Name: minimizing post-infusion portal vein bleeding during intrahepatic islet transplantation in mice
Uploaded: 2021-05-10T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice at JoVE.com

تم دعم هذه الدراسة من قبل وزارة شؤون المحاربين القدامى (VA-ORD BLR & D MERITIT I01BX004536) ، ومنح المعهد الوطني للصحة # 1R01DK105183 ، DK120394 ، DK118529 ، إلى HW. نود أن نشكركم السيد مايكل لي والسيدة ليندسي سوابي على تحرير اللغة

تم إجراء جميع الإجراءات بموافقة اللجان المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات في جامعة ساوث كارولينا الطبية ومركز رالف إتش جونسون الطبي في تشارلستون.
1. تحريض مرض السكري باستخدام الستربتوزوتوسين (STZ)
<ol><li>إعداد الفئران المتلقية:<ol>
<li>وزن جميع الفئران بشكل فردي.</li>
		<li>تحقق من مس...

<ol>
	<li>Pellegrini, S., Cantarelli, E., Sordi, V., Nano, R., Piemonti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+state+of+the+art+of+islet+transplantation+and+cell+therapy+in+type+1+diabetes.">The state of the art of islet transplantation and cell therapy in type 1 diabetes.</a> Acta Diabetology. 53 (5), 683-691 (2016).</li><li>Ballinger, W. F., Lacy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+intact+pancreatic+islets+in+rats.">Transplantation of intact pancreatic islets in rats.</a> Surgery. 72 (2), 175-186 (1972).</li><li>Wright, J. R., Hauptfeld, V., Lacy, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Ia+antigen+expression+on+murine+islet+parenchymal+cells+does+not+diminish+islet+allograft+survival.">Induction of Ia antigen expression on murine islet parenchymal cells does not diminish islet allograft survival.</a> American Journal of Pathology. 134 (2), 237-242 (1989).</li><li>Toyofuku, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+killer+T-cells+participate+in+rejection+of+islet+allografts+in+the+liver+of+mice.">Natural killer T-cells participate in rejection of islet allografts in the liver of mice.</a> Diabetes. 55 (1), 34-39 (2006).</li><li>Goss, J. A., Nakafusa, Y., Finke, E. H., Flye, M. W., Lacy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+tolerance+to+islet+xenografts+in+a+concordant+rat-to-mouse+model.">Induction of tolerance to islet xenografts in a concordant rat-to-mouse model.</a> Diabetes. 43 (1), 16-23 (1994).</li><li>Hara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+studying+intrahepatic+islet+transplantation.">A mouse model for studying intrahepatic islet transplantation.</a> Transplantation. 78 (4), 615-618 (2004).</li><li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-1+antitrypsin+enhances+islet+engraftment+by+suppression+of+instant+blood-mediated+inflammatory+reaction.">Alpha-1 antitrypsin enhances islet engraftment by suppression of instant blood-mediated inflammatory reaction.</a> Diabetes. 66 (4), 970-980 (2017).</li><li>Gou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-1+antitrypsin+suppresses+macrophage+activation+and+promotes+islet+graft+survival+after+intrahepatic+islet+transplantation.">Alpha-1 antitrypsin suppresses macrophage activation and promotes islet graft survival after intrahepatic islet transplantation.</a> American Journal of Transplantation. , (2020).</li><li>Contreras, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+protein+C+preserves+functional+islet+mass+after+intraportal+transplantation:+A+novel+link+between+endothelial+cell+activation,+thrombosis,+inflammation,+and+islet+cell+death.">Activated protein C preserves functional islet mass after intraportal transplantation: A novel link between endothelial cell activation, thrombosis, inflammation, and islet cell death.</a> Diabetes. 53 (11), 2804-2814 (2004).</li><li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation.">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> Lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li><li>Melzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrahepatic+islet+transplant+in+the+mouse:+functional+and+morphological+characterization.">Intrahepatic islet transplant in the mouse: functional and morphological characterization.</a> Cell Transplantation. 17 (12), 1361-1370 (2008).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+treatment+with+carbon+monoxide+can+yield+islet+allograft+survival+and+tolerance.">Donor treatment with carbon monoxide can yield islet allograft survival and tolerance.</a> Diabetes. 54 (5), 1400-1406 (2005).</li><li>Desai, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+liver+histopathology+on+islet+cell+engraftment+in+the+model+mimicking+autologous+islet+cell+transplantation.">Effect of liver histopathology on islet cell engraftment in the model mimicking autologous islet cell transplantation.</a> Islets. 9 (6), 140-149 (2017).</li><li>Cui, W., Angsana, J., Wen, J., Chaikof, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal+formulations+of+thrombomodulin+increase+engraftment+after+intraportal+islet+transplantation.">Liposomal formulations of thrombomodulin increase engraftment after intraportal islet transplantation.</a> Cell Transplantation. 19 (11), 1359-1367 (2010).</li><li>Cui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombomodulin+improves+early+outcomes+after+intraportal+islet+transplantation.">Thrombomodulin improves early outcomes after intraportal islet transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 9 (6), 1308-1316 (2009).</li><li>Proto, C., Grasso, G., Fassio, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatoparenchymal+clearance+of+indocyanine+green+in+infectious+hepatitis.">Hepatoparenchymal clearance of indocyanine green in infectious hepatitis.</a> Giornale di Malattie Infettive e Parassitarie. 20 (9), 845-851 (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+hepatocytes+and+sinusoidal+endothelial+cells+from+mouse+liver+perfusion.">Purification of hepatocytes and sinusoidal endothelial cells from mouse liver perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e56993 (2018).</li><li>Khatri, R., Hussmann, B., Rawat, D., Gurol, A. O., Linn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraportal+transplantation+of+pancreatic+islets+in+mouse+model.">Intraportal transplantation of pancreatic islets in mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57559 (2018).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+mesenchymal+stem+cell+and+islet+cotransplantation:+Safety+and+efficacy.">Autologous mesenchymal stem cell and islet cotransplantation: Safety and efficacy.</a> Stem Cells Translational Medicine. 7 (1), 11-19 (2018).</li></ol>

في هذه الدراسة ، تم إثبات اثنين من الإجراءات المحسنة التي يمكن أن تمنع النزيف وقد تقلل من وفيات الفئران أثناء IIT الفأر. تمكن هذه الدراسة الباحثين من تصور نموذج زرع الجزر الفريد من نوعه في دراسة الاستجابة الالتهابية الفورية بوساطة الدم بعد الزرع. نموذج IIT هو نموذج مميز لدراسة بقاء الخلايا ال...

زرع الجزر داخل البوابة (IIT) عبر الوريد البابي هو الطريقة الأكثر استخداما لزرع الجزر البشرية في الإعدادات السريرية. يوفر نموذج IIT للفأر فرصة رائعة لدراسة زراعة الجزر واختبار الأساليب التداخلية الواعدة التي يمكن أن تعزز فعالية زراعة الجزر1. تم وصف IIT لأول مرة في 1970s واستخدامها من قبل عدة مجموعات1،2،3،4،5. استعادت شعبيتها بعد الاختراق في زرع الجزر البشرية في عام 20006،7. ومع ذلك ، استخدمت معظم دراسات زراعة الجزر كبسولة الكلى كموقع مفضل لزرع الجزر التجريبي بسبب نجاحها السهل. على العكس من ذلك ، فإن IIT أكثر تحديا من الناحية الفنية وأقل استخداما لدراسات زرع الجزر8,9. على عكس IIT ، ومع ذلك ، فإن الجزر المزروعة تحت كبسولة الكلى لا تعاني من التفاعل الالتهابي الفوري بوساطة الدم الذي يتميز بالجلطة والالتهاب ونقص تروية الأنسجة الكبدية ، وبالتالي يكون لها وظيفة أفضل من الجزر المزروعة في الكبد. لذلك ، قد لا يحاكي نموذج كبسولة الكلى تماما الضغوط التي تواجهها الجزر في زراعة الجزر البشرية 10،11،12.
واحدة من المضاعفات الرئيسية ل IIT في الفئران هي النزيف من موقع الحقن بعد الزرع ، مما قد يسبب 10-30 ٪ من الوفيات بين سلالات الفئران المختلفة 12. في هذه الورقة ، تم تطوير نهجين مكررين لوقف النزيف بسرعة أكبر وأمان وللحد من وفيات الفئران بعد IIT. سيساعد العرض المرئي لهذه التفاصيل الدقيقة الباحثين على تحديد الخطوات الرئيسية لهذا الإجراء الصعب تقنيا. بالإضافة إلى ذلك ، تم تحديد موقع الطعوم الجزرية في كبد المتلقي من خلال الفحص النسيجي لأنسجة الكبد الملطخة بالهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E) (القسم بأكمله) التي تحمل الجزر المزروعة.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Neutral buffered formalin v/v</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23426796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe with needle</td>
			<td>AHS</td>
			<td>AH01T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>301031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G x 5/8&#34; hypodermic needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pads, sterile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Anesthesia system</td>
			<td>VetEquip, Inc.</td>
			<td>901806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine hydrochloride, injection</td>
			<td>Par Sterile Products, LLC</td>
			<td>NDC 42023-179-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes, 15 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>0553859A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMRL-1066</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15110CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10013CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, absolute (200 proof), molecular biology grade</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra fine Micro Dissecting scissors 4&#8221; straight sharp</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35011CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FreeStyle&#160; Glucose meter</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>Lite</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FreeStyle Blood Glucose test strips</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>Lite</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam (absorbable gelatin sponge, USP)</td>
			<td>Pharmacia &#38; Upjohn Company</td>
			<td>34201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe forceps 4&#8221; extra delicate tip</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heated pad</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07HMKMBKM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hegar-Baumgartner Needle Holder 5.25&#8221;</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-7850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with 27-gauge needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>879588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine prep pads</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>19-027048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin (P/S)</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene Suture 4-0</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>MV-8683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene Suture 5-0</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>MV-8661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride, 0.9% intravenous solution</td>
			<td>VWR</td>
			<td>2B1322Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptozocin (STZ)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape, sterile</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>DR1826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassette</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-272416</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minimizing post-infusion portal vein bleeding during intrahepatic islet transplantation in mice

على الرغم من أن الكبد مقبول حاليا كموقع زرع أساسي للجزر البشرية في الإعدادات السريرية ، إلا أن الجزر يتم زرعها تحت كبسولة الكلى في معظم دراسات زراعة الجزر قبل السريرية للقوارض. يستخدم هذا النموذج بشكل شائع لأن زرع جزيرة الفئران داخل الكبد يمثل تحديا تقنيا ، ويمكن أن تموت نسبة عالية من الفئران من المضاعفات الجراحية ، وخاصة النزيف من موقع الحقن بعد الزرع. في هذه الدراسة ، تم عرض إجراءين يمكنهما تقليل حدوث نزيف الوريد البابي بعد التسريب. تطبق الطريقة الأولى إسفنجة جيلاتين مرقئ قابلة للامتصاص على موقع الحقن ، وتتضمن الطريقة الثانية اختراق إبرة حقن الجزيرة من خلال الأنسجة الدهنية أولا ثم في الوريد البابي باستخدام الأنسجة الدهنية كحاجز مادي لوقف النزيف. كلتا الطريقتين يمكن أن تمنع بشكل فعال موت الفئران الناجم عن النزيف. تم تقديم قسم الكبد بأكمله الذي يوضح توزيع الجزر وأدلة على تجلط الدم في الجزيرة بعد الزرع ، وهي ميزة نموذجية لزرع الجزر داخل الكبد. تعمل هذه البروتوكولات المحسنة على تحسين إجراءات زرع الجزر داخل الكبد وقد تساعد المختبرات على إعداد الإجراء لدراسة بقاء الجزيرة ووظيفتها في إعدادات ما قبل السريرية.

أجرينا عمليات زرع جزر متجانسة وجينية أجنبية عبر الوريد البابي. لوحظت وظيفة الكسب غير المشروع في الجزيرة بطريقة تعتمد على الجرعة في كل من نماذج زرع الجزر. في نموذج زرع الجزر المتلازمية باستخدام الفئران C57BL/6 ، أدى زرع 250 جزيرة إلى ارتفاع السكر في الدم المعياري العابر قبل أن تعود الفئران إلى ا...

Watch this Scientific Journal Video about Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice at JoVE.com

Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

نقدم هنا إجراءات جراحية محسنة حول إجراء عملية زرع الجزر داخل البوابة بنجاح ، وهو إجراء جراحي ذي صلة سريريا ولكنه صعب تقنيا ، في الفئران.

تقليل نزيف الوريد البابي بعد التسريب أثناء زراعة الجزر داخل الكبد في الفئران

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...

الكبد هو موقع أساسي للزرع في البيئة السريرية للجزيرة البشرية. تعتبر عملية زرع الجزر داخل الكبد تحديا تقنيا ، ويمكن أن تموت نسبة عالية من الفئران بسبب المضاعفات الجراحية ، وخاصة النزيف. في هذه الدراسة ، يمكن للطريقتين اللتين أظهرناهما أن تمنعا بشكل فعال موت الفئران الناجم عن النزيف.يمكن تطبيق طريقتنا على الأبحاث في سرطان الكبد وأمراض الكبد الأخرى عن طريق السماح بحقن الخلايا السرطانية والخلايا الجذعية الوسيطة وخلايا الكبد مباشرة إلى الكبد. للبدء ، افصل ثقافة جزيرة بشرية مع خدش لطيف. استخدم حقنة 1 سنتيمتر مكعب لاختيار 300 إلى 350 جزيرة في أنابيب طرد مركزي دقيقة معقمة 1.5 ملليلتر على الجليد.عندما يتم اختيار جميع الجزر ، قم بطرد الأنابيب لمدة 10 ثوان لترسيب الخلايا. تخلص من جميع المواد الفائقة باستثناء حجم صغير منها لمنع فقدان الكريات وإعادة تعليق الجزر في 200 ميكرولتر HBSS تحتوي على 5٪ BSA. قم بتحميل الجزر المعاد تعليقها في حقنة أنسولين سعة 5 ملليلتر وقم بتحويل إبرة المحقنة لمدة 1 دقيقة للسماح للجزر بالاستقرار في المكبس.اخفض المكبس لإزالة أي فقاعات ، مع الاحتفاظ بحوالي 100 إلى 150 ميكرولتر من المحلول في المحقنة وعكس المحقنة بنقر لطيف لتوزيع الجزر بالتساوي. بعد التأكد من عدم الاستجابة لمنعكس الدواسة ، ضع مرهما على العينين لمنع التجفيف. حلق بطن الفأر المخدر لإزالة الفراء وتطهير المنطقة الجراحية بثلاثة مناديل متناوبة من 2٪ من اليود و 75٪ من الكحول.بعد ذلك ، قم بعمل شق من 1 إلى 1.5 سم في البطن وافتح التجويف البريتوني. ضع قطعة معقمة من الشاش حول الشق واستخدم الملقط أو أطراف القطن لنقل الأمعاء بلطف إلى الشاش. ثم قم بتغطية الأمعاء بقطعة من الشاش المنقوع بمحلول ملحي وكشف الوريد البابي.لوقف النزيف الناجم عن نقل الجزيرة باستخدام رغوة الجل ، أمسك الإبرة مع توجيه الشطبة لأسفل ووضع طرف الإبرة مع الفتحة الموازية لجدار الوريد البابي قبل إدخال الإبرة في الوريد البابي. اسحب المكبس لسحب 20 إلى 50 ميكرولتر من الدم إلى المحقنة لخلطها مع الجزر قبل غرس الجزر في الوريد البابي مع الضغط وسحب المكبس بشكل متكرر. عندما يتم تسليم جميع الجزر ، ضع قطعة من رغوة الجل بطول 5 × 5 سنتيمترات تقريبا فوق موقع الحقن.استخدم طرف قطني للضغط على رغوة الجل لأسفل أثناء إزالة الإبرة من الوريد البابي. امسك الجل في مكانه لمدة 2 دقيقة تقريبا ، مع لف رغوة الجل للتأكد من أنه يغطي الوريد البابي. بمجرد إيقاف النزيف ، أعد الأمعاء بلطف إلى التجويف البريتوني في الموضع الأصلي وحقن 500 ميكرولتر من المياه المالحة الدافئة في تجويف البطن.استخدم الغرز لإغلاق طبقات العضلات والجلد. ثم ضع الماوس في قفص نظيف على وسادة تدفئة مع المراقبة حتى الشفاء التام من التخدير ، وإدارة التسكين كل 12 ساعة والحرارة لمدة 48 ساعة. لوقف النزيف الناجم عن نقل الجزيرة باستخدام وسادة دهنية ، بعد تعريض الوريد البابي كما هو موضح ، استخدم طرفين قطنيين لتثبيت الوريد المكشوف على الجانبين الأيسر والأيمن وتحديد موقع وسادة الأنسجة الدهنية بين الاثني عشر والوريد البابي.اخترق وسادة الدهون بطرف الإبرة قبل إدخالها في الوريد البابي. غرس الجزر في الوريد البابي كما هو موضح. عندما يتم تسليم جميع الجزر ، اضغط على الأنسجة الدهنية بطرف قطني لمدة 1 دقيقة تقريبا أثناء إزالة الإبرة من الوريد.ثم أعد الأمعاء إلى تجويف البطن وقم بإجراء بقية إجراءات الرعاية بعد الجراحة كما هو موضح. تعتمد آثار زرع الجزر على الجرعة ، حيث لوحظ نسبة السكر في الدم الطبيعية بعد 30 يوما من زرع الجزر المتزامن عندما يتم نقل 500 جزيرة ، ولكن يتم ملاحظة ارتفاع السكر في الدم الانتقالي فقط عند تسليم 250 جزيرة ، مع عودة الفئران إلى ارتفاع السكر في الدم قبل 10 أيام بعد الزرع. لوحظ زيادة في وزن الجسم في كلتا المجموعتين ولوحظت استجابات متطابقة عند زرع الجزر البشرية في فئران NOD-SCID المصابة بالسكري ، مع ملاحظة ارتفاع نسبة السكر في الدم عند زرع أعداد أكبر من مكافئات الجزر ولكن ليس بأعداد أقل.غالبية الفئران التي تنزف بعد النقل تموت بعد الجراحة ، في حين أن الفئران دون نزيف البقاء على قيد الحياة. في 28 يوما بعد الزرع ، يكشف تلطيخ الأنسولين عن توزيع متساو للجزيرة البشرية في جميع أنحاء الكبد ، معظمها بالقرب من الأوعية الدموية. بالإضافة إلى الأنسولين ، لوحظ أيضا ترشيح الخلايا الفيبرين والخلايا النووية متعددة الأشكال داخل الجزر البشرية المزروعة.ستولد زراعة الجزر داخل الكبد ثقبا كبيرا في الوريد البابي قد يسبب نزيفا. يمكن أن يؤدي استخدام إجراءين محسنين إلى منع النزيف وتقليل الوفيات بعد زرع الجزر. يمكن لنموذج زرع الجزر داخل البوابة أن يحاكي زراعة الجزر البشرية السريرية.يمكن أن تؤدي إجراءاتنا المكررة إلى ارتفاع معدلات البقاء على قيد الحياة للمتلقين ، مما يسمح بإجراء مزيد من الدراسة لوظيفة الجزيرة بعد الزرع.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

وهناك طريقة لعزل جزيرة الفئران تحت المحفظة وزراعة الكلى

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

الأبعاد 3-صب الراتنج والتصوير من الوريد البابي داخل الكبد أو ماوس نظام القناة الصفراوية

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Direct Pressure Monitoring Accurately Predicts Pulmonary Vein Occlusion During Cryoballoon Ablation

مراقبة ضغط المباشر تتنبأ بدقة انسداد الوريد الرئوي خلال تذرية Cryoballoon

Cryoballoon  ablation (CBA) is an established therapy for atrial fibrillation (AF).  Pulmonary vein (PV) occlusion is essential for achieving antral ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

جيل من تحت الجلد والخلايا الكبدية داخل الكبد سرطان Xenografts الإنسان في الفئران العوز المناعي

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Heterotopic Auxiliary Rat Liver Transplantation With Flow-regulated Portal Vein Arterialization in Acute Hepatic Failure

منتبذ مساعدة الجرذ زراعة الكبد مع تدفق التنظيم الوريد البابي Arterialization في الفشل الكبدي الحاد

In acute hepatic failure auxiliary liver transplantation is an interesting alternative approach. The aim is to provide a temporary support until the ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

منتبذ عنق الرحم القلب زرع في الفئران

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

باستخدام هذه التقنية الأكمام في نموذج ماوس لزرع الابهري-فيديو التعليمية

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

نموذج الفئران لربط قسم الكبد وربط الوريد البابي لإجراءات مرحلية ظهرت (البس)

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

إينتراسبلينيك زرع خلايا الكبد بعد ظهرت جزئيا في إيماءة. الفئران مشمولان

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

جمع الدم من خلال ثقب الوريد تحت الترقوة في الفئران

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...