Name: application of ultrasound and shear wave elastography imaging in a rat model of nafld/nash
Uploaded: 2021-04-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Application of Ultrasound and Shear Wave Elastography Imaging in a Rat Model of NAFLD/NASH at JoVE.com

저자는 연구 동물의 건강을 돌보고 보장하고 일부 기술을 지원한 화이자 비교 의학 운영 팀에게 감사를 표하고 싶습니다. 또한, 감사는 조직 분석을위한 조직 처리에 대한 자신의 도움에 대한 다니엘 크로웰, 게리 Seitis, 제니퍼 애슐리 올슨에 빚이있다. 또한, 저자는 이 원고를 준비하는 동안 줄리타 라미레즈에게 귀중한 피드백을 검토하고 제공한 것에 대해 감사드립니다.

화이자의 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 검토 및 승인된 모든 동물 관련 절차는 AAALAC (실험실 동물 관리의 평가 및 인증) 국제 공인 시설에서 수행되었습니다.
1. 질병 유도
<ol><li>알려진 쥐 출현 병원균이 없는 수컷 위스터 한 쥐(150-175g; ~ 6-7주, 총 40마리의 쥐)를 사용하십시오. 개별적으로 통풍이 잘 되는 채 로 쥐를 종이 침구(재료 표참조)로 채석?...

<ol>
	<li>Younossi, Z. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+epidemiology+of+nonalcoholic+fatty+liver+disease-Meta-analytic+assessment+of+prevalence,+incidence,+and+outcomes.">Global epidemiology of nonalcoholic fatty liver disease-Meta-analytic assessment of prevalence, incidence, and outcomes.</a> Hepatology. 64 (1), 73-84 (2016).</li><li>Boland, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+standard+diet-induced+and+biopsy-confirmed+mouse+model+of+non-alcoholic+steatohepatitis:+Impact+of+dietary+fat+source.">Towards a standard diet-induced and biopsy-confirmed mouse model of non-alcoholic steatohepatitis: Impact of dietary fat source.</a> World Journal of Gastroenterology. 25 (33), 4904-4920 (2019).</li><li>Oldham, S., Rivera, C., Boland, M. L., Trevaskis, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incorporation+of+a+survivable+liver+biopsy+procedure+in+mice+to+assess+non-alcoholic+steatohepatitis+(NASH)+resolution.">Incorporation of a survivable liver biopsy procedure in mice to assess non-alcoholic steatohepatitis (NASH) resolution.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (146), e59130 (2019).</li><li>Bercoff, J., Tanter, M., Fink, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supersonic+shear+imaging:+a+new+technique+for+soft+tissue+elasticity+mapping.">Supersonic shear imaging: a new technique for soft tissue elasticity mapping.</a> IEEE Transactions on Ultrasonics, Ferroelectrics, and Frequency Control. 51 (4), 396-409 (2004).</li><li>Bavu, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+in+vivo+liver+fibrosis+evaluation+using+supersonic+shear+imaging:+a+clinical+study+on+113+hepatitis+C+virus+patients.">Noninvasive in vivo liver fibrosis evaluation using supersonic shear imaging: a clinical study on 113 hepatitis C virus patients.</a> Ultrasound in Medicine &amp; Biology. 37 (9), 1361-1373 (2011).</li><li>Ferraioli, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accuracy+of+real-time+shear+wave+elastography+for+assessing+liver+fibrosis+in+chronic+hepatitis+C:+a+pilot+study.">Accuracy of real-time shear wave elastography for assessing liver fibrosis in chronic hepatitis C: a pilot study.</a> Hepatology. 56 (6), 2125-2133 (2012).</li><li>Ross, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acetyl-CoA+carboxylase+inhibition+improves+multiple+dimensions+of+NASH+pathogenesis+in+model+systems.">Acetyl-CoA carboxylase inhibition improves multiple dimensions of NASH pathogenesis in model systems.</a> Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 10 (4), 829-851 (2020).</li><li>Gu, L. H., Gu, G. X., Wan, P., Li, F. H., Xia, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+utility+of+two-dimensional+shear+wave+elastography+and+texture+analysis+for+monitoring+liver+fibrosis+in+rat+model.">The utility of two-dimensional shear wave elastography and texture analysis for monitoring liver fibrosis in rat model.</a> Hepatobiliary &amp; Pancreatic Diseases International. 20 (1), 46-52 (2020).</li><li>Marshall, R. H., Eissa, M., Bluth, E. I., Gulotta, P. M., Davis, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatorenal+index+as+an+accurate,+simple,+and+effective+tool+in+screening+for+steatosis.">Hepatorenal index as an accurate, simple, and effective tool in screening for steatosis.</a> American Journal of Roentgenology. 199 (5), 997-1002 (2012).</li><li>Webb, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+value+of+a+computerized+hepatorenal+index+for+sonographic+quantification+of+liver+steatosis.">Diagnostic value of a computerized hepatorenal index for sonographic quantification of liver steatosis.</a> American Journal of Roentgenology. 192 (4), 909-914 (2009).</li><li>Tous, M., Ferre, N., Camps, J., Riu, F., Joven, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeding+apolipoprotein+E-knockout+mice+with+cholesterol+and+fat+enriched+diets+may+be+a+model+of+non-alcoholic+steatohepatitis.">Feeding apolipoprotein E-knockout mice with cholesterol and fat enriched diets may be a model of non-alcoholic steatohepatitis.</a> Molecular and Cellular Biochemistry. 268 (1-2), 53-58 (2005).</li><li>Kirsch, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+nutritional+model+of+non-alcoholic+steatohepatitis:+species,+strain+and+sex+difference+studies.">Rodent nutritional model of non-alcoholic steatohepatitis: species, strain and sex difference studies.</a> Journal of Gastroenterology and Hepatology. 18 (11), 1272-1282 (2003).</li><li>Journal of Ultrasound in Medicine. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2018+Scientific+Program.">2018 Scientific Program.</a> Journal of Ultrasound in Medicine. 37 (1), 1 (2018).</li><li>Engelmann, G., Quader, J., Teufel, U., Schenk, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limitations+and+opportunities+of+non-invasive+liver+stiffness+measurement+in+children.">Limitations and opportunities of non-invasive liver stiffness measurement in children.</a> World Journal of Hepatology. 9 (8), 409-417 (2017).</li><li>Piscaglia, F., Salvatore, V., Mulazzani, L., Cantisani, V., Schiavone, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound+shear+wave+elastography+for+liver+disease.+a+critical+appraisal+of+the+many+actors+on+the+stage.">Ultrasound shear wave elastography for liver disease. a critical appraisal of the many actors on the stage.</a> Ultraschall in der Medizin. 37 (1), 1-5 (2016).</li><li>Singh, S., Loomba, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+two-dimensional+shear+wave+elastography+in+the+assessment+of+chronic+liver+diseases.">Role of two-dimensional shear wave elastography in the assessment of chronic liver diseases.</a> Hepatology. 67 (1), 13-15 (2018).</li></ol>

SWE를 포함하여 초음파 기지를 둔 화상 진찰은, NAFLD/NASH의 전임상 모형에 있는 간 steatosis 및 뻣뻣함의 종방향 평가를 위한 귀중한 공구일 수 있습니다. 이 논문은 NASH의 CDAHFD 다이어트 유도 쥐 모델을 사용하여 HR 지수 및 탄성의 측정을 위한 고품질 B 모드뿐만 아니라 간 SWE 이미지를 획득하는 방법에 대한 상세한 방법론을 설명합니다. 또한, 결과는 간 조직의 평가-조직학적 평가의 금본위제와 HR 지...

비알코올성 지방간질환(NAFLD)은 간에서 과도한 지방축적을 특징으로 하는 대사 상태이며, 최근 보고된 글로벌 보급률25%1로전 세계적으로 선도적인 간질환이 되고 있다. 무알코올 성 세포 간염 (NASH)은 NAFLD의 스펙트럼의 더 진행 단계이며, 진보적 인 세포 손상, 염증 및 섬유증을 가진 과잉 간 지방을 특징으로합니다. 이 질병은 환자의 간에서 상당한 손상이 이미 발생할 때까지 혈액 검사 또는 일상적인 검사를 통해 발견되지 않는 종종 침묵합니다. 현재, 환자에서 NASH를 진단하는 금 본위제는 환자 유래 간 생검 샘플의 조직학적 검사를 통해서이다. 유사하게, NASH/NAFLD의 병인뿐만 아니라 약물 개발 산업을 이해하기 위해 일하는 전임상 연구자들은 세포증, 염증 및 섬유증을 측정하기 위해 조직학을 위한 위성 코호트의 간 샘플 또는 말기 안락사의 생체 내 쐐기 생검에 의존합니다.
예를 들어, 간 쐐기 생검은 GUBRA NASH 모델2를사용하는 동안 간 간염과 섬유증을 평가하기 위한 표준 기술이었다. 간 쐐기 생검 방법은 작은 동물3에서침략적이고 힘들다. 연구 결과의 중간에 쐐기 간 생검의 사용은 수시로 필요로 하는 동물의 수를 증가하는 질병 모형에 있는 추가된 실험변수를 나타냅니다. 이러한 요인을 염두에 두고, 초기 시점에서 NASH/NAFLD 동물 모델에서 steatosis및 섬유증을 안정적으로 평가하는 데 사용할 수 있는 비침습적 이미징 기술은 매우 중요합니다. 전단 파 엘라스토그래피 (SWE)는 연조직의 탄성을 측정하는 데 사용되는 초음파 기반 방법입니다. 이 기술은 조직 표적을 향한 초음속 초음파 펄스에 의해 생성된 전단 파의 전파를 측정한 다음 E 계수4라는값을 계산합니다. 전단 파의 속도는 조직 강성의 정도에 비례한다.
도 1 및 도 2는 이미징 영역 설정 및 SWE 계측기를 보여 준다. SWE 계측기는 두 개의 스크린과 그림 2A에표시된 제어판이 있는 단일 휠 유닛입니다. 상부모니터(그림 2B)는컴퓨터 모니터역할을 하며 이미지 및 환자 디렉토리를 표시합니다. 제어판(그림2C)은이미지 캡처의 일반적인 측면을 제어하는 버튼과 다이얼의 배열입니다: 화면 동결, 이미지 저장, 한 모드에서 다른 모드로 변경. 하부화면(그림 2D)은설정을 변경하는 추가 컨트롤이 있는 터치 스크린이며 필요에 따라 데이터를 입력하는 키보드 역할을 합니다. 기기에는 원하는 경우 터치 스크린에 사용할 스타일러스가 장착되어 있습니다. 초음파 프로브는 장치의 하부 전면 패널에 부착됩니다. 설치류의 B 모드 및 SWE 이미징의 경우 초선형 6~20MHz 트랜스듀서가 사용되었습니다. 비침습적으로 조직 강성을 측정하는 이 기능은 SWE를 NASH 환자에서 간 섬유증5의 식별 및 준비에 대한 귀중한 도구로 만들어 더 침습적 인 방법에 대한 필요성을 감소시다. SWE는, 실제로, 환자에서 간 섬유증을 측정하기 위하여 이용되고 진료소 에서 섬유증을 득점하는 FDA 승인한 방법입니다6. SWE를 사용하여 질병의 동물 모델에서 NASH 진행을 모니터링하면 치료 개발을위한 번역 도구를 제공하고 동시에 동물 주체 수의 감소와 통증과 고통을 최소화하기 위한 생체 내 절차의 개선을 통해 동물 복지를 향상시킬 수 있습니다.
인간 환자에서 SWE 이미징은 작은 동물에게 이상적이지 않은 저주파 초음파 트랜스듀서4를사용합니다. 특히, 고주파 SWE 기술은 쥐 모델7에서NASH의 발병에 대한 아세틸-코아 카바실라제 억제의 효능을 평가하기 위해 사용되어 왔으며, 이 기술의 유용성은 전통적인 METAVIR 조직학 채점방법에비해 성공적인 결과를 갖는 간 섬유증의 탄소 테트라클로라이드 쥐 모델에서 기술되었다 8. 그러나, 기존 문헌은 NASH의 전임상 모델에서 SWE 이미징의 적용에 대한 상세한 기술 및 방법론 정보가 부족합니다. 위에서 설명한 바와 같이, 간 steatosis는 NAFLD/NASH 상태의 주요 특징 의 한개이고 내정간섭이 고려될 수 있는 중요한 단계입니다. 따라서, 이미징 양식증을 사용하여 간 지방 축적을 평가하는 것은 NASH/NAFLD의 전임상 모델에서 간 섬유증을 평가하는 것만큼 중요합니다.
신장 피질의 것과 비교하여 간 조직 밝기의 비율로 알려진 초음파 기술은 클리닉9,10에서스테토시스의 대리 마커로 사용되어 왔다. 그러나 이 접근법은 NAFLD/NASH의 전임상 동물 모델에서 광범위하게 사용되지 않았습니다. 본 기사는 NAFLD/NASH의 콜린 결핍, 고지방 식단(CDAHFD) 쥐 모델에서 각각 간 섬유증 및 스테토시스의 대리 마커로서 의탄성뿐만 아니라 HR 지수를 측정하는 방법을 설명합니다. 이 모델은 급속한 steatosis를 유도, 간 염증, 및 섬유증, 마우스에서 6 주 이내에 측정 할 수있습니다 11. 이 규정식에 콜레스테롤 (1%)의 추가는 쥐에 있는 섬유발생을 승진시키기 위하여 보였습니다12,이 모형은 전단 파 화상 진찰을 관련시키는 검증 연구 결과를 위한 적당한 후보 만들기. 전반적으로, 이 화상 진찰 기술은 또한 steatosis 및/또는 섬유증이 관심의 끝점인 NASH 모형/규정식의 넓은 범위에 적용될 수 있습니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Aixplorer</td>
			<td>Supersonic Imagine</td>
			<td></td>
			<td>Shear Wave Elastography Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aixplorer SuperLinear SLH20-6 Transducer</td>
			<td>Supersonic Imagine</td>
			<td></td>
			<td>Transducer for Shear Wave Elastography</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alpha-dri bedding</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>rat cages</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aperio AT2 scanner</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Digital Pathology Brightfield Scanner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compac 6 Anesthesia System</td>
			<td>VetEquip</td>
			<td></td>
			<td>Anesthesia Vaporizer and Delivery System. Any anesthesia delivery system can be used, however.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manage Imager Database</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td></td>
			<td>Digital Pathology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mayer&#39;s Hematoxilin</td>
			<td>Dako/Agilent</td>
			<td></td>
			<td>H&#38;E Staining/Histology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nair</td>
			<td>Church &#38; Dwight</td>
			<td></td>
			<td>Hair remover</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oil Red O solution</td>
			<td>Poly Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Lipid Staining/Histology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrosirius Red Stain (PSR)</td>
			<td>Rowley Biochemical</td>
			<td>F-357-2</td>
			<td>Collagen Stain/Histology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puralube Opthalmic ointment</td>
			<td>Dechra Veterinary Product</td>
			<td></td>
			<td>Lubricatn to prevent eye dryness&#160; during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Prisma Plus</td>
			<td>Sakura Finetek USA</td>
			<td></td>
			<td>Automated slide stainer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VISIOPHARM software</td>
			<td>Visiopharm</td>
			<td></td>
			<td>Digital pathology software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Research Diets</td>
			<td>A06071309i</td>
			<td>NASH inducing diet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Purina</td>
			<td>5053</td>
			<td>Control animal chow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wistar Han rats</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

application of ultrasound and shear wave elastography imaging in a rat model of nafld/nash

무알코올 성 세포 간염 (NASH)은 간 지방 축적 (steatosis) 및 섬유증으로 이어지는 염증을 특징으로하는 비 알코올 성 지방 간 질환 (NAFLD)의 스펙트럼 내에서 상태입니다. 인간 NASH/NAFLD를 밀접하게 재구성하는 전임상 모델은 약물 개발에 필수적입니다. 간 생검은 현재 클리닉에서 NAFLD /NASH 진행 및 진단을 측정하기위한 금 본위제이지만, 전임상 공간에서, 연구 중 여러 시점에서 전체 간 샘플의 수집 또는 간 생검은 질병 단계를 평가하기 위해 조직학적 분석을 위해 필요합니다.
간 생검 중간 연구를 수행하는 것은 침략적이고 노동 집약적인 절차이며, 질병 수준을 평가하기 위해 간 샘플을 수집하면 연구에 필요한 연구 동물의 수가 증가합니다. 따라서, 이러한 전임상 모델에서 NASH/NAFLD를 검출하기 위해 신뢰할 수 있고, 전염가능하고, 비침습적 이미징 바이오마커에 대한 필요성이 있다. 비침습적 초음파 기반 의 B 모드 이미지와 전단 웨이브 엘라스토그래피 (SWE)는 간 섬유증뿐만 아니라 세포증을 측정하는 데 사용할 수 있습니다. NASH의 전임상 설치류 모델에서 SWE의 유용성을 평가하기 위해 동물은 프로 NASH 식단에 배치되었고, 비침습적 초음파 B 모드와 전단 파 엘라스토그래피 이미징을 수행하여 간장(HR) 지수와 간 탄력성을 측정하여 NAFLD/NASH 연구를 통해 여러 시간 지점에서 간 지방 축적 및 조직 강성의 진행을 측정했습니다.
HR 지수와 탄성 수치는 스테토시스 및 섬유증의 조직학적 마커와 비교하였다. 결과는 HR 지수와 오일 레드 O (ORO) 염색의 백분율 사이 강한 상관관계를 보여주었습니다, 뿐만 아니라 탄성과 피크로 시리우스 레드 (PSR) 간 염색 사이. 고전적인 전 생체 내 방법과 생체 내 이미징 결과 사이의 강한 상관 관계는 전단 파 엘라스토그래피 / 초음파 기반 이미징이 NAFLD / NASH의 전임상 모델에서 질병 표현형 및 진행을 평가하는 데 사용될 수 있다는 증거를 제공합니다.

CDAHFD를 먹이는 동물의 한 가지 특징은 스테토시스입니다. 간에서 지방의 축적은 조직의 반향 특성을 변화, 이는 간 밝기를 측정하고 같은 평면에서 촬영 B 모드 이미지에서 신장 피질의 밝기로 정상화하여 정량화 될 수있다. 정량화된 값은 steatosis의 간접 척도인 HR 지수로 표현됩니다. 도 4A에서,대조군 동물의 대표적인 간 이미지는 신장 피질에 비해 약 같거나 적은 밝기(echog...

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Application of Ultrasound and Shear Wave Elastography Imaging in a Rat Model of NAFLD/NASH

이 프로토콜은 비침습적으로 비 알코올 성 지방 간 질환의 설치류 모델에서 간 조직 변화를 관찰하고 정량화하기 위해 향상된 초음파 기술의 사용을 설명합니다.

NAFLD/NASH의 쥐 모형에 초음파 및 전단 파 단층 사진 의 응용

Nonalcoholic Steatohepatitis (NASH) is a condition within the spectrum of Non-Alcoholic Fatty Liver Disease (NAFLD), which is characterized by liver fat ...

초음파 및 전단 파 엘라스토피의 사용은 연구원이 무알코올 성 세포 형 간염의 모형에 있는 간 지방 및 섬유증에 있는 변경을 측정하는 것을 가능하게 합니다. 이 이미징 양식은 비침습적, 고처리량 및 임상적으로 전이 가능한 기술이며 약물 발견 중 비알코올성 간염 모델의 질병 단계 및 효능을 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 시작하려면 6-7주 된 남성 Wistar Han rats를 150~175그램의 개별 환기 케이지에 넣고 적절한 침구를 약 22도, 12~12시간 의 빛/어두운 사이클로 40~70%의 상대 습도를 조절합니다.1%콜레스테롤을 가진 콜린 결핍, 고지방 규정식을 가진 20개의 쥐를, 그리고 표준 실험실 설치류 차우를 가진 또 다른 20개의 쥐를 제공합니다. 이미징 기기를 설정하려면 이미징 부위에 온난한 표면을 배치하여 이미징 중에 동물을 따뜻하게 유지하고 흡입제 마취를 전달하기 위한 마취 코 콘을 수정합니다. 초음파 프로브 홀더를 사용하여 초음파 프로브를 원하는 위치로 이동하고 프로브가 동물에 놓이지 않도록하십시오.쥐가 완전히 마취되면 유도 챔버에서 따뜻한 뜨거운 물이 순환 담요로 옮기습니다. 화학 적 제모 크림을 사용하여 쥐의 오른쪽에있는 골반에 늑골 케이지에서 머리카락을 제거합니다. 쥐를 왼쪽 측면 재배치 위치에 놓고 머리 위에 위쪽 발을 따뜻한 이미징 플랫폼에 테이프로 놓습니다.계기판에 있는 환자 키를 누르고 연구 설계에 따라 피사체를 식별합니다. 쥐의 미온된 피부 부위에 소량의 따뜻한 초음파 젤을 발라주세요. 초음파 프로브를 이동하여 젤로 덮인 부위를 만집니다.내부 장기의 라이브 B 모드 이미지가 화면에 나타나면 초음파 프로브를 엉덩이 위 부위로 약간 이동하여 요추 척추와 평행하게 이동합니다. B 모드 디스플레이를 사용하여 큰 신장 동맥 및 피질 수질 분리를 식별하여 오른쪽 신장을 찾습니다. 이미지의 단일 평면에서 간 부분을 관찰하고 기포 또는 그림자가 이미지에 존재하지 않도록합니다.초점을 조정하고 신장 피질과 간 빈맥이 동일한 평면에 있는지 확인하여 선명한 이미지를 얻습니다. 흐리게 이미지를 캡처하지 않도록 화면을 동결 할 때 동물이 호흡 사이에 있는지 확인합니다. B 모드 비율을 선택하여 선택한 관심 영역에서 조직의 상대적 밝기를 측정합니다.2 밀리미터 원을 만들고 신장의 오른쪽에 위치한 간 이미지에 관심 영역에 배치합니다. 신장 피질의 이미지에 새로운 원을 배치하여 간과 신장 피질에 원의 깊이를 동일하게 유지합니다. 제어판의 선택 버튼을 눌러 간신장 지수를 B 모드 비율로 표시하고 조직의 서로 다른 깊이및 평면에서 세 번 측정을 반복한 다음 평균을 계산합니다.프로브를 오른쪽 하위 코스부분에서 가로방향으로 이동하여 B 모드를 사용하여 간을 찾습니다. 주로 빈약한 간 및 포탈 정맥 및 간 동맥과 같은 큰 혈관이없는 간의 명확한 영역을 찾은 다음 제어판의 SWE 버튼을 눌러 조직의 전단 탄력지도를 생성합니다. 그림자가 없는 부위에 간 캡슐 아래의 SWE 상자의 크기와 위치를 조정합니다.상자가 가득 차있고 안정되면 쥐가 호흡 사이에있는 동안 제어판의 동결 버튼을 누릅니다. 계측기의 터치 디스플레이에 Q-Box를 탭하여 전단 파 탄력맵에서 관심 영역의 탄력성을 계산합니다. 원과 데이터 상자가 나타납니다.균일한 착색으로 그림자없는 영역에 원을 배치하여 강성 영역을 피합니다. 간의 다른 지역에서 SWE 매핑 된 이미지를 수집하기 위해 복부에 프로브를 위아래로 또는 옆으로 이동하여 절차를 세 번 반복합니다. 완료되면 발에서 테이프를 제거하고 여분의 젤을 닦아냅니다.쥐를 따뜻하고 건조한 케이지에 다시 넣고 완전히 회복할 수 있도록 합니다. 트랙 볼 및 선택 버튼을 사용하여 환자의 이름 옆에 있는 상자를 선택하여 데이터 분석에 필요한 모든 검사를 선택합니다. 파일을 내보낸 후 각 검사의 개별 JPG 파일을 열고 이미지의 오른쪽에 있는 데이터를 관찰합니다.모든 데이터를 스프레드시트 또는 기타 데이터베이스 관리 소프트웨어에 복사하고 원하는 통계 분석을 수행합니다. 대조군과 콜린-결핍, 고지방 다이어트 그룹에서 간 신장 지수의 대표적인 이미지는 신장 피질에서 간 밝기가 거의 동일하다는 것을 나타내며, 간신장 지수는 대조군에서 1개 미만이었다. 고지방 식이그룹에서는 간밝기가 높아졌고, 간신장지수는 6주 만에 1.91, 12주 시점에서 1.79로 상승했다.고지방 다이어트 그룹의 간장 색인 값은 고원에 도달하기 전에 처음 3 ~ 6 주 동안 빠르게 상승했습니다. 오일 레드 O 염료로 염색된 간 단면은 대조군에 비해 고지방 식이군에서 유의하게 증가한 스테인드 영역을 보였다. 또한 얼룩진 영역과 간 신장 지수 사이에 상관 관계가 발견되었습니다.조직 강성은 12 주 이상 고지방 규정식 단에서 점차적으로 증가하고, 섬유증 때문에 23.1 kilopascals에 도달했습니다. 간 샘플은 섬유증의 지표로 콜라겐을 국소화하기 위해 피그리리우스 빨간색으로 염색되었다. 대조군에 비해 고지방 식이군에서 얼룩진 비율의 현저한 증가가 관찰되었다.그리고 백분율 염색 된 영역과 전단 파 E 계수 수 사이에도 강한 상관 관계가 발견되었습니다. 트랜스듀서와 측정 원 이나 상자를 제대로 배치하는 것이 중요합니다. 이미지에서 아티팩트를 피하면 반복 가능하고 일관된 측정이 가능합니다.시술 후, 간 트리글리세라이드 및 콜라겐 유전자 발현의 전 생체 측정은 또한 부검 조직에서 수행되어 이미징에서 본 결과를 확인할 수 있다.

Research

JoVE Journal

Biology

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High speed videoanalysis of the details of movement can provide a source of information about qualitative aspects of walking movements. When walking on a ...

연구

생물학

Implantation of Engineered Tissue in the Rat Heart

랫 중심에 엔지니어링된 조직의 주입

Rodent surgery is often an important component in assessing the utility of engineered tissues. A wide variety of surgical procedures can be performed in ...

Imaging of Estrogen Receptor-&alpha; in Rat Pial Arterioles using a Digital Immunofluorescent Microscope

Imaging of Estrogen Receptor-&#945; in Rat Pial Arterioles using a Digital Immunofluorescent Microscope

디지털 Immunofluorescent 현미경을 사용하여 쥐 Pial Arterioles에서 에스 트로겐 수용체 - α의 영상

Many of estrogen's effects on vascular reactivity are mediated through interaction with estrogen receptors 1, 2, 3. Although two sub-types exist (estrogen ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

쥐 간장 세포의 분리 및 차 문화

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis

쥐의 장간막의 Exteriorization : Angiogenesis에 관련된 세포 역학을 조사하기위한 모델

Microvacular network growth and remodeling are critical aspects of wound healing, inflammation, diabetic retinopathy, tumor growth and other disease ...

High-throughput Image Analysis of Tumor Spheroids: A User-friendly Software Application to Measure the Size of Spheroids Automatically and Accurately

종양 상체의 높은 처리량의 이미지 분석 : 자동으로 정확하게 상체의 크기를 측정하는 사​​용자 친화적 인 소프트웨어 응용 프로그램

The increasing number of applications of three-dimensional (3D) tumor spheroids as an in vitro model for drug discovery requires their adaptation to ...

Validation of a Mouse Model to Disrupt LINC Complexes in a Cell-specific Manner

마우스 모델의 유효성 검사는 세포 고유의 방식으로 LINC 단지를 방해

Nuclear migration and anchorage within developing and adult tissues relies heavily upon large macromolecular protein assemblies called LInkers of the ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

고해상도 시간 경과 이미징 및 생활 인간 제대 정맥 내피 세포의 미세 소관 역학의 자동 분석

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...

The Assembly and Application of 'Shear Rings': A Novel Endothelial Model for Orbital, Unidirectional and Periodic Fluid Flow and Shear Stress

총회와 &#39;전단 반지&#39;의 응용 프로그램 : 궤도, 단방향 및 정기 유체 흐름 및 전단 응력에 대한 소설 내피 모델

Deviations from normal levels and patterns of vascular fluid shear play important roles in vascular physiology and pathophysiology by inducing adaptive as ...

Implantation of Electrospun Vascular Grafts with Optimized Structure in a Rat Model

쥐 모델에 최적화 된 구조를 가진 Electrospun 혈관 이식 술의 이식

Here, we present a protocol to fabricate macroporous PCL vascular graft and describe an evaluation protocol by using a rat model of abdominal aorta ...