Name: minimizing post-infusion portal vein bleeding during intrahepatic islet transplantation in mice
Uploaded: 2021-05-10T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice at JoVE.com

Diese Studie wurde vom Department of Veterans Affairs (VA-ORD BLR&D Merit I01BX004536) und dem National Institute of Health grants # 1R01DK105183, DK120394, DK118529, an HW unterstützt. Wir möchten uns bei Ihnen, Herrn Michael Lee und Frau Lindsay Swaby, für die Sprachbearbeitung bedanken.

Alle Verfahren wurden mit Genehmigung der Institutional Animal Care and Use Committees an der Medical University of South Carolina und des Ralph H Johnson Medical Center in Charleston durchgeführt.
1. Diabetes-Induktion mit Streptozotocin (STZ)
<ol><li>Vorbereitung der Empfängermäuse:<ol>
<li>Wiegen Sie alle Mäuse einzeln.</li>
		<li>Überprüfen Sie den Blutzuckerspiegel aus einer Blutprobe der Heckvene mit einem Glucometer.</li>
	</ol>
</li>
	<li>STZ-Dosisbestimmung für drei verschied...

<ol>
	<li>Pellegrini, S., Cantarelli, E., Sordi, V., Nano, R., Piemonti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+state+of+the+art+of+islet+transplantation+and+cell+therapy+in+type+1+diabetes.">The state of the art of islet transplantation and cell therapy in type 1 diabetes.</a> Acta Diabetology. 53 (5), 683-691 (2016).</li><li>Ballinger, W. F., Lacy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+intact+pancreatic+islets+in+rats.">Transplantation of intact pancreatic islets in rats.</a> Surgery. 72 (2), 175-186 (1972).</li><li>Wright, J. R., Hauptfeld, V., Lacy, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Ia+antigen+expression+on+murine+islet+parenchymal+cells+does+not+diminish+islet+allograft+survival.">Induction of Ia antigen expression on murine islet parenchymal cells does not diminish islet allograft survival.</a> American Journal of Pathology. 134 (2), 237-242 (1989).</li><li>Toyofuku, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+killer+T-cells+participate+in+rejection+of+islet+allografts+in+the+liver+of+mice.">Natural killer T-cells participate in rejection of islet allografts in the liver of mice.</a> Diabetes. 55 (1), 34-39 (2006).</li><li>Goss, J. A., Nakafusa, Y., Finke, E. H., Flye, M. W., Lacy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+tolerance+to+islet+xenografts+in+a+concordant+rat-to-mouse+model.">Induction of tolerance to islet xenografts in a concordant rat-to-mouse model.</a> Diabetes. 43 (1), 16-23 (1994).</li><li>Hara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+studying+intrahepatic+islet+transplantation.">A mouse model for studying intrahepatic islet transplantation.</a> Transplantation. 78 (4), 615-618 (2004).</li><li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-1+antitrypsin+enhances+islet+engraftment+by+suppression+of+instant+blood-mediated+inflammatory+reaction.">Alpha-1 antitrypsin enhances islet engraftment by suppression of instant blood-mediated inflammatory reaction.</a> Diabetes. 66 (4), 970-980 (2017).</li><li>Gou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-1+antitrypsin+suppresses+macrophage+activation+and+promotes+islet+graft+survival+after+intrahepatic+islet+transplantation.">Alpha-1 antitrypsin suppresses macrophage activation and promotes islet graft survival after intrahepatic islet transplantation.</a> American Journal of Transplantation. , (2020).</li><li>Contreras, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+protein+C+preserves+functional+islet+mass+after+intraportal+transplantation:+A+novel+link+between+endothelial+cell+activation,+thrombosis,+inflammation,+and+islet+cell+death.">Activated protein C preserves functional islet mass after intraportal transplantation: A novel link between endothelial cell activation, thrombosis, inflammation, and islet cell death.</a> Diabetes. 53 (11), 2804-2814 (2004).</li><li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation.">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> Lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li><li>Melzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrahepatic+islet+transplant+in+the+mouse:+functional+and+morphological+characterization.">Intrahepatic islet transplant in the mouse: functional and morphological characterization.</a> Cell Transplantation. 17 (12), 1361-1370 (2008).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+treatment+with+carbon+monoxide+can+yield+islet+allograft+survival+and+tolerance.">Donor treatment with carbon monoxide can yield islet allograft survival and tolerance.</a> Diabetes. 54 (5), 1400-1406 (2005).</li><li>Desai, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+liver+histopathology+on+islet+cell+engraftment+in+the+model+mimicking+autologous+islet+cell+transplantation.">Effect of liver histopathology on islet cell engraftment in the model mimicking autologous islet cell transplantation.</a> Islets. 9 (6), 140-149 (2017).</li><li>Cui, W., Angsana, J., Wen, J., Chaikof, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal+formulations+of+thrombomodulin+increase+engraftment+after+intraportal+islet+transplantation.">Liposomal formulations of thrombomodulin increase engraftment after intraportal islet transplantation.</a> Cell Transplantation. 19 (11), 1359-1367 (2010).</li><li>Cui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombomodulin+improves+early+outcomes+after+intraportal+islet+transplantation.">Thrombomodulin improves early outcomes after intraportal islet transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 9 (6), 1308-1316 (2009).</li><li>Proto, C., Grasso, G., Fassio, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatoparenchymal+clearance+of+indocyanine+green+in+infectious+hepatitis.">Hepatoparenchymal clearance of indocyanine green in infectious hepatitis.</a> Giornale di Malattie Infettive e Parassitarie. 20 (9), 845-851 (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+hepatocytes+and+sinusoidal+endothelial+cells+from+mouse+liver+perfusion.">Purification of hepatocytes and sinusoidal endothelial cells from mouse liver perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e56993 (2018).</li><li>Khatri, R., Hussmann, B., Rawat, D., Gurol, A. O., Linn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraportal+transplantation+of+pancreatic+islets+in+mouse+model.">Intraportal transplantation of pancreatic islets in mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57559 (2018).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+mesenchymal+stem+cell+and+islet+cotransplantation:+Safety+and+efficacy.">Autologous mesenchymal stem cell and islet cotransplantation: Safety and efficacy.</a> Stem Cells Translational Medicine. 7 (1), 11-19 (2018).</li></ol>

In dieser Studie wurden zwei verbesserte Verfahren demonstriert, die Blutungen verhindern und die Mausmortalität während der Maus-IIT reduzieren können. Diese Studie ermöglicht es den Forschern, das Inseltransplantationsmodell zu visualisieren, das bei der Untersuchung der sofortigen blutvermittelten Entzündungsreaktion nach der Transplantation einzigartig ist. Das IIT-Modell ist ein unverwechselbares Modell für die Untersuchung des Überlebens von Inselzellen und hepatischer ischämischer Verletzungen als Reaktion...

Die intraportale Inseltransplantation (IIT) über die Pfortader ist die am häufigsten verwendete Methode für die Transplantation menschlicher Inseln in klinischen Umgebungen. Das IIT-Modell der Maus bietet eine großartige Gelegenheit, die Inseltransplantation zu untersuchen und vielversprechende interventionelle Ansätze zu testen, die die Wirksamkeit der Inseltransplantation verbessern können1. IIT wurde erstmals in den 1970er Jahren beschrieben und von mehreren Gruppen verwendet1,2,3,4,5. Es gewann nach dem Durchbruch in der menschlichen Inseltransplantation im Jahr 20006 wieder an Popularität,7. Die meisten Inseltransplantationsstudien verwendeten jedoch die Nierenkapsel aufgrund ihres leichten Erfolgs als bevorzugten Ort für die experimentelle Inseltransplantation. Im Gegenteil, IIT ist technisch anspruchsvoller und wird seltener für Inseltransplantationsstudien verwendet8,9. Im Gegensatz zum IIT leiden Inseln, die unter die Nierenkapsel transplantiert werden, jedoch nicht an der unmittelbaren blutvermittelten Entzündungsreaktion, die durch Thrombose, Entzündungen und Lebergewebeischämie gekennzeichnet ist, und haben daher eine bessere Funktion als in die Leber transplantierte Inseln. Das Nierenkapselmodell kann daher die Belastungen, denen Inselchen bei der Transplantation menschlicher Inseln ausgesetzt sind, möglicherweise nicht vollständig nachahmen10,11,12.
Eine der Hauptkomplikationen der IIT bei Mäusen sind Blutungen von der Injektionsstelle nach der Transplantation, die 10-30% der Mortalität bei verschiedenen Mausstämmen verursachen können12. In diesem Artikel wurden zwei verfeinerte Ansätze entwickelt, um Blutungen schneller und sicherer zu stoppen und die Maussterblichkeit nach einem IIT zu reduzieren. Die visuelle Demonstration dieser raffinierten Details wird den Forschern helfen, die wichtigsten Schritte dieses technisch anspruchsvollen Verfahrens zu identifizieren. Darüber hinaus wurde die Lage der Inseltransplantate in der Leber des Empfängers durch histologische Untersuchung des mit Hämatoxylin und Eosin (H & E) gefärbten Lebergewebes (ganzer Abschnitt) bestimmt, das transplantierte Inseln trägt.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Neutral buffered formalin v/v</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23426796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe with needle</td>
			<td>AHS</td>
			<td>AH01T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>301031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G x 5/8&#34; hypodermic needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pads, sterile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Anesthesia system</td>
			<td>VetEquip, Inc.</td>
			<td>901806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine hydrochloride, injection</td>
			<td>Par Sterile Products, LLC</td>
			<td>NDC 42023-179-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes, 15 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>0553859A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMRL-1066</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15110CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10013CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, absolute (200 proof), molecular biology grade</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra fine Micro Dissecting scissors 4&#8221; straight sharp</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35011CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FreeStyle&#160; Glucose meter</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>Lite</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FreeStyle Blood Glucose test strips</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>Lite</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam (absorbable gelatin sponge, USP)</td>
			<td>Pharmacia &#38; Upjohn Company</td>
			<td>34201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe forceps 4&#8221; extra delicate tip</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heated pad</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07HMKMBKM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hegar-Baumgartner Needle Holder 5.25&#8221;</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-7850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with 27-gauge needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>879588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine prep pads</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>19-027048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin (P/S)</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene Suture 4-0</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>MV-8683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene Suture 5-0</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>MV-8661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride, 0.9% intravenous solution</td>
			<td>VWR</td>
			<td>2B1322Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptozocin (STZ)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape, sterile</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>DR1826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassette</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-272416</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minimizing post-infusion portal vein bleeding during intrahepatic islet transplantation in mice

Obwohl die Leber derzeit als primärer Transplantationsort für menschliche Inseln in klinischen Umgebungen akzeptiert wird, werden Inseln in den meisten präklinischen Inseltransplantationsstudien von Nagetieren unter die Nierenkapsel transplantiert. Dieses Modell wird häufig verwendet, da die murine intrahepatische Inseltransplantation technisch eine Herausforderung darstellt und ein hoher Prozentsatz der Mäuse an chirurgischen Komplikationen sterben könnte, insbesondere an Blutungen von der Injektionsstelle nach der Transplantation. In dieser Studie werden zwei Verfahren gezeigt, die die Häufigkeit von Pfortaderblutungen nach der Infusion minimieren können. Die erste Methode wendet einen resorbierbaren hämostatischen Gelatineschwamm auf die Injektionsstelle an, und die zweite Methode besteht darin, die Inselinjektionsnadel zuerst durch das Fettgewebe und dann in die Pfortader zu durchdringen, indem das Fettgewebe als physikalische Barriere verwendet wird, um Blutungen zu stoppen. Beide Methoden könnten den blutungsbedingten Mäusetod wirksam verhindern. Der gesamte Leberabschnitt mit Inselverteilung und Anzeichen einer Inselthrombose nach der Transplantation, ein typisches Merkmal für die intrahepatische Inseltransplantation, wurden vorgestellt. Diese verbesserten Protokolle verfeinern die intrahepatischen Inseltransplantationsverfahren und können Labors helfen, das Verfahren zur Untersuchung des Überlebens und der Funktion von Inselchen in präklinischen Umgebungen einzurichten.

Über die Vene portal führten wir syngene und xenogene Inseltransplantationen durch. Die Funktion des Inseltransplantats wurde in beiden Inseltransplantationsmodellen dosisabhängig beobachtet. Im syngenen Inseltransplantationsmodell mit C57BL/6-Mäusen führte die Transplantation von 250 Inseln zu einer vorübergehenden Normoglykämie, bevor die Mäuse zur Hyperglykämie zurückkehrten. Mäuse, die 500 Inseln erhielten, erreichten und hielten die Normoglykämie länger als 30 Tage nach der Transplantation aufrecht (<st...

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Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

Hier stellen wir verfeinerte chirurgische Verfahren zur erfolgreichen Durchführung der intraportalen Inseltransplantation, einem klinisch relevanten, aber technisch anspruchsvollen chirurgischen Eingriff, bei Mäusen vor.

Minimierung der Venenblutung nach der Infusion während der intrahepatischen Inseltransplantation bei Mäusen

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...

Die Leber ist ein primärer Ort für die Transplantation im klinischen Umfeld der menschlichen Inseln. Die intrahepatische Inseltransplantation von Mäusen ist technisch eine Herausforderung, und ein hoher Prozentsatz der Mäuse könnte an chirurgischen Komplikationen, insbesondere Blutungen, sterben. In dieser Studie konnten die beiden Methoden, die wir gezeigt haben, beide den blutungsbedingten Maustod effektiv verhindern.Unsere Methode kann auf die Erforschung von Leberkrebs und anderen Lebererkrankungen angewendet werden, indem die Injektion von Krebszellen, mesenchymalen Stammzellen und Hepatozyten direkt in die Leber ermöglicht wird. Lösen Sie zunächst eine menschliche Inselkultur mit sanftem Kratzen. Verwenden Sie eine 1-Kubikzentimeter-Spritze, um 300 bis 350 Inseln in sterile 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenröhrchen auf Eis aufzunehmen.Wenn alle Inseln entnommen wurden, zentrifugieren Sie die Röhrchen für 10 Sekunden, um die Zellen zu sedimentieren. Verwerfen Sie alle bis auf ein kleines Volumen Überstands, um den Verlust von Pellets zu verhindern, und suspendieren Sie die Inseln in 200 Mikrolitern HBSS mit 5% BSA. Laden Sie die suspendierten Inseln in eine 5-Milliliter-Insulinspritze und drehen Sie das Spritzennadelende für 1 Minute nach oben, damit sich die Inseln am Kolben absetzen können.Drücken Sie den Kolben, um Blasen zu entfernen, halten Sie etwa 100 bis 150 Mikroliter Lösung in der Spritze und drehen Sie die Spritze mit sanftem Klopfen um, um die Inseln gleichmäßig zu verteilen. Nachdem Sie eine mangelnde Reaktion auf den Pedalreflex bestätigt haben, tragen Sie Salbe auf die Augen auf, um ein Austrocknen zu verhindern. Rasieren Sie den Bauch der betäubten Maus, um das Fell zu entfernen, und desinfizieren Sie den Operationsbereich mit drei abwechselnden Tüchern von 2% Jod und 75% Alkohol.Als nächstes machen Sie einen 1 bis 1,5 Zentimeter großen Schnitt im Bauch und öffnen Sie die Peritonealhöhle. Legen Sie ein steriles Stück Gaze um den Einschnitt und verwenden Sie Pinzetten oder Baumwollspitzen, um den Darm vorsichtig auf die Gaze zu übertragen. Die bedecken dann den Darm mit einem Stück salzgetränkter Gaze und legen die Pfortader frei.Um Inseltransfer-induzierte Blutungen mit Gelschaum zu stoppen, halten Sie die Nadel mit der Fase nach unten und positionieren Sie die Nadelspitze mit der Öffnung parallel zur Pfortaderwand, bevor Sie die Nadel in die Pfortader einführen. Ziehen Sie den Kolben ein, um 20 bis 50 Mikroliter Blut in die Spritze zu ziehen, um sie mit den Inseln zu vermischen, bevor Sie die Inseln in die Pfortader infundieren, während Sie den Kolben wiederholt drücken und zurückziehen. Wenn alle Inseln geliefert wurden, legen Sie ein etwa 5 x 5 Zentimeter großes Stück Gelschaum über die Injektionsstelle.Verwenden Sie eine Baumwollspitze, um den Gelschaum nach unten zu drücken, während Sie die Nadel aus der Pfortader entfernen. Halten Sie das Gel etwa 2 Minuten an Ort und Stelle und rollen Sie den Gelschaum, um sicherzustellen, dass er die Pfortader bedeckt. Sobald die Blutung gestoppt ist, bringen Sie den Darm vorsichtig in die Bauchhöhle in der ursprünglichen Position zurück und injizieren Sie 500 Mikroliter warme Kochsalzlösung in die Bauchhöhle.Verwenden Sie Nähte, um die Muskel- und Hautschichten zu schließen. Legen Sie die Maus dann in einen sauberen Käfig auf einem Heizkissen mit Überwachung bis zur vollständigen Wiederherstellung von der Anästhesie, verabreichen Sie Analgetika alle 12 Stunden und erhitzen Sie für 48 Stunden. Um Inseltransfer-induzierte Blutungen mit einem Fettpolster zu stoppen, verwenden Sie nach der Freilegung der Pfortader wie gezeigt zwei Baumwollspitzen, um die freiliegende Vene auf der linken und rechten Seite zu halten und das Fettgewebepolster zwischen dem Zwölffingerdarm und der Pfortader zu lokalisieren.Penetrieren Sie das Fettpolster mit der Nadelspitze, bevor Sie es in die Pfortader einführen. Gießen Sie die Inseln in die Pfortader, wie gezeigt. Wenn alle Inseln geliefert wurden, drücken Sie das Fettgewebe mit einer Baumwollspitze für ca. 1 Minute, während Sie die Nadel aus der Vene entfernen.Bringen Sie dann den Darm in die Bauchhöhle zurück und führen Sie den Rest der postoperativen Pflegeverfahren wie gezeigt durch. Die Auswirkungen der Inseltransplantation sind dosisabhängig, da eine normale Glykämie 30 Tage nach der syngenen Inseltransplantation beobachtet wird, wenn 500 Inseln übertragen werden, aber nur eine vorübergehende Normoglykämie beobachtet wird, wenn 250 Inseln geliefert werden, wobei die Mäuse 10 Tage nach der Transplantation zur Hyperglykämie zurückkehren. Ein erhöhtes Körpergewicht wird in beiden Gruppen beobachtet und identische Reaktionen beobachtet, wenn menschliche Inseln in diabetische NOD-SCID-Mäuse transplantiert werden, wobei Normoglykämie beobachtet wird, wenn eine höhere Anzahl von Inseläquivalenten transplantiert wird, aber keine kleinere Anzahl.Die Mehrheit der Mäuse, die nach dem Transfer Blutungen haben, sterben nach der Operation, während die Mäuse ohne Blutungen überleben. 28 Tage nach der Transplantation zeigt die Insulinfärbung eine gleichmäßige Verteilung der menschlichen Insel in der gesamten Leber, meist in der Nähe von Blutgefäßen. Neben Insulin werden auch Fibrin und polymorphe Zellfiltration innerhalb der transplantierten menschlichen Inseln beobachtet.Die intrahepatische Inseltransplantation erzeugt ein großes Loch in der Pfortadere, das Blutungen verursachen kann. Die Verwendung unserer beiden verbesserten Verfahren kann Blutungen verhindern und die Mortalität nach der Inseltransplantation reduzieren. Das intraportale Inseltransplantationsmodell kann die klinische Transplantation menschlicher Inseln nachahmen.Unsere verfeinerten Verfahren können zu höheren Überlebensraten für die Empfänger führen, die eine weitere Untersuchung der Inselfunktion nach der Transplantation ermöglichen.

Research

JoVE Journal

Medicine

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