Name: modeling stroke in mice: transient middle cerebral artery occlusion via the external carotid artery
Uploaded: 2021-05-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery at JoVE.com

Vi takker alle vores samarbejdspartnere i ImmunoStroke Consortia (FOR 2879, Fra immunceller til slagtilfælde opsving) for forslag og diskussioner. Dette arbejde blev finansieret af Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, German Research Foundation) under Tysklands Excellence Strategy inden for rammerne af München Cluster for Systems Neurology (EXC 2145 SyNergy - ID 390857198) og under tilskuddene LI-2534/6-1, LI-2534/7-1 og LL-112/1-1.

De forsøg, der blev rapporteret i denne video, blev udført i kølvandet på de nationale retningslinjer for brug af forsøgsdyr, og protokollerne blev godkendt af de tyske regeringsudvalg (Regierung von Oberbayern, München, Tyskland). Ti uger gamle han-mus til C57Bl/6J blev anvendt og anbragt under kontrolleret temperatur (22 ± 2 °C), med en 12 timers lys mørk cyklusperiode og adgang til pelleteret mad og vand ad libitum.
1. Udarbejdelse af materiale og instrumenter
<ol><li>Ti...

<ol>
	<li>Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke.">Stroke.</a> Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).</li><li>O'Collins, V. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=1,026+experimental+treatments+in+acute+stroke.">1,026 experimental treatments in acute stroke.</a> Annals of Neurology. 59 (3), 467-477 (2006).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> Journal of Neuroscience Methods. 139 (2), 203-207 (2004).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+rat+model+of+thrombotic+focal+cerebral+ischemia.">A new rat model of thrombotic focal cerebral ischemia.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 17 (2), 123-135 (1997).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2 (3), 396-409 (2005).</li><li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (47), e2423 (2011).</li><li>Dirnagl, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+concerted+appeal+for+international+cooperation+in+preclinical+stroke+research.">A concerted appeal for international cooperation in preclinical stroke research.</a> Stroke. 44 (6), 1754-1760 (2013).</li><li>McNutt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Journals+unite+for+reproducibility.">Journals unite for reproducibility.</a> Science. 346 (6210), 679 (2014).</li><li>Llovera, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+a+preclinical+randomized+controlled+multicenter+trial+(pRCT):+Anti-CD49d+treatment+for+acute+brain+ischemia.">Results of a preclinical randomized controlled multicenter trial (pRCT): Anti-CD49d treatment for acute brain ischemia.</a> Science Translational Medicine. 7 (299), (2015).</li><li>Llovera, G., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+next+step+in+translational+research:+lessons+learned+from+the+first+preclinical+randomized+controlled+trial.">The next step in translational research: lessons learned from the first preclinical randomized controlled trial.</a> Journal of Neurochemistry. 139, 271-279 (2016).</li><li>Swanson, G. M., Satariano, E. R., Satariano, W. A., Threatt, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Racial+differences+in+the+early+detection+of+breast+cancer+in+metropolitan+Detroit,+1978+to+1987.">Racial differences in the early detection of breast cancer in metropolitan Detroit, 1978 to 1987.</a> Cancer. 66 (6), 1297-1301 (1990).</li><li>Lourbopoulos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inadequate+food+and+water+intake+determine+mortality+following+stroke+in+mice.">Inadequate food and water intake determine mortality following stroke in mice.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 37 (6), 2084-2097 (2017).</li><li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse.">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurological Research. 19 (6), 641-648 (1997).</li><li>Jackman, K., Kunz, A., Iadecola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+focal+cerebral+ischemia+in+vivo.">Modeling focal cerebral ischemia in vivo.</a> Methods in Molecular Biology. 793, 195-209 (2011).</li><li>Kitano, H., Kirsch, J. R., Hurn, P. D., Murphy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalational+anesthetics+as+neuroprotectants+or+chemical+preconditioning+agents+in+ischemic+brain.">Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 27 (6), 1108-1128 (2007).</li><li>Rousselet, E., Kriz, J., Seidah, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+intraluminal+MCAO:+cerebral+infarct+evaluation+by+cresyl+violet+staining.">Mouse model of intraluminal MCAO: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (69), e4038 (2012).</li><li>Rha, J. H., Saver, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+recanalization+on+ischemic+stroke+outcome:+a+meta-analysis.">The impact of recanalization on ischemic stroke outcome: a meta-analysis.</a> Stroke. 38 (3), 967-973 (2007).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+filament+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+rats:+does+the+reperfusion+method+matter+24+hours+after+perfusion.">Transient filament occlusion of the middle cerebral artery in rats: does the reperfusion method matter 24 hours after perfusion.</a> BMC Neuroscience. 13, 154 (2012).</li><li>Sommer, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+stroke:+experimental+models+and+reality.">Ischemic stroke: experimental models and reality.</a> Acta Neuropathologica. 133 (2), 245-261 (2017).</li><li>Jones, B. J., Roberts, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rotarod+suitable+for+quantitative+measurements+of+motor+incoordination+in+naive+mice.">A rotarod suitable for quantitative measurements of motor incoordination in naive mice.</a> Naunyn-Schmiedebergs Archiv f&#252;r Experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 259 (2), 211 (1968).</li><li>Bouet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adhesive+removal+test:+a+sensitive+method+to+assess+sensorimotor+deficits+in+mice.">The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice.</a> Nature Protocols. 4 (10), 1560-1564 (2009).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+test+for+detecting+long-term+sensorimotor+dysfunction+in+the+mouse+after+focal+cerebral+ischemia.">A test for detecting long-term sensorimotor dysfunction in the mouse after focal cerebral ischemia.</a> Journal of Neuroscience Methods. 117 (2), 207-214 (2002).</li><li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke,+cortical+ablation,+parkinsonism+and+spinal+cord+injury.">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39 (5), 777-787 (2000).</li><li>Roth, S., Yang, J., Cramer, J., Malik, R., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+cytokine-induced+sickness+behavior+after+ischemic+stroke+by+an+optimized+behavioral+assessment+battery.">Detection of cytokine-induced sickness behavior after ischemic stroke by an optimized behavioral assessment battery.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 91, 668-672 (2021).</li></ol>

Den nuværende protokol beskriver en eksperimentel slagtilfælde model baseret på konsensus aftale af en tysk multicenter forskningskonsortium ("ImmunoStroke") at etablere en standardiseret forbigående MCAo model. Den forbigående MCAo-model, der er etableret ved at indføre en siliciumbelagt glødetråd gennem Revisionsretten til MCA's oprindelse, er en af de mest anvendte slagtilfældemodeller for at opnå arteriel reperfusion efter en afgrænset okklusionsperiode. Derfor kan denne procedure betragtes som en translat...

Slagtilfælde er en af de mest almindelige årsager til død og handicap på verdensplan. Selv om der hovedsageligt er to forskellige former for slagtilfælde, iskæmisk og hæmoragisk, 80-85% af alle slagtilfælde tilfælde er iskæmisk1. I øjeblikket er kun to behandlinger tilgængelige for patienter med iskæmisk slagtilfælde: farmakologisk behandling med rekombinant væv plasminogen aktivator (rtPA) eller mekanisk trombektomi. Men på grund af den smalle terapeutiske tidsvindue og flere udelukkelseskriterier kan kun et udvalgt antal patienter drage fordel af disse specifikke behandlingsmuligheder. I løbet af de sidste to årtier har præklinisk og translationel slagtilfældeforskning fokuseret på studiet af neuroprotektive tilgange. Men, alle forbindelser, der nåede kliniske forsøg har hidtil vist nogen forbedringer for patienten2.
Da in vitro-modeller ikke nøjagtigt kan reproducere alle hjerneinteraktioner og patofysiologiske mekanismer af slagtilfælde, er dyremodeller afgørende for præklinisk slagtilfældeforskning. Det er imidlertid ikke muligt at efterligne alle aspekter af human iskæmisk slagtilfælde i en enkelt dyremodel, da iskæmisk slagtilfælde er en meget kompleks og heterogen sygdom. Af denne grund er der udviklet forskellige iskæmiske slagtilfældemodeller over tid i forskellige arter. Fotothrombose af cerebral arterioles eller permanent distal okklusion af den midterste cerebral arterie (MCA) er almindeligt anvendte modeller, der fremkalder små og lokalt definerede læsioner i neocortex3,4. Udover dem, den mest almindeligt anvendte slagtilfælde model er sandsynligvis den såkaldte "glødetråd model", hvor en forbigående okklusion af MCA er opnået. Denne model består af en forbigående introduktion af en sutur glødetråd til oprindelsen af MCA, hvilket fører til en brat reduktion af cerebral blodgennemstrømning og den efterfølgende store infarkt af subkortikale og kortikale hjerneområder5. Selvom de fleste slagtilfælde modeller efterligneR MCA okklusioner 6, "glødetråd model" giver mulighed for præcis afgrænsning af den iskæmiske tid. Reperfusion ved fjernelse af glødetråd efterligner det menneskelige kliniske scenario med cerebral blodgennemstrømning restaurering efter spontane eller terapeutiske (rtPA eller mekanisk trombektomi) blodprop lysis. Til dato er forskellige ændringer af denne "glødetrådsmodel" blevet beskrevet. I den mest almindelige tilgang, først beskrevet af Longa et al. i 19895indføres en siliciumbelagt glødetråd via den fælles halspulsåre (CCA) til oprindelsen af MCA7. Selv om det er en meget anvendt tilgang, denne model tillader ikke fuldstændig restaurering af blodgennemstrømningen under reperfusion, som CCA er permanent ligated efter fjernelse af glødetråd.
I løbet af det seneste årti har et stigende antal forskergrupper været interesseret i at modellere slagtilfælde hos mus ved hjælp af denne "glødetrådsmodel." Imidlertid er den betydelige variation i denne model og den manglende standardisering af procedurerne nogle af årsagerne til den høje variation og dårlige reproducerbarhed af de eksperimentelle resultater og videnskabelige resultater, der hidtil er rapporteret2,8. En potentiel årsag til den nuværende "replikationskrise", der henviser til den lave reproducerbarhed blandt forskningslaboratorier, er de ikke-sammenlignelige slaginfarktmængder mellem forskningsgrupper, der anvender den samme eksperimentelle metode9. Faktisk, efter at have gennemført den første prækliniske randomiserede kontrollerede multicenterforsøgsundersøgelse10, var vi i stand til at bekræfte, at manglen på tilstrækkelig standardisering af denne eksperimentelle slagtilfældemodel og de efterfølgende resultatparametre var hovedårsagerne til svigt af reproducerbarhed i prækliniske undersøgelser mellem uafhængige laboratorier11 . Disse drastiske forskelle i de resulterende infarktstørrelser udgør på trods af brug af den samme slagmodel med rette ikke kun en trussel mod bekræftende forskning, men også for videnskabelige samarbejder på grund af manglen på robuste og reproducerbare modeller.
I lyset af disse udfordringer havde vi til formål at udvikle og detaljeret beskrive proceduren for en standardiseret forbigående MCAo-model, som anvendes til forskningsindsatsen i forskningskonsortiet "ImmunoStroke" (https://immunostroke.de/). Dette konsortium har til formål at forstå de hjerneimmune interaktioner, der ligger til grund for de mekanistiske principper for slagtilfældegendannelse. Derudover præsenteres histologiske og relaterede funktionelle metoder til analyse af slagtilfælde. Alle metoder er baseret på etablerede standarddriftsprocedurer, der anvendes i alle forskningslaboratorier i ImmunoStroke konsortiet.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>45&#176; ramp</td>
			<td>H&#38;S Kunststofftechnik</td>
			<td></td>
			<td>height: 18 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5/0 threat</td>
			<td>Pearsalls</td>
			<td>10C103000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Syringe</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>695092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia system for isoflurane</td>
			<td>Drager</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen pomade</td>
			<td>Bayer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl/6J mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp</td>
			<td>FST</td>
			<td>12500-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotons</td>
			<td>NOBA Verbondmitel Danz</td>
			<td>974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cresyl violet</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific CryoStarNX70</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>521005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 96%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>522078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 99%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>ETO-5000-99-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filaments</td>
			<td>Doccol</td>
			<td>602112PK5Re</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine 45 angled forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11252-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14094-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glue</td>
			<td>Orechseln</td>
			<td>BSI-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hardener Glue</td>
			<td>Drechseln &#38; Mehr</td>
			<td>BSI-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating blanket</td>
			<td>FHC DC Temperature Controller</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Abbot</td>
			<td>B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopentane</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>59070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Inresa Arzneimittel GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Doppler</td>
			<td>Perimed</td>
			<td>PF 5010 LDPM, Periflux System 5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Doppler probe</td>
			<td>Perimed</td>
			<td>91-00123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline pH: 7.4</td>
			<td>Apotheke Innestadt Uni Munchen</td>
			<td>P32799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recovery chamber</td>
			<td>Mediheat</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roti-Histokit mounting medium</td>
			<td>Roth</td>
			<td>6638.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Braun</td>
			<td>131321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>02.001.30.011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon-coated filaments</td>
			<td>Doccol</td>
			<td>602112PK5Re</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicropscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylacine</td>
			<td>Albrecht</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling stroke in mice: transient middle cerebral artery occlusion via the external carotid artery

Slagtilfælde er den tredje mest almindelige årsag til dødelighed og den hyppigste årsag til erhvervet voksen handicap i de udviklede lande. Til dato, terapeutiske muligheder er begrænset til en lille andel af slagtilfælde patienter inden for de første timer efter slagtilfælde. Nye terapeutiske strategier er ved at blive grundigt undersøgt, især for at forlænge den terapeutiske tidsvindue. Disse nuværende undersøgelser omfatter studiet af vigtige patofysiologiske veje efter slagtilfælde, såsom post-slagtilfælde betændelse, angiogenese, neuronal plasticitet, og regenerering. I løbet af det sidste årti har der været stigende bekymring over den ringe reproducerbarhed af eksperimentelle resultater og videnskabelige resultater blandt uafhængige forskningsgrupper. For at overvinde den såkaldte "replikationskrise" er der et presserende behov for detaljerede standardiserede modeller for alle procedurer. Som en indsats inden for "ImmunoStroke" forskningskonsortium (https://immunostroke.de/), foreslås en standardiseret musemodel af forbigående mellem cerebral arterie okklusion (MCAo). Denne model gør det muligt fuldstændig restaurering af blodgennemstrømningen ved fjernelse af glødetråden, der simulerer den terapeutiske eller spontane blodprop lysis, der forekommer i en stor del af menneskelige slagtilfælde. Den kirurgiske procedure for denne "glødetråd" slagtilfælde model og værktøjer til sin funktionelle analyse er påvist i den ledsagende video.

Den model, der er beskrevet her, er en ændring af den almindeligt anvendte "glødetråd" slagtilfælde model, som består i at indføre en silicium-belagt glødetråd gennem Revisionsretten til forbigående blokere oprindelsen af MCA (Figur 1). Efter fjernelse af glødetråden ophører kun blodgennemstrømningen i Revisionsretten permanent, hvilket muliggør fuldstændig recanalisering af CCA og ICA. Dette giver mulighed for en passende reperfusion af hjernen (Figur 2</...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery at JoVE.com

Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery

Forskellige modeller af midten cerebral arterie okklusion (MCAo) anvendes i eksperimentel slagtilfælde forskning. Her beskrives en eksperimentel slagtilfældemodel af forbigående MCAo via den eksterne halspulsåre (ECA), som har til formål at efterligne human slagtilfælde, hvor cerebrovaskulær trombbus fjernes på grund af spontan blodprop lysis eller terapi.

Modellering Slagtilfælde i mus: Forbigående Middle Cerebral Arterie Okklusion via den eksterne halspulsåre

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options ...

I glødetråd model beskrevet her, fuldstændig restaurering af blodgennemstrømningen, og det er optagelse, er krav til at sikre en producible tilstrømning blandt mus, især i translationelle slagtilfælde undersøgelser. Denne model har to hovedfordele sammenlignet med andre tidligere beskrevne stregmodeller. Ingen kraniotomi er påkrævet, og en fuldstændig re-perfusion af blodkarret er opnået.Glødetrådsmodellen er et komplekst kirurgisk indgreb, der involverer procesmanipulation af forskellige arterier. Visualiseringen og forklaringen af alle disse er små, men vigtige trin, kan fremskynde læringsperioden for neurokirurger. Tilslut varmetæppet for at opretholde temperaturen i operationsområdet og musens kropstemperatur under anæstesi ved 37 grader Celsius.Forbered autoklave saks og sammenkrøkker, 70% ethanol opløsning og dexpanthenol øje salve, og holde flere stykker bomuld og Fem O belagt flettet polyester sutur, klar til brug. Forbered en 0,9% saltvandsopløsning i en 1 milliliter sprøjte uden en nål for at holde snitstedet hydreret. Forbered en holder til laser Doppler sonden ved at skære spidsen af en 10 mikroliter pipette spids.Når musen er helt bedøvet, skal du placere den i en udsat position i operationsområdet. Sæt forsigtigt rektalsonden i for at overvåge temperaturen under de kirurgiske procedurer. Efter desinfektion af det kirurgiske sted, skæres denne hovedbund mellem venstre øre og øjet for at udsætte kraniebenet.Derefter skæres og trækker den tidsmæssige muskel tilbage for at visualisere de mange cerebrale arterier eller MCA under kraniet. Fix den ydre del af spidsen holder laser Doppler sonde eller fiber på toppen af venstre MCA med lim og lukke huden, så huden er limet så godt. Påfør to til tre dråber hærde lim for at fremskynde processen.Sørg for, at laseren Doppler fiber ikke er limet og kan nemt fjernes fra spidsen indehaveren til enhver tid. Drej musen til liggende position, derefter sætte snuden i anæstesi kegle og fastsætte poterne med tape. Desinficer huden og håret omkring brystet og lav et to centimeter langt midterlinje snit i nakken.Brug kraften til at trække huden submandibulær kirtel og sternomastoid muskel fra hinanden. Brug retraktorer til at eksponere det kirurgiske felt og finde den venstre fælles halspulsåre eller CCA. Dissekere CCA fri for bindevæv og omgivende nerver uden at skade vagalnerven og udføre en forbigående ligation før bifurcation.Dissekere den ydre halspulsåren eller ECA og binde en permanent knude på den mest distale synlige del. Placer en anden sutur under REVISIONSRETTEN og tæt på bifurcation, og forbered derefter en løs knude, der skal bruges senere. Dissekere den interne halspulsåren eller ICA og placere en mikrovaskulær klip på det omkring fem millimeter over bifurcation.Sørg for ikke at beskadige vagalnerven. Skær derefter et lille hul i Revisionsretten mellem de stramme og løse ligationer, så du ikke skærer hele Revisionsretten. Indfør glødetråden, og fremrykke den mod CCA.Stram den løse ligation i Revisionsretten omkring lumen for et øjeblik at sikre glødetråden i denne position. Fjernelse af det mikrovaskulære klip og forhindre blødning. Når du har fjernet det mikrovaskulære klip, skal glødetråden indsættes gennem ICA'en, indtil MCA'ens oprindelse er nået.Fastgør glødetråden i denne position ved yderligere at stramme knuden omkring Revisionsretten. Optag laser Doppler-værdier før og efter indsættelse af glødetråd. Fjern retraktoren og flyt sternomastoid muskel i den submandibulære kirtel, før suturing såret.Fjern laser Doppler sonden og placere dyret i et opsving kammer på 37 grader Celsius for hvad en time. Placer musen i en udsat position i operationsområdet med snuden i anæstesimasken, og fastgør derefter dyrets poter med tape. Sæt laser Doppler sonden ind i sondeholderen.Fjern såret sutur og bruge kraften til at trække huden, den submandibulære kirtel og sternomastoid muskel fra hinanden. Brug retraktorer til at eksponere det kirurgiske felt. Løsn ECA suturen, der strammer glødetråden og træk forsigtigt glødetråden.Undgå at beskadige glødetrådens silikonegummibelægning under fjernelsen. Optag laser Doppler værdier før og efter glødetråd fjernelse. Tæt binde ECA sutur og bekræfte stigningen i cerebral blodgennemstrømning i laser Doppler enhed.Åbn den forbigående ligation før bifurcation fra CCA for at genoprette den komplette blodgennemstrømning. Fjern retraktoren og flyt sternomastoid muskel i den submandibulære kirtel, før suturing såret. Derefter placere dyret i et genopretningskammer ved 37 grader Celsius i en time for at komme sig efter anæstesi.Efter genopretning returnere musene til deres bure i et temperaturstyret rum og tage sig af dyrene ved at tilføje våde fødevarer pellets og hydrogel i små Petri retter på buret gulvet og injicere analgesi hver 12 timer indtil dag tre efter operationen. Når blodgennemstrømningen i CCA er genoprettet efter fjernelse af glødetråden, opstår fuldstændig re-perfusion af hjernen, hvilket svarer til den situation, der observeres efter vellykket mekanisk trombektomi hos menneskelige patienter. Stroke dyr præsenteret en betydelig ændring i komposit og fokal neuro score, men ikke i den generelle neuro score i forhold til falske dyr.Infarct volumen hentet blev også udført ved hjælp af cresol violet farvning af koronar seriel hjerne sektioner 24 timer efter slagtilfælde induktion. Læsionsområdet omfatter somatosensoriske og motoriske cortex samt sub kortikale strukturer, såsom striatum. Den infarkt volumen gennemsnit var 61 til 62 millimeter firkantet, der repræsenterer 48% af den påtjente hjernehalvdel.Det er vigtigt at udføre en passende dissektion af CCA, ECA og RCA uden at forårsage skade på det tilstødende væv, især vagusnerven, at have en god visualisering af alle strukturer og at være i stand til at indsætte glødetråden og okkludere MCA-oprindelsen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Lateral Kronisk Kranie Window Forberedelse Aktiverer<em&gt; In vivo</em&gt; Observation Efter Distal mellem-cerebral arterieokklusion i mus

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

A Model for Encephalomyosynangiosis Treatment after Middle Cerebral Artery Occlusion-Induced Stroke in Mice

En model for encephalomyosynangiose behandling efter mellemcerebral arterie okklusionsinduceret slagtilfælde hos mus

There is no effective treatment available for most patients suffering with ischemic stroke, making development of novel therapeutics imperative. The ...

Etablering af en transkraniel mellemhjernearterie okklusionsmusmodel

A Modified Transcranial Middle Cerebral Artery Occlusion Model to Study Stroke Outcomes in Aged Mice

Forfatter Spotlight: Innovative teknikker og fremtidige retninger inden for slagtilfælde 

En modificeret transkraniel midterste cerebral arterieokklusionsmodel til undersøgelse af slagtilfælderesultater hos ældre mus

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. ...

En model af forbigående cerebral iskæmi ved okklusion af den midterste cerebrale arterie

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Stroke

Forfatter Spotlight: Vurdering af iskæmisk slagtilfælde gennem okklusionsmodel for mellemhjernearterie 

Transient midterste cerebral arterieokklusionsmodel af slagtilfælde

Stroke stands as a major cause of death or chronic disability globally. Nevertheless, existing optimal treatments are limited to reperfusion therapies ...

Okklusion af distal mellemarterie for at udvikle en iskæmisk slagmusemodel

Induction of Acute Ischemic Stroke in Mice Using the Distal Middle Artery Occlusion Technique

Forfatter Spotlight: Etablering af en pålidelig distal MCA-okklusionsmodel hos mus til slagtilfældeforskning

Induktion af akut iskæmisk slagtilfælde hos mus ved hjælp af den distale mellemarterie okklusionsteknik

Ischemic stroke remains the predominant cause of mortality and functional impairment among the adult populations globally. Only a minority of ischemic ...