Name: proplatelet formation dynamics of mouse fresh bone marrow explants
Uploaded: 2021-05-20T15:00:00
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लेखक तकनीकी सहायता के लिए जीन-येव्स रिंकेल, जूली बोशर, पेट्रीसिया लैफर, मोनिक फ्रायंड, केट्टी Knez-Hippert का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं । इस काम को एएनआर (एग्नेस नेशनल डे ला रेचेचे) ग्रांट एएनआर-17-सीई14-0001-01 और एएनआर-18-सीई14-0037 ने सपोर्ट किया है ।

सभी पशु प्रयोगों यूरोपीय मानकों के अनुसार प्रदर्शन किया गया 2010/63/यूरोपीय संघ और स्ट्रासबर्ग विश्वविद्यालय के पशु प्रयोगों की नैतिकता पर CREMEAS समिति (Comité Régional d' Ethique en Matière d ' Expérimentation Animale स्ट्रासबर्ग) ।
1. र?...

<ol>
	<li>Thiery, J. P., Bessis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+platelet+genesis;+in+vitro+study+by+cinemicrophotography.">Mechanism of platelet genesis; in vitro study by cinemicrophotography.</a> Reviews in Hematology. 11 (2), 162-174 (1956).</li><li>Becker, R. P., De Bruyn, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transmural+passage+of+blood+cells+into+myeloid+sinusoids+and+the+entry+of+platelets+into+the+sinusoidal+circulation:+A+scanning+electron+microscopic+investigation.">The transmural passage of blood cells into myeloid sinusoids and the entry of platelets into the sinusoidal circulation: A scanning electron microscopic investigation.</a> American Journal of Anatomy. 145 (2), 183-205 (1976).</li><li>Muto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+scanning+and+transmission+electron+microscopic+study+on+rat+bone+marrow+sinuses+and+transmural+migration+of+blood+cells.">A scanning and transmission electron microscopic study on rat bone marrow sinuses and transmural migration of blood cells.</a> Archivum Histologicum Japonicum. 39 (1), 51-66 (1976).</li><li>Cramer, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrastructure+of+platelet+formation+by+human+megakaryocytes+cultured+with+the+Mpl+ligand.">Ultrastructure of platelet formation by human megakaryocytes cultured with the Mpl ligand.</a> Blood. 89 (7), 2336-2346 (1997).</li><li>Kaushansky, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+megakaryocyte+progenitor+expansion+and+differentiation+by+the+c-Mpl+ligand+thrombopoietin.">Promotion of megakaryocyte progenitor expansion and differentiation by the c-Mpl ligand thrombopoietin.</a> Nature. 369 (6481), 568-571 (1994).</li><li>Strassel, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hirudin+and+heparin+enable+efficient+megakaryocyte+differentiation+of+mouse+bone+marrow+progenitors.">Hirudin and heparin enable efficient megakaryocyte differentiation of mouse bone marrow progenitors.</a> Experimental Cell Research. 318 (1), 25-32 (2012).</li><li>Aguilar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+environmental+stiffness+for+megakaryocyte+differentiation+and+proplatelet+formation.">Importance of environmental stiffness for megakaryocyte differentiation and proplatelet formation.</a> Blood. 128 (16), 2022-2032 (2016).</li><li>Scandola, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+electron+microscopy+to+study+megakaryocytes.">Use of electron microscopy to study megakaryocytes.</a> Platelets. 31 (5), 589-598 (2020).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+megakaryocyte+development+in+the+native+bone+marrow+environment.">Characterization of megakaryocyte development in the native bone marrow environment.</a> Methods in Molecular Biology. 788, 175-192 (2012).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+megakaryocyte+morphology+and+proplatelet+formation+in+mice+with+megakaryocyte-restricted+MYH9+inactivation.">Abnormal megakaryocyte morphology and proplatelet formation in mice with megakaryocyte-restricted MYH9 inactivation.</a> Blood. 113 (14), 3182-3189 (2009).</li><li>Eckly, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proplatelet+formation+deficit+and+megakaryocyte+death+contribute+to+thrombocytopenia+in+Myh9+knockout+mice.">Proplatelet formation deficit and megakaryocyte death contribute to thrombocytopenia in Myh9 knockout mice.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 8 (10), 2243-2251 (2010).</li><li>Ortiz-Rivero, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C3G,+through+its+GEF+activity,+induces+megakaryocytic+differentiation+and+proplatelet+formation.">C3G, through its GEF activity, induces megakaryocytic differentiation and proplatelet formation.</a> Cell Communication and Signaling. 16 (1), 101 (2018).</li><li>Junt, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+visualization+of+thrombopoiesis+within+bone+marrow.">Dynamic visualization of thrombopoiesis within bone marrow.</a> Science. 317 (5845), 1767-1770 (2007).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+MYH9-related+disease:+mutations+in+nonmuscle+myosin+II-A.">Mouse models of MYH9-related disease: mutations in nonmuscle myosin II-A.</a> Blood. 119 (1), 238-250 (2012).</li><li>Malara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+structure+and+nano-mechanics+determine+megakaryocyte+function.">Extracellular matrix structure and nano-mechanics determine megakaryocyte function.</a> Blood. 118 (16), 4449-4453 (2011).</li><li>Balduini, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adhesive+receptors,+extracellular+proteins+and+myosin+IIA+orchestrate+proplatelet+formation+by+human+megakaryocytes.">Adhesive receptors, extracellular proteins and myosin IIA orchestrate proplatelet formation by human megakaryocytes.</a> Journal of Thrombosis and Haemostasis. 6 (11), 1900-1907 (2008).</li></ol>

यहां हम बोन मैरो में बड़े हुए प्रोपलेट्स का विस्तार करने के लिए मेगाकारियोसाइट्स की दक्षता का मूल्यांकन करने के लिए एक सरल और कम लागत वाली इन विट्रो विधि का वर्णन करते हैं। माउस के लिए बोन मैरो एक्स?...

बोन मैरो एक्सप्लांट तकनीक को सबसे पहले 1956 में थिएरी और बेसिस द्वारा विकसित किया गया था ताकि प्लेटलेट निर्माण में प्रारंभिक घटना के रूप में चूहा मेगाकारियोसाइट साइटोप्लाज्मिक एक्सटेंशन केगठनका वर्णन किया जा सके। चरण के विपरीत और छायांकन तकनीकों का उपयोग करते हुए, इन लेखकों ने परिपक्व दौर मेगाकारियोसाइट्स के परिवर्तन को "स्क्विड-लाइक" थ्रोम्बोसाइटोजेनिक कोशिकाओं में चित्रित किया, जिसमें साइटोप्लाज्मिक एक्सटेंशन के साथ विस्तार और संकुचन के गतिशील आंदोलनों को दिखाया गया था। ये हथियार उत्तरोत्तर पतले हो जाते हैं जब तक कि वे बाहों के साथ और सुझावों पर छोटी सूजन के साथ फिलीफॉर्म न हो जाएं। इन विशिष्ट मेगाकार्योसाइट विस्तार, विट्रो और तरल मीडिया में प्राप्त, निश्चित अस्थि मज्जा में मनाए गए प्लेटलेट्स के साथ कुछ समानताएं हैं, जहां मेगाकारियोसाइट्स साइनसॉयड दीवारों के माध्यम से रक्त परिसंचरण2,3मेंलंबेविस्तार को फैलाते हैं। 1994 में टीपीओ की खोज और क्लोनिंग ने संस्कृति में मेगाकारियोसाइट्स को अंतर करने की अनुमति दी, जो बोन मैरोएक्सप्लांट4,5,6में वर्णित प्रोपलेट एक्सटेंशन के समान है। हालांकि, मेगाकारियोसाइट परिपक्वता संस्कृति की स्थितियों में बहुत कम कुशल है, विशेष रूप से अस्थि मज्जा परिपक्व मेगाकारियोसाइट्स का व्यापक आंतरिक झिल्ली नेटवर्क सुसंस्कृत मेगाकारियोसाइट्स में अविकसित है, प्लेटलेट बायोजेनेसिस7,8के तंत्र पर अध्ययन में बाधा डालता है।
हम यहां विस्तार से थेरी और बीसिस पर आधारित बोन मैरो एक्सप्लांट मॉडल, माउस मेगाकारियोसाइट्स के वास्तविक समय के प्रोपलेट गठन में पालन करने के लिए, जो अपने मूल वातावरण में पूरी तरह से परिपक्व हो गए हैं, इस प्रकार विट्रो कलाकृतियों और गलत व्याख्याओं में संभव दरकिनार करते हैं। जंगली प्रकार के वयस्क चूहों में प्राप्त परिणामों को प्रोपलेटलेट, उनकी आकृति विज्ञान और प्रोपलेटर की जटिलता का विस्तार करने के लिए मेगाकार्योसाइट की क्षमता को चित्रित करने के लिए प्रस्तुत किया जाता है। हम मेगाकारियोसाइट रिकॉर्डिंग प्रक्रिया के दौरान डेटा सटीकता और मजबूती सुनिश्चित करने के लिए गुणवत्ता सत्यापन के लिए एक तेजी से मात्रात्मक रणनीति भी पेश करते हैं। यहां प्रस्तुत प्रोटोकॉल एक पुस्तक अध्याय के रूप में प्रकाशित विधि का सबसे हाल ही में संस्करण है9पहले ।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 mL syringes</td>
			<td>Terumo</td>
			<td>SS+05S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>21-gauge needles</td>
			<td>BD Microlance</td>
			<td>301155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2.6H2O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>21108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverwall Incubation Chambers</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>70324-02</td>
			<td>Depth : 0,2 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H-3375</td>
			<td>pH adjusted to 7.5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human serum albumin</td>
			<td>VIALEBEX</td>
			<td>authorized medication : n&#176; 3400956446995</td>
			<td>20% (200mg/mL -100mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2.6H2O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>BVBW8448</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Cover Glass</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72200-40</td>
			<td>22 mm x 55 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica Microsystems SA, Westlar, Germany</td>
			<td>DMI8 - 514341</td>
			<td>air lens</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microscope camera</td>
			<td>Leica Microsystems SA, Westlar, Germany</td>
			<td>K5 CMS GmbH -14401137</td>
			<td>image resolution : 4.2 megapixel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse serum</td>
			<td>BioWest</td>
			<td>S2160-010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4.H2O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PSG 100x</td>
			<td>Gibco, Life Technologies</td>
			<td>1037-016</td>
			<td>10,000 units/mL penicillin, 10,000 &#956;g/mL streptomycin and 29.2 mg/mL glutamine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose D (+)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

proplatelet formation dynamics of mouse fresh bone marrow explants

मेगाकारियोपोइसिस के अंतिम चरण में परिपक्व मेगाकारियोसाइट्स, तथाकथित प्रोपलेटलेट्स से साइटोप्लाज्मिक एक्सटेंशन होता है। इन विट्रो-विभेदित मेगाकारियोसाइट्स का उपयोग करके प्रॉप्लेलेट गठन के बारे मेंबहुत कुछ सीखा गया है; हालांकि, इस बात का सबूत बढ़ रहा है कि पारंपरिक संस्कृति प्रणालियां अस्थि मज्जा के अंदर होने वाली भेदभाव/परिपक्वता प्रक्रिया को ईमानदारी से पुनर्मूल्यांकन नहीं करती हैं । इस पांडुलिपि में, हम शुरू में थिएरी और बेसिस द्वारा 1 9 56 में वर्णित एक एक्सप्लांट विधि प्रस्तुत करते हैं ताकि मेगाकारियोसाइट्स की कल्पना की जा सके जो उनके मूल वातावरण में परिपक्व हो गए हैं, इस प्रकार संभावित कलाकृतियों और गलत व्याख्याओं को दरकिनार करते हैं। ताजा अस्थि मज्जा चूहों के फीमर को फ्लश करके एकत्र किए जाते हैं, 0.5 मिमी क्रॉस सेक्शन में कटा हुआ है, और एक इनक्यूबेशन कक्ष में 37 डिग्री सेल्सियस पर रखा जाता है जिसमें शारीरिक बफर होता है। मेगाकारियोसाइट्स एक्सप्लांट परिधि में धीरे-धीरे दिखाई देते हैं और एक वीडियो कैमरे के साथ मिलकर एक उल्टे माइक्रोस्कोप के नीचे 6 घंटे तक देखे जाते हैं। समय के साथ, मेगाकारियोसाइट्स अपना आकार बदलते हैं, कुछ कोशिकाओं के पास गोलाकार रूप होता है और अन्य मोटी एक्सटेंशन विकसित करते हैं या व्यापक ब्रांचिंग के साथ कई पतले प्रोपलेटलेट का विस्तार करते हैं। गुणात्मक और मात्रात्मक दोनों जांच की जाती है । इस विधि में सरल, प्रजनन योग्य और तेज होने का लाभ है क्योंकि कई मेगाकारियोसाइट्स मौजूद हैं, और उनमें से आधे सुसंस्कृत माउस मेगाकारियोसाइट्स के लिए 4 दिनों की तुलना में 6 घंटे में प्रोपलेटलेट बनाते हैं। उत्परिवर्ती चूहों के अध्ययन के अलावा, इस विधि का एक दिलचस्प अनुप्रयोग संस्कृतियों में होने वाली भेदभाव प्रक्रिया में हस्तक्षेप किए बिना, प्रोपलेटेलेट विस्तार प्रक्रिया पर औषधीय एजेंटों का सीधा मूल्यांकन है।

गुणात्मक परिणाम। प्रयोग की शुरुआत में, सभी कोशिकाओं को बोन मैरो सेक्शन में कॉम्पैक्ट किया जाता है। यह कोशिकाओं के लिए 30 मिनट लगते है explants की परिधि में स्पष्ट रूप से दिखाई हो जाते हैं । मेगाकारियोस?...

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Proplatelet Formation Dynamics of Mouse Fresh Bone Marrow Explants

यहां, हम बोन मैरो एक्सप्लांट विधि का विस्तार करते हैं, नमूना तैयारी से लेकर सूक्ष्म स्लाइड विश्लेषण तक, मेगाकारियोसाइट्स की क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए, जिन्होंने अपने शारीरिक वातावरण में प्रॉलेटलेट बनाने के लिए विभेदित किया है।

माउस फ्रेश बोन मैरो एक्सप्लांट्स की प्रोपलेट फॉर्मेशन डायनेमिक्स

The last stage of megakaryopoiesis leads to cytoplasmic extensions from mature megakaryocytes, the so-called proplatelets. Much has been learned about the ...

इस प्रक्रिया का समग्र उद्देश्य वास्तविक समय में माउस मेगाकारियोसाइट्स से प्रोपलेट के गठन का पालन करना है, जो उनके मूल वातावरण में परिपक्व होता है। इस विधि को सरल, प्रजनन योग्य और तेज होने का लाभ है। एक कई मेगाकारियोसाइट्स का विश्लेषण कर सकता है और केवल छह घंटे में प्रोपलेट्स के गठन की कल्पना कर सकता है, बजाय संस्कृति के पहले दिन की प्रतीक्षा के बजाय वाय्रो में माउस मेगाकारियोसाइट्स के लिए।इस विधि का एक दिलचस्प आवेदन दवा उपचार या आनुवंशिक उत्परिवर्तन के प्रभाव का अध्ययन करने की संभावना है, विशेष रूप से प्रोपलेट विस्तार के कदम में। यहां विट्रो संस्कृति के मामले में भेदभाव प्रक्रिया में कोई हस्तक्षेप नहीं है। यह वीडियो फ्लशिंग और बोन मैरो को काटने के इन प्रमुख चरणों को सुनिश्चित करने में मदद करता है।यह भी समझाया गया है कि आकृति विज्ञान और मेगाकारियोसाइट्स को वर्गीकृत कैसे किया जाए, जो थ्रोम्बोफिलिक रोग में दोषों के लक्षण वर्णन के लिए वास्तव में उपयोगी है। शुरू करने के लिए, गर्म टायरोड के बफर 37 डिग्री सेल्सियस पर, और तापमान को 37 डिग्री सेल्सियस तक लाने के लिए माइक्रोस्कोप के हीटिंग चैंबर को चालू करें। सभी आवश्यक उपकरण तैयार करें, जैसे टाइमर, इनक्यूबेशन कक्ष, पांच मिलीलीटर 21 गेज सीरिंज, संदंश, एक रेजर ब्लेड, पाश्चर पिपेट, ग्लास स्लाइड, और 15 मिलीलीटर सेंट्रलाइज ट्यूब।घुटने की ओर फीमर के उद्घाटन में एक 21 गेज सुई शुरू करने के द्वारा टायरोड बफर के दो मिलीलीटर के साथ अस्थि मज्जा फ्लश, और धीरे से एक बरकरार मज्जा सिलेंडर पुनः प्राप्त करने के लिए प्लंजर प्रेस । ध्यान से और धीरे एक गिलास स्लाइड पर बरकरार अस्थि मज्जा हस्तांतरण करने के लिए एक तीन मिनट लीटर प्लास्टिक पिपेट का प्रयोग करें। फ्लश के समय संकुचित हो सकता है कि मज्जा के सिरों को काट लें।फिर मेगाकारियोसाइट्स को नुकसान पहुंचाने से बचने के लिए एक तेज रेजर ब्लेड का उपयोग करके 0.5 मिलीमीटर मोटाई के पतले ट्रांसवर्सल वर्गों को काटें। एक प्लास्टिक पिपेट का उपयोग करना, 10 वर्गों को एक मिलीलीटर ट्यूब में इकट्ठा करें जिसमें टायरोड के बफर होते हैं। ध्यान से 13 मिलीमीटर व्यास के साथ एक इनक्यूबेशन कक्ष में वर्गों को स्थानांतरित करें।बफर को एस्पिरेट करें और 5% माउस सीरम के साथ पूरक टायरोड के बफर के 30 माइक्रोलीटर के लिए मात्रा को समायोजित करें। एक दूरी पर वर्गों की स्थिति। 22 बाय 55 मिलीमीटर कवर स्लिप के साथ सेल्फ चिपकने वाले चैंबर को सील करें, हवा के बुलबुले के बनने से बचने के लिए कवर स्लिप को झुकाएं।कक्ष को हीटिंग चैंबर में 37 डिग्री सेल्सियस पर रखें। क्रोनोमीटर शुरू करें और प्रयोग को 37 डिग्री सेल्सियस पर छह घंटे तक चलाएं, मेगाकारियोसाइट्स के ट्रांसफॉर्मेशन को रिकॉर्ड करने के लिए वीडियो बनाएं। 30 मिनट के बाद, मैरो कोशिकाएं धीरे-धीरे मोनो लेयर बनाने वाले एक्सप्लांट की परिधि में स्थानांतरित हो जाते हैं।एक घंटे की इनक्यूबेशन के बाद मेगाकारियोसाइट्स को उनके बड़े आकार और पॉलीलोब्ल्युलेटेड न्यूक्लियी से पहचाना जा सकता है । तीन घंटे इनक्यूबेशन के बाद मेगाकारियोसाइट्स की संख्या बढ़ जाती है और कुछ में लंबे एक्सटेंशन होते हैं। इनक्यूबेशन कक्ष में प्रत्येक अनुभाग को स्थानीयकृत करने के लिए एक नक्शा तैयार करें।एक घंटे के बाद, दृश्यमान मेगाकारियोसाइट्स की पहचान करें, जो प्रत्येक खंड की परिधि पर विशाल पॉलीलोबेटेड कोशिकाएं हैं, और ड्राइंग पर अपनी स्थिति को प्लॉट करें। तीन और छह घंटे के बाद इस प्रक्रिया को दोहराएं। मेगाकार्योसाइट्स को मैन्युअल रूप से गिना जाता है और इनक्यूबेशन कक्ष को सील करने के तीन और छह घंटे बाद उनकी आकृति विज्ञान के अनुसार वर्गीकृत किया जाता है।उन्हें छोटे, मोटे इरादे के साथ बड़े और प्रोपलेट विस्तार के रूप में वर्गीकृत किया जाता है। मैपिंग की मदद से समय के साथ उनके विकास का पालन किया जा सकता है। परिणाम प्रत्येक अवलोकन समय पर प्रत्येक वर्ग के प्रतिशत के रूप में व्यक्त किए जाते हैं ।शास्त्रीय रूप से, परिधि में दिखाई देने वाले मेगाकारियोसाइट्स का आधा जंगली प्रकार माउस बोन मैरो के लिए छह घंटे में प्रोपलेटलेट का विस्तार करता है। गोल मेगाकारियोसाइट्स के भाग्य के बाद समय के साथ अनुक्रमिक छवियों को कैप्चर करके छवि बनाई गई कि वे प्रोपलेटलेट कैसे बनाते हैं। इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय याद रखने के लिए एक महत्वपूर्ण बात यह है कि प्रयोग की अवधि के लिए एक्सप्लांट्स को 37 डिग्री सेल्सियस पर रखना है।एक अलग तापमान परिणाम बदल सकता है। दिलचस्प बात यह है कि अंतर्मुखी माइक्रोस्कोपी प्रयोगों के बाद एक्सप्लांट प्रोटोकॉल का उपयोग किया जा सकता है। अंत में बोन मैरो एक्सप्लांट्स में मेगाकारियोसाइट्स स्वाभाविक रूप से फ्लोरोसेंट होंगे, और उनके व्यवहार की आसानी से जांच की जा सकती है।यह एक ही जानवरों पर विभिन्न उपचार को जोड़ना संभव बनाता है और इस प्रकार चूहों की संख्या को कम करता है। अंत में, एक्सप्लांट विधि तेज, सरल है, और बाहरी प्रोपलेटर्स को प्राकृतिक मेगाकारियोसाइट्स की क्षमता के बारे में कई जानकारी प्रदान करती है। जिसके परिणामस्वरूप गुणात्मक और मात्रात्मक खोज थ्रोम्बोफिलिक रोग की हमारी समझ के लिए महत्वपूर्ण हैं ।एक शारीरिक या रोग संदर्भ में।

Research

JoVE Journal

Biology

Culture of myeloid dendritic cells from bone marrow precursors

अस्थि मज्जा व्यापारियों से माइलॉयड वृक्ष के समान कोशिकाओं की संस्कृति

Myeloid dendritic cells (DCs) are frequently used to study the interactions between innate and adaptive immune mechanisms and the early response to ...

Generation of Bone Marrow Derived Murine Dendritic Cells for Use in 2-photon Imaging

अस्थि मज्जा का सृजन 2 फोटॉन इमेजिंग में उपयोग के लिए murine वृक्ष के समान कोशिकाओं व्युत्पन्न

Several methods for the preparation of murine dendritic cells can be found in the literature. Here, we present a method that produces greater than 85% ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

प्राथमिक electroporation के लिए murine अस्थि मज्जा से hematopoietic सेल संस्कृतियों की तैयारी

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

Homing of Hematopoietic Cells to the Bone Marrow

अस्थि मज्जा hematopoietic कोशिकाओं के घर वापस आना

Homing is the phenomenon whereby transplanted hematopoietic cells are able to travel to and engraft or establish residence in the bone marrow.  Various ...

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

In Vivo 4-Dimensional Tracking of Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Adult Mouse Calvarial Bone Marrow

वयस्क माउस Calvarial अस्थि मज्जा में hematopoietic स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के Vivo 4 आयामी ट्रैकिंग में

Through a delicate balance between quiescence and proliferation, self renewal and production of differentiated progeny, hematopoietic stem cells (HSCs) ...

Osteoclast Derivation from Mouse Bone Marrow

माउस अस्थि मज्जा से अस्थिशोषक व्युत्पत्ति

Osteoclasts are highly specialized cells that are derived from the monocyte/macrophage lineage of the bone marrow. Their unique ability to resorb both the ...

Expression of Fluorescent Fusion Proteins in Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells and Macrophages

Murine अस्थि मज्जा में फ्लोरोसेंट फ्यूजन प्रोटीन की अभिव्यक्ति-व्युत्पंन वृक्ष कोशिकाओं और मैक्रोफेज

Dendritic cells and macrophages are crucial cells that form the first line of defense against pathogens. They also play important roles in the initiation ...

Isolation, Purification, and Differentiation of Osteoclast Precursors from Rat Bone Marrow

अलगाव, शुद्धि, और चूहा अस्थि मज्जा से Osteoclast पूर्ववर्ती की भिंनता

Osteoclasts are large, multinucleated, and bone-resorbing cells of the monocyte-macrophage lineage that are formed by the fusion of monocytes or ...

In Vivo Two-photon Imaging of Megakaryocytes and Proplatelets in the Mouse Skull Bone Marrow

In Vivo Two-photon Imaging of Megakaryocytes and Proplatelets in the Mouse Skull Bone Marrow

वीवो में माउस खोपड़ी बोन मैरो में मेगाकैरियोसाइट्स और प्रोपलेट्स की दो फोटॉन इमेजिंग

Platelets are produced by megakaryocytes, specialized cells located in the bone marrow. The possibility to image megakaryocytes in real time and their ...

Flow Cytometry Analysis of Murine Bone Marrow Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and Stromal Niche Cells

म्यूरिन अस्थि मज्जा हेमटोपोइएटिक स्टेम और पूर्वज कोशिकाओं और स्ट्रोमल आला कोशिकाओं का फ्लो साइटोमेट्री विश्लेषण

The bone marrow (BM) is the soft tissue found within bones where hematopoiesis, the process by which new blood cells are generated, primarily occurs. As ...