Name: sample preparation and transfer protocol for in-vacuum long-wavelength crystallography on beamline i23 at diamond light source
Uploaded: 2021-04-23T15:00:00
Duration: 10 min 32 s
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हम क्रायोजेनिक नमूना स्थानांतरण प्रणाली (सीटीएस) के विकास में उनके समर्थन के लिए एडम टेलर, एडम प्रेस्कॉट, केन जोन्स, अरविंदर पलाहा और केविन विल्किंसन को धन्यवाद देना चाहते हैं। इस काम को यूरोपीय आयोग के क्षितिज 2020 कार्यक्रम द्वारा वित्त पोषित iNEXT-Discovery (अनुदान 871037) द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

<ol>
	<li>Green, D. W., Ingram, V. M., Perutz, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+haemoglobin+-+IV.+Sign+determination+by+the+isomorphous+replacement+method.">The structure of haemoglobin - IV. Sign determination by the isomorphous replacement method.</a> Proceedings of the Royal Society of London. Series A. Mathematical and Physical Sciences. 225 (1162), 287 (1954).</li><li>Hendrickson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anomalous+diffraction+in+crystallographic+phase+evaluation.">Anomalous diffraction in crystallographic phase evaluation.</a> Quarterly Reviews of Biophysics. 47 (1), 49-93 (2014).</li><li>Pike, A. C., Garman, E. F., Krojer, T., von Delft, F., Carpenter, E. 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A., Wlodawer, A., Dauter, Z., Jaskolski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contemporary+use+of+anomalous+diffraction+in+biomolecular+structure+analysis.">Contemporary use of anomalous diffraction in biomolecular structure analysis.</a> Protein Crystallography. Methods in Molecular Biology. 1607, 377-399 (2017).</li><li>Rose, J. P., Wang, B. C., Weiss, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Native+SAD+is+maturing.">Native SAD is maturing.</a> IUCrJ. 2 (4), 431-440 (2015).</li><li>Rozov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+potassium+ions+for+ribosome+structure+and+function+revealed+by+long-wavelength+X-ray+diffraction.">Importance of potassium ions for ribosome structure and function revealed by long-wavelength X-ray diffraction.</a> Nature Communications. 10 (1), 2519 (2019).</li><li>Rocchio, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+dynamic,+partially+occupied+residues+using+anomalous+scattering.">Identifying dynamic, partially occupied residues using anomalous scattering.</a> Acta Crystallographica Section D: Structural Biology. 75 (12), 1084-1095 (2019).</li><li>Langan, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anomalous+X-ray+diffraction+studies+of+ion+transport+in+K++channels.">Anomalous X-ray diffraction studies of ion transport in K+ channels.</a> Nature Communications. 9 (1), 4540 (2018).</li><li>Lolicato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=K2p+channel+C-type+gating+involves+asymmetric+selectivity+filter+order-disorder+transitions.">K2p channel C-type gating involves asymmetric selectivity filter order-disorder transitions.</a> Science Advances. 6 (44), (2020).</li><li>Thorn, A., Sheldrick, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ANODE:+anomalous+and+heavy-atom+density+calculation.">ANODE: anomalous and heavy-atom density calculation.</a> Journal of Applied Crystallography. 44 (6), 1285-1287 (2011).</li><li>Handing, K. B., Niedzialkowska, E., Shabalin, I. G., Kuhn, M. L., Zheng, H., Minor, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterizing+metal-binding+sites+in+proteins+with+X-ray+crystallography.">Characterizing metal-binding sites in proteins with X-ray crystallography.</a> Nature Protocols. 13 (5), 1062-1090 (2018).</li><li>Jungnickel, K. E. J., Parker, J. L., Newstead, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+amino+acid+transport+by+the+CAT+family+of+SLC7+transporters.">Structural basis for amino acid transport by the CAT family of SLC7 transporters.</a> Nature Communications. 9 (1), 550 (2018).</li><li>Wagner, A., Duman, R., Henderson, K., Mykhaylyk, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-vacuum+long-wavelength+macromolecular+crystallography.">In-vacuum long-wavelength macromolecular crystallography.</a> Acta Crystallographica Section D: Structural Biology. 72 (3), 430-439 (2016).</li><li>Wernecke, J., Gollwitzer, C., M&#252;ller, P., Krumrey, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+an+in-vacuum+PILATUS+1M+detector.">Characterization of an in-vacuum PILATUS 1M detector.</a> Journal of Synchrotron Radiation. 21 (3), 529-536 (2014).</li><li>Kabsch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=XDS.">XDS.</a> Acta Crystallographica Section D: Biological Crystallography. 66 (2), 125-132 (2010).</li><li>Winter, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DIALS:+Implementation+and+evaluation+of+a+new+integration+package.">DIALS: Implementation and evaluation of a new integration package.</a> Acta Crystallographica Section D: Structural Biology. 74 (2), 85-97 (2018).</li><li>Brockhauser, S., Di Michiel, M., Mcgeehan, J. E., Mccarthy, A. A., Ravelli, R. B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-ray+tomographic+reconstruction+of+macromolecular+samples.">X-ray tomographic reconstruction of macromolecular samples.</a> Journal of Applied Crystallography. 41 (6), 1057-1066 (2008).</li><li>Kitano, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+of+membrane+protein+crystal+using+ultraviolet+laser+irradiation.">Processing of membrane protein crystal using ultraviolet laser irradiation.</a> Journal of Bioscience and Bioengineering. 100 (1), 50-53 (2005).</li><li>Mykhaylyk, V., Wagner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+long-wavelength+protein+crystallography:+Keeping+a+protein+crystal+frozen+in+vacuum.">Towards long-wavelength protein crystallography: Keeping a protein crystal frozen in vacuum.</a> Journal of Physics: Conference Series. 425 (1), 012010 (2013).</li><li>Snell, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+sample+mounting+and+alignment+system+for+biological+crystallography+at+a+synchrotron+source.">Automated sample mounting and alignment system for biological crystallography at a synchrotron source.</a> Structure. 12 (4), 537-545 (2004).</li><li>. The universal container project Available from: <a target="_blank" href="https://smb.slac.stanford.edu/robosync/Universal_Puck/">https://smb.slac.stanford.edu/robosync/Universal_Puck/</a> (2020)</li><li>Teng, T. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mounting+of+crystals+for+macromolecular+crystallography+in+a+freestanding+thin-film.">Mounting of crystals for macromolecular crystallography in a freestanding thin-film.</a> Journal of Applied Crystallography. 23, 387-391 (1990).</li><li>Esposito, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+basis+for+the+glycosyltransferase+activity+of+the+salmonella+effector+SseK3.">Structural basis for the glycosyltransferase activity of the salmonella effector SseK3.</a> Journal of Biological Chemistry. 293 (14), 5064-5078 (2018).</li><li>O'Donnell, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+architecture+of+EMC+reveals+a+path+for+membrane+protein+insertion.">The architecture of EMC reveals a path for membrane protein insertion.</a> eLife. 9, 57887 (2020).</li><li>Mishra, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+characterization+of+crimean-congo+hemorrhagic+fever+virus+GP38.">Structure and characterization of crimean-congo hemorrhagic fever virus GP38.</a> Journal of Virology. 94 (8), 02005-02019 (2020).</li><li>Rudolf, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+morphogen+sonic+hedgehog+inhibits+its+receptor+patched+by+a+pincer+grasp+mechanism.">The morphogen sonic hedgehog inhibits its receptor patched by a pincer grasp mechanism.</a> Nature Chemical Biology. 15 (10), 975-982 (2019).</li><li>El Omari, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pushing+the+limits+of+sulfur+sad+phasing:+De+novo+structure+solution+of+the+n-terminal+domain+of+the+ectodomain+of+hcv+e1.">Pushing the limits of sulfur sad phasing: De novo structure solution of the n-terminal domain of the ectodomain of hcv e1.</a> Acta Crystallographica Section D: Structural Biology. 70 (8), 2197-2203 (2014).</li><li>Winter, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=XIA2:+an+expert+system+for+macromolecular+crystallography+data+reduction.">XIA2: an expert system for macromolecular crystallography data reduction.</a> Journal of Applied Crystallography. 43 (1), 186-190 (2010).</li><li>Cowtan, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Buccaneer+software+for+automated+model+building.+1.+Tracing+protein+chains.">The Buccaneer software for automated model building. 1. Tracing protein chains.</a> Acta Crystallographica Section D: Structural Biology. 62 (9), 1002-1011 (2006).</li><li>Skubak, P., Pannu, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+protein+structure+solution+from+weak+X-ray+data.">Automatic protein structure solution from weak X-ray data.</a> Nature Communications. 4 (1), 2777 (2013).</li></ol>

वर्तमान प्रोटोकॉल बीमलाइन I23 पर इन-वैक्यूम लंबी तरंग दैर्ध्य एमएक्स प्रयोगों के लिए नमूना तैयारी आवश्यकताओं का अनुपालन करने के लिए विकसित किया गया है। यह पिछले एक साल से बीमलाइन पर उपयोग में है और कई परियोजनाओं के सफल समापन में योगदान दिया है। जैसा कि यहां प्रस्तुत परिणामों से संकेत मिलता है, प्रोटोकॉल उनकी विवर्तन गुणवत्ता को संरक्षित करते हुए वैक्यूम एंड-स्टेशन में नमूनों के एक सुरक्षित और विश्वसनीय हस्तांतरण को सक्षम बनाता है। यह बीमलाइन ऑपरेशन के लिए एक महत्वपूर्ण पहलू है और बीमलाइन कर्मचारियों द्वारा इन-पर्सन उपयोगकर्ता प्रशिक्षण के साथ होगा। कुछ चरणों को प्रक्रिया के सफल और सुरक्षित समापन के लिए महत्वपूर्ण के रूप में हाइलाइट किया जा रहा है: कॉम्बीपक ठिकानों से नमूना ब्लॉकों में नमूनों के हस्तांतरण के लिए हानिकारक नमूनों से बचने के लिए सटीकता और ध्यान देने की आवश्यकता होती है (चरण 2.1.4 देखें); सभी चरणों में तरल नाइट्रोजन स्तर की निगरानी नमूनों को हवा के संपर्क में आने या उन हिस्सों के करीब संपर्क में होने से रोकने के लिए महत्वपूर्ण है जो ठीक से ठंडा नहीं हैं (2.1.3 और 2.2.2); जब तक बंद अनुक्रम (2.2.14) पूरी तरह से समाप्त हो जाता है, तब तक इंतजार कर रहा है, एंडस्टेशन वैक्यूम (2.2.15) से शटल को हटाने से पहले, एंडस्टेशन वैक्यूम के क्षरण से बचने के लिए।
प्रोटोकॉल की अवधारणा को वैक्यूम वातावरण में प्रोटीन क्रिस्टल के हस्तांतरण के लिए उद्देश्य-निर्मित उपकरण विकसित करने के उद्देश्य से एक इंजीनियरिंग प्रयास के साथ शुरू किया गया था। इस परियोजना के अंतिम उत्पाद सीटीएस और ऊपर वर्णित संबंधित नमूना हैंडलिंग उपकरण थे। सीटीएस अपने पूर्ववर्ती, Leica EM VCT10014 पर एक महत्वपूर्ण सुधार है, और कई सीमाओं को हटा देता है, जैसे कि स्थानांतरण के दौरान नमूना परिरक्षण और वैक्यूम वातावरण की कमी, तरल नाइट्रोजन स्नान के अंदर बर्फ का निर्माण, और एक सहज ज्ञान युक्त उपयोगकर्ता इंटरफ़ेस और सुरक्षा सुविधाओं की अनुपस्थिति। सीटीएस की अतिरिक्त विशेषताएं जो उपयोगकर्ता अनुभव में सुधार करती हैं, शटल और नमूना स्टेशन के अंदर तापमान और तरल नाइट्रोजन स्तर की निगरानी, एक बड़ी क्षमता वाले स्नान में एक साथ चार ब्लॉकों को समायोजित किया जाता है, बजाय एक, और शटल ऑपरेशन के लिए एक स्व-निर्देशित तंत्र। CTS पूरी तरह से एक उपयोगकर्ता के अनुकूल touchscreen इंटरफ़ेस और बढ़ाया वैक्यूम और यांत्रिक सुरक्षा के साथ बीमलाइन नियंत्रण प्रणाली में एकीकृत है जब endstation के साथ interfacing.
बीमलाइन I23 अपनी तरह का पहला लंबा-तरंग दैर्ध्य एमएक्स सिंक्रोट्रॉन उपकरण है और, जैसे, प्रोटीन क्रिस्टल को उच्च-वैक्यूम वातावरण में पेश करना और उन्हें क्रायोजेनिक तापमान पर संग्रहीत करना, काफी प्रयासों की आवश्यकता है। नमूना तैयारी उपकरण और प्रोटोकॉल में सुधार, साथ ही साथ प्रक्रियाओं को सुव्यवस्थित करने के प्रयास, चल रहे हैं। उपयोगकर्ता समर्थन के हिस्से के रूप में, बीमलाइन कर्मचारी हमेशा समस्या निवारण में सहायता करने के लिए उपलब्ध होते हैं। इस तरह के एक परिदृश्य का एक उदाहरण ऐसे मुद्दे होंगे जो वैक्यूम सिस्टम की अखंडता से समझौता करते हैं, जिससे शटल को सीटीएस या एंडस्टेशन एयरलॉक से / से संलग्न करने या हटाने में कठिनाइयों का सामना करना पड़ता है। परीक्षणों के विभिन्न स्तरों को साप्ताहिक और दैनिक आधार पर किया जाता है, और उपयोगकर्ता प्रशिक्षण संभावित विफलताओं से बचने के लिए अतिरिक्त जांच को कवर करेगा, जैसे कि शटल द्वारा संलग्न इंटरफेस पर ओ के छल्ले का दृश्य निरीक्षण। जबकि वैक्यूम वातावरण एक तरंग दैर्ध्य रेंज में विवर्तन प्रयोगों को करने का अवसर खोलता है जो अन्य बीमलाइनों पर सुलभ नहीं है, अतिरिक्त स्थानांतरण चरण समग्र नमूना थ्रूपुट को कम कर देता है।
हस्तांतरण ब्लॉक प्रति केवल चार नमूनों के साथ मैनुअल स्थानांतरण और वैक्यूम पोत के अंदर पांच ब्लॉकों तक कुल क्षमता को 20 नमूनों तक सीमित करता है। इसलिए, नमूना परिवर्तनशीलता के लिए एक बड़े नमूने के साथ परियोजनाओं के लिए, नमूनों को डायमंड उच्च-थ्रूपुट बीमलाइनों पर पूर्व-स्क्रीन किया जाना चाहिए, और फिर बाद में अनुकूलित लंबे तरंग दैर्ध्य प्रयोग के लिए केवल सबसे आशाजनक नमूनों को स्थानांतरित किया जाना चाहिए। जबकि नमूना धारकों और स्थानांतरण ब्लॉककुछ साल पहले अपने प्रारंभिक परिचय से अपरिवर्तित हैं, यहां प्रस्तुत हैंडलिंग उपकरण सभी नए विकास हैं। I23 समर्पित नमूना धारकों बीमलाइन के लिए शीतलन अवधारणा में उनकी भूमिका के कारण अपरिवर्तनीय हैं। जैसे, नमूना हैंडलिंग टूल के डिजाइन का उद्देश्य इस नए प्रकार के धारक और मानक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध उपकरणों के बीच एक लिंक बनाना है जिसे एमएक्स उपयोगकर्ता समुदाय ने लंबे समय तक अपनाया था, जैसे कि कॉम्बीपक्स, क्रिस्टल हार्वेस्टिंग वैंड्स, और सूखी शिपर परिवहन प्रणाली। उनके डिजाइन में उपयोगकर्ता समुदाय के साथ महत्वपूर्ण परामर्श शामिल था और इसे पूरा करने के लिए कई पुनरावृत्तियों की आवश्यकता थी। यहां प्रस्तुत उपकरण, उपकरण और प्रोटोकॉल डायमंड लाइट सोर्स पर बीमलाइन I23 पर प्रयोगों के लिए उपयोगकर्ता के नमूनों के हस्तांतरण के लिए एक सरल और मजबूत प्रणाली का प्रतिनिधित्व करते हैं। इन-वैक्यूम लंबी तरंग दैर्ध्य मैक्रोमोलेक्यूलर क्रिस्टलोग्राफी के लिए यह उपकरण संरचनात्मक जीव विज्ञान के लिए नए अवसर खोलता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12M detector</td>
			<td>Dectris, Switzerland</td>
			<td></td>
			<td>single-photon-counting X-ray detector</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CombiPuck</td>
			<td>MiTeGen</td>
			<td>SKU: M-CBP-P1</td>
			<td>Cryopucks used for cryogenic storage and transport of I23 samples holders and samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crystal-harvesting magnetic wand</td>
			<td>Molecular Dimensions</td>
			<td>MD7-411</td>
			<td>Used for harvesting crystal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry Shipper (CX100)</td>
			<td>Molecular Dimensions</td>
			<td>MD7-21</td>
			<td>Used for cryogenic storage and transport of I23 samples holders and samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dry shipper insert (CombiPuck Transport Cane)</td>
			<td>MiTeGen</td>
			<td>SKU: M-CBP-PTC1</td>
			<td>Used for cryogenic storage and transport of I23 samples holders and samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kapton polyimide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>sample mount made of Kapton polyimide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perpsex lid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>acrylic lid with built-in rotation key</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thaumatin powder</td>
			<td>&#160;Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7638</td>
			<td>Used for production of thaumatin crystals by vapour diffusion</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

sample preparation and transfer protocol for in-vacuum long-wavelength crystallography on beamline i23 at diamond light source

लंबी तरंग दैर्ध्य मैक्रोमोलेक्यूलर क्रिस्टलोग्राफी (एमएक्स) तत्वों के असंगत प्रकीर्णन गुणों का शोषण करता है, जैसे कि सल्फर, फास्फोरस, पोटेशियम, क्लोरीन, या कैल्शियम, जो अक्सर मैक्रोमोलेक्यूल्स में मूल रूप से मौजूद होते हैं। यह अतिरिक्त लेबलिंग की आवश्यकता के बिना प्रयोगात्मक चरणबद्धता के माध्यम से प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड की प्रत्यक्ष संरचना समाधान को सक्षम बनाता है। इस तरंग दैर्ध्य शासन में एक्स-रे के महत्वपूर्ण वायु अवशोषण को खत्म करने के लिए, ये प्रयोग एक वैक्यूम वातावरण में किए जाते हैं। डायमंड लाइट सोर्स, यूके में बीमलाइन I23, अपनी तरह का पहला सिंक्रोट्रॉन उपकरण है, जिसे 5 Å की ओर लंबी तरंग दैर्ध्य सीमा में MX प्रयोगों के लिए डिज़ाइन और अनुकूलित किया गया है। 
इसे संभव बनाने के लिए, एक बड़ा वैक्यूम पोत नमूना वातावरण के सभी एंडस्टेशन घटकों को घेरता है। वैक्यूम में भंडारण और डेटा संग्रह के दौरान क्रायोजेनिक तापमान पर नमूनों को बनाए रखने की आवश्यकता के लिए थर्मल रूप से प्रवाहकीय नमूना धारकों के उपयोग की आवश्यकता होती है। यह लगभग 50 K के लिए नमूना शीतलन सुनिश्चित करने के लिए कुशल गर्मी हटाने की सुविधा प्रदान करता है। वर्तमान प्रोटोकॉल नमूना तैयारी और बीमलाइन I23 पर वैक्यूम में नमूनों के हस्तांतरण के लिए उपयोग की जाने वाली प्रक्रियाओं का वर्णन करता है। मैक्रोमोलेक्यूलर क्रिस्टलोग्राफी समुदाय के भीतर पहले से ही स्थापित प्रथाओं और तरीकों में एकरूपता सुनिश्चित करना, तरल नाइट्रोजन तापमान के लिए नमूना शीतलन मानक एमएक्स उपकरणों से सुसज्जित किसी भी प्रयोगशाला सेटिंग में किया जा सकता है। 
क्रायोजेनिक भंडारण और नमूनों के परिवहन के लिए केवल मानक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध उपकरणों की आवश्यकता होती है। वैक्यूम एंडस्टेशन में तरल नाइट्रोजन से क्रायोजेनिक रूप से ठंडा क्रिस्टल के हस्तांतरण के लिए विशेष उपकरण की आवश्यकता होती है। बेस्पोक नमूना हैंडलिंग उपकरण और एक समर्पित क्रायोजेनिक ट्रांसफर सिस्टम (सीटीएस) घर में विकसित किया गया है। इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके तैयार किए गए नमूनों पर एकत्र किए गए विवर्तन डेटा उत्कृष्ट विलय आंकड़े दिखाते हैं, यह दर्शाता है कि प्रक्रिया के दौरान नमूनों की गुणवत्ता अपरिवर्तित है। यह मानक सिंक्रोट्रॉन बीमलाइनों से परे एक तरंग दैर्ध्य सीमा में इन-वैक्यूम एमएक्स के लिए अद्वितीय अवसर खोलता है।

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Sample Preparation and Transfer Protocol for In-Vacuum Long-Wavelength Crystallography on Beamline I23 at Diamond Light Source

यहां, हम क्रायोजेनिक नमूना तैयारी और डायमंड लाइट सोर्स पर बीमलाइन I23 पर वैक्यूम एंडस्टेशन में क्रिस्टल के हस्तांतरण के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं, लंबे तरंग दैर्ध्य मैक्रोमोलेक्यूलर एक्स-रे क्रिस्टलोग्राफी प्रयोगों के लिए।

डायमंड लाइट स्रोत पर बीमलाइन I23 पर इन-वैक्यूम लंबी तरंग दैर्ध्य क्रिस्टलोग्राफी के लिए नमूना तैयारी और स्थानांतरण प्रोटोकॉल

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Here, a protocol is presented to facilitate the creation of large volumes (&#62; 100 &#181;L) of micro-crystalline slurries suitable for serial ...

Crystallization and Structural Determination of an Enzyme:Substrate Complex by Serial Crystallography in a Versatile Microfluidic Chip

एक एंजाइम का क्रिस्टलीकरण और संरचनात्मक निर्धारण: एक बहुमुखी माइक्रोफ्लुइडिक चिप में सीरियल क्रिस्टलोग्राफी द्वारा सब्सट्रेट कॉम्प्लेक्स

The preparation of well diffracting crystals and their handling before their X-ray analysis are two critical steps of biocrystallographic studies. We ...

Fixed Target Serial Data Collection at Diamond Light Source

डायमंड लाइट सोर्स पर फिक्स्ड टारगेट सीरियल डेटा कलेक्शन

Serial data collection is a relatively new technique for synchrotron users. A user manual for fixed target data collection at I24, Diamond Light Source is ...

Workflow and Tools for Crystallographic Fragment Screening at the Helmholtz-Zentrum Berlin

हेल्महोल्ट्ज़-ज़ेंड्रम बर्लिन में क्रिस्टलीय टुकड़ा स्क्रीनिंग के लिए कार्यप्रवाह और उपकरण

Fragment screening is a technique that helps to identify promising starting points for ligand design. Given that crystals of the target protein are ...

A Sample Preparation Pipeline for Microcrystals at the VMXm Beamline

वीएमएक्सएम बीमलाइन में माइक्रोक्रिस्टल के लिए एक नमूना तैयारी पाइपलाइन

The mounting of microcrystals (&#60;10 &#181;m) for single crystal cryo-crystallography presents a non-trivial challenge. Improvements in data quality ...

Preparing Lamellae from Vitreous Biological Samples Using a Dual-Beam Scanning Electron Microscope for Cryo-Electron Tomography

क्रायो-इलेक्ट्रॉन टोमोग्राफी के लिए दोहरी-बीम स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप का उपयोग करके विट्रियस जैविक नमूनों से लैमेला तैयार करना

Presented here is a protocol for preparing cryo-lamellae from plunge-frozen grids of Plasmodium falciparum-infected&#160;human erythrocytes, which could ...