Name: modeling stroke in mice: transient middle cerebral artery occlusion via the external carotid artery
Uploaded: 2021-05-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery at JoVE.com

We danken al onze samenwerkingspartners van de ImmunoStroke Consortia (FOR 2879, From immune cells to stroke recovery) voor suggesties en discussies. Dit werk werd gefinancierd door de Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) in het kader van de Duitse excellentiestrategie in het kader van de Münchense cluster voor systeemneurologie (EXC 2145 SyNergy - ID 390857198) en onder de subsidies LI-2534/6-1, LI-2534/7-1 en LL-112/1-1.

De experimenten die in deze video worden gerapporteerd, werden uitgevoerd volgens de nationale richtlijnen voor het gebruik van proefdieren en de protocollen werden goedgekeurd door de Duitse regeringscommissies (Regierung von Oberbayern, München, Duitsland). Tien weken oude mannelijke C57Bl/6J-muizen werden gebruikt en gehuisvest onder gecontroleerde temperatuur (22 ± 2 °C), met een licht-donkercyclusperiode van 12 uur en toegang tot gepelletiseerd voedsel en water ad libitum.
1. Vo...

<ol>
	<li>Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke.">Stroke.</a> Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).</li><li>O'Collins, V. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=1,026+experimental+treatments+in+acute+stroke.">1,026 experimental treatments in acute stroke.</a> Annals of Neurology. 59 (3), 467-477 (2006).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> Journal of Neuroscience Methods. 139 (2), 203-207 (2004).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+rat+model+of+thrombotic+focal+cerebral+ischemia.">A new rat model of thrombotic focal cerebral ischemia.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 17 (2), 123-135 (1997).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2 (3), 396-409 (2005).</li><li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (47), e2423 (2011).</li><li>Dirnagl, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+concerted+appeal+for+international+cooperation+in+preclinical+stroke+research.">A concerted appeal for international cooperation in preclinical stroke research.</a> Stroke. 44 (6), 1754-1760 (2013).</li><li>McNutt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Journals+unite+for+reproducibility.">Journals unite for reproducibility.</a> Science. 346 (6210), 679 (2014).</li><li>Llovera, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+a+preclinical+randomized+controlled+multicenter+trial+(pRCT):+Anti-CD49d+treatment+for+acute+brain+ischemia.">Results of a preclinical randomized controlled multicenter trial (pRCT): Anti-CD49d treatment for acute brain ischemia.</a> Science Translational Medicine. 7 (299), (2015).</li><li>Llovera, G., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+next+step+in+translational+research:+lessons+learned+from+the+first+preclinical+randomized+controlled+trial.">The next step in translational research: lessons learned from the first preclinical randomized controlled trial.</a> Journal of Neurochemistry. 139, 271-279 (2016).</li><li>Swanson, G. M., Satariano, E. R., Satariano, W. A., Threatt, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Racial+differences+in+the+early+detection+of+breast+cancer+in+metropolitan+Detroit,+1978+to+1987.">Racial differences in the early detection of breast cancer in metropolitan Detroit, 1978 to 1987.</a> Cancer. 66 (6), 1297-1301 (1990).</li><li>Lourbopoulos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inadequate+food+and+water+intake+determine+mortality+following+stroke+in+mice.">Inadequate food and water intake determine mortality following stroke in mice.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 37 (6), 2084-2097 (2017).</li><li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse.">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurological Research. 19 (6), 641-648 (1997).</li><li>Jackman, K., Kunz, A., Iadecola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+focal+cerebral+ischemia+in+vivo.">Modeling focal cerebral ischemia in vivo.</a> Methods in Molecular Biology. 793, 195-209 (2011).</li><li>Kitano, H., Kirsch, J. R., Hurn, P. D., Murphy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalational+anesthetics+as+neuroprotectants+or+chemical+preconditioning+agents+in+ischemic+brain.">Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 27 (6), 1108-1128 (2007).</li><li>Rousselet, E., Kriz, J., Seidah, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+intraluminal+MCAO:+cerebral+infarct+evaluation+by+cresyl+violet+staining.">Mouse model of intraluminal MCAO: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (69), e4038 (2012).</li><li>Rha, J. H., Saver, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+recanalization+on+ischemic+stroke+outcome:+a+meta-analysis.">The impact of recanalization on ischemic stroke outcome: a meta-analysis.</a> Stroke. 38 (3), 967-973 (2007).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+filament+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+rats:+does+the+reperfusion+method+matter+24+hours+after+perfusion.">Transient filament occlusion of the middle cerebral artery in rats: does the reperfusion method matter 24 hours after perfusion.</a> BMC Neuroscience. 13, 154 (2012).</li><li>Sommer, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+stroke:+experimental+models+and+reality.">Ischemic stroke: experimental models and reality.</a> Acta Neuropathologica. 133 (2), 245-261 (2017).</li><li>Jones, B. J., Roberts, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rotarod+suitable+for+quantitative+measurements+of+motor+incoordination+in+naive+mice.">A rotarod suitable for quantitative measurements of motor incoordination in naive mice.</a> Naunyn-Schmiedebergs Archiv f&#252;r Experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 259 (2), 211 (1968).</li><li>Bouet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adhesive+removal+test:+a+sensitive+method+to+assess+sensorimotor+deficits+in+mice.">The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice.</a> Nature Protocols. 4 (10), 1560-1564 (2009).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+test+for+detecting+long-term+sensorimotor+dysfunction+in+the+mouse+after+focal+cerebral+ischemia.">A test for detecting long-term sensorimotor dysfunction in the mouse after focal cerebral ischemia.</a> Journal of Neuroscience Methods. 117 (2), 207-214 (2002).</li><li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke,+cortical+ablation,+parkinsonism+and+spinal+cord+injury.">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39 (5), 777-787 (2000).</li><li>Roth, S., Yang, J., Cramer, J., Malik, R., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+cytokine-induced+sickness+behavior+after+ischemic+stroke+by+an+optimized+behavioral+assessment+battery.">Detection of cytokine-induced sickness behavior after ischemic stroke by an optimized behavioral assessment battery.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 91, 668-672 (2021).</li></ol>

Het huidige protocol beschrijft een experimenteel beroertemodel op basis van de consensusovereenkomst van een Duits multicenter onderzoeksconsortium ("ImmunoStroke") om een gestandaardiseerd transiënt MCAo-model vast te stellen. Het transiënte MCAo-model dat tot stand is gebracht door een met silicium gecoat filament via de ECA te introduceren bij de oorsprong van de MCA, is een van de meest gebruikte slagmodellen om arteriële reperfusie te bereiken na een afgebakende occlusieperiode. Daarom kan deze procedure worden ...

Beroerte is wereldwijd een van de meest voorkomende oorzaken van overlijden en invaliditeit. Hoewel er voornamelijk twee verschillende vormen van beroerte zijn, ischemisch en hemorragisch, is 80-85% van alle gevallen van beroerte ischemisch1. Momenteel zijn er slechts twee behandelingen beschikbaar voor patiënten met ischemische beroerte: farmacologische behandeling met recombinant weefselplasminogeenactivator (rtPA) of mechanische trombectomie. Vanwege het smalle therapeutische tijdvenster en de meervoudige exclusiecriteria kan echter slechts een select aantal patiënten profiteren van deze specifieke behandelingsopties. In de afgelopen twee decennia heeft preklinisch en translationeel beroerteonderzoek zich gericht op de studie van neuroprotectieve benaderingen. Alle verbindingen die klinische onderzoeken hebben bereikt, hebben tot nu toe echter geen verbeteringen voor de patiënt laten zien2.
Omdat in vitro modellen niet alle herseninteracties en pathofysiologische mechanismen van beroerte nauwkeurig kunnen reproduceren, zijn diermodellen cruciaal voor preklinisch beroerteonderzoek. Het nabootsen van alle aspecten van menselijke ischemische beroerte in een enkel diermodel is echter niet haalbaar, omdat ischemische beroerte een zeer complexe en heterogene ziekte is. Om deze reden zijn er in de loop van de tijd verschillende ischemische beroertemodellen ontwikkeld bij verschillende soorten. Fototrombose van cerebrale arteriolen of permanente distale occlusie van de middelste hersenslagader (MCA) zijn veelgebruikte modellen die kleine en lokaal gedefinieerde laesies induceren in de neocortex3,4. Daarnaast is het meest gebruikte slagmodel waarschijnlijk het zogenaamde "filamentmodel", waarbij een voorbijgaande occlusie van MCA wordt bereikt. Dit model bestaat uit een voorbijgaande introductie van een hechtdraadfilament aan de oorsprong van de MCA, wat leidt tot een abrupte vermindering van de cerebrale bloedstroom en het daaropvolgende grote infarct van subcorticale en corticale hersengebieden5. Hoewel de meeste slagmodellen MCA-occlusies 6nabootsen, maakt het "filamentmodel" een nauwkeurige afbakening van de ischemische tijd mogelijk. Reperfusie door filamentverwijdering bootst het menselijke klinische scenario na van cerebrale bloedstroomherstel na spontane of therapeutische (rtPA of mechanische trombectomie) stolsellysis. Tot op heden zijn verschillende modificaties van dit "filamentmodel" beschreven. In de meest voorkomende benadering, voor het eerst beschreven door Longa et al. in 19895, wordt een met silicium gecoat filament via de gemeenschappelijke halsslagader (CCA) geïntroduceerd bij de oorsprong van de MCA7. Hoewel het een veel gebruikte aanpak is, laat dit model geen volledig herstel van de bloedstroom toe tijdens reperfusie, omdat de CCA permanent wordt geligeerd na verwijdering van het filament.
In het afgelopen decennium zijn steeds meer onderzoeksgroepen geïnteresseerd in het modelleren van beroerte bij muizen met behulp van dit 'filamentmodel'. De aanzienlijke variabiliteit van dit model en het gebrek aan standaardisatie van de procedures zijn echter enkele van de redenen voor de hoge variabiliteit en slechte reproduceerbaarheid van de experimentele resultaten en wetenschappelijke bevindingen die tot nu toe zijn gerapporteerd2,8. Een mogelijke oorzaak van de huidige "replicatiecrisis", verwijzend naar de lage reproduceerbaarheid onder onderzoekslaboratoria, zijn de niet-vergelijkbare beroerte-infarctvolumes tussen onderzoeksgroepen die dezelfde experimentele methodologie gebruiken9. Na het uitvoeren van de eerste preklinische gerandomiseerde gecontroleerde multicenter studie10, konden we bevestigen dat het gebrek aan voldoende standaardisatie van dit experimentele beroertemodel en de daaropvolgende uitkomstparameters de belangrijkste redenen waren voor het falen van de reproduceerbaarheid in preklinische studies tussen onafhankelijke laboratoria11 . Deze drastische verschillen in de resulterende infarctgroottes vormen, ondanks het gebruik van hetzelfde beroertemodel, terecht niet alleen een bedreiging voor bevestigend onderzoek, maar ook voor wetenschappelijke samenwerkingen vanwege het gebrek aan robuuste en reproduceerbare modellen.
In het licht van deze uitdagingen wilden we de procedure voor een gestandaardiseerd transiënt MCAo-model ontwikkelen en in detail beschrijven, zoals gebruikt voor de gezamenlijke onderzoeksinspanningen binnen het onderzoeksconsortium "ImmunoStroke" (https://immunostroke.de/). Dit consortium heeft tot doel de hersen-immuuninteracties te begrijpen die ten grondslag liggen aan de mechanistische principes van beroerteherstel. Daarnaast worden histologische en gerelateerde functionele methoden voor de analyse van beroerte-uitkomsten gepresenteerd. Alle methoden zijn gebaseerd op vastgestelde standaard operationele procedures die worden gebruikt in alle onderzoekslaboratoria van het ImmunoStroke-consortium.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>45&#176; ramp</td>
			<td>H&#38;S Kunststofftechnik</td>
			<td></td>
			<td>height: 18 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5/0 threat</td>
			<td>Pearsalls</td>
			<td>10C103000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Syringe</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>695092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia system for isoflurane</td>
			<td>Drager</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen pomade</td>
			<td>Bayer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl/6J mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp</td>
			<td>FST</td>
			<td>12500-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotons</td>
			<td>NOBA Verbondmitel Danz</td>
			<td>974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cresyl violet</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific CryoStarNX70</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>521005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 96%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>522078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 99%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>ETO-5000-99-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filaments</td>
			<td>Doccol</td>
			<td>602112PK5Re</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine 45 angled forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11252-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14094-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glue</td>
			<td>Orechseln</td>
			<td>BSI-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hardener Glue</td>
			<td>Drechseln &#38; Mehr</td>
			<td>BSI-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating blanket</td>
			<td>FHC DC Temperature Controller</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Abbot</td>
			<td>B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopentane</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>59070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Inresa Arzneimittel GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Doppler</td>
			<td>Perimed</td>
			<td>PF 5010 LDPM, Periflux System 5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Doppler probe</td>
			<td>Perimed</td>
			<td>91-00123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline pH: 7.4</td>
			<td>Apotheke Innestadt Uni Munchen</td>
			<td>P32799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recovery chamber</td>
			<td>Mediheat</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roti-Histokit mounting medium</td>
			<td>Roth</td>
			<td>6638.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Braun</td>
			<td>131321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>02.001.30.011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon-coated filaments</td>
			<td>Doccol</td>
			<td>602112PK5Re</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicropscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylacine</td>
			<td>Albrecht</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling stroke in mice: transient middle cerebral artery occlusion via the external carotid artery

Beroerte is de derde meest voorkomende oorzaak van sterfte en de belangrijkste oorzaak van verworven volwassen invaliditeit in ontwikkelde landen. Tot op heden zijn therapeutische opties beperkt tot een klein deel van de patiënten met een beroerte binnen de eerste uren na een beroerte. Nieuwe therapeutische strategieën worden uitgebreid onderzocht, vooral om het therapeutische tijdvenster te verlengen. Deze huidige onderzoeken omvatten de studie van belangrijke pathofysiologische routes na een beroerte, zoals ontsteking na een beroerte, angiogenese, neuronale plasticiteit en regeneratie. In het afgelopen decennium is er toenemende bezorgdheid over de slechte reproduceerbaarheid van experimentele resultaten en wetenschappelijke bevindingen bij onafhankelijke onderzoeksgroepen. Om de zogenaamde "replicatiecrisis" te overwinnen, zijn gedetailleerde gestandaardiseerde modellen voor alle procedures dringend nodig. Als een inspanning binnen het "ImmunoStroke" onderzoeksconsortium (https://immunostroke.de/), wordt een gestandaardiseerd muismodel van transiënte midden cerebrale arterie occlusie (MCAo) voorgesteld. Dit model maakt het volledige herstel van de bloedstroom mogelijk na verwijdering van het filament, waarbij de therapeutische of spontane stolsellysis wordt gesimuleerd die optreedt bij een groot deel van de menselijke beroertes. De chirurgische procedure van dit "filament" beroertemodel en hulpmiddelen voor de functionele analyse ervan worden gedemonstreerd in de bijbehorende video.

Het hier beschreven model is een wijziging van het veelgebruikte "filament" -slagmodel, dat bestaat uit het introduceren van een met silicium gecoat filament door de ECA om de oorsprong van de MCA tijdelijk te blokkeren (figuur 1). Na het verwijderen van het filament wordt alleen de bloedstroom in de ECA permanent gestaakt, waardoor volledige rekanalisatie van het CCA en ICA mogelijk is. Dit maakt een adequate reperfusie van de hersenen mogelijk(figuur 2),vergel...

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery at JoVE.com

Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery

Verschillende modellen van middelste cerebrale arterie occlusie (MCAo) worden gebruikt in experimenteel beroerteonderzoek. Hier wordt een experimenteel beroertemodel van voorbijgaande MCAo via de externe halsslagader (ECA) beschreven, dat tot doel heeft een menselijke beroerte na te bootsen, waarbij de cerebrovasculaire trombus wordt verwijderd als gevolg van spontane stolsellysis of therapie.

Modellering beroerte bij muizen: transiënte middelste cerebrale arterie occlusie via de externe halsslagader

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options ...

In het hier beschreven filamentmodel zijn volledig herstel van de bloedstroom en de registratie ervan vereisten om een produceerbare instroom bij muizen te garanderen, vooral in translationele beroertestudies. Dit model heeft twee belangrijke voordelen ten opzichte van andere eerder beschreven beroertemodellen. Er is geen craniotomie vereist en een volledige reperfusie van het bloedvat wordt bereikt.Het filamentmodel is een complexe chirurgische ingreep waarbij verschillende slagaders worden gemanipuleerd. De visualisatie en uitleg van dit alles zijn kleine maar belangrijke stappen, kunnen de leerperiode van neurochirurgen versnellen. Sluit de warmtedeken aan om de temperatuur van het operatiegebied en de lichaamstemperatuur van de muis tijdens de anesthesie op 37 graden Celsius te houden.Bereid een autoclaafschaar en -tang, 70% ethanoloplossing en dexpanthenol oogzalf voor en houd verschillende stukken katoen en Five O-gecoate gevlochten polyester hechtdraad klaar voor gebruik. Bereid een zoutoplossing van 0,9% in een spuit van één milliliter zonder naald om de incisieplaats gehydrateerd te houden. Bereid een houder voor de laser Doppler-sonde voor door de punt van een pipetpunt van 10 microliter te snijden.Zodra de muis volledig is verdoofd, plaatst u deze in een buikligging in het operatiegebied. Breng de rectale sonde voorzichtig in om de temperatuur tijdens de chirurgische ingrepen te controleren. Na het desinfecteren van de operatieplaats, snijdt u deze hoofdhuid tussen het linkeroor en het oog om het schedelbot bloot te leggen.Snijd vervolgens de temporale spier af en trek deze terug om de meerdere hersenslagaders of MCA onder de schedel te visualiseren. Bevestig het buitenste deel van de punt met de laser Doppler-sonde of vezel bovenop de linker MCA met lijm en sluit de huid zodat de huid ook wordt gelijmd. Breng twee tot drie druppels verharderlijm aan om het proces te versnellen.Zorg ervoor dat de laser Doppler vezel niet gelijmd is en op elk moment gemakkelijk uit de tiphouder kan worden verwijderd. Draai de muis in rugligging, plaats de snuit in de anesthesiekegel en bevestig de poten met tape. Desinfecteer de huid en het haar rond de borst en maak een twee centimeter lange middellijnincisie in de nek.Gebruik een tang om de submandibulaire klier van de huid en de sternomastoïde spier uit elkaar te trekken. Gebruik retractors om het chirurgische veld bloot te leggen en de linker gemeenschappelijke halsslagader of CCA te vinden. Ontleed de CCA vrij van bindweefsel en omliggende zenuwen zonder de vagale zenuw te beschadigen en voer een voorbijgaande ligatie uit vóór de bifurcatie.Ontleed de uitwendige halsslagader of ECA en knoop een permanente knoop op het meest distale zichtbare deel. Plaats nog een hechting onder de ECA en dicht bij de bifurcatie en bereid vervolgens een losse knoop voor om later te gebruiken. Ontleed de interne halsslagader of ICA en plaats er een microvasculaire clip op ongeveer vijf millimeter over de bifurcatie.Zorg ervoor dat u de nervus vagus niet beschadigt. Snijd vervolgens een klein gaatje in de ECA tussen de strakke en de losse ligaties, zodat niet de hele ECA wordt doorgesneden. Introduceer het filament en breng het naar het CCA.Draai de losse ligatie in de ECA rond het lumen aan om de gloeidraad tijdelijk in die positie vast te zetten. Verwijder de microvasculaire clip en voorkom bloedingen. Na het verwijderen van de microvasculaire clip, brengt u het filament door de ICA totdat de oorsprong van de MCA is bereikt.Bevestig het filament in deze positie door de knoop rond de ECA verder aan te spannen. Record laser Doppler waarden voor en na filament insertie. Verwijder het terugtrekkingsmiddel en verplaats de sternomastoïde spier in de submandibulaire klier voordat u de wond hecht.Verwijder de laser Doppler sonde en plaats het dier in een herstelkamer bij 37 graden Celsius voor wat een uur. Plaats de muis in een buikligging in het operatiegebied met zijn snuit in het anesthesiemasker en bevestig vervolgens de poten van het dier met tape. Plaats de laser Doppler sonde in de sondehouder.Verwijder de wondnaad en gebruik een tang om de huid, de submandibulaire klier en de sternomastoïde spier uit elkaar te trekken. Gebruik retractors om het chirurgische veld bloot te leggen. Maak de ECA-hechting los die de gloeidraad aanspant en trek voorzichtig aan de gloeidraad.Vermijd beschadiging van de siliconenrubberen coating van het filament tijdens het verwijderen. Noteer de dopplerwaarden van de laser voor en na het verwijderen van filamenten. Bind de ECA-hechting stevig vast en bevestig de toename van de cerebrale bloedstroom in het laser-dopplerapparaat.Open de voorbijgaande ligatie vóór de bifurcatie van het CCA om de volledige bloedstroom te herstellen. Verwijder het terugtrekkingsmiddel en verplaats de sternomastoïde spier in de submandibulaire klier voordat u de wond hecht. Plaats het dier vervolgens een uur in een herstelkamer bij 37 graden Celsius om te herstellen van de anesthesie.Na herstel brengen de muizen terug naar hun kooien in een temperatuurgecontroleerde ruimte en zorgen ze voor de dieren door natte voedselkorrels en hydrogel toe te voegen in kleine petrischaaltjes op de kooivloer en elke 12 uur analgesie te injecteren tot dag drie na de operatie. Zodra de bloedstroom in het CCA is hersteld na het verwijderen van het filament, treedt volledige reperfusie van de hersenen op, wat vergelijkbaar is met de situatie die wordt waargenomen na succesvolle mechanische trombectomie bij menselijke patiënten. Beroertedieren vertoonden een significante verandering in de samengestelde en focale neuroscore, maar niet in de algemene neuroscore in vergelijking met schijndieren.Het opgehaalde infarctvolume werd ook uitgevoerd met behulp van cresol violette kleuring van coronale seriële hersensecties 24 uur na beroerte-inductie. Het laesiegebied omvat de somatosensorische en motorische cortex, evenals subcorticale structuren, zoals het striatum. Het gemiddelde infarctvolume was 61 tot 62 millimeter vierkant, wat neerkomt op 48% van de getroffen hersenhelft.Het is belangrijk om een adequate dissectie van het CCA, ECA en RCA uit te voeren zonder schade toe te brengen aan het aangrenzende weefsel, met name de nervus vagus, om een goede visualisatie van alle structuren te hebben en om het filament te kunnen inbrengen en de MCA-oorsprong te kunnen afsluiten.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Focal Cerebral Ischemia Model by Endovascular Suture Occlusion of the Middle Cerebral Artery in the Rat

Focus cerebrale ischemie Model door Endovasculaire Suture Occlusie van de midden cerebrale slagader in de Rat

Stroke is the leading cause of disability and the third leading cause of death in adults worldwide1. In human stroke, there exists a highly variable ...

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Laterale Chronische Cranial Window Voorbereiding Maakt<em&gt; In Vivo</em&gt; Observatie Na distale midden cerebrale slagader Occlusie in Muizen

Focal cerebral ischemia (i.e., ischemic stroke) may cause major brain injury, leading to a severe loss of neuronal function and consequently to a host of ...

A Model for Encephalomyosynangiosis Treatment after Middle Cerebral Artery Occlusion-Induced Stroke in Mice

Een model voor encefalomyosynangiose behandeling na middelste cerebrale arterie occlusie-geïnduceerde beroerte bij muizen

There is no effective treatment available for most patients suffering with ischemic stroke, making development of novel therapeutics imperative. The ...

Het opzetten van een transcraniaal muizenmodel voor occlusie van de middelste cerebrale slagader

A Modified Transcranial Middle Cerebral Artery Occlusion Model to Study Stroke Outcomes in Aged Mice

Auteur in de schijnwerpers: innovatieve technieken en toekomstige richtingen in beroerteonderzoek 

Een aangepast transcraniaal occlusiemodel voor de middelste cerebrale slagader om de uitkomsten van een beroerte bij oudere muizen te bestuderen

In experimental stroke research, middle cerebral artery occlusion (MCAO) with an intraluminal filament is widely used to model ischemic stroke in mice. ...

Een model van voorbijgaande cerebrale ischemie door occlusie van de middelste hersenslagader

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Stroke

Auteur in de schijnwerpers: beoordeling van schade door ischemische beroerte door middel van occlusiemodel voor de middelste hersenslagader 

Voorbijgaand occlusiemodel van de middelste cerebrale slagader van een beroerte

Stroke stands as a major cause of death or chronic disability globally. Nevertheless, existing optimal treatments are limited to reperfusion therapies ...

Occlusie van de distale middelste slagader om een muismodel met ischemische beroerte te ontwikkelen

Induction of Acute Ischemic Stroke in Mice Using the Distal Middle Artery Occlusion Technique

Auteur in de schijnwerpers: het opzetten van een betrouwbaar distaal MCA-occlusiemodel bij muizen voor onderzoek naar beroertes

Inductie van acute ischemische beroerte bij muizen met behulp van de distale occlusietechniek van de middelste slagader

Ischemic stroke remains the predominant cause of mortality and functional impairment among the adult populations globally. Only a minority of ischemic ...