Name: uptake of fluorescent labeled small extracellular vesicles in vitro and in spinal cord
Uploaded: 2021-05-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Uptake of Fluorescent Labeled Small Extracellular Vesicles In Vitro and in Spinal Cord at JoVE.com

تم دعم هذه الدراسة من خلال المنح المقدمة من المعاهد القومية للصحة NINDS R01NS102836 ووزارة الصحة في ولاية بنسلفانيا تعزيز البحوث العالمية الكومنولث (CURE) الممنوحة لسينا ك. أجيت. نشكر الدكتور برادلي ناش على القراءة النقدية للمخطوطة.

ملاحظة: تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا لدليل المعاهد القومية للصحة لرعاية واستخدام المختبر ووافقت عليها اللجنة المؤسسية للعناية بالحيوانات واستخدامها التابعة لكلية الطب بجامعة دريكسل. واستخدمت فئران CD-1 الحامل في الوقت المناسب في زراعة الاسطوانة الفلكية، وتم استقبال جميع السدود بعد 15 يوم...

<ol>
	<li>Mulcahy, L. A., Pink, R. C., Carter, D. R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Routes+and+mechanisms+of+extracellular+vesicle+uptake.">Routes and mechanisms of extracellular vesicle uptake.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 3 (1), 24641 (2014).</li><li>Betzer, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+imaging+strategies+for+in+vivo+tracking+of+exosomes.">Advances in imaging strategies for in vivo tracking of exosomes.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews. Nanomedicine and Nanobiotechnology. 12 (2), 1594 (2020).</li><li>Dehghani, M., Gaborski, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+labeling+of+extracellular+vesicles.">Fluorescent labeling of extracellular vesicles.</a> Methods in Enzymology. 645, 15-42 (2020).</li><li>Gonz&#225;lez, M. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Covalently+labeled+fluorescent+exosomes+for+in+vitro+and+in+vivo+applications.">Covalently labeled fluorescent exosomes for in vitro and in vivo applications.</a> Biomedicines. 9 (1), 81 (2021).</li><li>Chuo, S. T. -. Y., Chien, J. C. -. Y., Lai, C. P. -. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+extracellular+vesicles:+current+and+emerging+methods.">Imaging extracellular vesicles: current and emerging methods.</a> Journal of Biomedical Science. 25 (1), 91 (2018).</li><li>vander Vlist, E. J., Nolte-'tHoen, E. N. M., Stoorvogel, W., Arkesteijn, G. J. A., Wauben, M. H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+labeling+of+nano-sized+vesicles+released+by+cells+and+subsequent+quantitative+and+qualitative+analysis+by+high-resolution+flow+cytometry.">Fluorescent labeling of nano-sized vesicles released by cells and subsequent quantitative and qualitative analysis by high-resolution flow cytometry.</a> Nature Protocols. 7 (7), 1311-1326 (2012).</li><li>Hoshino, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour+exosome+integrins+determine+organotropic+metastasis.">Tumour exosome integrins determine organotropic metastasis.</a> Nature. 527 (7578), 329-335 (2015).</li><li>Heinrich, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confocal+laser+scanning+microscopy+using+dialkylcarbocyanine+dyes+for+cell+tracing+in+hard+and+soft+biomaterials.">Confocal laser scanning microscopy using dialkylcarbocyanine dyes for cell tracing in hard and soft biomaterials.</a> Journal of Biomedical Materials Research. Part B, Applied Biomaterials. 81 (1), 153-161 (2007).</li><li>Haney, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+as+drug+delivery+vehicles+for+Parkinson's+disease+therapy.">Exosomes as drug delivery vehicles for Parkinson's disease therapy.</a> Journal of Controlled Release. 207, 18-30 (2015).</li><li>Grange, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biodistribution+of+mesenchymal+stem+cell-derived+extracellular+vesicles+in+a+model+of+acute+kidney+injury+monitored+by+optical+imaging.">Biodistribution of mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles in a model of acute kidney injury monitored by optical imaging.</a> International Journal of Molecular Medicine. 33 (5), 1055-1063 (2014).</li><li>Wiklander, O. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicle+in+vivo+biodistribution+is+determined+by+cell+source,+route+of+administration+and+targeting.">Extracellular vesicle in vivo biodistribution is determined by cell source, route of administration and targeting.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 4, 26316 (2015).</li><li>Lai, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+tracking+of+tumour+extracellular+vesicle+delivery+and+RNA+translation+using+multiplexed+reporters.">Visualization and tracking of tumour extracellular vesicle delivery and RNA translation using multiplexed reporters.</a> Nature Communications. 6 (1), 7029 (2015).</li><li>Deddens, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circulating+extracellular+vesicles+contain+miRNAs+and+are+released+as+early+biomarkers+for+cardiac+injury.">Circulating extracellular vesicles contain miRNAs and are released as early biomarkers for cardiac injury.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 9 (4), 291-301 (2016).</li><li>Montecalvo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+transfer+of+functional+microRNAs+between+mouse+dendritic+cells+via+exosomes.">Mechanism of transfer of functional microRNAs between mouse dendritic cells via exosomes.</a> Blood. 119 (3), 756-766 (2012).</li><li>Escrevente, C., Keller, S., Altevogt, P., Costa, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+and+uptake+of+exosomes+by+ovarian+cancer+cells.">Interaction and uptake of exosomes by ovarian cancer cells.</a> BMC Cancer. 11, 108 (2011).</li><li>Cho, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+exosomes+and+ferritin+protein+nanocages+for+the+delivery+of+membrane+protein+therapeutics.">Comparison of exosomes and ferritin protein nanocages for the delivery of membrane protein therapeutics.</a> Journal of Controlled Release. 279, 326-335 (2018).</li><li>Mantel, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malaria-infected+erythrocyte-derived+microvesicles+mediate+cellular+communication+within+the+parasite+population+and+with+the+host+immune+system.">Malaria-infected erythrocyte-derived microvesicles mediate cellular communication within the parasite population and with the host immune system.</a> Cell Host &amp; Microbe. 13 (5), 521-534 (2013).</li><li>Porro, C., Trotta, T., Panaro, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvesicles+in+the+brain:+Biomarker,+messenger+or+mediator.">Microvesicles in the brain: Biomarker, messenger or mediator.</a> Journal of Neuroimmunology. 288, 70-78 (2015).</li><li>De Toro, J., Herschlik, L., Waldner, C., Mongini, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+roles+of+exosomes+in+normal+and+pathological+conditions:+new+insights+for+diagnosis+and+therapeutic+applications.">Emerging roles of exosomes in normal and pathological conditions: new insights for diagnosis and therapeutic applications.</a> Frontiers in Immunology. 6, 203 (2015).</li><li>Matsumoto, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transmission+of+alpha-synuclein-containing+erythrocyte-derived+extracellular+vesicles+across+the+blood-brain+barrier+via+adsorptive+mediated+transcytosis:+another+mechanism+for+initiation+and+progression+of+Parkinson's+disease.">Transmission of alpha-synuclein-containing erythrocyte-derived extracellular vesicles across the blood-brain barrier via adsorptive mediated transcytosis: another mechanism for initiation and progression of Parkinson's disease.</a> Acta Neuropathologica Communications. 5 (1), 71 (2017).</li><li>Matsumoto, J., Stewart, T., Banks, W. A., Zhang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transport+mechanism+of+extracellular+vesicles+at+the+blood-brain+barrier.">The transport mechanism of extracellular vesicles at the blood-brain barrier.</a> Current Pharmaceutical Design. 23 (40), 6206-6214 (2017).</li><li>Shaimardanova, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+in+the+diagnosis+and+treatment+of+central+nervous+system+diseases.">Extracellular vesicles in the diagnosis and treatment of central nervous system diseases.</a> Neural Regeneration Research. 15 (4), 586-596 (2020).</li><li>Th&#233;ry, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+information+for+studies+of+extracellular+vesicles+2018+(MISEV2018):+a+position+statement+of+the+International+Society+for+Extracellular+Vesicles+and+update+of+the+MISEV2014+guidelines.">Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 7 (1), 1535750 (2018).</li><li>Hoen, E. N. M. N. -. t., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+qualitative+flow+cytometric+analysis+of+nanosized+cell-derived+membrane+vesicles.">Quantitative and qualitative flow cytometric analysis of nanosized cell-derived membrane vesicles.</a> Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine. 8 (5), 712-720 (2012).</li><li>Gangadaran, P., Hong, C. M., Ahn, B. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+update+on+in+vivo+imaging+of+extracellular+vesicles+as+drug+delivery+vehicles.">An update on in vivo imaging of extracellular vesicles as drug delivery vehicles.</a> Frontiers in Pharmacology. 9, 169 (2018).</li><li>Teare, G. F., Horan, P. K., Slezak, S. E., Smith, C., Hay, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+tracking+of+lymphocytes+in+vivo:+the+migration+of+PKH-labeled+lymphocytes.">Long-term tracking of lymphocytes in vivo: the migration of PKH-labeled lymphocytes.</a> Cellular Immunology. 134 (1), 157-170 (1991).</li><li>Kuffler, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+survival+and+sprouting+in+culture+by+motoneurons+isolated+from+the+spinal+cord+of+adult+frogs.">Long-term survival and sprouting in culture by motoneurons isolated from the spinal cord of adult frogs.</a> Journal of Comparative Neurology. 302 (4), 729-738 (1990).</li><li>Takov, K., Yellon, D. M., Davidson, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Confounding+factors+in+vesicle+uptake+studies+using+fluorescent+lipophilic+membrane+dyes.">Confounding factors in vesicle uptake studies using fluorescent lipophilic membrane dyes.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 6 (1), 1388731 (2017).</li><li>Pu&#382;ar Dominku&#353;, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PKH26+labeling+of+extracellular+vesicles:+Characterization+and+cellular+internalization+of+contaminating+PKH26+nanoparticles.">PKH26 labeling of extracellular vesicles: Characterization and cellular internalization of contaminating PKH26 nanoparticles.</a> Biochimica et Biophysica Acta. Biomembranes. 1860 (6), 1350-1361 (2018).</li><li>Dehghani, M., Gulvin, S. M., Flax, J., Gaborski, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+evaluation+of+PKH+labelling+on+extracellular+vesicle+size+by+nanoparticle+tracking+analysis.">Systematic evaluation of PKH labelling on extracellular vesicle size by nanoparticle tracking analysis.</a> Scientific Reports. 10 (1), 9533 (2020).</li><li>Shimomura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+lipophilic+fluorescent+dyes+for+labeling+extracellular+vesicles:+characterization+and+monitoring+of+cellular+uptake.">New lipophilic fluorescent dyes for labeling extracellular vesicles: characterization and monitoring of cellular uptake.</a> Bioconjugate Chemistry. 32 (4), 680-684 (2021).</li><li>Yuan, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+exosomes+as+natural+nanocarriers+for+protein+delivery+to+inflamed+brain.">Macrophage exosomes as natural nanocarriers for protein delivery to inflamed brain.</a> Biomaterials. 142, 1-12 (2017).</li><li>Polanco, J. C., Li, C., Durisic, N., Sullivan, R., G&#246;tz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+taken+up+by+neurons+hijack+the+endosomal+pathway+to+spread+to+interconnected+neurons.">Exosomes taken up by neurons hijack the endosomal pathway to spread to interconnected neurons.</a> Acta Neuropathologica Communications. 6 (1), 10 (2018).</li><li>Jurgielewicz, B. J., Yao, Y., Stice, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+and+specificity+of+HEK293T+extracellular+vesicle+uptake+using+imaging+flow+cytometry.">Kinetics and specificity of HEK293T extracellular vesicle uptake using imaging flow cytometry.</a> Nanoscale Research Letters. 15 (1), 170 (2020).</li></ol>

في هذا البروتوكول، أظهرنا وضع العلامات على المركبات ذاتية الدفع بأصباغ PKH وتصور امتصاصها في الحبل الشوكي. تستخدم الأصباغ الفلورية PKH lipophilic على نطاق واسع لتسمية الخلايا عن طريق قياس التدفق الخلوي والمجهر الفلوري3،5،6،12<s...

الحويصلات الصغيرة خارج الخلية (sEVs) هي حويصلات نانوية مشتقة من الأغشية مع نطاق حجم يتراوح بين 50-150 نانومتر. أنها تنشأ من أجسام متعددة المركبات (MVBs) ويتم تحريرها من الخلايا عند دمج MVBs مع غشاء البلازما. تحتوي المركبات الذاتية على ميرناس، ورناس، وبروتينات، ودهون نشطة بيولوجيا، ويتم نقل هذه الجزيئات بين الخلايا في شكل اتصال من خلية إلى خلية. يمكن استيعابها بواسطة الخلايا المتلقية بواسطة مجموعة متنوعة من المسارات الانسطية، ويتم التوسط في التقاط هذه المركبات من قبل الخلايا المتلقية من خلال التعرف على جزيئات السطح على كل من المركبات الكهربائية والخلايا المستهدفة1.
اكتسبت sEVs الاهتمام بسبب قدرتها على إحداث تغييرات جزيئية وفينوطيبيك في الخلايا المقبولة ، وفائدتها كعامل علاجي ، وإمكاناتها كناقلين لجزيئات الشحن أو العوامل الدوائية. نظرا لصغر حجمها ، يمكن أن يكون تصوير وتتبع المركبات ذاتية الدفع تحديا ، خاصة بالنسبة للدراسات الحية والإعدادات السريرية. لذلك ، تم تطوير العديد من الطرق لتسمية وصور sEVs للمساعدة في التوزيع الحيوي وتتبع في المختبر وفي الجسم الحي2.
التقنية الأكثر شيوعا لدراسة التوزيع الحيوي SEV والتفاعلات الخلية المستهدفة ينطوي على وضع العلامات عليها مع جزيئات صبغ الفلورسنت3،4،5،6،7. وصفت المركبات الكهربائية في البداية مع الأصباغ غشاء الخلية التي كانت تستخدم عادة لتصوير الخلايا. هذه الأصباغ الفلورية وصمة عار عموما ثنائي الطبقة الدهون أو البروتينات ذات الفائدة على sEVs. العديد من الأصباغ lipophilic عرض إشارة الفلورسنت قوية عندما أدرجت في السيتوسول، بما في ذلك دير (1،1′-ديوكوتاديسيل-3,3′,3′-tetramethylindotricarbocyanine يوديد), ديال (1, 1′-dioctadecyl-3, 3، 3′، 3′-tetramethyl إندوكاربواسيانين بيركلورات)، ودي دي دي (1، 1′-ديوكوتاديسيل-3، 3، 3′-tetramethyl إندوكاربواسيانين 4-chlorobenzenesulfonate الملح)8،9،10،11.
الأصباغ الدهنية الأخرى، مثل PKH67 و PKH26، لديها مجموعة رأس قطبية فلورية للغاية وذيل هيدروكربوني طويل يتداخل بسهولة في أي بنية دهون ويؤدي إلى احتباس صبغ طويل الأجل وفلورسنس مستقر12. يمكن للأصباغ PKH أيضا تسمية المركبات الكهربائية ، والتي تسمح بدراسة خصائص EV في الجسم الحي13. وقد استخدمت العديد من الأصباغ الأخرى لمراقبة exosomes باستخدام المجهر الفلوري وتدفق قياس الخلايا، بما في ذلك الأصباغ تسمية الدهون14 والأصباغ نفاذية الخلية مثل carboxyfluorescein diacetate succinimidyl استر (CFDA-SE)15،16 وكالسين أسيتوكسميثيل (AM) استر17.
وقد وفرت دراسات المحادثات المتقاطعة بوساطة SEV بين خلايا مختلفة في الجهاز العصبي المركزي رؤى هامة حول الإمراض من الأمراض العصبية والعصبية18. على سبيل المثال، يمكن أن SEVs من الخلايا العصبية نشر الببتيدات بيتا اميلويد والبروتينات تاو الفوسفورية والمساعدة في الإمراض من مرض الزهايمر19. بالإضافة إلى ذلك ، تحتوي المركبات الكهربائية المشتقة من الكريات الحمراء على كميات كبيرة من ألفا سينوكلين ويمكن أن تعبر حاجز الدم في الدماغ وتسهم في أمراض باركنسون20. قدرة SEVs لعبور الحواجز الفسيولوجية21 ونقل الجزيئات الحيوية لاستهداف الخلايا يجعلها أدوات مريحة لتقديم الأدوية العلاجية إلى CNS22.
تصور امتصاص SEV من قبل عدد لا يحصى من خلايا الجهاز العصبي المركزي في الحبل الشوكي ستمكن كل من الدراسات الميكانيكية وتقييم الفوائد العلاجية للمركبات ذاتية المنشأ تدار من مصادر خلوية مختلفة. تصف هذه الورقة منهجية تسمية المركبات الكهربائية المشتقة من الضامة وصورة امتصاصها في المختبر وفي الجسم الحي في الحبل الشوكي القطني بواسطة الخلايا العصبية والخلايا الدقيقة والخلايا الفلكية لتأكيد تسليم SEV نوعيا عن طريق التصور.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra 0.5 mL centrifugal filters</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>Z677094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Alix Antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab186429</td>
			<td>1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Calnexin Antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Ab10286</td>
			<td>1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD81 Antibody</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-166029</td>
			<td>1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GAPDH Monoclonal Antibody (14C10)</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>2118</td>
			<td>1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Glial Fibrillary Acidic Protein Antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>MAB360</td>
			<td>1:500 for IF; 1:1000 for IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Iba1 Antibody</td>
			<td>Wako</td>
			<td>019-19741</td>
			<td>1:2000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-MAP2A Antibody</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>MAB378</td>
			<td>1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>0332</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer, 40 &#956;m</td>
			<td>VWR</td>
			<td>15-1040-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge Tubes</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3118-0050</td>
			<td>12,000 x g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip, 12-mm, #1.5</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72230-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip, 18-mm, #1.5</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72222-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542-1MG</td>
			<td>1 &#181;g/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DC Protein Assay</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>500-0116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I (DNAse I)</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>D4513-1VL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey Anti-Rabbit IgG H&#38;L (HRP)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab16284</td>
			<td>1:10000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey Anti-Rabbit IgG H&#38;L, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21206</td>
			<td>1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Frosted Microscope Slides, #1</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12-552-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS without Calcium and Magnesium</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Exosome-Depleted Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A27208-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>35-011-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluorChem M imaging system</td>
			<td>ProteinSimple</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FV3000 Confocal Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Mouse IgG H&#38;L (HRP)</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6789</td>
			<td>1:10000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Mouse IgG H&#38;L, Alexa Fluor 488</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-11001</td>
			<td>1:500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Mouse IgG1, Alexa Fluor 594</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-21125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hank&#39;s Balanced Salt Solution (HBSS)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>02-0121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15630080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP Substrate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>34094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intercept blocking buffer, TBS</td>
			<td>LI-COR Biosciences</td>
			<td>927-60001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laemmli SDS Sample Buffer</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>AAJ61337AC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Cover Glass, #1</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48404-454</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microm HM550</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoSight NS300 system</td>
			<td>Malvern Panalytical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NanoSight NTA 3.2 software</td>
			<td>Malvern Panalytical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neuro-2a Cell Line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-131</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat Serum</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>S-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T Compound</td>
			<td>Sakura Finetek</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>NC9597281</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PKH26</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>MINI26-1KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PKH67</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>MINI67-1KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>1862209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF Transfer Membrane</td>
			<td>MDI</td>
			<td>SVFX8302XXXX101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RAW 267.4 Cell Line</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>TIB-71</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RIPA Buffer</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R0278</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>AMRESCO</td>
			<td>0241-2.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Gold Slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>15-188-48</td>
			<td>adhesive slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T-75 Flasks</td>
			<td>Corning</td>
			<td>431464U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tecnai 12 Digital Transmission Electron Microscope</td>
			<td>FEI Company</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TEM Grids</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>FSF300-cu</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-Glycine Protein Gel, 12%</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>XP00120BOX</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-Glycine SDS Running Buffer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC26755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-Glycine Transfer Buffer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC3675</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express</td>
			<td></td>
			<td>cell dissociation enzyme</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>327371000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin, 0.25%</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-053-CL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultracentrifuge Tubes</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>344058</td>
			<td>110,000 x g</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

uptake of fluorescent labeled small extracellular vesicles in vitro and in spinal cord

الحويصلات الصغيرة خارج الخلية (sEVs) هي الحويصلات 50-150 نانومتر تفرزها جميع الخلايا ومتواجدة في سوائل الجسم. تقوم المركبات الذاتية بنقل الجزيئات الحيوية مثل الحمض النووي الريبي والبروتينات والدهون من المتبرعين إلى خلايا القبول، مما يجعلها وسطاء إشارات رئيسية بين الخلايا. في الجهاز العصبي المركزي (CNS)، يمكن أن تتوسط أجهزة التلفاز للإشارات بين الخلايا، بما في ذلك التفاعلات العصبية المناعية. يمكن دراسة وظائف sEV عن طريق تتبع امتصاص sEVs المسمى في الخلايا المتلقية في المختبر وفي الجسم الحي. تصف هذه الورقة وضع العلامات على المركبات ذاتية الدفع من الوسائط المكيفة لخلايا الضامة RAW 264.7 باستخدام صبغة غشاء PKH. فإنه يظهر امتصاص تركيزات مختلفة من sEVs المسمى في نقاط زمنية متعددة من قبل خلايا Neuro-2a والخلايا الفلكية الأولية في المختبر. كما يظهر امتصاص sEVs تسليمها intrathecally في الخلايا العصبية الحبل الشوكي الماوس، والخلايا الفلكية، وmicroglia تصورها المجهر confocal. تظهر النتائج التمثيلية تباينا يعتمد على الوقت في امتصاص الخلايا المختلفة للمركبات الكهربائية المستقلة ، مما يمكن أن يساعد في تأكيد الولادة الناجحة للمركبات الكهربائية في الحبل الشوكي.

بعد عزل أجهزة SEVs عن الوسائط المكيفة RAW 264.7 عبر الطرد المركزي ، تم استخدام NTA لتحديد تركيز وحجم أجهزة التلفاز المنقى. وكان متوسط حجم الجسيمات الخام 264.7 المشتقة 140 نانومتر، وكان حجم الجسيمات الذروة 121.8 نانومتر، مما يؤكد أن معظم الجسيمات التي يمكن اكتشافها في قياس تشتت الضوء تقع ضمن نطاق حجم exosom...

Watch this Scientific Journal Video about Uptake of Fluorescent Labeled Small Extracellular Vesicles In Vitro and in Spinal Cord at JoVE.com

Uptake of Fluorescent Labeled Small Extracellular Vesicles In Vitro and in Spinal Cord

نحن نصف بروتوكول لتسمية الحويصلات الصغيرة المشتقة من الضامة خارج الخلية مع أصباغ PKH ومراقبة امتصاصها في المختبر وفي الحبل الشوكي بعد الولادة داخل العين.

امتصاص الفلورسنت المسمى Vesicles صغيرة خارج الخلية في المختبر وفي الحبل الشوكي

Small extracellular vesicles (sEVs) are 50-150 nm vesicles secreted by all cells and present in bodily fluids. sEVs transfer biomolecules such as RNA, ...

تصور امتصاص الحويصلات الصغيرة خارج الخلية، والمعروفة أيضا باسم sEVs، من قبل خلايا مختلفة في الحبل الشوكي، يمكن أن تؤكد نجاح تسليم SEVs. وهذا يتيح كل من الدراسات الميكانيكية والعلاجية من sEVs تدار intrathecally من مصادر مختلفة في نماذج roden. يمكن استخدام هذا البروتوكول لتصور امتصاص الخلايا في الحبل الشوكي الخفيف ، ويمكن أن يساعد في تقييم دور المركبات ذاتية الدفع وجزيئات شحنها في اضطرابات العمود الفقري والألم والالتهاب.هذا الإجراء سوف يظهر من قبلي، جنبا إلى جنب مع شوان لوه وهو جين تشوتشنغ لين، وهما طالبان دراسات عليا في مختبر الدكتورة سينا أجيت. تبدأ بوضع 18 ملليمتر غطاء زلات في لوحة بئر 12، ثم لوحة العصبية-2a الخلايا في كل بئر مع ما مجموعه 1 ملليلتر من DMEM كاملة تحتوي على 10٪ FBS و 1٪ القلم العقدية. عندما بلغ عدد الخلايا الطلاقة 80 إلى 90٪ تغيير المتوسطة إلى DMEM exosome المتوسط المنضب في كل بئر إضافة واحدة، 5 أو 10 ميكروغرام من sEVs المسمى.لمدة ساعة و4 و24 ساعة. للجرعة والوقت تعتمد امتصاص لبقية الآبار في حجم متساو من السيطرة على صبغ. جمع أدمغة الجراء بعد الولادة في 60 ملليمتر، طبق بيتري التي تحتوي على الجليد الباردة هانكس متوازنة محلول الملح تكملها مع 10 hepes ملليمولار، تشريح كل من الفصوص القشرية وإزالة السحايا.ثم فرم الأنسجة مع شفرة معقمة. نقل الأنسجة إلى أنبوب مخروطي 15 ملليلتر تحتوي على بيبان أو deoxyribonucleus عازلة واحدة الفصام واحتضان لمدة 20 دقيقة في 37 درجة مئوية، يحوم الأنبوب كل 5 دقائق، يستنشق supernatant وإضافة 5 ملليلتر من DMEM كاملة إلى الأنبوب. لتثبيط نشاط الإنزيم، حاول تقييم بعناية لتفكيك الأنسجة مع ماصة مصلية زجاجية 5 ملليلتر، وماصة مرعى مصقولة باللهب.تمرير تعليق الخلية من خلال مصفاة خلية 40 ميكرومتر، ومن ثم الطرد المركزي الخلايا في 250 مرة G لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية، يستنشق المتوسطة ونرى الخلايا في 10 ملليلتر من DMEM كاملة في قارورة 75 سم مربع. بعد 4 ساعات من الطلاء، استبدل الفائقة والمتوسطة مع 15 ملليلتر من المتوسط DMEM الطازجة. بعد 14 يوما في المختبر لفصل microglia وoligodendrocytes، نقل القارورة إلى شاكر المدارية في 320 دورة في الدقيقة لمدة 6 ساعات.استخدم 5 ملليلترات من إنزيم فص الخلايا لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية. لtripsinize، والخلايا الفلكية المتبقية، لتثبيط العمل الأنزيمي، إضافة 5 ملليلتر من DMEM كاملة ومن ثم بيليه الخلايا في 250 مرة G لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية. Resuspend الخلايا في DMEM كاملة ونرى الخلايا على 12 ملليمتر رقم 1.5 زلات الغطاء في لوحة بئر 24.باستخدام برنامج تلفزيوني شطف الخلايا 3 مرات ومن ثم إصلاحها مع 4٪ فورمالديهايد السلطة أو PFA في برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. غسل الخلايا الثابتة 3 مرات لمدة 5 دقائق مع برنامج تلفزيوني و permeabilize لهم باستخدام 0.1٪ تريتون X 100 في برنامج تلفزيوني لمدة 10 إلى 15 دقيقة. ثم كرر يغسل مع برنامج تلفزيوني.استخدام مصل الماعز 5٪ العادي أو NGS في برنامج تلفزيوني لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة لمنع الخلايا، واحتضان الخلايا العصبية-2a مع خريطة الأجسام المضادة في اتجاهين والخلايا الفلكية الأولية مع الأجسام المضادة GFAP بنسبة 1 إلى 500 في الطازجة 5٪ NGS أو PBS بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية مع اهتزاز لطيف. بعد غسل الخلايا 3 مرات في برنامج تلفزيوني، إضافة الأجسام المضادة الثانوية المترافقة الفلوروفوري في 5٪ NGS. حضانة لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة المحمية من الضوء على الروك.كرر الغسيل مع برنامج تلفزيوني واحتضان الخلية مع 1 ميكروغرام لكل ملليلتر من DAPI لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. مرة أخرى، غسل الخلايا 3 مرات مع برنامج تلفزيوني. باستخدام وسيط تصاعد المضادة تتلاشى، جبل الغطاء زلات على عدد 1 الشرائح، والسماح لهم الجافة بين عشية وضحاها في الظلام وتخزين الشرائح الزجاجية المعدة في 4 درجات مئوية حتى التصوير على المجهر confocal.تشريح الحبل الشوكي وإصلاحه في 4٪ PFA في برنامج تلفزيوني في 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة. قبل حماية الأنسجة في 30٪ السكروز في برنامج تلفزيوني في 4 درجات مئوية لمدة 24 ساعة أو حتى تغرق الأنسجة ومن ثم تخزين الأنسجة في 4 درجات مئوية حتى الكيمياء المناعية، imbed الحبل الشوكي L4 L5 في مجمع أكتوبر، ثم تجميده على الجليد الجاف حتى يتم ترسيخه تماما. استخدام cryostat لقسم الأنسجة في 30 ميكرومتر وجمع المقاطع في لوحة بئر 24 التي تحتوي على برنامج تلفزيوني.غسل المقاطع 3 مرات لمدة 5 دقائق مع كل 0.3٪ تريتون في برنامج تلفزيوني، منع المواقع ملزمة غير محددة باستخدام 5٪ MGS في 0.3٪ تريتون PBS لمدة 2 ساعة في درجة حرارة الغرفة. احتضان الأقسام بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية على شاكر. غسل المقاطع 3 مرات لمدة 5 دقائق مع 0.3٪ تريتون في برنامج تلفزيوني.ثم أضف التركيز المناسب للأجسام المضادة الثانوية. وفقا لمخطوطة النص، احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعتين، وغسل المقاطع باستخدام برنامج تلفزيوني فقط واحتضانها في 1 ميكروغرام لكل ملليلتر من DAPI لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. ثم كرر يغسل برنامج تلفزيوني تحت المجهر الخفيف، جبل المقاطع على شريحة لاصقة واضحة مع فرشاة الطلاء غرامة.الرطب زلة الغطاء مع تصاعد المتوسطة وعلاج بين عشية وضحاها في الظلام في درجة حرارة الغرفة، والحصول على الصور تحت المجهر confocal مع الليزر كل منهما، ومتوسط حجم متوسط RA 2 6 4 0.7 sEVs المستمدة كان 140 نانومتر وكان حجم الجسيمات الذروة 121.8 نانومتر. مع الجسيمات الأكثر قابلية للكشف التي تقع ضمن نطاق حجم exosomes أو sEVS. في 50 إلى 150 نانومتر، النشاف الغربي من SEVs، خلية Lysate و exodepleted وسائل الإعلام، أظهرت أن عينات البروتين المشتقة SEV تحتوي على البروتينات علامة SEV أليكس CD81 و GAPDH.وقد تم إثراء lysate الخلية مع reticulum endoplasmic، والبروتين المقيم كالنكسين وبالتالي كالنكسين بمثابة علامة سلبية للتلوث الخلوي كما كان غائبا في أجهزة الدفع الرباعي. ولوحظ أن امتصاص المركبات الكهربائية ذاتية الدفع يحدث في ساعة واحدة، وبالنسبة لمركبات SEVs 1 و5 و10 ميكروغرام، يمكن اكتشاف مضان ما بعد الحضانة في 4 ساعات، لمدة 4 و5 و10 ميكروغرام من أجهزة التلفاز الخاصة. تم فحص امتصاص PKH 26 sEVs المسمى من قبل الخلايا الفلكية الأولية وتم تناول أقصى مضان من امتصاص SEVS في الخلايا الفلكية القشرية الأولية في 24 ساعة تم تناول SEVs المسمى PKH26 ولوحظ الحد الأقصى للفلورة في 6 ساعات ، بعد الحقن في الخلايا العصبية والخلايا الفلكية الدقيقة.إدراج الضوابط، sEVs غير المسمى، والسيطرة على صبغ خلق رمز للرياح إشارات إيجابية إيجابية الأخيرة بسبب وضع علامات محددة الآن أوبري الرقص من السواحل التصحيح صبغ غير منضم. ويمكن تأكيد امتصاص المركبات الذاتية من خلال التحقيق في نقل البضائع الجزيئية الحيوية إلى الوصفات والخلايا والأنسجة وتحديد التغيرات في مستويات التعبير عن الجزيئات الحيوية أو الجينات المستهدفة. ويمكن أيضا إجراء دراسات السلوك، للتحقيق في التأثير الوظيفي لتسليم SEV.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Uptake of Fluorescent Labeled Small Extracellular Vesicles In Vitro and in Spinal Cord

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication

الحبل الشوكي الكهربية ثانيا : خارج الخلية التصنيع الكهربائي شفط

Development of neural circuitries and locomotion can be studied using neonatal rodent spinal cord central pattern generator (CPG) behavior. We demonstrate ...

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

الوحشي قرع السائل : نموذج لإصابات في الدماغ لدى الفئران

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

الفلورسنت وصفها الوراء يسمح لخارج الخلية المستهدفة واحدة وحدة التسجيل من الخلايا العصبية التي تم تحديدها<em&gt; في الجسم الحي</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Spinal Cord Transection in the Larval Zebrafish

Transection الحبل الشوكي في اليرقات الزرد

Mammals fail in sensory and motor recovery following spinal cord injury due to lack of axonal regrowth below the level of injury as well as an inability ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

ل<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; يسببها الليزر اصابات الحبل الشوكي نموذج لتقييم آليات محور عصبي تنكس في الوقت الحقيقي

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Two-photon Imaging of Cellular Dynamics in the Mouse Spinal Cord

التصوير ثنائي الفوتون الخلوية ديناميكية في الحبل الشوكي ماوس

Two-photon (2P) microscopy is utilized to reveal cellular dynamics and interactions deep within living, intact tissues. Here, we present a method for ...

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

التصوير النشاط العصبي في القشرة الأولية Somatosensory باستخدام Thy1-GCaMP6s الفئران المحورة وراثيا

The mammalian brain exhibits marked symmetry across the sagittal plane. However, detailed description of neural dynamics in symmetric brain regions in ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

استئصال الصفيحة الفقرية وغرس نافذه الحبل الشوكي في الماوس

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Preparation of Rhythmically-active In Vitro Neonatal Rodent Brainstem-spinal Cord and Thin Slice

إعداد نشط إيقاعي في الحبل الشوكي الدماغ القوارض الولدان المختبر وشريحة رقيقة

Mammalian inspiratory rhythm is generated from a neuronal network in a region of the medulla called the preB&#246;tzinger complex (pBC), which produces a ...