Name: minimizing post-infusion portal vein bleeding during intrahepatic islet transplantation in mice
Uploaded: 2021-05-10T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice at JoVE.com

Questo studio è stato supportato dal Department of Veterans Affairs (VA-ORD BLR& D Merit I01BX004536) e dal National Institute of Health concede # 1R01DK105183, DK120394, DK118529, a HW. Vorremmo ringraziarvi mr. Michael Lee e Ms. Lindsay Swaby per l'editing linguistico

Tutte le procedure sono state condotte con l'approvazione dei comitati istituzionali per la cura e l'uso degli animali presso la Medical University of South Carolina e il Ralph H Johnson Medical Center di Charleston.
1. Induzione del diabete con streptozotocina (STZ)
<ol><li>Preparazione dei topi riceventi:<ol>
<li>Pesare tutti i topi individualmente.</li>
		<li>Controllare i livelli di glucosio nel sangue da un campione di sangue della vena della coda utilizzando un glucometro.</li>
	</ol>
...

<ol>
	<li>Pellegrini, S., Cantarelli, E., Sordi, V., Nano, R., Piemonti, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+state+of+the+art+of+islet+transplantation+and+cell+therapy+in+type+1+diabetes.">The state of the art of islet transplantation and cell therapy in type 1 diabetes.</a> Acta Diabetology. 53 (5), 683-691 (2016).</li><li>Ballinger, W. F., Lacy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+intact+pancreatic+islets+in+rats.">Transplantation of intact pancreatic islets in rats.</a> Surgery. 72 (2), 175-186 (1972).</li><li>Wright, J. R., Hauptfeld, V., Lacy, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Ia+antigen+expression+on+murine+islet+parenchymal+cells+does+not+diminish+islet+allograft+survival.">Induction of Ia antigen expression on murine islet parenchymal cells does not diminish islet allograft survival.</a> American Journal of Pathology. 134 (2), 237-242 (1989).</li><li>Toyofuku, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+killer+T-cells+participate+in+rejection+of+islet+allografts+in+the+liver+of+mice.">Natural killer T-cells participate in rejection of islet allografts in the liver of mice.</a> Diabetes. 55 (1), 34-39 (2006).</li><li>Goss, J. A., Nakafusa, Y., Finke, E. H., Flye, M. W., Lacy, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+tolerance+to+islet+xenografts+in+a+concordant+rat-to-mouse+model.">Induction of tolerance to islet xenografts in a concordant rat-to-mouse model.</a> Diabetes. 43 (1), 16-23 (1994).</li><li>Hara, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+studying+intrahepatic+islet+transplantation.">A mouse model for studying intrahepatic islet transplantation.</a> Transplantation. 78 (4), 615-618 (2004).</li><li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen.">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-1+antitrypsin+enhances+islet+engraftment+by+suppression+of+instant+blood-mediated+inflammatory+reaction.">Alpha-1 antitrypsin enhances islet engraftment by suppression of instant blood-mediated inflammatory reaction.</a> Diabetes. 66 (4), 970-980 (2017).</li><li>Gou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-1+antitrypsin+suppresses+macrophage+activation+and+promotes+islet+graft+survival+after+intrahepatic+islet+transplantation.">Alpha-1 antitrypsin suppresses macrophage activation and promotes islet graft survival after intrahepatic islet transplantation.</a> American Journal of Transplantation. , (2020).</li><li>Contreras, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activated+protein+C+preserves+functional+islet+mass+after+intraportal+transplantation:+A+novel+link+between+endothelial+cell+activation,+thrombosis,+inflammation,+and+islet+cell+death.">Activated protein C preserves functional islet mass after intraportal transplantation: A novel link between endothelial cell activation, thrombosis, inflammation, and islet cell death.</a> Diabetes. 53 (11), 2804-2814 (2004).</li><li>Moberg, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+tissue+factor+by+pancreatic+islet+cells+as+a+trigger+of+detrimental+thrombotic+reactions+in+clinical+islet+transplantation.">Production of tissue factor by pancreatic islet cells as a trigger of detrimental thrombotic reactions in clinical islet transplantation.</a> Lancet. 360 (9350), 2039-2045 (2002).</li><li>Melzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrahepatic+islet+transplant+in+the+mouse:+functional+and+morphological+characterization.">Intrahepatic islet transplant in the mouse: functional and morphological characterization.</a> Cell Transplantation. 17 (12), 1361-1370 (2008).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor+treatment+with+carbon+monoxide+can+yield+islet+allograft+survival+and+tolerance.">Donor treatment with carbon monoxide can yield islet allograft survival and tolerance.</a> Diabetes. 54 (5), 1400-1406 (2005).</li><li>Desai, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+liver+histopathology+on+islet+cell+engraftment+in+the+model+mimicking+autologous+islet+cell+transplantation.">Effect of liver histopathology on islet cell engraftment in the model mimicking autologous islet cell transplantation.</a> Islets. 9 (6), 140-149 (2017).</li><li>Cui, W., Angsana, J., Wen, J., Chaikof, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomal+formulations+of+thrombomodulin+increase+engraftment+after+intraportal+islet+transplantation.">Liposomal formulations of thrombomodulin increase engraftment after intraportal islet transplantation.</a> Cell Transplantation. 19 (11), 1359-1367 (2010).</li><li>Cui, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombomodulin+improves+early+outcomes+after+intraportal+islet+transplantation.">Thrombomodulin improves early outcomes after intraportal islet transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 9 (6), 1308-1316 (2009).</li><li>Proto, C., Grasso, G., Fassio, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatoparenchymal+clearance+of+indocyanine+green+in+infectious+hepatitis.">Hepatoparenchymal clearance of indocyanine green in infectious hepatitis.</a> Giornale di Malattie Infettive e Parassitarie. 20 (9), 845-851 (1968).</li><li>Cabral, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+hepatocytes+and+sinusoidal+endothelial+cells+from+mouse+liver+perfusion.">Purification of hepatocytes and sinusoidal endothelial cells from mouse liver perfusion.</a> Journal of Visualized Experiments. (132), e56993 (2018).</li><li>Khatri, R., Hussmann, B., Rawat, D., Gurol, A. O., Linn, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraportal+transplantation+of+pancreatic+islets+in+mouse+model.">Intraportal transplantation of pancreatic islets in mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (135), e57559 (2018).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+mesenchymal+stem+cell+and+islet+cotransplantation:+Safety+and+efficacy.">Autologous mesenchymal stem cell and islet cotransplantation: Safety and efficacy.</a> Stem Cells Translational Medicine. 7 (1), 11-19 (2018).</li></ol>

In questo studio, sono state dimostrate due procedure migliorate che possono prevenire il sanguinamento e possono ridurre la mortalità del topo durante l'IIT del topo. Questo studio consente ai ricercatori di visualizzare il modello di trapianto di isole che è unico nello studio della risposta infiammatoria istantanea mediata dal sangue dopo il trapianto. Il modello IIT è un modello distintivo per lo studio della sopravvivenza delle cellule insulari e delle lesioni ischemiche epatiche in risposta al trapianto di <sup ...

Il trapianto intraportale di isole (IIT) attraverso la vena porta è il metodo più comunemente usato per il trapianto di isole umane in contesti clinici. Il modello IIT murino offre una grande opportunità per studiare il trapianto di isole e testare approcci interventistici promettenti che possono migliorare l'efficacia del trapianto di isole1. IIT è stato descritto per la prima volta nel 1970 e utilizzato da diversi gruppi1,2,3,4,5. Ha riacquistato popolarità dopo la svolta nel trapianto di isole umane nell'anno 20006,7. Tuttavia, la maggior parte degli studi sul trapianto di isole ha utilizzato la capsula renale come sito preferito per il trapianto sperimentale di isole grazie al suo facile successo. Al contrario, l'IIT è più tecnicamente impegnativo e meno frequentemente utilizzato per gli studi sui trapianti di isole8,9. A differenza dell'IIT, tuttavia, le isole trapiantate sotto la capsula renale non soffrono della reazione infiammatoria immediata mediata dal sangue caratterizzata da trombosi, infiammazione e ischemia del tessuto epatico, e quindi hanno una funzione migliore rispetto alle isole trapiantate nel fegato. Il modello di capsula renale, quindi, potrebbe non imitare completamente gli stress incontrati dalle isole nel trapianto di isole umane10,11,12.
Una delle principali complicanze dell'IIT nei topi è il sanguinamento dal sito di iniezione dopo il trapianto, che potrebbe causare il 10-30% della mortalità tra diversi ceppi di topo12. In questo articolo, sono stati sviluppati due approcci raffinati per fermare il sanguinamento in modo più rapido e sicuro e per ridurre la mortalità dei topi dopo un IIT. La dimostrazione visiva di questi dettagli raffinati aiuterà i ricercatori a identificare i passaggi chiave di questa procedura tecnicamente impegnativa. Inoltre, la posizione degli innesti di isole nel fegato del ricevente è stata determinata dall'esame istologico del tessuto epatico colorato di ematossilina ed eosina (H & E) (intera sezione) recante isole trapiantate.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10% Neutral buffered formalin v/v</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>23426796</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe with needle</td>
			<td>AHS</td>
			<td>AH01T</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>301031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25G x 5/8&#34; hypodermic needles</td>
			<td>BD</td>
			<td>305122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol prep pads, sterile</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal Anesthesia system</td>
			<td>VetEquip, Inc.</td>
			<td>901806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine hydrochloride, injection</td>
			<td>Par Sterile Products, LLC</td>
			<td>NDC 42023-179-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes, 15 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>0553859A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CMRL-1066</td>
			<td>Corning</td>
			<td>15110CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10013CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol, absolute (200 proof), molecular biology grade</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2818500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra fine Micro Dissecting scissors 4&#8221; straight sharp</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-5882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35011CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FreeStyle&#160; Glucose meter</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>Lite</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FreeStyle Blood Glucose test strips</td>
			<td>Abbott</td>
			<td>Lite</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelfoam (absorbable gelatin sponge, USP)</td>
			<td>Pharmacia &#38; Upjohn Company</td>
			<td>34201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe forceps 4&#8221; extra delicate tip</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heated pad</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>B07HMKMBKM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hegar-Baumgartner Needle Holder 5.25&#8221;</td>
			<td>Roboz Surgical Instrument Co.</td>
			<td>RS-7850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringe with 27-gauge needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>879588</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodine prep pads</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>19-027048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Piramal Critical Care</td>
			<td>NDC 66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin (P/S)</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene Suture 4-0</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>MV-8683</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polypropylene Suture 5-0</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>MV-8661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride, 0.9% intravenous solution</td>
			<td>VWR</td>
			<td>2B1322Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptozocin (STZ)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape, sterile</td>
			<td>Med-Vet International</td>
			<td>DR1826</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassette</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-272416</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

minimizing post-infusion portal vein bleeding during intrahepatic islet transplantation in mice

Sebbene il fegato sia attualmente accettato come sito di trapianto primario per le isole umane in contesti clinici, le isole vengono trapiantate sotto la capsula renale nella maggior parte degli studi di trapianto di isole precliniche di roditori. Questo modello è comunemente usato perché il trapianto di isole intraepatiche murine è tecnicamente impegnativo e un'alta percentuale di topi potrebbe morire per complicazioni chirurgiche, in particolare sanguinamento dal sito di iniezione post-trapianto. In questo studio, vengono dimostrate due procedure che possono ridurre al minimo l'incidenza di sanguinamento della vena porta post-infusione. Il primo metodo applica una spugna di gelatina emostatica assorbibile al sito di iniezione, e il secondo metodo prevede la penetrazione dell'ago per iniezione dell'isolotto attraverso il tessuto adiposo prima e poi nella vena porta utilizzando il tessuto adiposo come barriera fisica per fermare il sanguinamento. Entrambi i metodi potrebbero prevenire efficacemente la morte del topo indotta dal sanguinamento. Sono state presentate l'intera sezione epatica che mostra la distribuzione delle isole e l'evidenza di trombosi delle isole post-trapianto, una caratteristica tipica per il trapianto di isole intraepatiche. Questi protocolli migliorati perfezionano le procedure di trapianto intraepatico di isole e possono aiutare i laboratori a impostare la procedura per studiare la sopravvivenza e la funzione delle isole in contesti pre-clinici.

Abbiamo eseguito trapianti di isole singeniche e xenogeniche attraverso la vena porta. La funzione dell'innesto di isole è stata osservata in modo dose-dipendente in entrambi i modelli di trapianto di isole. Nel modello di trapianto di isole singeniche utilizzando topi C57BL/6, il trapianto di 250 isole ha portato a normoglicemia transitoria prima che i topi tornassero all'iperglicemia. I topi che ricevevano 500 isole hanno raggiunto e mantenuto la normoglicemia oltre i 30 giorni dopo il trapianto (...

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Minimizing Post-Infusion Portal Vein Bleeding during Intrahepatic Islet Transplantation in Mice

Qui presentiamo procedure chirurgiche raffinate sull'esecuzione con successo del trapianto intraportale di isole, una procedura chirurgica clinicamente rilevante ma tecnicamente impegnativa, nei topi.

Ridurre al minimo il sanguinamento della vena porta post-infusione durante il trapianto di isole intraepatiche nei topi

Although the liver is currently accepted as the primary transplantation site for human islets in clinical settings, islets are transplanted under the ...

Il fegato è un sito primario per il trapianto nel contesto clinico delle isole umane. Il trapianto di isole intraepatiche di topo è tecnicamente impegnativo e un'alta percentuale di topi potrebbe morire per complicazioni chirurgiche, in particolare sanguinamento. In questo studio, i due metodi che abbiamo mostrato entrambi potrebbero prevenire efficacemente la morte del topo indotta dal sanguinamento.Il nostro metodo può essere applicato alla ricerca sul cancro al fegato e altre malattie del fegato consentendo l'iniezione di cellule tumorali, cellule staminali mesenchimali ed epatociti direttamente al fegato. Per iniziare, stacca una cultura di isole umane con delicati graffi. Utilizzare una siringa da 1 centimetro cubo per raccogliere da 300 a 350 isole in tubi sterili da 1,5 millilitri microcentrifuga sul ghiaccio.Quando tutte le isole sono state raccolte, centrifugare i tubi per 10 secondi per sedimentare le cellule. Scartare tutti tranne un piccolo volume di surnatante per prevenire la perdita di pellet e risospesciare le isole in 200 microlitri HBSS contenenti il 5% di BSA. Caricare le isole risospese in una siringa da insulina da 5 millilitri e ruotare l'ago della siringa per 1 minuto per lasciare che le isole si depositino allo stantuffo.Premere lo stantuffo per rimuovere eventuali bolle, mantenendo circa 100-150 microlitri di soluzione nella siringa e invertire la siringa con un tocco delicato per distribuire uniformemente le isole. Dopo aver confermato una mancanza di risposta al riflesso del pedale, applicare un unguento agli occhi per evitare l'essiccazione. Rasare l'addome del topo anestetizzato per rimuovere la pelliccia e disinfettare l'area chirurgica con tre salviette alternate di 2% di iodio e 75% di alcol.Quindi, fare un'incisione da 1 a 1,5 centimetri nell'addome e aprire la cavità peritoneale. Posizionare un pezzo sterile di garza intorno all'incisione e utilizzare pinze o punte di cotone per trasferire delicatamente l'intestino sulla garza. Coprire quindi l'intestino con un pezzo di garza imbevuta di soluzione salina ed esporre la vena porta.Per fermare il sanguinamento indotto dal trasferimento di isole utilizzando schiuma gel, tenere l'ago con la smussatura rivolta verso il basso e posizionare la punta dell'ago con l'apertura parallela alla parete della vena porta prima di inserire l'ago nella vena porta. Ritrarre lo stantuffo per aspirare da 20 a 50 microlitri di sangue nella siringa per mescolarli con le isole prima di infondere le isole nella vena porta mentre si deprime e si ritrae ripetutamente lo stantuffo. Quando tutte le isole sono state consegnate, posizionare un pezzo di schiuma gel di circa 5 per 5 centimetri sul sito di iniezione.Utilizzare una punta di cotone per premere la schiuma di gel verso il basso mentre si rimuove l'ago dalla vena porta. Tenere il gel in posizione per circa 2 minuti, arrotolando la schiuma gel per assicurarsi che copra la vena porta. Una volta fermato il sanguinamento, riportare delicatamente l'intestino nella cavità peritoneale nella posizione originale e iniettare 500 microlitri di soluzione salina calda nella cavità addominale.Utilizzare suture per chiudere gli strati muscolari e cutanei. Quindi posizionare il mouse in una gabbia pulita su una piastra riscaldante con monitoraggio fino al completo recupero dall'anestesia, somministrando analgesia ogni 12 ore e riscaldare per 48 ore. Per fermare il sanguinamento indotto dal trasferimento di isole usando un cuscinetto di grasso, dopo aver esposto la vena porta come dimostrato, utilizzare due punte di cotone per tenere la vena esposta sui lati sinistro e destro e individuare il cuscinetto di tessuto adiposo tra il duodeno e la vena porta.Penetrare il cuscinetto di grasso con la punta dell'ago prima dell'inserimento nella vena porta. Infondere gli isolotti nella vena porta come dimostrato. Quando tutte le isole sono state consegnate, premere il tessuto adiposo con una punta di cotone per circa 1 minuto mentre si rimuove l'ago dalla vena.Quindi riportare l'intestino nella cavità addominale ed eseguire il resto delle procedure di cura postchirurgica come dimostrato. Gli effetti del trapianto di isole sono dose-dipendenti, poiché la glicemia normale si osserva 30 giorni dopo il trapianto di isole sinergiche quando vengono trasferite 500 isole, ma si osserva solo normoglicemia transitoria quando vengono consegnate 250 isole, con i topi che ritornano all'iperglicemia entro 10 giorni dopo il trapianto. Un aumento del peso corporeo è osservato in entrambi i gruppi e risposte identiche osservate quando le isole umane vengono trapiantate in topi diabetici NOD-SCID, con normoglicemia osservata quando viene trapiantato un numero maggiore di equivalenti di isole ma non numeri più piccoli.La maggior parte dei topi che hanno sanguinamento dopo il trasferimento muoiono dopo l'intervento chirurgico, mentre i topi senza sanguinamento sopravvivono. A 28 giorni dopo il trapianto, la colorazione dell'insulina rivela una distribuzione uniforme dell'isolotto umano in tutto il fegato, per lo più vicino ai vasi sanguigni. Oltre all'insulina, la fibrina e la filtrazione delle cellule polimorfonucleate sono osservate anche all'interno delle isole umane trapiantate.Il trapianto di isole intraepatiche genererà un grande foro nella vena porta che può causare sanguinamento. L'utilizzo delle nostre due procedure migliorate può prevenire il sanguinamento e ridurre la mortalità dopo il trapianto di isole. Il modello di trapianto intraportale di isole può imitare il trapianto clinico di isole umane.Le nostre procedure raffinate possono portare a tassi di sopravvivenza più elevati per i riceventi, che consentono ulteriori studi sulla funzione delle isole dopo il trapianto.

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