Name: zebrafish model of neuroblastoma metastasis
Uploaded: 2021-03-14T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Zebrafish Model of Neuroblastoma Metastasis at JoVE.com

इस काम को राष्ट्रीय कैंसर संस्थान से एक अनुदान R01 CA240323 (S.Z.) द्वारा समर्थित किया गया था; संयुक्त राज्य अमेरिका के रक्षा विभाग (डीओडी) से एक अनुदान W81XWH-17-1-0498 (S.Z.); कैंसर अनुसंधान के लिए वी फाउंडेशन (एसजेड) से एक वी विद्वान पुरस्कार और बायोमेडिकल डिस्कवरी (एसजेड) के लिए मेयो सेंटर से एक मंच अनुदान; और मेयो क्लिनिक कैंसर सेंटर और सेंटर फॉर इंडिविजुअलाइज्ड मेडिसिन (एसजेड) से समर्थन करता है।

मेयो क्लिनिक में संस्थागत दिशानिर्देशों के अनुपालन में ज़ेबराफ़िश और पशु देखभाल / रखरखाव का उपयोग करने वाले सभी शोध तरीकों का प्रदर्शन किया गया था।
1. तैयारी और TRANSGENE निर्माणों की microinjection PSNS में overex...

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	<li>Veldman, M., Lin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+developmental+model+organism+for+pediatric+research.">Zebrafish as a developmental model organism for pediatric research.</a> Pediatric Research. 64, 470-476 (2008).</li><li>Feitsma, H., Cuppen, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+cancer+model.">Zebrafish as a cancer model.</a> Molecular Cancer Research. 6 (5), 694 (2008).</li><li>Ethcin, J., Kanki, J. P., Look, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+as+a+model+for+the+study+of+human+cancer.">Zebrafish as a model for the study of human cancer.</a> Methods in Cell Biology. 105, 309-337 (2010).</li><li>Benjamin, D. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Children's+oncology+group's+2013+blueprint+for+research:+neuroblastoma.">Children's oncology group's 2013 blueprint for research: neuroblastoma.</a> Pediatric Blood and Cancer. 60 (6), 985-993 (2013).</li><li>Hoehner, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+developmental+model+of+neuroblastoma:+differentiating+stroma-poor+tumors'+progress+along+an+extra-adrenal+chromaffin+lineage.">A developmental model of neuroblastoma: differentiating stroma-poor tumors' progress along an extra-adrenal chromaffin lineage.</a> Laboratory Investigation: A Journal of Technical Methods and Pathology. 75 (5), 659-675 (1996).</li><li>Tsubota, S., Kadomatsu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+initiation+mechanisms+of+neuroblastoma.">Origin and initiation mechanisms of neuroblastoma.</a> Cell and Tissue Research. 372 (2), 211-221 (2018).</li><li>Tolbert, V. P., Matthay, K. 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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+tumor-propagating+cells,+regional+tumor+heterogeneity,+and+dynamic+cell+movements+in+embryonal+rhabdomyosarcoma.">In vivo imaging of tumor-propagating cells, regional tumor heterogeneity, and dynamic cell movements in embryonal rhabdomyosarcoma.</a> Cancer Cell. 21 (5), 680-693 (2012).</li><li>Stoletov, K., Montel, V., Lester, R. D., Gonias, S. L., Klemke, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-resolution+imaging+of+the+dynamic+tumor+cell+vascular+interface+in+transparent+zebrafish.">High-resolution imaging of the dynamic tumor cell vascular interface in transparent zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (44), 17406-17411 (2007).</li><li>Ahmed, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma+with+orbital+metastasis:+ophthalmic+presentation+and+role+of+ophthalmologists.">Neuroblastoma with orbital metastasis: ophthalmic presentation and role of ophthalmologists.</a> Eye. 20 (4), 466-470 (2006).</li><li>Papaioannou, G., McHugh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroblastoma+in+childhood:+review+and+radiological+findings.">Neuroblastoma in childhood: review and radiological findings.</a> Cancer Imaging Society. 5 (1), 116-127 (2005).</li><li>Langenau, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-injection+strategies+to+modify+radiation+sensitivity+and+tumor+initiation+in+transgenic+Zebrafish.">Co-injection strategies to modify radiation sensitivity and tumor initiation in transgenic Zebrafish.</a> Oncogene. 27 (30), 4242-4248 (2008).</li><li>Amores, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+hox+clusters+and+vertebrate+genome+evolution.">Zebrafish hox clusters and vertebrate genome evolution.</a> Science. 282 (5394), 1711-1714 (1998).</li><li>Postlethwait, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vertebrate+genome+evolution+and+the+zebrafish+gene+map.">Vertebrate genome evolution and the zebrafish gene map.</a> Nature Genetics. 18 (4), 345-349 (1998).</li><li>Opazo, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-genome+duplication+and+the+functional+diversification+of+teleost+fish+hemoglobins.">Whole-genome duplication and the functional diversification of teleost fish hemoglobins.</a> Molecular Biology and Evolution. 30 (1), 140-153 (2013).</li></ol>

ज़ेबराफ़िश का उपयोग आमतौर पर पिछले कुछ दशकों से अनुसंधान में किया जाता है, विशेष रूप से कैंसर अनुसंधान में, स्पष्ट कारणों से, जैसे कि रखरखाव में आसानी, मजबूत प्रजनन, और विवो इमेजिंग 1,28 के ...

ज़ेबराफ़िश का व्यापक रूप से उपयोग किया गया है और अनुसंधान के कई क्षेत्रों में लागू किया गया है, विशेष रूप से कैंसर में। यह मॉडल कई फायदे प्रदान करता है- जैसे कि इसके मजबूत प्रजनन, लागत प्रभावी रखरखाव, और ट्यूमर के विकास और मेटास्टेसिस के बहुमुखी विज़ुअलाइज़ेशन- जिनमें से सभी ज़ेबराफ़िश को एक शक्तिशाली उपकरण बनाते हैं जो जेब्राफ़िश को सेलुलर और आणविक आधारों का अध्ययन करने और जांच करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण बनाते हैं। बड़े पैमाने पर जीनोम मैपिंग, ट्रांसजेनेसिस, जीन ओवरएक्सप्रेशन या नॉकआउट, सेल प्रत्यारोपण और रासायनिक स्क्रीन के लिए नई तकनीकों ने ज़ेबराफ़िश मॉडल 1 की शक्ति को बेहद बढ़ाया है। पिछले कुछ वर्षों के दौरान, कई ज़ेबराफ़िश लाइनों को विभिन्न प्रकार के मानव कैंसर के मेटास्टेसिस और मेटास्टेसिस का अध्ययन करने के लिए विकसित किया गया है, जिसमें ल्यूकेमिया, मेलेनोमा, रैबडोमायोसारकोमा और हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा 2,3,4,5 शामिल हैं, लेकिन सीमित नहीं हैं। इसके अतिरिक्त, न्यूरोब्लास्टोमा (एनबी) का पहला ज़ेब्राफ़िश मॉडल डोपामाइन-बीटा-हाइड्रॉक्सिलेस (डीएच) प्रमोटर के नियंत्रण में परिधीय सहानुभूति तंत्रिका तंत्र (पीएसएनएस) में एमवाईसीएन, एक ऑन्कोजीन को अतिरंजित करके उत्पन्न किया गया था। इस मॉडल के साथ, यह आगे प्रदर्शित किया गया था कि सक्रिय एएलके ट्यूमर की शुरुआत में तेजी लाने और विवो 6 में ट्यूमर पेनिट्रेंस को बढ़ाने के लिए MYCN के साथ तालमेल कर सकता है।
एनबी तंत्रिका शिखा कोशिकाओं के sympathoadrenal वंश से व्युत्पन्न है, और बच्चों में एक अत्यधिक मेटास्टैटिक कैंसर है7. यह बाल चिकित्सा कैंसर से संबंधित मौतों के 10% के लिए जिम्मेदार है8। निदान पर व्यापक रूप से metastasized, एनबी को नैदानिक रूप से ट्यूमर के रूप में प्रस्तुत किया जा सकता है जो मुख्य रूप से सहानुभूति गैन्ग्लिया की श्रृंखला और PSNS9,10 के अधिवृक्क मज्जा के साथ उत्पन्न होता है। MYCN प्रवर्धन आमतौर पर NB रोगियों 11,12 में खराब परिणामों के साथ जुड़ा हुआ है। इसके अलावा, LMO1 को उच्च जोखिम वाले मामलों में एक महत्वपूर्ण एनबी संवेदनशीलता जीन के रूप में पहचाना गया है13,14। अध्ययनों में पाया गया कि ज़ेब्राफ़िश मॉडल के पीएसएनएस में MYCN और LMO1 का ट्रांसजेनिक coexpression न केवल NB की पहले की शुरुआत को बढ़ावा देता है, बल्कि ऊतकों और अंगों के लिए व्यापक मेटास्टेसिस को भी प्रेरित करता है जो आमतौर पर उच्च जोखिम वाले NB13 वाले रोगियों में देखी जाने वाली साइटों के समान होते हैं। हाल ही में, एनबी के एक और मेटास्टैटिक फेनोटाइप को एनबी के एक नए ज़ेब्राफ़िश मॉडल में भी देखा गया है, जिसमें MYCN और Lin28B दोनों, एक आरएनए बाध्यकारी प्रोटीन को एन्कोडिंग करते हैं, को डीएच प्रमोटर 16 के नियंत्रण में अतिरंजित किया जाता है।
ज़ेब्राफ़िश में स्थिर ट्रांसजेनिक दृष्टिकोण का उपयोग अक्सर यह अध्ययन करने के लिए किया जाता है कि क्या ब्याज के जीन का ओवरएक्सप्रेशन सामान्य विकास और रोग रोगजनन में योगदान कर सकता है14,15। इस तकनीक का सफलतापूर्वक उपयोग कई जीनों और मार्गों के महत्व को प्रदर्शित करने के लिए किया गया है, जो एनबी के लिए 6,16,17,18,19,20 है। यह पेपर पेश करेगा कि कैसे ट्रांसजेनिक मछली लाइन जो पीएसएनएस में MYCN और LMO1 दोनों को अतिरंजित करती है, बनाई गई थी और यह कैसे प्रदर्शित किया गया था कि इन दो ऑन्कोजीन के सहयोग से एनबी और मेटास्टेसिस 13 की शुरुआत में तेजी आती है। सबसे पहले, ट्रांसजेनिक लाइन जो EGFP-MYCN को अतिरंजित करती है, जो dπh प्रमोटर (नामित MYCN लाइन) के नियंत्रण में है, को जंगली-प्रकार (डब्ल्यूटी) एबी भ्रूण के एक-सेल चरण में dπh-EGFP-MYCN निर्माण को इंजेक्ट करके विकसित किया गया था, जैसा कि पहले वर्णित 6,17 था। एक अलग ट्रांसजेनिक लाइन जो PSNS (नामित LMO1 लाइन) में LMO1 को overexpresses करती है, को दो डीएनए निर्माणों, dπh-LMO1 और dπh-mCherry को एक-सेल चरण 13 पर डब्ल्यूटी भ्रूण में सह-इंजेक्शन द्वारा विकसित किया गया था। यह पहले प्रदर्शित किया गया है कि coinjected डबल डीएनए निर्माणों मछली जीनोम में cointegrated किया जा सकता है; इसलिए, LMO1 और mCherry ट्रांसजेनिक जानवरों के PSNS कोशिकाओं में coexpressed हैं। एक बार इंजेक्ट किए गए एफ 0 भ्रूण यौन परिपक्वता तक पहुंचने के बाद, उन्हें ट्रांसजीन (एस) एकीकरण के साथ सकारात्मक मछली की पहचान के लिए डब्ल्यूटी मछली के साथ आउट-क्रॉस किया गया था। संक्षेप में, F1 संतानों को पहली बार PSNS कोशिकाओं में mCherry अभिव्यक्ति के लिए फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी द्वारा जांचा गया था। mCherry-positive fish में LMO1 के germline integration को जीनोमिक PCR और sequencing द्वारा आगे की पुष्टि की गई थी। प्रत्येक ट्रांसजेनिक लाइन की सफल पहचान के बाद, विषमयुग्मजी MYCN और LMO1 ट्रांसजेनिक मछली की संतानों को MYCN और LMO1 (नामित MYCN) दोनों को व्यक्त करने वाली एक यौगिक मछली लाइन उत्पन्न करने के लिए इंटरब्रीड किया गया था; एलएमओ 1 लाइन)। ट्यूमर असर MYCN; LMO1 मछली को फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी द्विसाप्ताहिक रूप से प्राथमिक साइट, इंटररेनल ग्रंथि क्षेत्र (IRG, मानव अधिवृक्क ग्रंथि के बराबर ज़ेब्राफ़िश) से दूर के क्षेत्रों में मेटास्टैटिक ट्यूमर के सबूत के लिए निगरानी की गई थी। MYCN में ट्यूमर के मेटास्टेसिस की पुष्टि करने के लिए; LMO1 मछली, हिस्टोलॉजिकल और इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण लागू किए गए थे।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3,3&#8217;-Diaminobenzidine (DAB) Vector Kit</td>
			<td>Vector</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Fisher Scientific / Acros Organic</td>
			<td>64-19-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose GP2</td>
			<td>Midwest Scientific</td>
			<td>009012-36-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Tyrosine Hydroxylase (TH) Antibody</td>
			<td>Pel-Freez</td>
			<td>P40101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avidin/Biotin Blocking Kit</td>
			<td>Vector</td>
			<td>SP-2001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BOND Intense R Detection</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>DS9263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BOND primary antibody diluent</td>
			<td>Leica Biosystems Newcastle, Ltd.</td>
			<td>AR9352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BOND-MAX IHC instrument</td>
			<td>Leica Biosystems Newcastle, Ltd.</td>
			<td>N/A</td>
			<td>fully automated IHC staining system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CH211-270H11 BAC clone</td>
			<td>BACPAC resources center (BRFC)</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compound microscope equipped with DP71 camera</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>AX70</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytoseal XYL (xylene based mounting medium)</td>
			<td>Richard-Allan Scientific</td>
			<td>8312-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3801601</td>
			<td>ready-to-use (no preparation needed)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Carolina</td>
			<td>86-1263</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Expand Long Template PCR System</td>
			<td>Roche Applied Science, IN</td>
			<td>11681834001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gateway BP Clonase II enzyme mix</td>
			<td>Invitrogen, CA</td>
			<td>11789-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gateway LR Clonase II enzyme mix</td>
			<td>Invitrogen, CA</td>
			<td>11791-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rb secondary antibody (Biotinylated)</td>
			<td>Dako</td>
			<td>E0432</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Solution, Harris Modified</td>
			<td>Sigma Aldrich Chemical Company Inc. / SAFC</td>
			<td>HHS-32-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP Avidin D</td>
			<td>Vector</td>
			<td>A-2004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric Acid</td>
			<td>Aqua Solutions</td>
			<td>4360-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrogen Peroxide, 3%</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>H324-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>I-SceI enzyme</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>R0694L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kanamycin sulfate</td>
			<td>Teknova, Inc.</td>
			<td>K2150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>34133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lithium Carbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich Chemical Company Inc. / SAFC</td>
			<td>554-13-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome for sectioning</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>RM2255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>One Shot TOP10 Chemically Competent&#160;E. coli</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C404006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p3E-polyA</td>
			<td>&#160;Dr. Chi-Bin Chien, Univ. of Utah</td>
			<td>N/A</td>
			<td>a generous gift 
			(Please refer to webpage http://tol2kit.genetics.utah.edu/index.php/Main_Page to obtain material, which is freely distrubted as described.)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafin wax</td>
			<td>Surgipath Paraplast</td>
			<td>39603002</td>
			<td>Parrafin to parafin</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A11313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pDEST vector (modified destination vector containing I-SceI recognition sites)</td>
			<td>Dr. C. Grabher, Karlsruhe Institute of Technology, Karlsruhe, Germany</td>
			<td>N/A</td>
			<td>a generous gift</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pDONR 221 gateway donor vector</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12536-017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pDONRP4-P1R donor vector</td>
			<td>&#160;Dr. Chi-Bin Chien, Univ. of Utah</td>
			<td>N/A</td>
			<td>a generous gift</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol red, 0.5%</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>&#160;P0290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS), 10X</td>
			<td>BioRad</td>
			<td>1610780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picrosirrius red stain kit</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>24901-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pME-mCherry</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>26028</td>
			<td>(DBH construct)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K, recombinant, PCR Grade</td>
			<td>Roche</td>
			<td>21712520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAprep Spin MiniPrep Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>27104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RDO Rapid Decalcifier</td>
			<td>Apex Enginerring</td>
			<td>RDO04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Azide (NaN3)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>26628-22-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo fluorescence microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ10F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereoscopic fluorescence microscope equipped with a digital sight DS-U1 camera for imaging</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ-1500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taq DNA Polymerase</td>
			<td>New England Biolabs, MA</td>
			<td>M0273L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek VIP&#174;&#160;6 AI Vacuum Infiltration Processor</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Model #: VIP-6-A1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine-S</td>
			<td>Western Chemical Incorporated</td>
			<td>20513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>X3P1GAL</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

zebrafish model of neuroblastoma metastasis

ज़ेबराफ़िश मानव रोगों, विशेष रूप से कैंसर का अध्ययन करने के लिए एक महत्वपूर्ण पशु मॉडल के रूप में उभरा है। ज़ेब्राफ़िश मॉडलिंग में लागू मजबूत ट्रांसजेनिक और जीनोम संपादन प्रौद्योगिकियों के साथ- साथ, रखरखाव में आसानी, उच्च उपज उत्पादकता, और शक्तिशाली लाइव इमेजिंग पूरी तरह से जेब्राफ़िश को मेटास्टेसिस और सेलुलर और आणविक आधारों का अध्ययन करने के लिए एक मूल्यवान मॉडल प्रणाली बनाती है जो विवो में इस प्रक्रिया को अंतर्निहित करती है। मेटास्टेसिस का पहला ज़ेब्राफ़िश न्यूरोब्लास्टोमा (एनबी) मॉडल डोपामाइन-बीटा-हाइड्रॉक्सिलेस (डीएच) प्रमोटर के नियंत्रण में दो ऑन्कोजीन, MYCN और LMO1 को अतिरंजित करके विकसित किया गया था। सह-overexpressed MYCN और LMO1 कम विलंबता और neuroblastomagenesis के penetrance में वृद्धि हुई, साथ ही साथ ट्यूमर कोशिकाओं के त्वरित दूर मेटास्टेसिस के लिए नेतृत्व किया। यह नया मॉडल मज़बूती से मानव मेटास्टैटिक एनबी की कई प्रमुख विशेषताओं को दोहराता है, जिसमें नैदानिक रूप से प्रासंगिक और मेटास्टेसिस से जुड़े आनुवंशिक परिवर्तनों की भागीदारी शामिल है; विवो में मेटास्टेसिस का प्राकृतिक और सहज विकास; और मेटास्टेसिस के संरक्षित स्थलों. इसलिए, जेब्राफ़िश मॉडल में विवो में ट्यूमर मेटास्टेसिस की जटिल प्रक्रिया को विच्छेदित करने के लिए अद्वितीय फायदे हैं।

यह निर्धारित करने के लिए कि क्या LMO1 एनबी रोगजनन को प्रभावित करने के लिए MYCN के साथ synergizes, ट्रांसजेनिक निर्माण जो या तो LMO1 (dπh: LMO1 और dπh: mCherry) या MYCN (dπh: EGFP-MYCN) की अभिव्यक्ति को ड्राइव करते हैं, उन्?...

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Zebrafish Model of Neuroblastoma Metastasis

यह पेपर न्यूरोब्लास्टोमा के ज़ेब्राफ़िश मॉडल में ट्यूमर मेटास्टेसिस को वास्तविक समय में विकसित करने, विशेषता और ट्रैक करने की विधि का परिचय देता है, विशेष रूप से MYCN और LMO1 के ओवरएक्सप्रेशन के साथ ट्रांसजेनिक ज़ेब्राफ़िश लाइन में, जो अनायास मेटास्टेसिस विकसित करता है।

ज़ेब्राफ़िश न्यूरोब्लास्टोमा मेटास्टेसिस का मॉडल

Zebrafish has emerged as an important animal model to study human diseases, especially cancer. Along with the robust transgenic and genome editing ...

इन तरीकों का उपयोग न्यूरोब्लास्टोमा मेटास्टेसिस के पहले ज़ेबराफ़िश मॉडल को विकसित करने के लिए किया गया था। और यह प्रदर्शित करने के लिए कि यह मॉडल न्यूरोब्लास्टोमा के उच्च जोखिम वाले रोगियों में देखे गए मेटास्टेसिस की कई विशेषताओं को ईमानदारी से दोहरा सकता है। इस मेटास्टैटिक ज़ेबराफ़िश मॉडल का मुख्य लाभ ट्यूमर प्रसार के विवो इमेजिंग में वास्तविक समय है ताकि यह बेहतर ढंग से समझा जा सके कि मेटास्टेसिस कब होता है, और संभवतः मेटास्टेसिस कैसे होता है।यह तकनीक न्यूरोब्लास्टोमा के लिए विशिष्ट नहीं है। इसे विभिन्न प्रकार के कैंसर के ज़ेब्राफ़िश मॉडल पर लागू किया जा सकता है जब तक कि ट्यूमर कोशिकाओं की पहचान की जा सकती है और संभावनाओं की एक सरणी के लिए अग्रणी ट्रैक किया जा सकता है। शुरू करने के लिए, एक विषमयुग्मजी ट्रांसजेनिक मछली लाइन विकसित करें जो MYCN और LMO1 दोनों को MYCN और LMO1 को इंटरब्रीडिंग करके overexpressing MYCN और LMO1 ट्रांसजेनिक लाइनों को बढ़ाता है।निषेचन के बाद एक दिन में, ईजीएफपी अभिव्यक्ति के लिए आउटक्रॉस की संतानों को क्रमबद्ध करने के लिए एक स्टीरियोस्कोपिक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का उपयोग करें, जो ईजीएफपी सकारात्मक बिंदुओं के रूप में प्रस्तुत करता है। छँटाई के बाद, अलग पेट्री व्यंजनों में स्क्रीन किए गए भ्रूण को अलग करें और MYCN सकारात्मक या MYCN नकारात्मक के रूप में लेबल व्यंजन। विज़ुअलाइज़ करें और LMO1 अभिव्यक्ति के लिए दोनों समूहों के भ्रूण को सॉर्ट करें तीन से चार दिन बाद निषेचन।दोनों बेहतर गर्भाशय ग्रीवा नाड़ीग्रन्थि और गैर PSNS डोपामिनर्जिक न्यूरोनल कोशिकाओं में विशेष रूप से hindbrain के oblongata मज्जा में लाल प्रतिदीप्ति धब्बे के लिए देखो. निषेचन के पांच दिनों के बाद भ्रूण तक पहुंचने से पहले स्क्रीनिंग करें। फिर अलग-अलग जीनोटाइप के चार समूहों में सॉर्ट की गई मछली को अलग करें और केवल MYCN के रूप में लेबल करें, केवल LMO1, MYCN और LMO1 दोनों और जंगली प्रकार।मानक प्रोटोकॉल के अनुसार समान परिस्थितियों में उन्हें उठाएं। ट्यूमर को देखने के लिए दोनों पार्श्व पक्षों पर एक धातु स्पैटुला के साथ मछली को धीरे से फ़्लिप करके एक स्टीरियोस्कोपिक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के साथ ट्यूमर की कल्पना करें। संभावित ट्यूमर-असर मछली की पहचान के बाद, उन्हें उचित लेबल के साथ एक अलग टैंक में अलग करें जिसमें जन्म तिथि, ट्यूमर की जांच होने की तारीख और जीनोटाइप शामिल हैं।निषेचन के बाद छह सप्ताह में, ट्यूमर-असर मछली और गैर-ट्यूमर असर मछली के लिए स्क्रीन करने के लिए पिछले चरणों को दोहराएं ताकि पहले से जांच की गई मछली के लिए ट्यूमर की उपस्थिति की पुष्टि की जा सके या नई संभावित ट्यूमर-असर वाली मछली की पहचान की जा सके। प्रतिदीप्ति सकारात्मक द्रव्यमान और पुष्टि की गई ट्यूमर-असर मछली के निरंतर या बढ़े हुए आकार की तलाश करें। ट्यूमर-असर मछली की पहचान करने के बाद, ट्यूमर सेल माइग्रेशन के सबूत के लिए उन्हें द्विसाप्ताहिक रूप से मॉनिटर करें, जो ट्यूमर उत्पत्ति की प्राथमिक साइट से दूर छोटे ईजीएफपी या एमचेरी पॉजिटिव ट्यूमर द्रव्यमान के रूप में प्रस्तुत करता है।आवश्यकतानुसार इन मछलियों को अलग-अलग टैंकों में अलग करें और संभावित मेटास्टेसिस को इंगित करने के लिए उचित रूप से लेबल करें। LMO1 मछली में विषमयुग्मजी MYCN की व्याख्या करने के बाद, और उनकी संतानों को छाँटते समय, EGFP MYCN अभिव्यक्ति एक दिन बाद निषेचन पर गैर PSNS डोपामिनर्जिक न्यूरोनल कोशिकाओं में प्रमुख थी। इसके विपरीत, एलएमओ 1 अभिव्यक्ति पीएसएनएस कोशिकाओं और गैर पीएसएनएस डोपामिनर्जिक न्यूरोनल कोशिकाओं दोनों में प्रमुख थी।फ्लोरोसेंट पॉजिटिव ट्यूमर द्रव्यमान अंगों में ऊतकों में पाया गया था, दोनों MYCN और LMO1 के overexpression के साथ यौगिक ट्रांसजेनिक मछली में प्राथमिक ट्यूमर साइट से दूर, लेकिन अकेले MYCN की अभिव्यक्ति के साथ ट्रांसजेनिक मछली में नहीं। सर्जिकल वर्गों के एच एंड ई दाग से पता चलता है कि प्राथमिक ट्यूमर इंटररेनल ग्रंथि क्षेत्र से उत्पन्न हुआ, मानव अधिवृक्क ग्रंथि के बराबर ज़ेब्राफ़िश जो न्यूरोब्लास्टोमा रोगी में प्राथमिक रोग की सबसे आम साइट है। इंटररेनल ग्रंथि से दूर ट्यूमर द्रव्यमान कई क्षेत्रों में पाया गया था, जिसमें गुर्दे के दूरस्थ भाग, कक्षा, गिल, प्लीहा और हृदय के अलिंद कक्ष की आंतरिक दीवार शामिल थी।प्राथमिक ट्यूमर और सभी मेटास्टैटिक साइटों पर ट्यूमर कोशिकाओं के पीएसएनएस न्यूरोब्लास्ट वंश की पुष्टि की गई थी। काफी प्रवर्धित मात्रा और पीएसआर-दाग कोलेजन फाइबर की बढ़ी हुई मोटाई MYCN LMO1 ट्यूमर में पाया गया जब अकेले MYCN व्यक्त करने वाले ट्यूमर की तुलना में। इस प्रक्रिया का उपयोग करने के बाद, दवा स्क्रीनिंग और परीक्षण उपन्यास कैंसर उपचार लागू किया जा सकता है, जो संभावित रूप से मेटास्टैटिक कैंसर को रोकने और इलाज करने के लिए वैकल्पिक एजेंटों के विकास का कारण बन सकता है।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

Murine Experimental Model of Original Tumor Development and Peritoneal Metastasis via Orthotopic Inoculation with Ovarian Carcinoma Cells

मूल ट्यूमर के विकास की murine प्रयोगात्मक मॉडल और पेरिटोनियल मेटास्टेसिस<em&gt; के माध्यम से</em&gt; डिम्बग्रंथि कार्सिनोमा कोशिकाओं के साथ Orthotopic टीका

Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is associated with a poor prognosis because it shows peritoneal dissemination. To improve the prognosis, it is ...

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

In Vivo Model for Testing Effect of Hypoxia on Tumor Metastasis

ट्यूमर मेटास्टेसिस पर हाइपोक्सिया का परीक्षण प्रभाव के लिए vivo मॉडल में

Hypoxia has been implicated in the metastasis of Ewing sarcoma (ES) by clinical observations and in vitro data, yet direct evidence for its pro-metastatic ...

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

जिगर में कोलोरेक्टल मेटास्टेसिस के उन्नत पशु मॉडल: इमेजिंग तकनीक और metastatic क्लोन का गुण

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

Surgical Procedures and Methodology for a Preclinical Murine Model of De Novo Mammary Cancer Metastasis

एक प्रीक्लेक्निकल मरीन मॉडल के लिए सर्जिकल प्रक्रियाओं और कार्यप्रणाली<em&gt; नो नोवो</em&gt; स्तन कैंसर मेटास्टेसिस

A rate-limiting aspect of transgenic mouse models of mammary adenocarcinoma is that primary tumor burden in mammary tissue typically defines study ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

एक पोर्टल नस इंजेक्शन मॉडल का अध्ययन करने के लिए स्तन कैंसर का लिवर मेटास्टेसिस

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Acellular and Cellular Lung Model to Study Tumor Metastasis

Acellular और सेलुलर फेफड़े मॉडल ट्यूमर मेटास्टेसिस का अध्ययन करने के लिए

It is difficult to isolate tumor cells at different points of tumor progression. We created an ex vivo lung model that can show the interaction of tumor ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

अनुप्रवाह आण्विक विश्लेषण और मेटास्टेटिक संभावित मूल्यांकन के लिए परिसंचारी ट्यूमर कोशिकाओं के micromanipulation

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

4T1 स्तन कैंसर मॉडल में फेफड़ों के मेटास्टेसिस के क्वांटिफिकेशन में सुधार करने के लिए कंप्यूटर आधारित छवि विश्लेषण का उपयोग करना

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

A Syngeneic Orthotopic Osteosarcoma Sprague Dawley Rat Model with Amputation to Control Metastasis Rate

मेटास्टेसिस दर को नियंत्रित करने के लिए विच्छेदन के साथ एक सिंजेनिक ऑर्थोटोपिक ऑस्टियोसारकोमा स्प्राग डावले चूहा मॉडल

The most recent advance in the treatment of osteosarcoma (OS) occurred in the 1980s when multi-agent chemotherapy was shown to improve overall survival ...