Name: in situ exploration of murine megakaryopoiesis using transmission electron microscopy
Uploaded: 2021-09-08T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy at JoVE.com

Forfatterne vil gerne takke Fabienne Proamer, Jean-Yves Rinckel, David Hoffmann, Monique Freund for teknisk bistand. Dette arbejde blev støttet af ARMESA (Association de Recherche et Développement en Médecine et Santé Publique), Den Europæiske Union gennem Den Europæiske Fond for Regionaludvikling (EFRU) og af Grant ANR-17-CE14-0001-01 til H.d.S.

Alle dyreforsøg blev udført i overensstemmelse med europæiske standarder 2010/63/EU og CREMEAS's komité for etik i dyreforsøg ved universitetet i Strasbourg (Comité Régional d'Ethique en Matière d'Expérimentation Animale Strasbourg). Protokollen vises skematisk i figur 1.
1. Indsamling og fiksering af knoglemarv ( figur 1A)
FORSIGTIG: Denne procedure omfatter kræftfremkaldende, mutagene og/eller gif...

<ol>
	<li>Machlus, K. R., Italiano, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incredible+journey:+From+megakaryocyte+development+to+platelet+formation.">The incredible journey: From megakaryocyte development to platelet formation.</a> The Journal of Cell Biology. 201 (6), 785-796 (2013).</li><li>Zucker-Franklin, D., Termin, C. S., Cooper, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+changes+in+the+megakaryocytes+of+patients+infected+with+the+human+immune+deficiency+virus+(HIV-1).">Structural changes in the megakaryocytes of patients infected with the human immune deficiency virus (HIV-1).</a> American Journal of Pathology. 134 (6), 9 (1989).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenesis+of+the+demarcation+membrane+system+(DMS)+in+megakaryocytes.">Biogenesis of the demarcation membrane system (DMS) in megakaryocytes.</a> Blood. 123 (6), 921-930 (2014).</li><li>Scandola, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+electron+microscopy+to+study+megakaryocytes.">Use of electron microscopy to study megakaryocytes.</a> Platelets. , 1-10 (2020).</li><li>Behnke, O., Forer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+megakaryocytes+to+platelets:+platelet+morphogenesis+takes+place+in+the+bloodstream.">From megakaryocytes to platelets: platelet morphogenesis takes place in the bloodstream.</a> European Journal of Haematology. 60, 3-23 (2009).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+megakaryocyte+development+in+the+native+bone+marrow+environment.">Characterization of megakaryocyte development in the native bone marrow environment.</a> Platelets and Megakaryocytes. 788, 175-192 (2012).</li><li>Brown, E., Carlin, L. M., Nerlov, C., Lo Celso, C., Poole, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+membrane+extrusion+sites+drive+megakaryocyte+migration+into+bone+marrow+blood+vessels.">Multiple membrane extrusion sites drive megakaryocyte migration into bone marrow blood vessels.</a> Life Science Alliance. 1 (2), 201800061 (2018).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Megakaryocytes+use+in+vivo+podosome-like+structures+working+collectively+to+penetrate+the+endothelial+barrier+of+bone+marrow+sinusoids.">Megakaryocytes use in vivo podosome-like structures working collectively to penetrate the endothelial barrier of bone marrow sinusoids.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. , 15024 (2020).</li><li>Cramer, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+of+platelet+formation+by+human+megakaryocytes+cultured+with+the+Mpl+ligand.">Ultrastructure of platelet formation by human megakaryocytes cultured with the Mpl ligand.</a> Blood. 89 (7), 2336-2346 (1997).</li><li>Heijnen, H. F. G., Debili, N., Vainchencker, W., Breton-Gorius, J., Geuze, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivesicular+Bodies+Are+an+Intermediate+Stage+in+the+Formation+of+Platelet+&#945;-Granules.">Multivesicular Bodies Are an Intermediate Stage in the Formation of Platelet &#945;-Granules.</a> Blood. 7 (7), 2313-2325 (1998).</li><li>Gupta, N., Jadhav, K., Shah, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emperipolesis,+entosis+and+cell+cannibalism:+Demystifying+the+cloud.">Emperipolesis, entosis and cell cannibalism: Demystifying the cloud.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Pathology. 21 (1), 92 (2017).</li><li>Centurione, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+and+pathologic+emperipolesis+of+neutrophils+within+megakaryocytes+associated+with+marrow+fibrosis+in+GATA-1low+mice.">Increased and pathologic emperipolesis of neutrophils within megakaryocytes associated with marrow fibrosis in GATA-1low mice.</a> Blood. 104 (12), 3573-3580 (2004).</li><li>Ellis, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+bone,+hemopoietic+stem+cells,+and+vasculature.">The relationship between bone, hemopoietic stem cells, and vasculature.</a> Blood. 118 (6), 1516-1524 (2011).</li><li>Bornert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoskeletal-based+mechanisms+differently+regulate+in+vivo+and+in+vitro+proplatelet+formation.">Cytoskeletal-based mechanisms differently regulate in vivo and in vitro proplatelet formation.</a> Haematologica. , (2020).</li></ol>

Direkte undersøgelse af megakaryocytter i deres oprindelige miljø er afgørende for at forstå megakaryopoiesis og blodplade dannelse. I dette manuskript leverer vi en transmissionselektronmikroskopimetode, der kombinerer knoglemarvsskylning og fiksering ved nedsænkning, hvilket gør det muligt at dissekere in situ morfologiegenskaberne for hele processen med megakaryocytmorphogenese, der finder sted i knoglemarven.
Skylningen af knoglemarven er et kritisk trin i denne metode, da s...

Megakaryocytter er specialiserede store polyploidceller, lokaliseret i knoglemarven, der er ansvarlig for blodpladeproduktion1. De stammer fra hæmatoopoietiske stamceller gennem en indviklet modningsproces, hvor megakaryocytprækursorer gradvist øges i størrelse, mens de gennemgår omfattende samtidige morfologiske ændringer i cytoplasmaet og kernen2. Under modning udvikler megakaryocytter en række forskellige strukturelle elementer, herunder: en polylobuleret kerne, invaginationer af overflademembranen, der danner afgrænsningsmembransystemet (DMS), en perifer zone uden organeller omgivet af det actinbaserede cytoskeletale netværk og talrige organeller, herunder α granulater, tætte granulater, lysosomer og flere Golgi-komplekser. På det ultrastrukturelle niveau observeres en væsentlig ændring den cytoplasmatiske opdeling i diskrete regioner afgrænset af DMS3. Denne omfattende forsyning af membraner vil brændstof forlængelsen af lange cytoplasmaiske processer i den indledende fase af blodpladeproduktion, som derefter vil ombygges til blodplader inde i cirkulationen. Enhver defekt under megakaryocytdifferentiering og modning kan påvirke blodpladeproduktionen i form af blodpladeantal og/eller blodpladefunktion. 
Tyndt lag transmission elektronmikroskopi (TEM) har været billeddannelse tilgang valg i årtier giver høj kvalitet ultrastruktur af megakaryocytter, der har formet vores forståelse af fysiologi af trombopoiesis4,5. Dette papir fokuserer på en standardiseret TEM metode gør det muligt at fange processen med blodplade biogenese forekommer in situ inden for den indfødte knoglemarvs mikromiljø, som også kunne tjene som grundlag for at analysere enhver knoglemarvscelletype. Vi giver ultrastrukturelle eksempler på udviklingen af megakaryocytter fra umodne til fuldt modne, som udvider cytoplasmaiske processer i mikrocirkulationen af sinusoider6. Vi beskriver også en nem procedure for at kvantificere de forskellige megakaryocyt modning faser, instruere om regenerering og blodplade produktionskapacitet af knoglemarven.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,4,6-Tri(dimethylaminomethyl)phenol (DMP-30)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose type LM-3 Low Melting Point Agar</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, USA</td>
			<td>1670-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 Calcium chloride hexahydrate</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>2083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper grids 200 mesh thin-bar</td>
			<td>Oxford Instrument, Agar Scientifics, England</td>
			<td>T200-CU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylarsinic acid sodium salt trihydrate</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>8.20670.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodecenyl Succinic Anhydride (DDSA)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Edge Stainless Razor blade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>EM-72000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolut</td>
			<td>VWR International, France</td>
			<td>20821296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper, 90 mm diameter</td>
			<td>Whatman, England</td>
			<td>512-0326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat embedding silicone mould</td>
			<td>Oxford Instrument, Agar Scientific, England</td>
			<td>G3533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 25%</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>16210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat plate Leica EMMP</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>705402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histo Diamond Knife 45&#176;</td>
			<td>Diatome, Switzerland</td>
			<td>1044797</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEOL 2100 Plus TEM microscope</td>
			<td>JEOL, Japan</td>
			<td>EM-21001BU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate - Ultrostain 2</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>70 55 30 22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LX-112 resin</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2 Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>M2393-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium - Poly(butyl methacrylate-co-methyl methacrylate)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>15320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nadic Methyl Anhydride (NMA)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide 2%</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>19172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propylene oxide (1.2-epoxypropane)</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>82320-250ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline injectable solution 0.9% NaCl</td>
			<td>C.D.M Lavoisier, France</td>
			<td>MA 575 420 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Surgical steel blade</td>
			<td>Swann-Morton, England</td>
			<td>.0508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium tetraborate - Borax</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>B-9876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>84100-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter 0.2&#181;m</td>
			<td>Pall Corporation, USA</td>
			<td>514-4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine blue</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>N10-70975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimmer EM TRIM2</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>702801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome Ultracut UCT</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>656201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>23620</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in situ exploration of murine megakaryopoiesis using transmission electron microscopy

Differentiering og modning af megakaryocytter forekommer i tæt samarbejde med de cellulære og ekstracellulære komponenter i knoglemarven. Disse processer er karakteriseret ved den gradvise forekomst af væsentlige strukturer i megakaryocytcytcytoplasmaet som en polyploid og polylobuleret kerne, et internt membrannetværk kaldet afgrænsning membransystem (DMS) og de tætte og alfagranulat, der vil blive fundet i cirkulerende blodplader. I denne artikel beskriver vi en standardiseret protokol for in situ ultrastrukturelle undersøgelse af murine megakaryocytter ved hjælp af transmissionselektronmikroskopi (TEM), der giver mulighed for identifikation af nøglekarakteristika, der definerer deres modningsstadium og cellulær tæthed i knoglemarven. Knoglemarv er skyllet, fast, dehydreret i ethanol, indlejret i plastharpiks, og monteret til generering af tværsnit. Halvtynde og tynde sektioner er forberedt til henholdsvis histologiske og TEM-observationer. Denne metode kan bruges til enhver knoglemarvscelle, i enhver EM-facilitet og har den fordel at bruge små prøvestørrelser, der giver mulighed for kombinationen af flere billeddannelsesmetoder på den samme mus.

Knoglemarvs histologi Observation af knoglemarvs toluid blå histologi under et let mikroskop er nøglen til hurtigt at analysere den samlede vævsarkitektur med hensyn til f.eks væv kompakthed, mikrovessel kontinuitet, og størrelsen og formen af megakaryocytter (Figur 1D). Det udføres før ultratynde sektioner for at bestemme behovet for at skære dybere i knoglemarvsblokken. På grund af deres gigantiske størrelse og nukleare lobulation kan de mere ...

Watch this Scientific Journal Video about In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy at JoVE.com

In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy

Her præsenterer vi en protokol til at analysere ultrastruktur af megakaryocytterne in situ ved hjælp af transmissionselektronmikroskopi (TEM). Murin knoglemarv indsamles, fast, indlejret i epoxyharpiks og skæres i ultratynde sektioner. Efter kontrastfarvning observeres knoglemarven under et TEM-mikroskop ved 120 kV.

In Situ Udforskning af Murine Megakaryopoiesis ved hjælp af Transmission ElektronMikroskopi

Differentiation and maturation of megakaryocytes occur in close association with the cellular and extracellular components of the bone marrow. These ...

Det overordnede mål med denne procedure er at observere ultrastrukturen af megakaryocytter placeret i musens knoglemarv og at kvantificere de forskellige modningsstadier ved hjælp af transmissionselektronmikroskopi i høj opløsning. Den største fordel er den direkte undersøgelse af megakaryocytter i det indfødte miljø, som adskiller sig fra in vitro-dyrkede megakaryocytter, der som bekendt ikke når det komplette modningsniveau. Efter høst af skinnebenet og lårben fra 12 til 18 uger gamle C57BL/6 mus i henhold til standardprotokoller skal du bruge et skarpt barberblad til at fjerne epifyserne fra hver knogle.Hvis hver knogle holder med pincet, indsættes en 21-gauge nål, der er fastgjort til en fem millilitersprøjte fyldt med kakodylatbuffer, i den ene ende af knoglen, og knoglemarven skylles ud i et opsamlingsrør på 15 milliliter, der indeholder to milliliter frisk kakodylatbuffer. Umiddelbart efter skylning skal du bruge en plastpipette til at overføre knoglemarvscylindrene til en milliliter frisk glutaraldehydfiksiv opløsning til en 60-minutters inkubation ved stuetemperatur. Til indlejring af knoglemarven i agarose skal de faste prøver vaskes i frisk kakodylatbuffer og bruge en plastpipette til forsigtigt at overføre knoglemarven til en glasrutschebane.Brug en varm pipette, hurtigt anvende en dråbe på 2% flydende agar til knoglemarvscylindre, og straks placere dias på is i et til to minutter. Når agaren er størknet, skal du bruge et stereomikroskop og et skarpt barberblad til at kassere ekstremiteterne på hver knoglemarvscylinder og overføre de trimmede marvblokke til et 1,5 milliliter mikrocentrifugerør, der indeholder en milliliter cacodylate buffer. Til harpiksindlejring skal blokkene fastgøres med 1% osmium tetroxid i kakodylatbuffer i en kemisk hætte i en time ved fire grader Celsius, før blokkene vaskes en gang med cacodylate buffer og en gang med destilleret vand.Efter vandvasken skal blokkene pletters med 4% uranylacetat i destilleret vand i en time efterfulgt af to vaske i destilleret vand som demonstreret. Efter den sidste vask dehydreres blokkene gennem en stigende række ethanol nedsænkninger og destilleret vand som angivet. For at opnå en ensartet infiltration og polymerisering af epoxyharpiksen inde i marven skal blokkene inkuberes i to på hinanden følgende bade af propylenoxid i 15 minutter, før prøverne inkuberes i en en-til-en blanding af 100% propylenoxid og epoxyharpiks i en time på en langsom roterende shaker ved stuetemperatur.I slutningen af inkubationen tilsættes 100% epoxyharpiks til marvblokkene for en overnatningsinkubation under de samme forhold, tilsæt derefter 100% epoxyharpiks til en anden inkubation på to timer. I slutningen af inkubationen skal du bruge et mikroskop til at orientere marvblokkene i flade silikoneforme for at tillade deres efterfølgende tværgående afsnit og fylde forme med epoxyharpiks, før du placerer dem ved 60 grader Celsius i 48 timer. For ultratynd snit skal prøveblokken monteres på en ultramikrotomstøtte og montere støtten på prøveholderen.Brug en diamantfræser til at trimme prøverne i en 45 graders vinkel for at fjerne den overskydende harpiks omkring vævet, før du bruger en diamantknivklinge udstyret med en vandtank til at skære tværgående 500 og 100 nanometer tykke sektioner til henholdsvis histologisk og TEM-analyse, og brug derefter en løkke til at overføre de 500 nanometer tykke sektioner, der flyder på vandoverfladen på en glasrutschebane og deponere de 100 nanometer tykke sektioner på 200 mesh tynde bar kobber gitre med et papirfilter nedenunder. For toluidine blå farvning, efter tegning af 500 nanometer tykke sektioner på en 60 graders kogeplade, tilsæt filtreret 1% toluid blå i destilleret vand til sektionerne for en en til to minutters inkubation. I slutningen af inkubationen vaskes prøverne med destilleret vand.Når lysbillederne er tørret, skal du bruge monteringsmedium til at montere prøverne med en coverlip og se prøverne ved let mikroskopi. For kontrast farvning, mærke de 100 nanometer sektioner med 4% uranylacetat i fem minutter efterfulgt af tre fem minutters vasker med destilleret vand. Efter den sidste vask, plette sektionerne med bly citrat i tre minutter, efterfulgt af tre fem minutters vasker i destilleret vand som påvist.Efter den sidste vask skal undersiden af hvert gitter først sættes i kontakt med et stykke filterpapir, så gitrene kan placeres på filterpapiret. For at undersøge afsnittene af TEM skal du, når gitrene er tørret, vælge en lav forstørrelse for at vurdere præparaternes generelle kvalitet. For at bestemme antallet af megakaryocytter fra hvert modningsstadium i hver tværgående sektion skal du vælge en højere forstørrelse og kvantificere antallet af trin I, II eller III megakaryocytter kun i firkanter, der er fuldt dækket af væv.I denne repræsentative histologiske analyse kan kompaktheden mikro-fartøj kontinuitet og størrelse og form af megakaryocytter tydeligt observeres. Murine megakaryocytter er opdelt i fire stadier af modning. Fase I megakaryocytter har en stor kerne.Tilstedeværelsen af det tidligste påviselige stadium af afgrænsningsmembransystemet er også et centralt kriterium i denne fase. I fase II begynder granuledannelsen, og udviklingen af afgrænsningsmembransystemet påbegyndes. Fase III megakaryocytter er gigantiske celler med veludviklede afgrænsning membransystemer, klart definerede cytoplasmaiske territorier og perifere zoner blottet for organeller, og excentrisk placeret kerner.Pyrenocytstadiet af megakaryocytmodning er karakteriseret ved en nøgen kerne. Som illustreret observeres megakaryocytter ofte i kontakt med endotelceller. Til tider danner megakaryocytterne korte invasive fremspring, der trænger ind i endotheliummet, eller de strækker fremspring i de sinusformede lumen.TEM tillader også visualisering af ultra strukturelle detaljer, samt tilstedeværelsen af hæmatopoietic celler, der er blevet opslugt af megakaryocytter. Knoglemarvsskylning skal udføres omhyggeligt og umiddelbart efter knogle dissektion. For at maksimere væv integritet, marven er omgivet af en gel af agar før dehydrering.Efter denne procedure, knoglemarvsblokke kan afbildes ved forskellige forstørrelser eller kan bruges til andre 3D elektronmikroskopi analyse, såsom fokuseret ion stråle scanning elektronmikroskopi.

Research

JoVE Journal

Biology

In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy

In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Nano-fEM: Protein Localization Using Photo-activated Localization Microscopy and Electron Microscopy

Nano-FEM: Protein Localization brug af foto-aktiverede Localization mikroskopi og elektronmikroskopi

Mapping the distribution of proteins is essential for understanding the function of proteins in a cell. Fluorescence microscopy is extensively used for ...

Rapid Analysis and Exploration of Fluorescence Microscopy Images

Hurtig analyse og udforskningen af ​​fluorescensmikroskopi Images

Despite rapid advances in high-throughput microscopy, quantitative image-based assays still pose significant challenges. While a variety of specialized ...

Tandem High-pressure Freezing and Quick Freeze Substitution of Plant Tissues for Transmission Electron Microscopy

Tandem Højtryks-Frysning og Quick Freeze Substitution af plantevævene for Transmission Electron Microscopy

Since the 1940s transmission electron microscopy (TEM) has been providing biologists with ultra-high resolution images of biological materials. Yet, ...

Plunge Freezing: A Tool for the Ultrastructural and Immunolocalization Studies of Suspension Cells in Transmission Electron Microscopy

Plunge Nedfrysning: Et værktøj for Ultrastrukturelle og immunlokalisering Studier af Suspension Celler i Transmission Electron Microscopy

Transmission Electron Microscopy (TEM) is an extraordinary tool for studying cell ultrastructure, in order to localize proteins and visualize ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

Forberedelse af prøver og billeddannelse af Exosomes af transmissions Elektron Mikroskopi

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

Miniaturiserede prøveforberedelse til transmissions Elektron Mikroskopi

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Biologiske prøveforberedelse højtryks frysebehandling, mikrobølgeovn-assisteret kontrastforbedring og Minimal harpiks indlejring for volumen Imaging

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...