Name: analysis of hbv-specific cd4 t-cell responses and identification of hla-dr-restricted cd4 t-cell epitopes based on a peptide matrix
Uploaded: 2021-10-20T14:00:00
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इस काम को नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (81930061), चोंगकिंग नेचुरल साइंस फाउंडेशन (cstc2019jcyj-bshX0039, cstc2019jcyj-zdxmX0004) और चीनी कुंजी द्वारा समर्थित किया गया था। संक्रामक रोगों के लिए विशेष परियोजना (2018ZX10723203)।

अध्ययन में शामिल प्रत्येक रोगी से लिखित सूचित सहमति प्राप्त की गई थी । अध्ययन प्रोटोकॉल हेलसिंकी की १९७५ घोषणा के नैतिक दिशा निर्देशों के अनुरूप है के रूप में दक्षिण पश्चिम अस्पताल की चिकित्सा नैतिक?...

<ol>
	<li>Desmond, C. P., Bartholomeusz, A., Gaudieri, S., Revill, P. A., Lewin, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+of+T-cell+epitopes+in+hepatitis+B+virus:+identification,+genotypic+variation+and+relevance+to+antiviral+therapeutics.">A systematic review of T-cell epitopes in hepatitis B virus: identification, genotypic variation and relevance to antiviral therapeutics.</a> Antiviral Therapy. 13, 161-175 (2008).</li><li>Mizukoshi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+immune+responses+to+the+hepatitis+B+virus+polymerase.">Cellular immune responses to the hepatitis B virus polymerase.</a> Journal of Immunology. 173, 5863-5871 (2004).</li><li>W&#246;lfl, M., Kuball, J., Eyrich, M., Schlegel, P. G., Greenberg, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+CD137+to+study+the+full+repertoire+of+CD8++T+cells+without+the+need+to+know+epitope+specificities.">Use of CD137 to study the full repertoire of CD8+ T cells without the need to know epitope specificities.</a> Cytometry Part A. 73, 1043-1049 (2008).</li><li>Reiss, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+activation+induced+marker+(AIM)+assays+for+sensitive+identification+of+antigen-specific+CD4+T+cells.">Comparative analysis of activation induced marker (AIM) assays for sensitive identification of antigen-specific CD4 T cells.</a> PLoS One. 12, 0186998 (2017).</li><li>Herati, R. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successive+annual+influenza+vaccination+induces+a+recurrent+oligoclonotypic+memory+response+in+circulating+T+follicular+helper+cells.">Successive annual influenza vaccination induces a recurrent oligoclonotypic memory response in circulating T follicular helper cells.</a> Science Immunology. 2, (2017).</li><li>Bowyer, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation-induced+Markers+Detect+Vaccine-Specific+CD4++T+Cell+Responses+Not+Measured+by+Assays+Conventionally+Used+in+Clinical+Trials.">Activation-induced Markers Detect Vaccine-Specific CD4+ T Cell Responses Not Measured by Assays Conventionally Used in Clinical Trials.</a> Vaccines. 6, (2018).</li><li>Morou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+differentiation+is+central+to+HIV-specific+CD4(+)+T+cell+dysfunction+in+progressive+disease.">Altered differentiation is central to HIV-specific CD4(+) T cell dysfunction in progressive disease.</a> Nature Immunology. 20, 1059-1070 (2019).</li><li>Grifoni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targets+of+T+Cell+Responses+to+SARS-CoV-2+Coronavirus+in+Humans+with+COVID-19+Disease+and+Unexposed+Individuals.">Targets of T Cell Responses to SARS-CoV-2 Coronavirus in Humans with COVID-19 Disease and Unexposed Individuals.</a> Cell. 181, 1489-1501 (2020).</li><li>Meckiff, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imbalance+of+Regulatory+and+Cytotoxic+SARS-CoV-2-Reactive+CD4++T+Cells+in+COVID-19.">Imbalance of Regulatory and Cytotoxic SARS-CoV-2-Reactive CD4+ T Cells in COVID-19.</a> Cell. , (2020).</li><li>Boni, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+hepatitis+B+virus+(HBV)-specific+T-cell+dysfunction+in+chronic+HBV+infection.">Characterization of hepatitis B virus (HBV)-specific T-cell dysfunction in chronic HBV infection.</a> Journal of Virology. 81, 4215-4225 (2007).</li><li>Chang, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+hepatitis+B+virus+(HBV)-specific+CD4++T-cell+responses+in+human+immunodeficiency+virus+type+1-HBV-coinfected+individuals+receiving+HBV-active+antiretroviral+therapy.">Reduced hepatitis B virus (HBV)-specific CD4+ T-cell responses in human immunodeficiency virus type 1-HBV-coinfected individuals receiving HBV-active antiretroviral therapy.</a> Journal of Virology. 79, 3038-3051 (2005).</li><li>Boni, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restored+Function+of+HBV-Specific+T+Cells+After+Long-term+Effective+Therapy+With+Nucleos(t)ide+Analogues.">Restored Function of HBV-Specific T Cells After Long-term Effective Therapy With Nucleos(t)ide Analogues.</a> Gastroenterology. 143, 963-973 (2012).</li><li>Kennedy, P. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preserved+T-cell+function+in+children+and+young+adults+with+immune-tolerant+chronic+hepatitis+B.">Preserved T-cell function in children and young adults with immune-tolerant chronic hepatitis B.</a> Gastroenterology. 143, 637-645 (2012).</li><li>de Niet, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+T+cell+function+in+chronic+hepatitis+B+patients+upon+treatment+with+interferon+based+combination+therapy.">Restoration of T cell function in chronic hepatitis B patients upon treatment with interferon based combination therapy.</a> Journal of Hepatology. 64, 539-546 (2016).</li><li>Rinker, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatitis+B+virus-specific+T+cell+responses+after+stopping+nucleos(t)ide+analogue+therapy+in+HBeAg-negative+chronic+hepatitis+B.">Hepatitis B virus-specific T cell responses after stopping nucleos(t)ide analogue therapy in HBeAg-negative chronic hepatitis B.</a> Journal of Hepatology. 69, 584-593 (2018).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF-&#945;/IFN-&#947;+profile+of+HBV-specific+CD4+T+cells+is+associated+with+liver+damage+and+viral+clearance+in+chronic+HBV+infection.">TNF-&#945;/IFN-&#947; profile of HBV-specific CD4 T cells is associated with liver damage and viral clearance in chronic HBV infection.</a> Journal of Hepatology. 72, 45-56 (2020).</li><li>Hoffmeister, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+T+cell+epitopes+by+flow+cytometry.">Mapping T cell epitopes by flow cytometry.</a> Methods. 29, 270-281 (2003).</li><li>Anthony, D. D., Lehmann, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-cell+epitope+mapping+using+the+ELISPOT+approach.">T-cell epitope mapping using the ELISPOT approach.</a> Methods. 29, 260-269 (2003).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल में सबसे महत्वपूर्ण कदम इस प्रकार सूचीबद्ध हैं: 1) पीबीएमसी विस्तार शुरू करने के लिए उच्च व्यवहार्यता के पर्याप्त पीबीएमसी; 2) पीबीएमसी विस्तार के लिए उपयुक्त वातावरण; और 3) एपिटोप पहचान से प...

वर्तमान में, एंटीजन-विशिष्ट टी कोशिकाओं का विश्लेषण करने के लिए 3 मुख्य दृष्टिकोण हैं। पहला दृष्टिकोण टी-सेल रिसेप्टर और पेप्टाइड (एपिटोप) के बीच बातचीत पर आधारित है। एंटीजन-विशिष्ट टी कोशिकाओं को पेप्टाइड-मेजर हिस्टोकंपैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स (एमएचसी) मल्टीमर्स से सीधे दाग लगाया जा सकता है। इस विधि का लाभ यह है कि यह व्यवहार्य एंटीजन-विशिष्ट टी कोशिकाओं को प्राप्त कर सकता है, जो डाउनस्ट्रीम ट्रांसक्रिप्टोमिक्स/मेटाबोलोमिक्स विश्लेषण के लिए उपयुक्त है । इस विधि की एक सीमा यह है कि यह एक विशिष्ट एंटीजन के लिए पूरे टी-सेल प्रतिक्रिया के बारे में जानकारी प्रदान नहीं कर सकता है, क्योंकि इसके लिए मान्य एपिटोप पेप्टाइड्स की आवश्यकता होती है जबकि एक विशिष्ट एंटीजन के लिए पहचाने गए एपिटोप की संख्या अभी के लिए सीमित है। हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी) की तुलना में विशिष्ट सीडी 8 टी-सेल एपिटोप्स, कम एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी-सेल एपिटोप की पहचान की गई है1,2,जिसने वर्तमान में एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी कोशिकाओं के विश्लेषण के लिए इस विधि को कम लागू किया ।
दूसरा दृष्टिकोण एंटीजन पेप्टाइड उत्तेजना3के बाद सक्रियण-प्रेरित मार्कर की एक श्रृंखला के उपनियमन पर आधारित है। आमतौर पर इस्तेमाल किए जाने वाले मार्कर में CD69, CD25, OX40, CD40L, पीडी-एल1, 4-1BB4शामिल हैं । इस विधि का उपयोग अब टीका लगाए गए व्यक्तियों 5,6,ह्यूमन इम्यूनोडेफिशिएंसी वायरस संक्रमणरोगियों 7औरगंभीर तीव्र श्वसन सिंड्रोम कोरोनावायरस 2 संक्रमण रोगियों8,9में एंटीजन-विशिष्ट टी-सेल प्रतिक्रियाओं का विश्लेषण करने के लिए किया गया है। पेप्टाइड-एमएचसी मल्टीमर्स आधारित परख के विपरीत, यह विधि मान्य एपिटोप द्वारा प्रतिबंधित नहीं है और डाउनस्ट्रीम विश्लेषण के लिए व्यवहार्य कोशिकाएं प्राप्त कर सकती है। इस विधि की एक सीमा यह है कि यह एंटीजन-विशिष्ट टी कोशिकाओं के साइटोकिन प्रोफाइल के बारे में जानकारी प्रदान नहीं कर सका। इसके अलावा, कुछ सक्रिय एंटीजन-गैर-विशिष्ट कोशिकाओं द्वारा इन सक्रिय-प्रेरित मार्कर की अभिव्यक्ति विश्लेषण में पृष्ठभूमि संकेतों में योगदान दे सकती है, जो एक समस्या हो सकती है, खासकर जब लक्ष्य एंटीजन-विशिष्ट टी कोशिकाएं दुर्लभ हों। वर्तमान में, एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी कोशिकाओं4पर इस विधि का सीमित अनुप्रयोग है। क्या इस विधि का उपयोग एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी कोशिकाओं का विश्वसनीय तरीके से विश्लेषण करने के लिए किया जा सकता है, आगे की जांच की आवश्यकता है।
तीसरा दृष्टिकोण एंटीजन पेप्टाइड उत्तेजना के बाद साइटोकिन स्राव पर आधारित है। सक्रियण-प्रेरित मार्कर-आधारित विश्लेषण की तरह, यह विधि मान्य एपिटोप द्वारा प्रतिबंधित नहीं है। यह विधि सीधे एंटीजन-विशिष्ट टी कोशिकाओं के साइटोकिन प्रोफ़ाइल को प्रकट कर सकती है। इस विधि की संवेदनशीलता सक्रियण-प्रेरित मार्कर-आधारित विधि से कम है क्योंकि यह एंटीजन-विशिष्ट टी कोशिकाओं के साइटोकिन स्राव पर निर्भर करती है और परीक्षण किए गए साइटोकिन्स की संख्या आमतौर पर सीमित होती है। वर्तमान में, इस विधि का व्यापक रूप से एचबीवी-विशिष्ट टी कोशिकाओं के विश्लेषण में उपयोग किया जाता है। चूंकि साइटोकिन स्राव एचबीवी-विशिष्ट टी कोशिकाओं का पता प्रत्यक्ष पूर्व वीवो पेप्टाइड उत्तेजना10, 11द्वारा शायद ही लगाया जा सकता है, एचबीवी-विशिष्ट टी कोशिकाओं की साइटोकिन प्रोफाइल का विश्लेषण आमतौर पर 10 दिन के बाद इन विट्रो पेप्टाइड उत्तेजित विस्तार12,13,14,15, 16से कियाजाताहै। मैट्रिक्स रूप में पेप्टाइड पूल की व्यवस्था का उपयोग एंटीजन-विशिष्ट एपिटोप्स17, 18की पहचान को सुगम बनाने के लिए किया गया है। पेप्टाइड मैट्रिक्स और साइटोकिन स्राव विश्लेषण के संयोजन के साथ, एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी-सेल प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन करने और एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी-सेल एपिटोप्स को एक साथ16की पहचान करने के लिए एक विधि विकसित की गई है। इस प्रोटोकॉल में, इस विधि का विवरण वर्णित है। एचबीवी कोर एंटीजन को इस प्रोटोकॉल में प्रदर्शन के उदाहरण के रूप में चुना जाता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Albumin Bovine V (BSA)</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>ST023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC-conjugated Anti-human TNF-&#945;</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>17-7349-82</td>
			<td>Keep protected from light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzonase Nuclease</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E1014</td>
			<td>Limit cell clumping</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B lymphoblastoid cell lines (BLCLs)</td>
			<td>FRED HUTCHINSON CANCER RESEARCH CENTER</td>
			<td>IHW09126</td>
			<td>HLA-DRB1*0803 homozygote</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B lymphoblastoid cell lines (BLCLs)</td>
			<td>FRED HUTCHINSON CANCER RESEARCH CENTER</td>
			<td>IHW09121</td>
			<td>HLA-DRB1*1202 homozygote</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Flask (T75)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Plate (96-well, flat bottom)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td>Flat bottom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Plate (96-well, round bottom)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3799</td>
			<td>Round bottom</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS431751</td>
			<td>Pore size 70&#160;&#956;m, white, sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tube (15 mL)</td>
			<td>KIRGEN</td>
			<td>KG2611</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tube (50 mL)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430829</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge, Refrigerated</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5804R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge, Refrigerated</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>ST16R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge, Refrigerated</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>Legend Micro 21R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytofix/Cytoperm Kit (Transcription Factor Buffer Set)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>562574</td>
			<td>Prepare solution before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td>Keep at room temperature to prevent crystallization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#8217;s Phosphate Buffered Saline</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Prepare ddH2O (1000 ml) containing NaCl (8000 mg), KCl (200 mg), KH2PO4 (200 mg), and Na2HPO4.7H2O (2160&#160; mg). Adjust PH to 7.4. Sterilize through autoclave.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ficoll-Paque Premium</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-5442-03</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Tips (0.5-10)</td>
			<td>Kirgen</td>
			<td>KG5131</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Tips (100-1000)</td>
			<td>Kirgen</td>
			<td>KG5333</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter Tips (1-200)</td>
			<td>Kirgen</td>
			<td>KG5233</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-conjugated Anti-human CD4</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>300506</td>
			<td>Keep protected from light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixable Viability Dye eFluor780</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>65-0865-14</td>
			<td>Keep protected from light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GolgiStop Protein Transport Inhibitor (Containing Monensin)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554724</td>
			<td>Protein Transport Inhibitor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Haemocytometer</td>
			<td>Brand</td>
			<td>718620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBV Core Antigen Derived Peptides</td>
			<td>ChinaPeptides</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15630080</td>
			<td>100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum AB</td>
			<td>Gemini Bio-Products</td>
			<td>100-51</td>
			<td>100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I0634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A100395-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A100781-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSRFortessa Flow Cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030081</td>
			<td>100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge Tube (1.5 mL)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td>Autoclaved sterilization before using</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate Shakers</td>
			<td>Scientific Industries</td>
			<td>MicroPlate Genie</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mitomycin C</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10107409001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4.7H2O</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A100348-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A100241-0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR Tubes (0.2 mL)</td>
			<td>Kirgen</td>
			<td>KG2331</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE/Cy7-conjugated Anti-human CD8</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>300914</td>
			<td>Keep protected from light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE-conjugated Anti-human IFN-&#947;</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>12-7319-42</td>
			<td>Keep protected from light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>100 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5-conjugated Anti-human CD3</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>45-0037-42</td>
			<td>Keep protected from light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1585</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human IL-2</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>200-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human IL-7</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>200-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Medium 1640</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11875500BT</td>
			<td>500 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium pyruvate,100mM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15360070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain (0.4%)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15250-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-LEAF Purified Anti-human HLA-DR</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>307648</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wizard Genomic DNA Purification Kit</td>
			<td>Promega</td>
			<td>A1125</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

analysis of hbv-specific cd4 t-cell responses and identification of hla-dr-restricted cd4 t-cell epitopes based on a peptide matrix

सीडी 4 टी कोशिकाएं क्रोनिक हेपेटाइटिस बी के रोगजनन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती हैं। एक बहुमुखी कोशिका आबादी के रूप में, सीडी 4 टी कोशिकाओं को उनके द्वारा स्रावित साइटोकिन्स के आधार पर अलग-अलग कार्यात्मक सबसेट के रूप में वर्गीकृत किया गया है: उदाहरण के लिए, सीडी 4 टी हेल्पर 1 कोशिकाओं के लिए आईएफएन-γ, सीडी 4 टी हेल्पर 2 कोशिकाओं के लिए आईएल-4 और आईएल-13, सीडी 4 टी कूप सहायक कोशिकाओं के लिए आईएल-21, और सीडी 4 टी हेल्प 17 सेल के लिए आईएल-17। हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी) का विश्लेषण- एचबीवी-व्युत्पन्न पेप्टाइड्स उत्तेजना के बाद साइटोकिन स्राव पर आधारित विशिष्ट सीडी 4 टी कोशिकाएं न केवल एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी-सेल प्रतिक्रिया के परिमाण के बारे में बल्कि एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी कोशिकाओं के कार्यात्मक सबसेट के बारे में भी जानकारी प्रदान कर सकती हैं। ट्रांसक्रिप्टोमिक्स और मेटाबोलोमिक्स विश्लेषण जैसे उपन्यास दृष्टिकोण, एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी कोशिकाओं के बारे में अधिक विस्तृत कार्यात्मक जानकारी प्रदान कर सकते हैं। इन दृष्टिकोणों को आमतौर पर पेप्टाइड-मेजर हिस्टोकम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स-II मल्टीमर्स के आधार पर व्यवहार्य एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी कोशिका कोशिकाओं के अलगाव की आवश्यकता होती है, जबकि वर्तमान में एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी-सेल एपिटोप्स के बारे में जानकारी सीमित है। एचबीवी-व्युत्पन्न पेप्टाइड मैट्रिक्स के आधार पर, एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी-सेल प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन करने और क्रोनिक एचबीवी संक्रमण रोगियों से परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं के नमूनों का उपयोग करके एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी-सेल एपिटोप्स की पहचान करने के लिए एक विधि विकसित की गई है ।

साइटोकिन स्राव सीडी 4 टी कोशिकाओं की आवृत्ति की गणना एकल उत्पादकों और दोहरे उत्पादकों दोनों के योग के रूप में की जाती है। जैसा कि चित्रा 1में प्रदर्शित किया गया है, टीएनएफ-α की आवृत्ति सीडी 4 ट?...

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Analysis of HBV-Specific CD4 T-cell Responses and Identification of HLA-DR-Restricted CD4 T-Cell Epitopes Based on a Peptide Matrix

हेपेटाइटिस बी वायरस (एचबीवी) -व्युत्पन्न पेप्टाइड मैट्रिक्स के आधार पर, एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी-सेल प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी-सेल एपिटोप्स की पहचान के साथ समानांतर रूप से किया जा सकता है।

एचबीवी-विशिष्ट सीडी 4 टी-सेल प्रतिक्रियाओं का विश्लेषण और एलएएल-डीआर-प्रतिबंधित सीडी 4 टी-सेल एपिटोप्स की पहचान पेप्टाइड मैट्रिक्स के आधार पर

CD4 T cells play important roles in the pathogenesis of chronic hepatitis B. As a versatile cell population, CD4 T cells have been classified as distinct ...

Research

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Immunology and Infection

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

माउस टी कोशिकाओं में टी सेल रिसेप्टर्स की रेट्रोवायरल transduction

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Use of Interferon-&gamma; Enzyme-linked Immunospot Assay to Characterize Novel T-cell Epitopes of Human Papillomavirus

Use of Interferon-&#947; Enzyme-linked Immunospot Assay to Characterize Novel T-cell Epitopes of Human Papillomavirus

इंटरफेरॉन γ एनजाइम से जुड़े Immunospot परख का उपयोग करने के लिए मानव papillomavirus के उपन्यास टी सेल epitopes विशेषताएँ

A protocol has been developed to overcome the difficulties of isolating and characterizing rare T cells specific for pathogens, such as human ...

In Vitro Assay to Evaluate the Impact of Immunoregulatory Pathways on HIV-specific CD4 T Cell Effector Function

In Vitro Assay to Evaluate the Impact of Immunoregulatory Pathways on HIV-specific CD4 T Cell Effector Function

इन विट्रो परख में एचआईवी विशिष्ट सीडी 4 टी सेल effector समारोह पर immunoregulatory रास्ते के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए

T cell exhaustion is a major factor in failed pathogen clearance during chronic viral infections. Immunoregulatory pathways, such as PD-1 and IL-10, are ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

टी सेल प्रतिक्रिया के मूल्यांकन के लिए फ्लोरोसेंट लक्ष्य सारणियों का प्रयोग करें<em&gt; में विवो</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

चूहे में allogeneic सीडी 4 टी सेल प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए तेल त्वचा का प्रत्यारोपण

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

माउस भोले सीडी 4<sup&gt; +</sup&gt; टी सेल अलगाव और<em&gt; इन विट्रो</em&gt; टी सेल सबसेट में भेदभाव

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Whole-animal Imaging and Flow Cytometric Techniques for Analysis of Antigen-specific CD8+ T Cell Responses after Nanoparticle Vaccination

Nanoparticle के टीकाकरण के बाद के विश्लेषण से प्रतिजन विशेष CD8 + टी सेल प्रतिक्रिया के लिए पूरे पशु इमेजिंग और प्रवाह cytometric तकनीकों

Traditional vaccine adjuvants, such as alum, elicit suboptimal CD8+ T cell responses. To address this major challenge in vaccine development, various ...

Imaging CD4 T Cell Interstitial Migration in the Inflamed Dermis

सूजन डर्मिस में इमेजिंग सीडी 4 टी सेल बीचवाला प्रवासन

The ability of CD4 T cells to carry out effector functions is dependent upon the rapid and efficient migration of these cells in inflamed peripheral ...

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

A Suction Blister Protocol to Study Human T-cell Recall Responses In Vivo

Vivo में मानव टी सेल याद प्रतिक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक चूषण छाला प्रोटोकॉल

Cutaneous antigen-recall models allow for studies of human memory responses in vivo. When combined with skin suction blister (SB) induction, this model ...

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

Evaluation of Zika Virus-specific T-cell Responses in Immunoprivileged Organs of Infected Ifnar1-/- Mice

संक्रमित Ifnar1 के Immunoprivileged अंगों में Zika वायरस-विशिष्ट टी-सेल प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन-चूहों/

The Zika virus (ZIKV) can induce inflammation in immunoprivileged organs (e.g., the brain and testis), leading to the Guillain-Barr&#233; syndrome and ...