich losmaken van de primaire tumor, in de bloedcirculatie gaan om uiteindelijk een ver doelorgaan te bereiken. Zodra deze losgemaakte cellen in het bloed gaan, noemen we ze secundaire tumorcellen.Ze vertegenwoordigen een variabel materiaal omdat ze aan de ene kant de belangrijkste boosdoener zijn van metastasevorming en aan de andere kant zijn ze gemakkelijker dan tumorbiopten. Inderdaad, ze kunnen worden verzameld door een eenvoudige bloedpunctie. Ondanks het lage aantal van deze cellen in het bloedmonster, zijn we de eersten die verschillende circulerende tumorcellijnen uit het bloed van de patiënt met grotere bezorgdheid vaststellen met behulp van de 3D-gecontroleerde aandoening.Deze cellijn kan op elke commerciële cellijn worden gebruikt voor routine-experimenten. Bijvoorbeeld voor genetische geneesmiddelenscreening, voor eiwit van belang, maar ook voor in vivo experimenten om het tumorinitiatievermogen en hun metastatische potentieel te testen. CTC, circulerende tumorcellijnen, moet worden gekweekt in 3D-omstandigheden bij hypoxie.Zodra CTC bollen heeft gevormd, kunnen we het in het medium plaatsen en het gedurende vijf minuten centrifugeren bij 300 RCF. Gooi het supernatant weg en voeg 500 microliter Accumax toe. We hangen er een op en incuberen de oplossing 20 minuten bij 37 graden.Was vervolgens gedissocieerde bollen met PBS en pellet de cellen. Resuspend de pellet met een vers aangevuld DMEM/F12 en zie de cellen met de dichtheid van vijf cellen per microliter in een nieuwe 24 Low Attachment plaat. Centrifuge CTC-bolletjes elimineren het supernatant en wassen de pellet twee keer met PBS.Meng bij 500 microliter PFE goed en incubeer de tube gedurende 20 minuten op ijs. Centrifugeer vervolgens de vaste bollen en was de pellet twee keer met PBS, elimineer het maximale volume PBS en voeg 20 microliter gevormde HistoGel toe. Neem het in suspensie en maak een druppel op de kweekvaas, laat het 10 minuten drogen en maak het los met een scalpel.U kunt nu voor elke gewenste proces om CTC's te richten op een gewenst eiwit van belang. Verzamel CTC's en dissocieer de bollen met Accumax zoals eerder beschreven. Elimineer de Accumax en resuspend de pellet met drie ml blokkerende buffer en breng de suspensie over door een celzeef van 14 micrometer om een eencellige oplossing te verkrijgen.Tel de cellen en verzend in buizen en voeg een volume van 200.000 cellen toe, centrifugeer de buizen en gooi het supernatant weg. Voeg volgens het antilichaamgegevensblad in een buis het gewenste volume van het antilichaam en in een andere buis het isotype toe en vervolg de stappen volgens de richtlijnen van de fabrikant. De resterende buis wordt niet gelabeld en het gebruik van een levensvatbaarheidsmarkt wordt sterk aanbevolen in dit experiment.Begin op de cytometer met de niet-gelabelde buis om de spanning in het negatief gelabelde gebied in te stellen. Plaats hierna de isotypebuis. Het isotype zou dienen als een negatieve controle om onderscheid te maken tussen het positieve signaal en het niet-specifieke signaal.En voltooi het experiment met de gelabelde cellen met het antilichaam van belang waar je een verschuiving in de positief gelabelde poort zou moeten zien, als het eiwit van belang wordt uitgedrukt. Deze suspensie gedissocieerde CTC's in aangevuld medium met een dichtheid van 200.000 cellen per ml. In een Ultra Low attachment 96, putplaat, sluit het volume van 50 microliter af en incubeer de plaat 24 uur bij hypoxie.Voeg de volgende dag 50 microliter van verschillende concentraties van het geteste medicijn toe en voeg hetzelfde volume DMEM / F12 toe om de basis van cellulaire levensvatbaarheid verder te bepalen en de plaat nog eens 48 uur te incuberen. Reconstitueer op dag drie het middel en voeg 70 microliter van het mengsel toe aan elke put. Leg de plaat gedurende 20 minuten op een orbitale shaker en meet vervolgens de luminescentie.Deze test is een nuttig hulpmiddel om een groot aantal geneesmiddelen te testen om hun effecten op de celgroei van CTC te evalueren. In Eppendorf knijpen resuspend cellen in 100 microliter PBS in de huid op de achterkant van de muis en brengen de naald onder de huid in. Injecteer langzaam het hele volume op dezelfde plek en controleer de tumorgroei om de tweede dag en offerde de muizen op als de tumor een grootte van 1,5 kubieke centimeter overschreed.Injecteer voorafgaand aan de operatie subcutaan een pijnstiller, aan de dorsale ventrale kant van de muis, doe een kleine incisie onder de 10e rib. Til de milt voorzichtig op en leg hem op een steriel gaasje. Injecteer met behulp van een insulinespuit 50 microliter geresuspendeerde CTC's in PBS en wacht drie minuten zonder de naald te verwijderen.Ligate het arteriële vat van de ene kant en het venale vat van de andere kant. Verwijder vervolgens de milt door direct boven de twee ligaturen te snijden. Steek het buikvlies en de huid en desinfecteer het gebied goed.Het doel van dit experiment is om de capaciteit van CTC's afgeleid van colorectale kankerpatiënt te testen om de lever te koloniseren door het induceren van, zichtbare gemetastaseerde vooruitziendheid. Het isoleren en vaststellen van de tumorcellijn van de kliniek is een opkomend hulpmiddel voor zowel fundamentele als translationele studies. Als u bijvoorbeeld een interessant gen hebt waarbij de in vivo studies hebben aangetoond dat dit gen betrokken is bij migratie en invasiecapaciteit van colorectale kankercellijnen, kan het uitschakelen van dit gen in circulerende tumorcellijnen voorafgaand aan de injectie in de milt van muizen, om ze de lever te laten koloniseren een goed hulpmiddel zijn om uw resultaat in vivo te bevestigen.Voor translationele studies is ons belangrijkste perspectief van het isoleren van circulerende tumorcellijnen het gebruik van dit kostbare materiaal in gepersonaliseerde geneeskunde. Uit de bloedmonsters van de patiënt zouden we CTC's gedurende twee of drie weken in cultuur isoleren en versterken om voldoende materiaal te hebben om het panel van geneesmiddelen dat beschikbaar is te screenen en de cytotoxiciteit ervan te beoordelen om uiteindelijk toe te schrijven

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Capture and Release of Viable Circulating Tumor Cells from Blood

Capture and Release van levensvatbare circulerende tumorcellen van Blood

We demonstrate a method for size based capture of viable circulating tumor cell (CTC) from whole blood, along with the release of these cells from chip ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolatie van circulerende tumorcellen in een orthotopische muismodel van colorectale kanker

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

The Establishment of a Lung Colonization Assay for Circulating Tumor Cell Visualization in Lung Tissues

De oprichting van een Long kolonisatie Assay voor het circulerende Tumor visualisatie van de cel in de weefsels van de longen

Metastasis is the major cause of cancer death. The role of circulating tumor cells (CTCs) in promoting cancer metastasis, in which lung colonization by ...

Characterization of Tumor Cells Using a Medical Wire for Capturing Circulating Tumor Cells: A 3D Approach Based on Immunofluorescence and DNA FISH

Karakterisering van tumorcellen met behulp van een medische draad voor het vastleggen van de circulerende tumorcellen: een 3D aanpak gebaseerd op immunofluorescentie en DNA vis

Circulating tumor cells (CTCs) are associated with poor survival in metastatic cancer. Their identification, phenotyping, and genotyping could lead to a ...

Paramyxoviruses for Tumor-targeted Immunomodulation: Design and Evaluation Ex Vivo

Paramyxovirussen voor Tumor-gerichte immunomodulatie: ontwerp en evaluatie Ex Vivo

Successful cancer immunotherapy has the potential to achieve long-term tumor control. Despite recent clinical successes, there remains an urgent need for ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patiënt-afgeleide Orthotopic xenograft modellen voor humaan Urotheelcelcarcinoom en colorectale kanker tumor groei en spontane metastasen

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Establishment and Characterization of Three Afatinib-resistant Lung Adenocarcinoma PC-9 Cell Lines Developed with Increasing Doses of Afatinib

Oprichting en karakterisering van drie Afatinib-resistente Long adenocarcinoom PC-9 cellijnen ontwikkeld met toenemende doses van Afatinib

Acquired resistance to molecular target inhibitors is a severe problem in cancer therapy. Lung cancer remains the leading cause of cancer-related death in ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Micromanipulatie van circulerende tumor cellen voor downstream moleculaire analyse en gemetastaseerde potentiële beoordeling

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Detection and Monitoring of Tumor Associated Circulating DNA in Patient Biofluids

Detectie en monitoring van tumor geassocieerd Circulerend DNA bij patiënt biovloeistoffen

Complications associated with upfront and repeat surgical tissue sampling present the need for minimally invasive platforms capable of molecular ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

Radio sensitiviteit van kanker stamcellen in longkanker cellijnen

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...