Name: in situ exploration of murine megakaryopoiesis using transmission electron microscopy
Uploaded: 2021-09-08T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke Fabienne Proamer, Jean-Yves Rinckel, David Hoffmann, Monique Freund for teknisk assistanse. Dette arbeidet ble støttet av ARMESA (Association de Recherche et Développement en Médecine et Santé Publique), EU gjennom European Regional Development Fund (ERDF) og av Grant ANR-17-CE14-0001-01 til H.d.S.

Alle dyreforsøk ble utført i samsvar med europeiske standarder 2010/63/EU og CREMEAS-komiteen for etikk for dyreforsøk ved Universitetet i Strasbourg (Comité Régional d'Ethique en Matière d'Expérimentation Animale Strasbourg). Protokollen vises skjematisk i figur 1.
1. Benmargssamling og fiksering ( Figur 1A)
FORSIKTIG: Denne prosedyren inkluderer kreftfremkallende, mutagene og/eller giftige stoffer og...

<ol>
	<li>Machlus, K. R., Italiano, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incredible+journey:+From+megakaryocyte+development+to+platelet+formation.">The incredible journey: From megakaryocyte development to platelet formation.</a> The Journal of Cell Biology. 201 (6), 785-796 (2013).</li><li>Zucker-Franklin, D., Termin, C. S., Cooper, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+changes+in+the+megakaryocytes+of+patients+infected+with+the+human+immune+deficiency+virus+(HIV-1).">Structural changes in the megakaryocytes of patients infected with the human immune deficiency virus (HIV-1).</a> American Journal of Pathology. 134 (6), 9 (1989).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenesis+of+the+demarcation+membrane+system+(DMS)+in+megakaryocytes.">Biogenesis of the demarcation membrane system (DMS) in megakaryocytes.</a> Blood. 123 (6), 921-930 (2014).</li><li>Scandola, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+electron+microscopy+to+study+megakaryocytes.">Use of electron microscopy to study megakaryocytes.</a> Platelets. , 1-10 (2020).</li><li>Behnke, O., Forer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+megakaryocytes+to+platelets:+platelet+morphogenesis+takes+place+in+the+bloodstream.">From megakaryocytes to platelets: platelet morphogenesis takes place in the bloodstream.</a> European Journal of Haematology. 60, 3-23 (2009).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+megakaryocyte+development+in+the+native+bone+marrow+environment.">Characterization of megakaryocyte development in the native bone marrow environment.</a> Platelets and Megakaryocytes. 788, 175-192 (2012).</li><li>Brown, E., Carlin, L. M., Nerlov, C., Lo Celso, C., Poole, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+membrane+extrusion+sites+drive+megakaryocyte+migration+into+bone+marrow+blood+vessels.">Multiple membrane extrusion sites drive megakaryocyte migration into bone marrow blood vessels.</a> Life Science Alliance. 1 (2), 201800061 (2018).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Megakaryocytes+use+in+vivo+podosome-like+structures+working+collectively+to+penetrate+the+endothelial+barrier+of+bone+marrow+sinusoids.">Megakaryocytes use in vivo podosome-like structures working collectively to penetrate the endothelial barrier of bone marrow sinusoids.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. , 15024 (2020).</li><li>Cramer, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+of+platelet+formation+by+human+megakaryocytes+cultured+with+the+Mpl+ligand.">Ultrastructure of platelet formation by human megakaryocytes cultured with the Mpl ligand.</a> Blood. 89 (7), 2336-2346 (1997).</li><li>Heijnen, H. F. G., Debili, N., Vainchencker, W., Breton-Gorius, J., Geuze, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivesicular+Bodies+Are+an+Intermediate+Stage+in+the+Formation+of+Platelet+&#945;-Granules.">Multivesicular Bodies Are an Intermediate Stage in the Formation of Platelet &#945;-Granules.</a> Blood. 7 (7), 2313-2325 (1998).</li><li>Gupta, N., Jadhav, K., Shah, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emperipolesis,+entosis+and+cell+cannibalism:+Demystifying+the+cloud.">Emperipolesis, entosis and cell cannibalism: Demystifying the cloud.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Pathology. 21 (1), 92 (2017).</li><li>Centurione, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+and+pathologic+emperipolesis+of+neutrophils+within+megakaryocytes+associated+with+marrow+fibrosis+in+GATA-1low+mice.">Increased and pathologic emperipolesis of neutrophils within megakaryocytes associated with marrow fibrosis in GATA-1low mice.</a> Blood. 104 (12), 3573-3580 (2004).</li><li>Ellis, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+bone,+hemopoietic+stem+cells,+and+vasculature.">The relationship between bone, hemopoietic stem cells, and vasculature.</a> Blood. 118 (6), 1516-1524 (2011).</li><li>Bornert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoskeletal-based+mechanisms+differently+regulate+in+vivo+and+in+vitro+proplatelet+formation.">Cytoskeletal-based mechanisms differently regulate in vivo and in vitro proplatelet formation.</a> Haematologica. , (2020).</li></ol>

Direkte undersøkelse av megakaryocytter i deres opprinnelige miljø er avgjørende for å forstå megakaryopoiesis og blodplatedannelse. I dette manuskriptet tilbyr vi en transmisjonselektronmikroskopimetode som kombinerer benmargspyling og fiksering ved nedsenking, slik at vi kan dissekere morfologiegenskapene til hele prosessen med megakaryocytt morfogenese som foregår i benmargen.
Rødme av benmargen er et kritisk trinn i denne metoden, da suksessen med en rødme av høy kvalitet...

Megakaryocytter er spesialiserte store polyploide celler, lokalisert i benmargen, ansvarlig for blodplateproduksjon1. De stammer fra hematopoietiske stamceller gjennom en intrikat modningsprosess, hvor megakaryocyttforløpere gradvis øker i størrelse, mens de gjennomgår omfattende samtidige morfologiske endringer i cytoplasma og kjerne2. Under modning utvikler megakaryocytter en rekke skilles strukturelle elementer, inkludert: en polylobulert kjerne, invaginasjoner av overflatemembranen som danner avgrensningsmembransystemet (DMS), en perifer sone blottet for organeller omgitt av aktinbaserte cytoskeletalnettverk og mange organeller, inkludert α granulater, tette granulater, lysosomer og flere Golgi-komplekser. På ultrastrukturelt nivå er en stor modifikasjon observert den cytoplasmatiske oppdelingen i diskrete områder avgrenset av DMS3. Denne omfattende tilførselen av membraner vil gi drivstoff til forlengelsen av lange cytoplasmatiske prosesser i den første fasen av blodplateproduksjonen, som deretter vil omdannes til blodplater inne i sirkulasjonen. Eventuelle feil under megakaryocyttdifferensiering og modning kan påvirke blodplateproduksjonen når det gjelder blodplatetelling og / eller blodplatefunksjon. 
Tynn lagoverføring elektronmikroskopi (TEM) har vært den valgte bildemetoden i flere tiår som gir ultrastruktur av megakaryocytter av høy kvalitet som har formet vår forståelse av fysiologien til trombopoiesis4,5. Dette dokumentet fokuserer på en standardisert TEM-metode som gjør det mulig å fange prosessen med blodplatebiogenese som forekommer in situ innenfor det opprinnelige benmargsmikromiljøet, som også kan tjene som grunnlag for å analysere hvilken som helst benmargscelletype. Vi gir ultrastrukturelle eksempler på utvikling av megakaryocytter fra umodne til fullt modne, som utvider cytoplasmatiske prosesser inn i mikrosirkulasjonen av bihuler6. Vi beskriver også en enkel prosedyre for å kvantifisere de forskjellige megakaryocyttmodningsstadiene, instruere på regenererings- og blodplateproduksjonskapasiteten til benmargen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,4,6-Tri(dimethylaminomethyl)phenol (DMP-30)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose type LM-3 Low Melting Point Agar</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, USA</td>
			<td>1670-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 Calcium chloride hexahydrate</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>2083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper grids 200 mesh thin-bar</td>
			<td>Oxford Instrument, Agar Scientifics, England</td>
			<td>T200-CU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylarsinic acid sodium salt trihydrate</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>8.20670.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodecenyl Succinic Anhydride (DDSA)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Edge Stainless Razor blade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>EM-72000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolut</td>
			<td>VWR International, France</td>
			<td>20821296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper, 90 mm diameter</td>
			<td>Whatman, England</td>
			<td>512-0326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat embedding silicone mould</td>
			<td>Oxford Instrument, Agar Scientific, England</td>
			<td>G3533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 25%</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>16210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat plate Leica EMMP</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>705402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histo Diamond Knife 45&#176;</td>
			<td>Diatome, Switzerland</td>
			<td>1044797</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEOL 2100 Plus TEM microscope</td>
			<td>JEOL, Japan</td>
			<td>EM-21001BU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate - Ultrostain 2</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>70 55 30 22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LX-112 resin</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2 Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>M2393-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium - Poly(butyl methacrylate-co-methyl methacrylate)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>15320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nadic Methyl Anhydride (NMA)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide 2%</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>19172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propylene oxide (1.2-epoxypropane)</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>82320-250ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline injectable solution 0.9% NaCl</td>
			<td>C.D.M Lavoisier, France</td>
			<td>MA 575 420 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Surgical steel blade</td>
			<td>Swann-Morton, England</td>
			<td>.0508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium tetraborate - Borax</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>B-9876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>84100-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter 0.2&#181;m</td>
			<td>Pall Corporation, USA</td>
			<td>514-4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine blue</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>N10-70975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimmer EM TRIM2</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>702801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome Ultracut UCT</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>656201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>23620</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in situ exploration of murine megakaryopoiesis using transmission electron microscopy

Differensiering og modning av megakaryocytter forekommer i nær tilknytning til de cellulære og ekstracellulære komponentene i benmargen. Disse prosessene er preget av gradvis utseende av essensielle strukturer i megakaryocytt cytoplasma som en polyploid og polylobulert kjerne, et internt membrannettverk kalt avgrensningsmembransystem (DMS) og de tette og alfagranulatene som finnes i sirkulerende blodplater. I denne artikkelen beskriver vi en standardisert protokoll for in situ ultrastrukturell studie av murine megakaryocytter ved hjelp av transmisjonselektronmikroskopi (TEM), noe som muliggjør identifisering av nøkkelegenskaper som definerer modningsstadiet og cellulær tetthet i benmargen. Benmarger skylles, festes, dehydreres i etanol, innebygd i plastharpiks og monteres for å generere tverrsnitt. Semitynne og tynne seksjoner er forberedt på henholdsvis histologiske og TEM observasjoner. Denne metoden kan brukes til en hvilken som helst benmargcelle, i ethvert EM-anlegg og har fordelen av å bruke små prøvestørrelser som tillater kombinasjonen av flere bildemetoder på samme mus.

Benmargs histologi Observasjon av benmargen toluidinblå histologi under et lett mikroskop er nøkkelen til raskt å analysere den generelle vevsarkitekturen når det gjelder for eksempel vevskomprimering, mikrovesselkontinuitet og størrelsen og formen på megakaryocytter (Figur 1D). Det utføres før ultratynne seksjoner for å bestemme behovet for å kutte dypere i benmargsblokken. På grunn av deres gigantiske størrelse og kjernefysiske lobulering, k...

Watch this Scientific Journal Video about In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy at JoVE.com

In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy

Her presenterer vi en protokoll for å analysere ultrastruktur av megakaryocyttene in situ ved hjelp av transmisjonselektronmikroskopi (TEM). Murine benmarger samles, festes, legges inn i epoksyharpiks og kuttes i ultratynne seksjoner. Etter kontrastfarging observeres benmargen under et TEM-mikroskop ved 120 kV.

In situ Utforskning av Murine Megakaryopoiesis ved hjelp av Transmission Electron Microscopy

Differentiation and maturation of megakaryocytes occur in close association with the cellular and extracellular components of the bone marrow. These ...

Det overordnede målet med denne prosedyren er å observere ultrastrukturen til megakaryocytter som ligger i musebenmargen, og å kvantifisere de forskjellige modningsstadiene ved hjelp av høyoppløselig overføringselektronmikroskopi. Den største fordelen er direkte undersøkelse av megakaryocytter i det opprinnelige miljøet, som adskiller seg fra in vitro-dyrkede megakaryocytter som som vi vet ikke når hele modningsnivået. Etter høsting av tibia og lårben fra 12 til 18 uker gamle C57BL/ 6 mus i henhold til standardprotokoller, bruk et skarpt barberblad for å fjerne epifysene fra hvert bein.Hold hvert bein med pinsett, sett inn en 21 gauge nål festet til en fem milliliter sprøyte fylt med kaktocylatbuffer i den ene enden av beinet og skyll benmargen i et 15 milliliter oppsamlingsrør som inneholder to milliliter fersk kaktocylatbuffer. Umiddelbart etter spyling, bruk en plastpipette for å overføre benmargsylindrene til en milliliter fersk glutaraldehydfiksiv løsning for en 60-minutters inkubasjon ved romtemperatur. For innebygging av benmargen i agarose, vask de faste prøvene i fersk kaktocylatbuffer og bruk en plastpipette for å forsiktig overføre benmargen til et glasssklie.Bruk en varm pipette, påfør raskt en dråpe 2% flytende agar til benmargsylindrene, og plasser straks lysbildet på is i ett til to minutter. Når agaren har størknet, bruk et stereomikroskop og et skarpt barberblad for å kaste ekstremitetene til hver benmargssylinder og overføre de trimmede margblokkene til et mikrosentermicentrifugerør på 1,5 milliliter som inneholder en milliliter kaktoylatbuffer. For harpiksinnbygging, fest blokkene med 1% osmium tetroxide i kaktocylatbuffer i en kjemisk hette i en time ved fire grader Celsius før du vasker blokkene en gang med kaktometritbuffer og en gang med destillert vann.Etter vannvasken, flekk blokkene med 4% uranylacetat i destillert vann i en time etterfulgt av to vasker i destillert vann som demonstrert. Etter den siste vasken dehydrerer du blokkene gjennom en stigende serie etanol nedsenkninger og destillert vann som angitt. For å oppnå en jevn infiltrasjon og polymerisering av epoksyharpiksen inne i margen, inkuber blokkene i to påfølgende bad av propylenoksid i 15 minutter før du inkuberer prøvene i en en-til-en-blanding av 100% propylenoksid og epoksyharpiks i en time på en langsom roterende shaker ved romtemperatur.På slutten av inkubasjonen legger du til 100% epoksyharpiks i margblokkene for en nattinkubasjon under de samme forholdene, og tilsett deretter 100% epoksyharpiks for en annen inkubasjon på to timer. På slutten av inkubasjonen, bruk et mikroskop for å orientere margblokkene i flate silikonformer for å tillate deres etterfølgende tverrgående seksjonering og fylle formene med epoksyharpiks før du plasserer dem på 60 grader Celsius i 48 timer. For ultratynn seksjonering monterer du prøveblokken på en ultramikrotomstøtte og monterer støtten på prøveholderen.Bruk en diamantfreser til å trimme prøvene i en 45 graders vinkel for å fjerne overflødig harpiks rundt vevet før du bruker et diamantknivblad utstyrt med en vanntank for å kutte tverrgående 500 og 100 nanometer tykke seksjoner for henholdsvis histologisk og TEM-analyse, og bruk deretter en løkke for å overføre de 500 nanometer tykke seksjonene som flyter på vannoverflaten til en glasssklie og for å deponere 100 nanometer tykke seksjoner som flyter på vannoverflaten til en glasssklie og for å deponere de 100 nanometer tykke delene som flyter på vannoverflaten til en glasssklie og for å deponere 100 nanometertykkelsen seksjoner på 200 mesh tynn bar kobbergitter med et papirfilter under. For toluidinblå farging, etter å ha tegnet de 500 nanometer tykke seksjonene på en 60 graders varm plate, legg til filtrert 1% toluidinblå i destillert vann til seksjonene for en til to-minutters inkubasjon. På slutten av inkubasjonen, vask prøvene med destillert vann.Når lysbildene har tørket, bruk monteringsmedium for å montere prøvene med en dekslelip og se prøvene ved lysmikroskopi. For kontrastfarging, merk de 100 nanometerseksjonene med 4% uranylacetat i fem minutter etterfulgt av tre fem minutters vask med destillert vann. Etter siste vask, flekk seksjonene med blysitrat i tre minutter, etterfulgt av tre fem minutters vask i destillert vann som demonstrert.Etter den siste vasken plasserer du undersiden av hvert rutenett i kontakt med et stykke filterpapir først for å la gitteret plasseres på filterpapiret for å tørke. For å undersøke seksjonene av TEM, når rutenettene har tørket, velg en lav forstørrelse for å vurdere den generelle kvaliteten på preparatene. For å bestemme antall megakaryocytter fra hvert modningsstadium i hver tverrgående seksjon, velg en høyere forstørrelse og kvantifisere antall trinn I, II eller III megakaryocytter bare i firkanter som er fullt dekket av vev.I denne representative histologiske analysen kan kompaktheten mikrofartøykontinuitet og størrelse og form av megakaryocyttene tydelig observeres. Murine megakaryocytter er delt inn i fire stadier av modning. Stage I megakaryocytes har en stor kjerne.Tilstedeværelsen av det tidligste påvisbare stadiet av avgrensningsmembransystemet er også et nøkkelkriterium for dette stadiet. I trinn II begynner granulatformasjonen og utviklingen av avgrensningsmembransystemet initieres. Trinn III megakaryocytter er gigantiske celler med velutviklede avgrensningsmembransystemer, klart definerte cytoplasmiske territorier og perifere soner uten organeller, og eksentrisk plasserte kjerner.Pyrenocyttstadiet av megakaryocyttmodning er preget av en naken kjerne. Som illustrert observeres megakaryocytter ofte i kontakt med endotelceller. Noen ganger danner megakaryocyttene korte invasive fremspring som trenger inn i endotelet, eller de strekker fremftene inn i den sinusformede lumen.TEM tillater også visualisering av ultra strukturelle detaljer, samt tilstedeværelsen av hematopoietiske celler som har blitt oppslukt av megakaryocytter. Benmargspyling må utføres nøye og umiddelbart etter bein disseksjon. For å maksimere vevsintegriteten er margen omgitt av en gel av agar før dehydrering.Etter denne prosedyren kan benmargsblokkene avbildes ved forskjellige forstørrelser eller kan brukes til andre 3D-elektronmikroskopianalyser, for eksempel fokusert ionstråleskanning elektronmikroskopi.

Research

JoVE Journal

Biology

In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy

In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Nano-fEM: Protein Localization Using Photo-activated Localization Microscopy and Electron Microscopy

Nano-FEM: Protein Lokalisering Bruke Photo-aktivert Lokalisering Mikroskopi og elektronmikroskopi

Mapping the distribution of proteins is essential for understanding the function of proteins in a cell. Fluorescence microscopy is extensively used for ...

Rapid Analysis and Exploration of Fluorescence Microscopy Images

Rapid Analyse og Utforskning av fluorescens mikros Images

Despite rapid advances in high-throughput microscopy, quantitative image-based assays still pose significant challenges. While a variety of specialized ...

Tandem High-pressure Freezing and Quick Freeze Substitution of Plant Tissues for Transmission Electron Microscopy

Tandem Høytrykks Frysing og Quick Freeze Bytte av plantemateriale for transmisjonselektronmikroskopi

Since the 1940s transmission electron microscopy (TEM) has been providing biologists with ultra-high resolution images of biological materials. Yet, ...

Plunge Freezing: A Tool for the Ultrastructural and Immunolocalization Studies of Suspension Cells in Transmission Electron Microscopy

Plunge Frysing: Et verktøy for Ultra og Immunolocalization Studier av suspensjonsceller i transmisjonselektronmikroskopi

Transmission Electron Microscopy (TEM) is an extraordinary tool for studying cell ultrastructure, in order to localize proteins and visualize ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

Eksempel forberedelse og bildebehandling for Exosomes av overføring elektronmikroskop

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

Miniatyriserte eksempel forberedelse til overføring elektronmikroskop

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Biologiske utvalg forberedelse av høytrykks fryser, mikrobølgeovn-assistert kontrast ekstrautstyr og Minimal harpiks innebygging volum Imaging

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...