Name: in situ exploration of murine megakaryopoiesis using transmission electron microscopy
Uploaded: 2021-09-08T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить Фабьен Проамер, Жан-Ива Ринкеля, Давида Хоффмана, Моник Фройнд за техническую помощь. Эта работа была поддержана ARMESA (Ассоциация исследований и развития в области медицины и санте), Европейским союзом через Европейский фонд регионального развития (ERDF) и грантом ANR-17-CE14-0001-01 H.d.S.

Все эксперименты на животных проводились в соответствии с европейскими стандартами 2010/63/EU и Комитетом CREMEAS по этике экспериментов на животных Страсбургского университета (Comité Régional d'Ethique en Matière d'Expérimentation Animale Strasbourg). Протокол схематически показан на рисунке 1.
<p class="jove_...

<ol>
	<li>Machlus, K. R., Italiano, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incredible+journey:+From+megakaryocyte+development+to+platelet+formation.">The incredible journey: From megakaryocyte development to platelet formation.</a> The Journal of Cell Biology. 201 (6), 785-796 (2013).</li><li>Zucker-Franklin, D., Termin, C. S., Cooper, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+changes+in+the+megakaryocytes+of+patients+infected+with+the+human+immune+deficiency+virus+(HIV-1).">Structural changes in the megakaryocytes of patients infected with the human immune deficiency virus (HIV-1).</a> American Journal of Pathology. 134 (6), 9 (1989).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenesis+of+the+demarcation+membrane+system+(DMS)+in+megakaryocytes.">Biogenesis of the demarcation membrane system (DMS) in megakaryocytes.</a> Blood. 123 (6), 921-930 (2014).</li><li>Scandola, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+electron+microscopy+to+study+megakaryocytes.">Use of electron microscopy to study megakaryocytes.</a> Platelets. , 1-10 (2020).</li><li>Behnke, O., Forer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+megakaryocytes+to+platelets:+platelet+morphogenesis+takes+place+in+the+bloodstream.">From megakaryocytes to platelets: platelet morphogenesis takes place in the bloodstream.</a> European Journal of Haematology. 60, 3-23 (2009).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+megakaryocyte+development+in+the+native+bone+marrow+environment.">Characterization of megakaryocyte development in the native bone marrow environment.</a> Platelets and Megakaryocytes. 788, 175-192 (2012).</li><li>Brown, E., Carlin, L. M., Nerlov, C., Lo Celso, C., Poole, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+membrane+extrusion+sites+drive+megakaryocyte+migration+into+bone+marrow+blood+vessels.">Multiple membrane extrusion sites drive megakaryocyte migration into bone marrow blood vessels.</a> Life Science Alliance. 1 (2), 201800061 (2018).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Megakaryocytes+use+in+vivo+podosome-like+structures+working+collectively+to+penetrate+the+endothelial+barrier+of+bone+marrow+sinusoids.">Megakaryocytes use in vivo podosome-like structures working collectively to penetrate the endothelial barrier of bone marrow sinusoids.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. , 15024 (2020).</li><li>Cramer, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+of+platelet+formation+by+human+megakaryocytes+cultured+with+the+Mpl+ligand.">Ultrastructure of platelet formation by human megakaryocytes cultured with the Mpl ligand.</a> Blood. 89 (7), 2336-2346 (1997).</li><li>Heijnen, H. F. G., Debili, N., Vainchencker, W., Breton-Gorius, J., Geuze, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivesicular+Bodies+Are+an+Intermediate+Stage+in+the+Formation+of+Platelet+&#945;-Granules.">Multivesicular Bodies Are an Intermediate Stage in the Formation of Platelet &#945;-Granules.</a> Blood. 7 (7), 2313-2325 (1998).</li><li>Gupta, N., Jadhav, K., Shah, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emperipolesis,+entosis+and+cell+cannibalism:+Demystifying+the+cloud.">Emperipolesis, entosis and cell cannibalism: Demystifying the cloud.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Pathology. 21 (1), 92 (2017).</li><li>Centurione, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+and+pathologic+emperipolesis+of+neutrophils+within+megakaryocytes+associated+with+marrow+fibrosis+in+GATA-1low+mice.">Increased and pathologic emperipolesis of neutrophils within megakaryocytes associated with marrow fibrosis in GATA-1low mice.</a> Blood. 104 (12), 3573-3580 (2004).</li><li>Ellis, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+bone,+hemopoietic+stem+cells,+and+vasculature.">The relationship between bone, hemopoietic stem cells, and vasculature.</a> Blood. 118 (6), 1516-1524 (2011).</li><li>Bornert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoskeletal-based+mechanisms+differently+regulate+in+vivo+and+in+vitro+proplatelet+formation.">Cytoskeletal-based mechanisms differently regulate in vivo and in vitro proplatelet formation.</a> Haematologica. , (2020).</li></ol>

Непосредственное исследование мегакариоцитов в их родной среде имеет важное значение для понимания мегакариопоэтиса и образования тромбоцитов. В данной рукописи представлен метод просвечивающей электронной микроскопии, сочетающий промывку костного мозга и фиксацию погружением, по...

Мегакариоциты представляют собой специализированные крупные полиплоидные клетки, локализованные в костном мозге, отвечающие за выработку тромбоцитов1. Они происходят из гемопоэтических стволовых клеток посредством сложного процесса созревания, в ходе которого предшественники мегакариоцитов постепенно увеличиваются в размерах, подвергаясь обширным сопутствующим морфологическим изменениям в цитоплазме и ядре2. Во время созревания мегакариоциты развивают ряд различимых структурных элементов, в том числе: полигобулированное ядро, инвагинации поверхностной мембраны, которые образуют демаркационную мембранную систему (DMS), периферическую зону, лишенную органелл, окруженных цитоскелетной сетью на основе актина, и многочисленные органеллы, включая α-гранулы, плотные гранулы, лизосомы и множественные комплексы Гольджи. На ультраструктурном уровне основной наблюдаемой модификацией является цитоплазматическое разделение на дискретные области, разграниченные DMS3. Этот обширный запас мембран будет способствовать расширению длительных цитоплазматических процессов на начальной фазе производства тромбоцитов, которые затем будут ремоконструированы в тромбоциты внутри циркуляции. Любой дефект во время дифференцировки и созревания мегакариоцитов может влиять на выработку тромбоцитов с точки зрения количества тромбоцитов и/или функции тромбоцитов. 
Тонкослойная просвечивающая электронная микроскопия (ТЭМ) была подходом к визуализации на протяжении десятилетий, обеспечивая высококачественную ультраструктуру мегакариоцитов, которые сформировали наше понимание физиологии тромбопоизиса4,5. В данной статье основное внимание уделяется стандартизированной методике ТЭМ, позволяющей охватить процесс биогенеза тромбоцитов, происходящий in situ в микросреде нативного костного мозга, который также может служить основой для анализа любого типа клеток костного мозга. Приведены ультраструктурные примеры развития мегакариоцитов от незрелых до полностью зрелых, которые расширяют цитоплазматические процессы в микроциркуляцию синусоид6. Мы также описываем простую процедуру количественной оценки различных стадий созревания мегакариоцитов, инструктируя о регенерации и производительности тромбоцитов костного мозга.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,4,6-Tri(dimethylaminomethyl)phenol (DMP-30)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose type LM-3 Low Melting Point Agar</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, USA</td>
			<td>1670-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 Calcium chloride hexahydrate</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>2083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper grids 200 mesh thin-bar</td>
			<td>Oxford Instrument, Agar Scientifics, England</td>
			<td>T200-CU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylarsinic acid sodium salt trihydrate</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>8.20670.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodecenyl Succinic Anhydride (DDSA)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Edge Stainless Razor blade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>EM-72000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolut</td>
			<td>VWR International, France</td>
			<td>20821296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper, 90 mm diameter</td>
			<td>Whatman, England</td>
			<td>512-0326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat embedding silicone mould</td>
			<td>Oxford Instrument, Agar Scientific, England</td>
			<td>G3533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 25%</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>16210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat plate Leica EMMP</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>705402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histo Diamond Knife 45&#176;</td>
			<td>Diatome, Switzerland</td>
			<td>1044797</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEOL 2100 Plus TEM microscope</td>
			<td>JEOL, Japan</td>
			<td>EM-21001BU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate - Ultrostain 2</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>70 55 30 22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LX-112 resin</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2 Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>M2393-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium - Poly(butyl methacrylate-co-methyl methacrylate)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>15320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nadic Methyl Anhydride (NMA)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide 2%</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>19172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propylene oxide (1.2-epoxypropane)</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>82320-250ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline injectable solution 0.9% NaCl</td>
			<td>C.D.M Lavoisier, France</td>
			<td>MA 575 420 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Surgical steel blade</td>
			<td>Swann-Morton, England</td>
			<td>.0508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium tetraborate - Borax</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>B-9876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>84100-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter 0.2&#181;m</td>
			<td>Pall Corporation, USA</td>
			<td>514-4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine blue</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>N10-70975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimmer EM TRIM2</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>702801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome Ultracut UCT</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>656201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>23620</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in situ exploration of murine megakaryopoiesis using transmission electron microscopy

Дифференцировка и созревание мегакариоцитов происходят в тесной связи с клеточными и внеклеточными компонентами костного мозга. Эти процессы характеризуются постепенным появлением в цитоплазме мегакариоцитов существенных структур, таких как полиплоидное и полигобулированное ядро, внутренняя мембранная сеть, называемая демаркационной мембранной системой (DMS), и плотные и альфа-гранулы, которые будут найдены в циркулирующих тромбоцитах. В этой статье мы описываем стандартизированный протокол ультраструктурного исследования in situ мышиных мегакариоцитов с использованием просвечивающей электронной микроскопии (ТЭМ), позволяющий идентифицировать ключевые характеристики, определяющие стадию их созревания и клеточную плотность в костном мозге. Костный мозг промывывается, фиксируется, обезвоживается в этаноле, внедряется в пластиковую смолу и монтируется для создания поперечных сечений. Полутонкие и тонкие срезы подготовлены для гистологических и ТЕА наблюдений соответственно. Этот метод может быть использован для любой клетки костного мозга, в любом электромагнитном объекте и имеет преимущество использования небольших размеров выборки, позволяющих комбинировать несколько подходов к визуализации на одной мыши.

Гистология костного мозга Наблюдение за гистологией толуидинового синего цвета костного мозга под световым микроскопом является ключом к быстрому анализу общей архитектуры ткани с точки зрения, например, компактности тканей, непрерывности микрососудов, а также размера и ф...

Watch this Scientific Journal Video about In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy at JoVE.com

In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy

Здесь мы представляем протокол анализа ультраструктуры мегакариоцитов in situ с помощью просвечивающих электронных микроскопий (ТЭМ). Мышиные косточки собирают, фиксируют, встраивают в эпоксидную смолу и разрезают на ультратонкие срезы. После контрастного окрашивания костный мозг наблюдается под микроскопом ТЭМ на 120 кВ.

На месте Исследование мышиного мегакариопоэтиса с помощью просвечивающих электронных микроскопий

Differentiation and maturation of megakaryocytes occur in close association with the cellular and extracellular components of the bone marrow. These ...

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы наблюдать ультраструктуру мегакариоцитов, расположенных в костном мозге мыши, и количественно оценить различные стадии созревания с помощью просвечивающих электронных микроскопий с высоким разрешением. Основным преимуществом является непосредственное исследование мегакариоцитов в нативной среде, которое отличается от культивированных in vitro мегакариоцитов, которые, как известно, не достигают полного уровня созревания. После сбора большеберцовой и бедренной костей у 12-18-недельных мышей C57BL/6 в соответствии со стандартными протоколами используйте острое лезвие бритвы для удаления эпифизов из каждой кости.Удерживая каждую кость пинцетом, вставьте иглу 21 калибра, прикрепленную к пятимиллилитровой шприц, заполненной какодилатным буфером, в один конец кости и промывайте костный мозг в 15-миллилитровую коллекторную трубку, содержащую два миллилитра свежего какодилатного буфера. Сразу после промывки используйте пластиковую пипетку для переноса цилиндров костного мозга в один миллилитр свежего фиксаторного раствора глутаральдегида для 60-минутной инкубации при комнатной температуре. Для встраивания костного мозга в агарозу промыть неподвижные образцы в свежем какодилатном буфере и использовать пластиковую пипетку, чтобы аккуратно перенести костный мозг на стеклянную горку.Используя теплую пипетку, быстро нанесите каплю 2%-го жидкого агара на цилиндры костного мозга и сразу же поместите горку на лед на одну-две минуты. Когда агар затвердеет, используйте стереомикроскоп и острое лезвие бритвы, чтобы отбросить конечности каждого цилиндра костного мозга и перенести обрезанные блоки костного мозга в 1,5-миллилитровую микроцентрифужную трубку, содержащую один миллилитр какодилатного буфера. Для встраивания смолы зафиксируйте блоки с 1% тетроксидом осмия в какодилатном буфере в химической вытяжке в течение одного часа при четырех градусах Цельсия перед промывкой блоков один раз с какодилатным буфером и один раз с дистиллированной водой.После промывки водой окрашивайте блоки 4% уранилацетатом в дистиллированной воде в течение одного часа с последующей двумя промывками в дистиллированной воде, как показано на казано. После последней промывки обезвоживайте блоки через восходящую серию погружений этанола и дистиллированной воды, как указано. Для получения равномерной инфильтрации и полимеризации эпоксидной смолы внутри костного мозга инкубируют блоки в двух последовательных ваннах оксида пропилена в течение 15 минут перед инкубацией образцов в индивидуальной смеси 100% оксида пропилена и эпоксидной смолы в течение одного часа на медленном ротационном шейкере при комнатной температуре.В конце инкубации добавляют 100% эпоксидную смолу в блоки костного мозга для ночной инкубации в тех же условиях, затем добавляют 100% эпоксидную смолу для еще одной инкубации в течение двух часов. В конце инкубации используйте микроскоп для ориентации блоков костного мозга в плоских силиконовых формах, чтобы обеспечить их последующее поперечное сечение и заполнить формы эпоксидной смолой, прежде чем поместить их при 60 градусах Цельсия в течение 48 часов. Для ультратонкого сечения установите блок образца на ультрамикротомную опору и установите опору на держатель образца.Используйте алмазный фрезерный резак для обрезки образцов под углом 45 градусов, чтобы удалить избыток смолы вокруг ткани, прежде чем использовать лезвие алмазного ножа, оснащенное резервуаром для воды, для резки поперечных участков толщиной 500 и 100 нанометров для гистологического анализа и анализа ТЭМ соответственно, затем используйте петлю для переноса секций толщиной 500 нанометров, плавающих на поверхности воды, на стеклянную горку и нанесения толщины 100 нанометров секции на 200-сетчатых тонких прутках медных сеток с бумажным фильтром внизу. Для окрашивания толуидиновым синим цветом, после нанесения 500-нанометровых разрезов на конфорку с 60 градусами, добавьте фильтрованный 1% толуидиновый синий в дистиллированной воде в секции для одно-двухминутной инкубации. В конце инкубации промыть образцы дистиллированной водой.Когда слайды высохнут, используйте монтажную среду для монтажа образцов с помощью крышки и просмотрите образцы с помощью световой микроскопии. Для контрастного окрашивания маркируют 100-нанометровые участки 4% уранилацетатом в течение пяти минут с последующей тремя пятиминутными промывками дистиллированной водой. После последней промывки окрашивайте участки цитратом свинца в течение трех минут, а затем три пятиминутные промывки в дистиллированной воде, как показано на продемонстрированном виде.После последней стирки сначала поместите нижнюю сторону каждой сетки в контакт с листом фильтровальной бумаги, чтобы сетки можно было поместить на фильтровальную бумагу для высыхания. Для осмотра участков ТЕА, когда сетки высохнут, выберите низкое увеличение для оценки общего качества препаратов. Чтобы определить количество мегакариоцитов из каждой стадии созревания в каждом поперечном сечении, выберите более высокое увеличение и количественно оцените количество мегакариоцитов I, II или III стадии только в квадратах, которые полностью покрыты тканью.В этом репрезентативном гистологическом анализе можно четко наблюдать непрерывность микросовидений компактности, а также размер и форму мегакариоцитов. Мышиные мегакариоциты делятся на четыре стадии созревания. Мегакариоциты I стадии имеют большое ядро.Наличие самой ранней обнаруживаемой стадии демаркационной мембранной системы также является ключевым критерием этой стадии. На II стадии начинается гранулообразование и инициируется развитие демаркационной мембранной системы. Мегакариоциты III стадии представляют собой гигантские клетки с хорошо развитыми демаркационными мембранными системами, четко очерченными цитоплазматическими территориями и периферическими зонами, лишенными органелл, и эксцентрично расположенными ядрами.Пиреноцитарная стадия созревания мегакариоцитов характеризуется голым ядром. Как показано на рисунке, мегакариоциты часто наблюдаются при контакте с эндотелиальными клетками. Иногда мегакариоциты образуют короткие инвазивные выступы, которые проникают в эндотелий или расширяют проплацелеты в синусоидальный просвет.TEM также позволяет визуализировать ультраструктурные детали, а также наличие кроветворных клеток, которые были поглощены мегакариоцитами. Промывка костного мозга должна проводиться осторожно и сразу после рассечения кости. Для максимальной целостности тканей костный мозг перед обезвоживанием облагают гелем агара.После этой процедуры блоки костного мозга могут быть визуанированы при различных увеличениях или могут быть использованы для другого анализа 3D-электронной микроскопии, такого как сфокусированная ионно-лучевая сканирующая электронная микроскопия.

Research

JoVE Journal

Biology

In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy

In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

Натурные съемки Мышь Thymus Использование 2-Фотон микроскопии

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Подготовка эмбрионов для электронной микроскопии Drosophila Эмбриональные трубки сердца

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Nano-fEM: Protein Localization Using Photo-activated Localization Microscopy and Electron Microscopy

Нано-FEM: Белка Локализация с использованием фото-активированного микроскопии локализации и электронная микроскопия

Mapping the distribution of proteins is essential for understanding the function of proteins in a cell. Fluorescence microscopy is extensively used for ...

Rapid Analysis and Exploration of Fluorescence Microscopy Images

Экспресс-анализ и разведка флуоресцентной микроскопии Images

Despite rapid advances in high-throughput microscopy, quantitative image-based assays still pose significant challenges. While a variety of specialized ...

Tandem High-pressure Freezing and Quick Freeze Substitution of Plant Tissues for Transmission Electron Microscopy

Тандем Замораживание высокого давления и резких похолоданий Замена тканей растений для просвечивающей электронной микроскопии

Since the 1940s transmission electron microscopy (TEM) has been providing biologists with ultra-high resolution images of biological materials. Yet, ...

Plunge Freezing: A Tool for the Ultrastructural and Immunolocalization Studies of Suspension Cells in Transmission Electron Microscopy

Погружение Замораживание: Инструмент для ультраструктурных и иммунолокализации исследований в суспензии клеток в просвечивающей электронной микроскопии

Transmission Electron Microscopy (TEM) is an extraordinary tool for studying cell ultrastructure, in order to localize proteins and visualize ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

Подготовка образцов и изображений Exosomes, просвечивающей электронной микроскопии

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

Миниатюрных Пробоподготовка для просвечивающей электронной микроскопии

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Подготовка биологический образец высокого давления замораживания, при содействии Микроволновая печь контрастности и минимальным смолы, встраивание образов тома

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...