De Object Location Task stelt ons in staat om verschillende mechanismen van de vorming of het behoud van ruimtelijk geheugen te onderzoeken door gebruik te maken van het spontane exploratieve gedrag bij knaagdieren. Dit protocol maakt het mogelijk om een objectlocatietaak tot vier keer toe te herhalen, waardoor de statistische kracht en de efficiëntie en output van studies met chirurgische ingrepen worden verhoogd. Om te beginnen een vierkante arena gemaakt van ondoorzichtig, niet poreus hard plastic met een minimum van 60 centimeter breedte en 50 centimeter hoogte.
Voor een succesvolle registratie van rattenbewegingen door de geautomatiseerde software moet u ervoor zorgen dat de vloerkleur contrasteert met die van de rat. Plaats de arena in een doos of op een platform dat is omsloten door een gordijn. Als u een context wilt maken, plaatst u een tweede laag insteekbare muren in verschillende kleuren of patronen in de arena.
Hang 3D ruimtelijke aanwijzingen op die verschillende geometrische vormen en kleuren hoog genoeg hebben zodat de ratten ze niet kunnen bereiken. Bevestig verschillende paren objecten die niet poreus, niet kauwbaar en gemakkelijk schoon te maken zijn met verschillende geometrische vormen en texturen op de vloer van de arena. Vul een niet-vierkante emmer met strooiselmateriaal.
Plaats willekeurig vijf tot 10 objecten van verschillende vormen en maten, die verschillen van de objecten die in het experiment zullen worden gebruikt, in de emmer. Breng voor sessie één alle thuiskooien naar de experimenteerruimte en laat de ratten wennen aan de kamer en neem minstens 30 minuten plaats. Zet twee tot vier ratten uit dezelfde kooi samen in de emmer gedurende ongeveer 20 minuten.
Reinig de emmer door alle ontlasting tussen elke groep ratten te verwijderen. Zet alle ratten in hun huiskooien en breng ze terug naar de huiskamer. Breng voor sessie twee alle kooien naar de experimenteerruimte en laat minstens 30 minuten staan.
Doe elke rat afzonderlijk gedurende 10 minuten in de emmer. Plaats de rat terug in de huiskooi en maak de emmer na elke rat schoon. Als u klaar bent, brengt u alle kooien terug naar de woonkamer.
Breng voor sessie vier alle kooien naar de experimenteerruimte en laat minstens 30 minuten staan. Plaats twee tot vier ratten uit dezelfde kooi samen in de lege arena zonder context of ruimtelijke aanwijzingen gedurende 20 minuten. Plaats alle ratten terug in de thuiskooi en veeg de arena af met 70% ethanol na elke groep ratten.
Wijzig de lege arena om de eerste context te creëren zonder de objecten in de arena te plaatsen. Voor sessie één van contextgewenning breng je alle kooien naar de experimenteerruimte en laat ze minstens 30 minuten staan. Start de recorder, plaats vervolgens de eerste rat in het midden van de arena en laat de rat de arena gedurende 10 minuten verkennen.
Stop vervolgens de recorder en plaats de rat terug in de thuiskooi. Breng alle kooien terug naar de woonkamer als ze klaar zijn. Herhaal dit proces voor elke rat voor sessies twee en drie gedurende twee opeenvolgende dagen, zodat er in totaal drie sessies van contextgewenning per rat zijn.
Breng alle kooien naar de experimenteerruimte en laat minstens 30 minuten staan. Gebruik het vooraf opgestelde schema om het eerste identieke paar objecten op de aangewezen locaties te plaatsen met behulp van kleverige matten of dubbelzijdige tape. Start de recorder en plaats de eerste rat in de arena op gelijke afstand van elk object tegenover een muur of een hoek die niet door een object wordt bezet.
Voor zwakke codering laat de rat de arena en objecten gedurende 20 minuten verkennen voor een enkele proef. Voor sterke codering laat de rat vijf minuten verkennen met drie proeven voor dezelfde rat. Stop de recorder.
Plaats de rat terug in de thuiskooi, verwijder de voorwerpen en veeg de arena na elke opname af met ethanol. Breng alle kooien naar de experimenteerruimte en laat voldoende tijd over voor de eerste test, zodat de ratten minstens 30 minuten kunnen worden achtergelaten. Plaats de objecten op de aangewezen locaties.
Start de recorder en plaats de eerste rat in de arena tegenover een muur of een hoek die niet door een object wordt bezet. Laat de rat vijf minuten lang de arena en objecten verkennen. Plaats de rat terug in de thuiskooi.
Verwijder de voorwerpen en veeg zowel de voorwerpen als de arena grondig af met 70% ethanol. Herhaal de opname voor elke rat en breng de kooien terug naar de woonkamer. Scoor voor elke rat de verkenningstijd voor elk object in zowel de coderings- als testproeven.
Scorecoderingsproeven voor de gehele duur en voor de testproeven gedurende twee minuten, voor de beste discriminatieprestaties. Bereken het percentage exploratie voor elk object of de discriminatie-index voor elke rat en om gemiddelde waarden voor de groepen te berekenen. Gebruik een T-test van één monster om een significante voorkeur boven het kansniveau te detecteren.
Het sterke coderingsprotocol leidde tot de voorkeur voor het object op de nieuwe locatie met een significant hoger gemiddeld exploratiepercentage dan het 50%-kansniveau in tests met zowel een uur als 24 uur vertraging. Het zwakke coderingsprotocol veroorzaakte een significante toename van de voorkeur voor het object op de nieuwe locatie, vergeleken met het kansniveau in tests met een vertraging van één uur, maar geen vertraging van 24 uur. Een belangrijk voordeel van dit protocol is dat het vier keer kan worden uitgevoerd met behulp van vier verschillende contexten met hetzelfde cohort ratten.
De resultaten van een mogelijke manier om counter balancing te gebruiken met twee experimentele groepen van een uur geheugen en 24-uurs geheugen worden hier gedemonstreerd. De twee groepen werden gecompenseerd over contexten één en twee, wat werd herhaald in twee extra contexten, drie en vier. De resultaten van deze vier contexten worden individueel gepresenteerd, waarbij het geheugen voor elke experimentele groep werd beoordeeld door de voorkeur te vergelijken met het toevalsniveau in elke context.
Er werd geen significant verschil gedetecteerd tussen de vier contexten. Voor een betere weergave en binnen subjectvergelijking van de gegevens werden de resultaten van twee contrabalanscontexten gecombineerd en vergeleken met behulp van vergelijking binnen proefpersonen, namelijk de gepaarde T-test. Omdat deze taak afhankelijk is van nieuwsgierigheid, is hantering en gewenning cruciaal, zodat het dier niet overweldigd of bang is tijdens de test.
Verdere manipulaties zoals farmacologische en optogenetische interventie kunnen in dit protocol worden geïmplementeerd, evenals in vivo beeldvorming voor het bestuderen van kortetermijn- en langetermijngeheugens en voor het verbeteren of aantasten van deze herinneringen.