Name: minimizing post-infusion portal vein bleeding during intrahepatic islet transplantation in mice
Uploaded: 2021-05-10T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי המחלקה לענייני יוצאי צבא (VA-ORD BLR&D הצטיינות I01BX004536), והמכון הלאומי לבריאות מענקים # 1R01DK105183, DK120394, DK118529, כדי HW. ברצוננו להודות לכם מר מייקל לי וגברת לינדזי סוואבי על עריכת השפה

כל ההליכים נערכו באישור הוועדות המוסדיות לטיפול בבעלי חיים ושימוש באוניברסיטה הרפואית של דרום קרוליינה ובמרכז הרפואי ראלף ה. ג'ונסון בצ'רלסטון.
1. אינדוקציה לסוכרת באמצעות סטרפטוזוטוצין (STZ)
<ol><li>הכנת עכברי נמען:<ol>
<li>לשקול את כל העכברים בנפרד.</li>
		<li>בדוק את רמות הגלוקוז בדם ...

<ol>
	<li>Pellegrini, S., Cantarelli, E., Sordi, V., Nano, R., Piemonti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+state+of+the+art+of+islet+transplantation+and+cell+therapy+in+type+1+diabetes.">The state of the art of islet transplantation and cell therapy in type 1 diabetes.</a> Acta Diabetology. 53 (5), 683-691 (2016).</li><li>Ballinger, W. F., Lacy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+intact+pancreatic+islets+in+rats.">Transplantation of intact pancreatic islets in rats.</a> Surgery. 72 (2), 175-186 (1972).</li><li>Wright, J. R., Hauptfeld, V., Lacy, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Ia+antigen+expression+on+murine+islet+parenchymal+cells+does+not+diminish+islet+allograft+survival.">Induction of Ia antigen expression on murine islet parenchymal cells does not diminish islet allograft survival.</a> American Journal of Pathology. 134 (2), 237-242 (1989).</li><li>Toyofuku, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+killer+T-cells+participate+in+rejection+of+islet+allografts+in+the+liver+of+mice.">Natural killer T-cells participate in rejection of islet allografts in the liver of mice.</a> Diabetes. 55 (1), 34-39 (2006).</li><li>Goss, J. A., Nakafusa, Y., Finke, E. H., Flye, M. W., Lacy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+tolerance+to+islet+xenografts+in+a+concordant+rat-to-mouse+model.">Induction of tolerance to islet xenografts in a concordant rat-to-mouse model.</a> Diabetes. 43 (1), 16-23 (1994).</li><li>Hara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+studying+intrahepatic+islet+transplantation.">A mouse model for studying intrahepatic islet transplantation.</a> Transplantation. 78 (4), 615-618 (2004).</li><li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-1+antitrypsin+enhances+islet+engraftment+by+suppression+of+instant+blood-mediated+inflammatory+reaction.">Alpha-1 antitrypsin enhances islet engraftment by suppression of instant blood-mediated inflammatory reaction.</a> Diabetes. 66 (4), 970-980 (2017).</li><li>Gou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-1+antitrypsin+suppresses+macrophage+activation+and+promotes+islet+graft+survival+after+intrahepatic+islet+transplantation.">Alpha-1 antitrypsin suppresses macrophage activation and promotes islet graft survival after intrahepatic islet transplantation.</a> American Journal of Transplantation. , (2020).</li><li>Contreras, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+protein+C+preserves+functional+islet+mass+after+intraportal+transplantation:+A+novel+link+between+endothelial+cell+activation,+thrombosis,+inflammation,+and+islet+cell+death.">Activated protein C preserves functional islet mass after intraportal transplantation: A novel link between endothelial cell activation, thrombosis, inflammation, and islet cell death.</a> Diabetes. 53 (11), 2804-2814 (2004).</li><li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation.">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> Lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li><li>Melzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrahepatic+islet+transplant+in+the+mouse:+functional+and+morphological+characterization.">Intrahepatic islet transplant in the mouse: functional and morphological characterization.</a> Cell Transplantation. 17 (12), 1361-1370 (2008).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+treatment+with+carbon+monoxide+can+yield+islet+allograft+survival+and+tolerance.">Donor treatment with carbon monoxide can yield islet allograft survival and tolerance.</a> Diabetes. 54 (5), 1400-1406 (2005).</li><li>Desai, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+liver+histopathology+on+islet+cell+engraftment+in+the+model+mimicking+autologous+islet+cell+transplantation.">Effect of liver histopathology on islet cell engraftment in the model mimicking autologous islet cell transplantation.</a> Islets. 9 (6), 140-149 (2017).</li><li>Cui, W., Angsana, J., Wen, J., Chaikof, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal+formulations+of+thrombomodulin+increase+engraftment+after+intraportal+islet+transplantation.">Liposomal formulations of thrombomodulin increase engraftment after intraportal islet transplantation.</a> Cell Transplantation. 19 (11), 1359-1367 (2010).</li><li>Cui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombomodulin+improves+early+outcomes+after+intraportal+islet+transplantation.">Thrombomodulin improves early outcomes after intraportal islet transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 9 (6), 1308-1316 (2009).</li><li>Proto, C., Grasso, G., Fassio, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatoparenchymal+clearance+of+indocyanine+green+in+infectious+hepatitis.">Hepatoparenchymal clearance of indocyanine green in infectious hepatitis.</a> Giornale di Malattie Infettive e Parassitarie. 20 (9), 845-851 (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+hepatocytes+and+sinusoidal+endothelial+cells+from+mouse+liver+perfusion.">Purification of hepatocytes and sinusoidal endothelial cells from mouse liver perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e56993 (2018).</li><li>Khatri, R., Hussmann, B., Rawat, D., Gurol, A. O., Linn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraportal+transplantation+of+pancreatic+islets+in+mouse+model.">Intraportal transplantation of pancreatic islets in mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57559 (2018).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+mesenchymal+stem+cell+and+islet+cotransplantation:+Safety+and+efficacy.">Autologous mesenchymal stem cell and islet cotransplantation: Safety and efficacy.</a> Stem Cells Translational Medicine. 7 (1), 11-19 (2018).</li></ol>

במחקר זה הוכחו שני הליכים משופרים שיכולים למנוע דימום ועשויים להפחית את תמותת העכבר במהלך IIT של העכבר. מחקר זה מאפשר לחוקרים לדמיין את מודל השתלת האיים הייחודי בחקר התגובה הדלקתית המתווכת בדם מיידי לאחר ההשתלה. מודל IIT הוא מודל ייחודי לחקר הישרדות תאי איון ופגיעות איסכמיות בכבד בתגובה להש?...

השתלת איים תוך-ספורטיביים (IIT) דרך וריד הפורטל היא השיטה הנפוצה ביותר להשתלת איון אנושית בהגדרות קליניות. מודל IIT העכבר מציע הזדמנות נהדרת ללמוד השתלת איון ולבדוק גישות התערבות מבטיחות שיכולות לשפר את היעילות של השתלת איון1. IIT תואר לראשונה בשנות השבעים ושימש מספר קבוצות 1,2,3,4,5. זה חזר לפופולריות לאחר פריצת הדרך בהשתלת האי האנושי בשנת 20006,7. עם זאת, רוב מחקרי השתלת האיון השתמשו בקפסולת הכליה כאתר מועדף להשתלת אי ניסיוני בשל הצלחתו הקלה. להיפך, IIT מאתגר יותר מבחינה טכנית ומשמש פחות למחקרי השתלת איון8,9. שלא כמו IIT, עם זאת, איונים המושתלים תחת כמוסת הכליה אינם סובלים מהתגובה הדלקתית המתווכת בדם המיידית המאופיינת בפקקת, דלקת ואיסכמיה של רקמת הכבד, ולכן יש להם תפקוד טוב יותר מאשר איים המושתלים בכבד. מודל קפסולה הכליה, אם כן, לא יכול לחקות באופן מלא את הלחצים נתקלים על ידי איים בהשתלת אי האדם10,11,12.
אחד הסיבוכים העיקריים של IIT בעכברים הוא דימום מאתר ההזרקה לאחר ההשתלה, אשר יכול לגרום 10-30% של תמותה בקרב זני עכבר שונים12. במאמר זה פותחו שתי גישות מעודנות כדי לעצור את הדימום במהירות ובבטחה רבה יותר וכדי להפחית את תמותת העכברים לאחר IIT. הדגמה חזותית של פרטים מעודנים אלה תסייע לחוקרים לזהות את הצעדים העיקריים של הליך מאתגר מבחינה טכנית זה. בנוסף, המיקום של שתלי האי בכבד של המטופל נקבע על ידי בדיקה היסטולוגית של המטוקסילין ואאוזין (H&E) רקמת כבד מוכתמת (סעיף שלם) הנושאת איים מושתלים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Neutral buffered formalin v/v</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23426796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe with needle</td>
			<td>AHS</td>
			<td>AH01T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>301031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G x 5/8&#34; hypodermic needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pads, sterile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Anesthesia system</td>
			<td>VetEquip, Inc.</td>
			<td>901806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine hydrochloride, injection</td>
			<td>Par Sterile Products, LLC</td>
			<td>NDC 42023-179-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes, 15 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>0553859A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMRL-1066</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15110CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10013CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, absolute (200 proof), molecular biology grade</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra fine Micro Dissecting scissors 4&#8221; straight sharp</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35011CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FreeStyle&#160; Glucose meter</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>Lite</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FreeStyle Blood Glucose test strips</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>Lite</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam (absorbable gelatin sponge, USP)</td>
			<td>Pharmacia &#38; Upjohn Company</td>
			<td>34201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe forceps 4&#8221; extra delicate tip</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heated pad</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07HMKMBKM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hegar-Baumgartner Needle Holder 5.25&#8221;</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-7850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with 27-gauge needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>879588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine prep pads</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>19-027048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin (P/S)</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene Suture 4-0</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>MV-8683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene Suture 5-0</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>MV-8661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride, 0.9% intravenous solution</td>
			<td>VWR</td>
			<td>2B1322Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptozocin (STZ)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape, sterile</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>DR1826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassette</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-272416</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minimizing post-infusion portal vein bleeding during intrahepatic islet transplantation in mice

למרות שהכבד מתקבל כיום כאתר ההשתלה העיקרי עבור איים אנושיים בהגדרות קליניות, איים מושתלים תחת קפסולת הכליה ברוב מחקרי השתלת האי הפרה-קליני מכרסמים. מודל זה נפוץ כי השתלת אי תוך-הפסטי מורין היא מאתגרת מבחינה טכנית, ואחוז גבוה של עכברים יכול למות מסיבוכים כירורגיים, במיוחד דימום מאתר ההזרקה לאחר ההשתלה. במחקר זה, שני נהלים שיכולים למזער את השכיחות של דימום וריד פורטל לאחר עירוי מוצגים. השיטה הראשונה מיישמת ספוג ג'לטין hemostatic נספג לאתר ההזרקה, והשיטה השנייה כוללת חדירה מחט הזרקת האי דרך רקמת השומן תחילה ולאחר מכן לתוך וריד הפורטל באמצעות רקמת השומן כמחסום פיזי כדי לעצור את הדימום. שתי השיטות יכולות למנוע ביעילות מוות של עכברים כתוצאה מדימום. כל החלק הכבד מראה הפצת איון וראיות של פקקת איון לאחר ההשתלה, תכונה אופיינית להשתלת איים תוך-הפגפיים, הוצגו. פרוטוקולים משופרים אלה לחדד את הליכי השתלת האי התוך-הפגטי ועשויים לסייע למעבדות להקים את ההליך לחקר ההישרדות והתפקוד של האיים בהגדרות פרה-קליניות.

ביצענו השתלות איים סינגניים וקסנוגניים דרך וריד הפורטל. פונקציית השתלת האיון נצפתה באופן תלוי במינון בשני המודלים להשתלת איון. במודל השתלת האי הסינגניים באמצעות עכברי C57BL/6, השתלה של 250 איים הובילה לנורמוגליקמיה חולפת לפני שהעכברים חזרו להיפרגליקמיה. עכברים שקיבלו 500 איים הגיעו והחזיקו נו...

Watch this Scientific Journal Video about Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice at JoVE.com

Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

כאן אנו מציגים הליכים כירורגיים מעודנים על ביצוע מוצלח של השתלת איים תוך-ספורטיביים, הליך כירורגי רלוונטי מבחינה קלינית אך מאתגר מבחינה טכנית, בעכברים.

מזעור דימום וריד פורטל לאחר עירוי במהלך השתלת איים תוך-הפטיים בעכברים

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...

כבד הוא אתר עיקרי להשתלה בסביבה הקלינית של האי האנושי. השתלת איים תוך-הפטנטיים של העכבר היא מאתגרת מבחינה טכנית, ואחוז גבוה של עכברים עלול למות מסיבוכים כירורגיים, במיוחד דימום. במחקר זה, שתי השיטות שהראנו שתיהן יכולות למנוע ביעילות מוות של עכברים כתוצאה מדימום.השיטה שלנו יכולה להיות מיושמת למחקר בסרטן הכבד ומחלות כבד אחרות על ידי מתן אפשרות הזרקה של תאים סרטניים, תאי גזע mesenchymal, hepatocyte ישירות לכבד. בתור התחלה, לנתק תרבות אי אנושית עם שריטות עדינות. השתמש מזרק 1 ס"מ מעוקב לקטוף 300 עד 350 איים לתוך צינורות מיקרו-צנטריפוגה סטריליים 1.5 מיליליטר על קרח.כאשר כל האיים כבר הרים, צנטריפוגות הצינורות במשך 10 שניות כדי לשקם את התאים. להשליך את כל אבל נפח קטן של supernatant כדי למנוע אובדן גלולה ו resuspend האיים ב 200 microliters HBSS המכיל 5%BSA. טען את האיים resuspended לתוך מזרק אינסולין 5 מיליליטר ולהפוך את מחט מזרק בסופו של דבר במשך 1 דקה כדי לתת את האיים להתיישב על הבוכנה.לדכא את הבוכנה כדי להסיר את כל הבועות, שמירה על כ 100 עד 150 מיקרוליטרים של פתרון במזרק ולהפוך את המזרק עם הקשה עדינה כדי להפיץ באופן שווה את האיים. לאחר אישור חוסר תגובה רפלקס דוושה, להחיל משחה על העיניים כדי למנוע ייבוש. לגלח את הבטן של העכבר מרדים כדי להסיר את הפרווה ולחטא את האזור הניתוחי עם שלושה מגבונים לסירוגין של 2% יוד ו 75% אלכוהול.לאחר מכן, לעשות חתך 1 עד 1.5 ס"מ בבטן ולפתוח את חלל הצפק. מניחים חתיכת גזה סטרילית סביב החתך ולהשתמש מלקחיים או קצות כותנה כדי להעביר בעדינות את המעי על הגזה. לאחר מכן לכסות את המעי עם חתיכת גזה ספוגה מלוחים ולחשוף את וריד הפורטל.כדי לעצור דימום המושרה בהעברת האי באמצעות קצף ג'ל, החזק את המחט עם השיפוע הפונה כלפי מטה ומקם את קצה המחט עם פתח מקביל לקיר וריד הפורטל לפני החדרת המחט לווריד הפורטל. הסר את הבוכנה כדי למשוך 20 עד 50 מיקרוליטרים של דם לתוך המזרק כדי לערבב עם האיים לפני החדרת האיים לתוך וריד הפורטל תוך כדי דיכאון חוזר ונשנה ונסיגה הבוכנה. כאשר כל האיים נמסרו, מניחים כ 5 על 5 ס"מ של קצף ג'ל מעל אתר ההזרקה.השתמש בקצה כותנה כדי ללחוץ על קצף הג'ל למטה בעת הסרת המחט מווריד הפורטל. החזק את הג'ל במקום במשך כ 2 דקות, מגלגל את קצף הג'ל כדי לוודא שהוא מכסה את וריד הפורטל. לאחר הדימום נעצר, בעדינות להחזיר את המעי לחלל הצפק בתנוחה המקורית ולהזריק 500 מיקרוליטרים של מלוחים חמים לתוך חלל הבטן.השתמשו בתפרים כדי לסגור את שכבות השרירים והעור. לאחר מכן מניחים את העכבר בכלוב נקי על כרית חימום עם ניטור עד התאוששות מלאה מהרדמה, מתן משככי כאבים כל 12 שעות וחום במשך 48 שעות. כדי לעצור דימום המושרה בהעברת האי באמצעות כרית שומן, לאחר חשיפת וריד הפורטל כפי שהודגם, השתמש בשני קצות כותנה כדי להחזיק את הווריד החשוף בצד שמאל ובצד ימין ולאתר את כרית רקמת השומן בין התריסריון לווריד הפורטל.לחדור את כרית השומן עם קצה המחט לפני הכניסה לתוך וריד הפורטל. החדירו את האיים לווריד השער כפי שהוכח. כאשר כל האיים נמסרו, לחץ על רקמת השומן עם קצה כותנה במשך כ 1 דקה תוך הסרת המחט מן הווריד.לאחר מכן להחזיר את המעי לחלל הבטן ולבצע את שאר ההליכים טיפול posturgical כפי שהוכח. ההשפעות של השתלת האיון תלויות במינון, כמו גליקמיה נורמלית הוא ציין 30 ימים לאחר השתלת האי הסינגנית כאשר 500 איים מועברים, אבל רק נורמוגליקמיה חולפת הוא ציין כאשר 250 איים מועברים, עם העכברים חוזרים היפרגליקמיה על ידי 10 ימים לאחר ההשתלה. משקל גוף מוגבר נצפתה בשתי הקבוצות ותגובות זהות שנצפו כאשר איים אנושיים מושתלים בעכברים NOD-SCID סוכרתיים, עם נורמוגליקמיה נצפתה כאשר מספר גבוה יותר של שווה ערך לאי מושתלים אך לא מספרים קטנים יותר.רוב העכברים שיש להם דימום לאחר ההעברה למות לאחר הניתוח, בעוד העכברים ללא דימום לשרוד. ב 28 ימים לאחר ההשתלה, כתמי אינסולין חושפים התפלגות אחידה של האי האנושי בכל הכבד, בעיקר קרוב לכלי הדם. בנוסף לאינסולין, פיברין וסינון תאים פולימורפונוקלארי נצפים גם בתוך האיים האנושיים המושתלים.השתלת איים תוך-הפטיים תיצור חור גדול בווריד הפורטל שעלול לגרום לדימום. שימוש בשני ההליכים המשופרים שלנו יכול למנוע דימום ולהפחית את התמותה לאחר השתלת איון. מודל השתלת האי הפנימי יכול לחקות השתלת איון אנושי קלינית.ההליכים המעודנים שלנו יכולים להוביל לשיעורי הישרדות גבוהים יותר עבור נמענים, המאפשרים מחקר נוסף של תפקוד האי לאחר ההשתלה.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

שיטה בידוד איילט Murine והשתלות כליה Subcapsular

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

3-Dimensional Resin Casting and Imaging of Mouse Portal Vein or Intrahepatic Bile Duct System

יציקה והדמיה של וריד שער מאוס או מערכת צינור מרת intrahepatic שרף 3-Dimensional

In  organs, the correct architecture of vascular and ductal structures is  indispensable for proper physiological function, and the formation and  ...

Direct Pressure Monitoring Accurately Predicts Pulmonary Vein Occlusion During Cryoballoon Ablation

ניטור לחץ ישיר מנבא במדויק חסימת וריד ריאתי במהלך אבלציה Cryoballoon

Cryoballoon  ablation (CBA) is an established therapy for atrial fibrillation (AF).  Pulmonary vein (PV) occlusion is essential for achieving antral ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

דור של תת עורי וintrahepatic אדם xenografts קרצינומה hepatocellular בעכברים עם מערכת חיסון חלשים

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Heterotopic Auxiliary Rat Liver Transplantation With Flow-regulated Portal Vein Arterialization in Acute Hepatic Failure

Heterotopic עזר עכברוש כבד השתלה עם זרימה מוסדר פורטל וריד Arterialization בכישלון חריף כבדית

In acute hepatic failure auxiliary liver transplantation is an interesting alternative approach. The aim is to provide a temporary support until the ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

Heterotopic צוואר הרחם לב השתלה בעכברים

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

בטכניקה שרוול במודל של עכברים של אבי העורקים השתלת - סרט הדרכה

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy (ALPPS) Procedure

Rat Model of the Associating Liver Partition and Portal Vein Ligation for Staged Hepatectomy ALPPS Procedure

עכברוש מודל של שיוך מחיצה בכבד, וריד שער הכבד מצדו לניתוח בשלבים Hepatectomy (ALPPS)

Recent clinical data support an aggressive surgical approach to both primary and metastatic liver tumors. For some indications, like colorectal liver ...

Intrasplenic Transplantation of Hepatocytes After Partial Hepatectomy in NOD.SCID Mice

השתלת intrasplenic של Hepatocytes לאחר Hepatectomy חלקית ב במנוד ראש. SCID עכברים

Partial hepatectomy is a versatile and reproducible method to study liver regeneration and the effect of cell based therapeutics in various pathological ...

Blood Collection Through Subclavian Vein Puncture in Mice

איסוף דם באמצעות ניקוב ורידים תת-מותני בעכברים

The mouse is the foremost mammalian model for studying human disease and human health. However, blood sample collection from mice is challenging in ...