Name: in situ exploration of murine megakaryopoiesis using transmission electron microscopy
Uploaded: 2021-09-08T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy at JoVE.com

Författarna vill tacka Fabienne Proamer, Jean-Yves Rinckel, David Hoffmann, Monique Freund för tekniskt stöd. Detta arbete stöddes av ARMESA (Association de Recherche et Développement en Médecine et Santé Publique), Europeiska unionen genom Europeiska regionala utvecklingsfonden (ERUF) och genom anslag ANR-17-CE14-0001-01 till H.d.S.

Alla djurförsök utfördes i enlighet med europeiska standarder 2010/63/EU och CREMEAS Committee on the Ethics of Animal Experiments vid universitetet i Strasbourg (Comité Régional d'Ethique en Matière d'Expérimentation Animale Strasbourg). Protokollet visas schematiskt i figur 1.
1. Insamling och fixering av benmärg (figur 1A)
VARNING: Denna procedur omfattar cancerframkallande, mutagena och/eller gift...

<ol>
	<li>Machlus, K. R., Italiano, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+incredible+journey:+From+megakaryocyte+development+to+platelet+formation.">The incredible journey: From megakaryocyte development to platelet formation.</a> The Journal of Cell Biology. 201 (6), 785-796 (2013).</li><li>Zucker-Franklin, D., Termin, C. S., Cooper, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+changes+in+the+megakaryocytes+of+patients+infected+with+the+human+immune+deficiency+virus+(HIV-1).">Structural changes in the megakaryocytes of patients infected with the human immune deficiency virus (HIV-1).</a> American Journal of Pathology. 134 (6), 9 (1989).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenesis+of+the+demarcation+membrane+system+(DMS)+in+megakaryocytes.">Biogenesis of the demarcation membrane system (DMS) in megakaryocytes.</a> Blood. 123 (6), 921-930 (2014).</li><li>Scandola, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+electron+microscopy+to+study+megakaryocytes.">Use of electron microscopy to study megakaryocytes.</a> Platelets. , 1-10 (2020).</li><li>Behnke, O., Forer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+megakaryocytes+to+platelets:+platelet+morphogenesis+takes+place+in+the+bloodstream.">From megakaryocytes to platelets: platelet morphogenesis takes place in the bloodstream.</a> European Journal of Haematology. 60, 3-23 (2009).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+megakaryocyte+development+in+the+native+bone+marrow+environment.">Characterization of megakaryocyte development in the native bone marrow environment.</a> Platelets and Megakaryocytes. 788, 175-192 (2012).</li><li>Brown, E., Carlin, L. M., Nerlov, C., Lo Celso, C., Poole, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+membrane+extrusion+sites+drive+megakaryocyte+migration+into+bone+marrow+blood+vessels.">Multiple membrane extrusion sites drive megakaryocyte migration into bone marrow blood vessels.</a> Life Science Alliance. 1 (2), 201800061 (2018).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Megakaryocytes+use+in+vivo+podosome-like+structures+working+collectively+to+penetrate+the+endothelial+barrier+of+bone+marrow+sinusoids.">Megakaryocytes use in vivo podosome-like structures working collectively to penetrate the endothelial barrier of bone marrow sinusoids.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. , 15024 (2020).</li><li>Cramer, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+of+platelet+formation+by+human+megakaryocytes+cultured+with+the+Mpl+ligand.">Ultrastructure of platelet formation by human megakaryocytes cultured with the Mpl ligand.</a> Blood. 89 (7), 2336-2346 (1997).</li><li>Heijnen, H. F. G., Debili, N., Vainchencker, W., Breton-Gorius, J., Geuze, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivesicular+Bodies+Are+an+Intermediate+Stage+in+the+Formation+of+Platelet+&#945;-Granules.">Multivesicular Bodies Are an Intermediate Stage in the Formation of Platelet &#945;-Granules.</a> Blood. 7 (7), 2313-2325 (1998).</li><li>Gupta, N., Jadhav, K., Shah, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emperipolesis,+entosis+and+cell+cannibalism:+Demystifying+the+cloud.">Emperipolesis, entosis and cell cannibalism: Demystifying the cloud.</a> Journal of Oral and Maxillofacial Pathology. 21 (1), 92 (2017).</li><li>Centurione, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+and+pathologic+emperipolesis+of+neutrophils+within+megakaryocytes+associated+with+marrow+fibrosis+in+GATA-1low+mice.">Increased and pathologic emperipolesis of neutrophils within megakaryocytes associated with marrow fibrosis in GATA-1low mice.</a> Blood. 104 (12), 3573-3580 (2004).</li><li>Ellis, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relationship+between+bone,+hemopoietic+stem+cells,+and+vasculature.">The relationship between bone, hemopoietic stem cells, and vasculature.</a> Blood. 118 (6), 1516-1524 (2011).</li><li>Bornert, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoskeletal-based+mechanisms+differently+regulate+in+vivo+and+in+vitro+proplatelet+formation.">Cytoskeletal-based mechanisms differently regulate in vivo and in vitro proplatelet formation.</a> Haematologica. , (2020).</li></ol>

Direkt undersökning av megakaryocyter i deras ursprungliga miljö är avgörande för att förstå megakaryopoiesis och trombocytbildning. I detta manuskript tillhandahåller vi en överföring elektronmikroskopi metod som kombinerar benmärg spolning och fixering genom nedsänkning, så att dissekera in situ morfologi egenskaper hos hela processen av megakaryocyt morfogenes äger rum i benmärgen.
Spolningen av benmärgen är ett kritiskt steg i denna metod, eftersom framgången fö...

Megakaryocyter är specialiserade stora polyploida celler, lokaliserade i benmärgen, ansvariga för trombocytproduktion1. De härstammar från hematopoetiska stamceller genom en invecklad mognadsprocess, under vilken megakaryocytprekursorer gradvis ökar i storlek, samtidigt som de genomgår omfattande samtidiga morfologiska förändringar i cytoplasman och kärnan2. Under mognad utvecklar megakaryocyter ett antal urskiljbara strukturella element, inklusive: en polylobulerad kärna, invaginationer av ytmembranet som bildar avgränsning membranet (DMS), en perifer zon utan organeller omgiven av det aktinbaserade cytoskeletala nätverket och många organeller inklusive α-granuler, täta granulat, lysosomer och flera Golgi-komplex. På den strukturella nivån är en större modifiering som observeras den cytoplasmiska compartmentalizationen i diskreta regioner avgränsade av DMS3. Denna omfattande tillförsel av membran kommer att driva förlängningen av långa cytoplasmiska processer i den inledande fasen av trombocytproduktionen, som sedan kommer att omvandlas till trombocyter inuti cirkulationen. Eventuella defekter under megakaryocytdifferentiering och mognad kan påverka trombocytproduktionen när det gäller trombocytantal och/eller trombocytfunktion. 
Tunt lager transmission elektronmikroskopi (TEM) har varit den bildframställningsmetod som valts i årtionden vilket ger högkvalitativ ultrastruktur av megakaryocyter som har format vår förståelse av fysiologin hos trombopoiesis4,5. Detta dokument fokuserar på en standardiserad TEM-metod som gör det möjligt att fånga processen av trombocyt biogenes som förekommer in situ inom den inhemska benmärg mikromiljön, som också kan tjäna som grund för att analysera någon benmärg cell typ. Vi ger strukturella exempel på utvecklingen av megakaryocyter från omogna till fullt mogna, vilket förlänger cytoplasmiska processer till mikrocirkulationen av sinusoider6. Vi beskriver också ett enkelt förfarande för att kvantifiera de olika megakaryocyt mogna stadierna, instruera om regenerering och trombocyt produktionskapacitet benmärgen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2,4,6-Tri(dimethylaminomethyl)phenol (DMP-30)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose type LM-3 Low Melting Point Agar</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences, USA</td>
			<td>1670-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 Calcium chloride hexahydrate</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>2083</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper grids 200 mesh thin-bar</td>
			<td>Oxford Instrument, Agar Scientifics, England</td>
			<td>T200-CU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylarsinic acid sodium salt trihydrate</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>8.20670.0250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodecenyl Succinic Anhydride (DDSA)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Edge Stainless Razor blade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>EM-72000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol absolut</td>
			<td>VWR International, France</td>
			<td>20821296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper, 90 mm diameter</td>
			<td>Whatman, England</td>
			<td>512-0326</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flat embedding silicone mould</td>
			<td>Oxford Instrument, Agar Scientific, England</td>
			<td>G3533</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde 25%</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>16210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat plate Leica EMMP</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>705402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histo Diamond Knife 45&#176;</td>
			<td>Diatome, Switzerland</td>
			<td>1044797</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>JEOL 2100 Plus TEM microscope</td>
			<td>JEOL, Japan</td>
			<td>EM-21001BU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lead citrate - Ultrostain 2</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>70 55 30 22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LX-112 resin</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2 Magnesium chloride hexahydrate</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>M2393-100g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting medium - Poly(butyl methacrylate-co-methyl methacrylate)</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences-EMS, USA</td>
			<td>15320</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nadic Methyl Anhydride (NMA)</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>21350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide 2%</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>19172</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propylene oxide (1.2-epoxypropane)</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>82320-250ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline injectable solution 0.9% NaCl</td>
			<td>C.D.M Lavoisier, France</td>
			<td>MA 575 420 6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel Surgical steel blade</td>
			<td>Swann-Morton, England</td>
			<td>.0508</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium tetraborate - Borax</td>
			<td>Sigma, France</td>
			<td>B-9876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Merck, Germany</td>
			<td>84100-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter 0.2&#181;m</td>
			<td>Pall Corporation, USA</td>
			<td>514-4126</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine blue</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>N10-70975</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimmer EM TRIM2</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>702801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome Ultracut UCT</td>
			<td>Leica Microsystems GmbH, Austria</td>
			<td>656201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Uranyl acetate</td>
			<td>Ladd Research Industries, USA</td>
			<td>23620</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in situ exploration of murine megakaryopoiesis using transmission electron microscopy

Differentiering och mognad av megakaryocyter förekommer i nära samband med cellulära och extracellulära komponenter i benmärgen. Dessa processer kännetecknas av det gradvisa utseendet av väsentliga strukturer i megakaryocytcytplasman såsom en polyploid och polylobulated kärna, ett internt membrannätverk som kallas avgränsning membransystem (DMS) och de täta och alfagranulat som finns i cirkulerande trombocyter. I den här artikeln beskriver vi ett standardiserat protokoll för in situ ultrastructural studie av murine megakaryocyter med hjälp av överföring elektronmikroskopi (TEM), vilket möjliggör identifiering av viktiga egenskaper som definierar deras mognadsstadium och cellulära densitet i benmärgen. Benmärgar spolas, fixeras, dehydreras i etanol, bäddas in i plastharts och monteras för att generera tvärsnitt. Halvtunna och tunna sektioner är förberedda för histologiska respektive TEM observationer. Denna metod kan användas för alla benmärgsceller, i alla EM-anläggningar och har fördelen att använda små provstorlekar som möjliggör kombinationen av flera bildframställningsmetoder på samma mus.

Benmärg histologi Observation av benmärgens toluidinblå histologi under ett ljusmikroskop är nyckeln till att snabbt analysera den övergripande vävnadsarkitekturen när det gäller t.ex. vävnadskomprimitet, mikrovesselkontinuitet och storlek och form av megakaryocyter (figur 1D). Det utförs före ultrathin sektioner för att bestämma behovet av att skära djupare i benmärg blocket. På grund av deras jättestorlek och nukleära lobulation kan de...

Watch this Scientific Journal Video about In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy at JoVE.com

In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy

Här presenterar vi ett protokoll för att analysera ultrastructure av megakaryocyterna in situ med hjälp av överföring elektronmikroskopi (TEM). Murin benmärg samlas in, fixas, bäddas in i epoxiharts och skärs i ultrathin sektioner. Efter kontrastfärgning observeras benmärgen under ett TEM-mikroskop vid 120 kV.

In situ Utforskning av Murine Megakaryopoiesis med transmissionselektronmikroskopi

Differentiation and maturation of megakaryocytes occur in close association with the cellular and extracellular components of the bone marrow. These ...

Det övergripande målet med denna procedur är att observera ultrastrukturen hos megakaryocyter som ligger inom musbenets märg och att kvantifiera de olika mognadsstegen med hjälp av högupplöst transmission elektronmikroskopi. Den största fördelen är den direkta undersökningen av megakaryocyter i den inhemska miljön, som skiljer sig från in vitro-odlade megakaryocyter som som vi vet inte når hela mognadsnivån. Efter att ha skördat skenbenet och lårbenen från 12 till 18 veckor gamla C57BL/6 möss enligt standardprotokoll, använd ett vasst rakblad för att ta bort epifyserna från varje ben.Håll varje ben med pincett, sätt in en 21 gauge nål fäst vid en fem milliliter spruta fylld med cacodylate buffert i ena änden av benet och spola benmärgen i ett 15 milliliter uppsamlingsrör som innehåller två milliliter färsk cacodylatebuffert. Omedelbart efter spolning, använd en plastpipett för att överföra benmärgscylindrarna till en milliliter färsk glutaraldehydfixativ lösning för en 60-minuters inkubation vid rumstemperatur. För inbäddning av benmärgen i agaros, tvätta de fasta proverna i färsk cacodylatebuffert och använd en plastpipett för att försiktigt överföra benmärgen till en glasrutschbana.Använd en varm pipett, applicera snabbt en droppe 2% flytande agar på benmärgscylindrarna och placera omedelbart glidningen på is i en till två minuter. När agaren har stelnat, använd ett stereomikroskop och ett vasst rakblad för att kassera extremiteterna på varje benmärgscylinder och överföra de trimmade märgblocken till ett 1,5 milliliter mikrocentrifugerör som innehåller en milliliter cacodylatbuffert. För hartsinbäddning, fixera blocken med 1%osmium tetroxid i cacodylate buffert i en kemisk huva i en timme vid fyra grader Celsius innan du tvättar blocken en gång med cacodylate buffert och en gång med destillerat vatten.Efter vattentvätten, färga blocken med 4% uranylacetat i destillerat vatten i en timme följt av två tvättar i destillerat vatten som visats. Efter den sista tvätten, dehydrera blocken genom en stigande serie etanol nedsänkningar och destillerat vatten enligt vad som anges. För att få en enhetlig infiltration och polymerisation av epoxihartset inuti märgen, inkubera blocken i två på varandra följande bad av propylenoxid i 15 minuter innan du inkuberar proverna i en 1-till-1-blandning av 100% propylenoxid och epoxiharts i en timme på en långsam roterande shaker vid rumstemperatur.I slutet av inkubationen tillsätt 100% epoxiharts till märgblocken för en inkubation över natten under samma förhållanden och tillsätt sedan 100% epoxiharts för en annan inkubation på två timmar. I slutet av inkubationen, använd ett mikroskop för att orientera märgblocken i platta silikonformar för att tillåta deras efterföljande tvärgående sektionering och fylla formarna med epoxiharts innan du placerar dem vid 60 grader Celsius i 48 timmar. För ultratunn sektionering monterar du provblocket på ett ultramikrotomstöd och monterar stödet på provhållaren.Använd en diamantfräs för att trimma proverna i 45 graders vinkel för att ta bort överskottet av harts runt vävnaden innan du använder ett diamantknivblad utrustat med en vattentank för att skära tvärgående 500 och 100 nanometer tjocka sektioner för histologisk respektive TEM-analys, använd sedan en slinga för att överföra de 500 nanometer tjocka sektionerna som flyter på vattenytan på en glasrutschbana och för att deponera de 100 nanometer tjocka sektioner på 200 mesh tunna stång koppargaller med ett pappersfilter under. För toluidinblå färgning, efter att ha ritat de 500 nanometer tjocka sektionerna på en 60 graders kokplatta, tillsätt filtrerad 1% toluidinblå i destillerat vatten till sektionerna för en till två minuters inkubation. Tvätta proverna med destillerat vatten i slutet av inkubationen.När diabilderna har torkat, använd monteringsmedium för att montera proverna med ett täckben och visa proverna genom ljusmikroskopi. För kontrastfärgning, märk 100 nanometerssektionerna med 4% uranylacetat i fem minuter följt av tre femminuterstvättar med destillerat vatten. Efter den sista tvätten, fläcka sektionerna med blycitrat i tre minuter, följt av tre fem minuters tvättar i destillerat vatten som visats.Efter den sista tvätten, placera undersidan av varje galler i kontakt med ett filterpapper först så att gallret placeras på filterpapperet att torka. Om du vill undersöka avsnitten efter TEM väljer du en låg förstoring när gallren har torkat för att bedöma preparatens allmänna kvalitet. För att bestämma antalet megakaryocyter från varje mognadsstadium i varje tvärsnitt väljer du en högre förstoring och kvantifierar antalet megakaryocyter i steg I, II eller III endast i rutor som är helt täckta av vävnad.I denna representativa histologiska analys kan kompaktiteten mikrokärlets kontinuitet och storlek och form av megakaryocyterna tydligt observeras. Murine megakaryocyter är indelade i fyra mognadsstadier. Steg I megakaryocyter har en stor kärna.Förekomsten av det tidigaste detekterbara stadiet av avgränsning membransystemet är också ett viktigt kriterium i detta skede. I steg II börjar granulatbildning och utvecklingen av avgränsningssystemet initieras. Steg III megakaryocyter är jätteceller med välutvecklade avgränsningsmembransystem, tydligt definierade cytoplasmiska territorier och perifera zoner utan organeller och excentriskt belägna atomkärnor.Pyrenocytstadiet av megakaryocyt mognad kännetecknas av en naken kärna. Som illustreras observeras megakaryocyter ofta i kontakt med endotelceller. Ibland bildar megakaryocyterna korta invasiva utskjutningar som tränger in i endotel eller de förlänger proplatelets i sinusformad lumen.TEM tillåter också visualisering av ultrastrukturära detaljer, liksom närvaron av hematopoetiska celler som har uppslukats av megakaryocyterna. Benmärgsspolning måste utföras noggrant och omedelbart efter benmärgsdesektion. För att maximera vävnadens integritet är märgen omgiven av en agargel före uttorkning.Efter denna procedur kan benmärgsblocken avbildas vid olika förstoringar eller användas för annan 3D-elektronmikroskopianalys, såsom fokuserad jonstråleskanningselektronmikroskopi.

Research

JoVE Journal

Biology

In Situ Exploration of Murine Megakaryopoiesis using Transmission Electron Microscopy

In situ Imaging of the Mouse Thymus Using 2-Photon Microscopy

In situ avbildning av Mouse Thymus Använda 2-Photon Mikroskopi

Two-photon Microscopy (TPM) enables us to image deep into the thymus and document the events that are important for thymocyte development.  To follow the ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Beredning av embryon för elektronmikroskopi av Drosophila Embryonala hjärta tub

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Nano-fEM: Protein Localization Using Photo-activated Localization Microscopy and Electron Microscopy

Nano-Fem: proteinlokalisering Använda Photo-aktiverad lokalisering Mikroskopi och elektronmikroskopi

Mapping the distribution of proteins is essential for understanding the function of proteins in a cell. Fluorescence microscopy is extensively used for ...

Rapid Analysis and Exploration of Fluorescence Microscopy Images

Snabb analys och utforskningen av fluorescensmikroskopi bilder

Despite rapid advances in high-throughput microscopy, quantitative image-based assays still pose significant challenges. While a variety of specialized ...

Tandem High-pressure Freezing and Quick Freeze Substitution of Plant Tissues for Transmission Electron Microscopy

Tandem Högtrycks Frysning och Quick Freeze Substitution av växtvävnad för transmissionselektronmikroskopi

Since the 1940s transmission electron microscopy (TEM) has been providing biologists with ultra-high resolution images of biological materials. Yet, ...

Plunge Freezing: A Tool for the Ultrastructural and Immunolocalization Studies of Suspension Cells in Transmission Electron Microscopy

Plunge Frysning: ett verktyg för Ultra och immunlokalisering Studier av suspensionsceller i transmissionselektronmikroskopi

Transmission Electron Microscopy (TEM) is an extraordinary tool for studying cell ultrastructure, in order to localize proteins and visualize ...

Sample Preparation and Imaging of Exosomes by Transmission Electron Microscopy

Provberedning och avbildning av Exosomes av transmissionselektronmikroskopi

Exosomes are nano-sized extracellular vesicles secreted by body fluids and are known to represent the characteristics of cells that secrete them. The ...

Miniaturized Sample Preparation for Transmission Electron Microscopy

Miniatyriserade provberedning för transmissionselektronmikroskopi

Due to recent technological progress, cryo-electron microscopy (cryo-EM) is rapidly becoming a standard method for the structural analysis of protein ...

Biological Sample Preparation by High-pressure Freezing, Microwave-assisted Contrast Enhancement, and Minimal Resin Embedding for Volume Imaging

Biologiska provberedning genom högtrycks frysning, mikrovågsugn-assisted kontrastförbättring, och Minimal harts inbäddning för volym Imaging

The described sample preparation technique is designed to combine the best quality of ultrastructural preservation with the most suitable contrast for the ...