Name: modeling stroke in mice: transient middle cerebral artery occlusion via the external carotid artery
Uploaded: 2021-05-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery at JoVE.com

Ringraziamo tutti i nostri partner di collaborazione dei Consorzi ImmunoStroke (FOR 2879, Dalle cellule immunitarie al recupero dell'ictus) per suggerimenti e discussioni. Questo lavoro è stato finanziato dalla Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG, German Research Foundation) nell'ambito della strategia di eccellenza della Germania nell'ambito del Cluster for Systems Neurology di Monaco (EXC 2145 SyNergy - ID 390857198) e nell'ambito delle sovvenzioni LI-2534/6-1, LI-2534/7-1 e LL-112/1-1.

Gli esperimenti riportati in questo video sono stati condotti seguendo le linee guida nazionali per l'uso di animali da esperimento e i protocolli sono stati approvati dai comitati governativi tedeschi (Regierung von Oberbayern, Monaco di Baviera, Germania). I topi maschi C57Bl/6J di dieci settimane sono stati utilizzati e alloggiati a temperatura controllata (22 ± 2 °C), con un periodo di ciclo luce-buio di 12 ore e accesso a cibo e acqua pellettati ad libitum.
1. Preparazione del ma...

<ol>
	<li>Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke.">Stroke.</a> Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).</li><li>O'Collins, V. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=1,026+experimental+treatments+in+acute+stroke.">1,026 experimental treatments in acute stroke.</a> Annals of Neurology. 59 (3), 467-477 (2006).</li><li>Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> Journal of Neuroscience Methods. 139 (2), 203-207 (2004).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+rat+model+of+thrombotic+focal+cerebral+ischemia.">A new rat model of thrombotic focal cerebral ischemia.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 17 (2), 123-135 (1997).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2 (3), 396-409 (2005).</li><li>Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (47), e2423 (2011).</li><li>Dirnagl, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+concerted+appeal+for+international+cooperation+in+preclinical+stroke+research.">A concerted appeal for international cooperation in preclinical stroke research.</a> Stroke. 44 (6), 1754-1760 (2013).</li><li>McNutt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Journals+unite+for+reproducibility.">Journals unite for reproducibility.</a> Science. 346 (6210), 679 (2014).</li><li>Llovera, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+a+preclinical+randomized+controlled+multicenter+trial+(pRCT):+Anti-CD49d+treatment+for+acute+brain+ischemia.">Results of a preclinical randomized controlled multicenter trial (pRCT): Anti-CD49d treatment for acute brain ischemia.</a> Science Translational Medicine. 7 (299), (2015).</li><li>Llovera, G., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+next+step+in+translational+research:+lessons+learned+from+the+first+preclinical+randomized+controlled+trial.">The next step in translational research: lessons learned from the first preclinical randomized controlled trial.</a> Journal of Neurochemistry. 139, 271-279 (2016).</li><li>Swanson, G. M., Satariano, E. R., Satariano, W. A., Threatt, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Racial+differences+in+the+early+detection+of+breast+cancer+in+metropolitan+Detroit,+1978+to+1987.">Racial differences in the early detection of breast cancer in metropolitan Detroit, 1978 to 1987.</a> Cancer. 66 (6), 1297-1301 (1990).</li><li>Lourbopoulos, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inadequate+food+and+water+intake+determine+mortality+following+stroke+in+mice.">Inadequate food and water intake determine mortality following stroke in mice.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 37 (6), 2084-2097 (2017).</li><li>Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monofilament+intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+in+the+mouse.">Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse.</a> Neurological Research. 19 (6), 641-648 (1997).</li><li>Jackman, K., Kunz, A., Iadecola, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+focal+cerebral+ischemia+in+vivo.">Modeling focal cerebral ischemia in vivo.</a> Methods in Molecular Biology. 793, 195-209 (2011).</li><li>Kitano, H., Kirsch, J. R., Hurn, P. D., Murphy, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalational+anesthetics+as+neuroprotectants+or+chemical+preconditioning+agents+in+ischemic+brain.">Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 27 (6), 1108-1128 (2007).</li><li>Rousselet, E., Kriz, J., Seidah, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+intraluminal+MCAO:+cerebral+infarct+evaluation+by+cresyl+violet+staining.">Mouse model of intraluminal MCAO: cerebral infarct evaluation by cresyl violet staining.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (69), e4038 (2012).</li><li>Rha, J. H., Saver, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+recanalization+on+ischemic+stroke+outcome:+a+meta-analysis.">The impact of recanalization on ischemic stroke outcome: a meta-analysis.</a> Stroke. 38 (3), 967-973 (2007).</li><li>Liu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+filament+occlusion+of+the+middle+cerebral+artery+in+rats:+does+the+reperfusion+method+matter+24+hours+after+perfusion.">Transient filament occlusion of the middle cerebral artery in rats: does the reperfusion method matter 24 hours after perfusion.</a> BMC Neuroscience. 13, 154 (2012).</li><li>Sommer, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+stroke:+experimental+models+and+reality.">Ischemic stroke: experimental models and reality.</a> Acta Neuropathologica. 133 (2), 245-261 (2017).</li><li>Jones, B. J., Roberts, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rotarod+suitable+for+quantitative+measurements+of+motor+incoordination+in+naive+mice.">A rotarod suitable for quantitative measurements of motor incoordination in naive mice.</a> Naunyn-Schmiedebergs Archiv f&#252;r Experimentelle Pathologie und Pharmakologie. 259 (2), 211 (1968).</li><li>Bouet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adhesive+removal+test:+a+sensitive+method+to+assess+sensorimotor+deficits+in+mice.">The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice.</a> Nature Protocols. 4 (10), 1560-1564 (2009).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+test+for+detecting+long-term+sensorimotor+dysfunction+in+the+mouse+after+focal+cerebral+ischemia.">A test for detecting long-term sensorimotor dysfunction in the mouse after focal cerebral ischemia.</a> Journal of Neuroscience Methods. 117 (2), 207-214 (2002).</li><li>Schallert, T., Fleming, S. M., Leasure, J. L., Tillerson, J. L., Bland, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke,+cortical+ablation,+parkinsonism+and+spinal+cord+injury.">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39 (5), 777-787 (2000).</li><li>Roth, S., Yang, J., Cramer, J., Malik, R., Liesz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+cytokine-induced+sickness+behavior+after+ischemic+stroke+by+an+optimized+behavioral+assessment+battery.">Detection of cytokine-induced sickness behavior after ischemic stroke by an optimized behavioral assessment battery.</a> Brain, Behavior, and Immunity. 91, 668-672 (2021).</li></ol>

Il presente protocollo descrive un modello sperimentale di ictus basato sull'accordo di consenso di un consorzio di ricerca multicentrico tedesco ("ImmunoStroke") per stabilire un modello MCAo transitorio standardizzato. Il modello MCAo transitorio stabilito introducendo un filamento rivestito di silicio attraverso l'ECA all'origine dell'MCA è uno dei modelli di ictus più utilizzati per ottenere la riperfusione arteriosa dopo un periodo di occlusione delimitato. Pertanto, questa procedura può essere considerata un mod...

L'ictus è una delle cause più comuni di morte e disabilità in tutto il mondo. Sebbene ci siano principalmente due forme distinte di ictus, ischemico ed emorragico, l'80-85% di tutti i casi di ictus sono ischemici1. Attualmente, sono disponibili solo due trattamenti per i pazienti con ictus ischemico: trattamento farmacologico con attivatore di plasminogeno tissutale ricombinante (rtPA) o trombectomia meccanica. Tuttavia, a causa della ristretta finestra temporale terapeutica e dei molteplici criteri di esclusione, solo un numero selezionato di pazienti può beneficiare di queste specifiche opzioni di trattamento. Negli ultimi due decenni, la ricerca preclinica e traslazionale sull'ictus si è concentrata sullo studio degli approcci neuroprotettivi. Tuttavia, tutti i composti che hanno raggiunto gli studi clinici non hanno finora mostrato miglioramenti per il paziente2.
Poiché i modelli in vitro non possono riprodurre con precisione tutte le interazioni cerebrali e i meccanismi fisiopatologici dell'ictus, i modelli animali sono cruciali per la ricerca preclinica sull'ictus. Tuttavia, imitare tutti gli aspetti dell'ictus ischemico umano in un singolo modello animale non è fattibile, poiché l'ictus ischemico è una malattia altamente complessa ed eterogenea. Per questo motivo, diversi modelli di ictus ischemico sono stati sviluppati nel tempo in diverse specie. La fototrombosi delle arteriole cerebrali o l'occlusione distale permanente dell'arteria cerebrale media (MCA) sono modelli comunemente usati che inducono lesioni piccole e localmente definite nella neocorteccia3,4. Oltre a questi, il modello di corsa più comunemente usato è probabilmente il cosiddetto "modello a filamento", in cui si ottiene un'occlusione transitoria di MCA. Questo modello consiste in un'introduzione transitoria di un filamento di sutura all'origine dell'MCA, che porta ad una brusca riduzione del flusso sanguigno cerebrale e al conseguente grande infarto delle regioni cerebrali sottocorticali e corticali5. Sebbene la maggior parte dei modelli di corsa imiti le occlusioni MCA 6, il "modello a filamento" consente una delimitazione precisa del tempo ischemico. La riperfusione mediante rimozione del filamento imita lo scenario clinico umano del ripristino del flusso sanguigno cerebrale dopo la lisi del coagulo spontanea o terapeutica (rtPA o trombectomia meccanica). Ad oggi, sono state descritte diverse modifiche di questo "modello di filamento". Nell'approccio più comune, descritto per la prima volta da Longa et al. nel 19895,un filamento rivestito di silicio viene introdotto attraverso l'arteria carotide comune (CCA) all'origine dell'MCA7. Sebbene sia un approccio ampiamente utilizzato, questo modello non consente il ripristino completo del flusso sanguigno durante la riperfusione, poiché il CCA viene legato in modo permanente dopo la rimozione del filamento.
Negli ultimi dieci anni, un numero crescente di gruppi di ricerca è stato interessato a modellare l'ictus nei topi utilizzando questo "modello di filamento". Tuttavia, la notevole variabilità di questo modello e la mancanza di standardizzazione delle procedure sono alcune delle ragioni dell'elevata variabilità e scarsa riproducibilità dei risultati sperimentali e dei risultati scientifici riportati finora2,8. Una potenziale causa dell'attuale "crisi di replicazione", riferendosi alla bassa riproducibilità tra i laboratori di ricerca, è la volumi di infarto dell'ictus non comparabili tra gruppi di ricerca che utilizzano la stessa metodologia sperimentale9. Infatti, dopo aver condotto il primo studio preclinico randomizzato controllato multicentrico10,siamo stati in grado di confermare che la mancanza di una sufficiente standardizzazione di questo modello sperimentale di ictus e dei successivi parametri di esito sono stati i motivi principali del fallimento della riproducibilità negli studi preclinici tra laboratori indipendenti11 . Queste drastiche differenze nelle dimensioni dell'infarto risultanti, nonostante l'utilizzo dello stesso modello di corsa, rappresentano giustamente non solo una minaccia per la ricerca di conferma, ma anche per le collaborazioni scientifiche a causa della mancanza di modelli robusti e riproducibili.
Alla luce di queste sfide, abbiamo mirato a sviluppare e descrivere in dettaglio la procedura per un modello MCAo transitorio standardizzato utilizzato per gli sforzi di ricerca collaborativa all'interno del consorzio di ricerca "ImmunoStroke" (https://immunostroke.de/). Questo consorzio mira a comprendere le interazioni cervello-immunità alla base dei principi meccanicistici del recupero dell'ictus. Inoltre, vengono presentati metodi istologici e funzionali correlati per l'analisi dei risultati dell'ictus. Tutti i metodi si basano su procedure operative standard stabilite utilizzate in tutti i laboratori di ricerca del consorzio ImmunoStroke.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>45&#176; ramp</td>
			<td>H&#38;S Kunststofftechnik</td>
			<td></td>
			<td>height: 18 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5/0 threat</td>
			<td>Pearsalls</td>
			<td>10C103000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL Syringe</td>
			<td>Braun</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic Acid</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>695092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia system for isoflurane</td>
			<td>Drager</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bepanthen pomade</td>
			<td>Bayer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl/6J mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>000664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp</td>
			<td>FST</td>
			<td>12500-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip</td>
			<td>FST</td>
			<td>18055-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clip holder</td>
			<td>FST</td>
			<td>18057-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotons</td>
			<td>NOBA Verbondmitel Danz</td>
			<td>974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cresyl violet</td>
			<td>Sigma Life Science</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific CryoStarNX70</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 70%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>521005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 96%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>522078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 99%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>ETO-5000-99-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filaments</td>
			<td>Doccol</td>
			<td>602112PK5Re</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine 45 angled forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11251-35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>FST</td>
			<td>11252-23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14094-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glue</td>
			<td>Orechseln</td>
			<td>BSI-112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hardener Glue</td>
			<td>Drechseln &#38; Mehr</td>
			<td>BSI-151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating blanket</td>
			<td>FHC DC Temperature Controller</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Abbot</td>
			<td>B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopentane</td>
			<td>Fluka</td>
			<td>59070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Inresa Arzneimittel GmbH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Doppler</td>
			<td>Perimed</td>
			<td>PF 5010 LDPM, Periflux System 5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser Doppler probe</td>
			<td>Perimed</td>
			<td>91-00123</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline pH: 7.4</td>
			<td>Apotheke Innestadt Uni Munchen</td>
			<td>P32799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recovery chamber</td>
			<td>Mediheat</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roti-Histokit mounting medium</td>
			<td>Roth</td>
			<td>6638.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline solution</td>
			<td>Braun</td>
			<td>131321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>02.001.30.011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon-coated filaments</td>
			<td>Doccol</td>
			<td>602112PK5Re</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicropscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas Spring Scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylacine</td>
			<td>Albrecht</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling stroke in mice: transient middle cerebral artery occlusion via the external carotid artery

L'ictus è la terza causa più comune di mortalità e la principale causa di disabilità acquisita negli adulti nei paesi sviluppati. Ad oggi, le opzioni terapeutiche sono limitate a una piccola percentuale di pazienti con ictus entro le prime ore dopo l'ictus. Nuove strategie terapeutiche sono state ampiamente studiate, soprattutto per prolungare la finestra temporale terapeutica. Queste indagini attuali includono lo studio di importanti percorsi fisiopatologici dopo l'ictus, come l'infiammazione post-ictus, l'angiogenesi, la plasticità neuronale e la rigenerazione. Nell'ultimo decennio, c'è stata una crescente preoccupazione per la scarsa riproducibilità dei risultati sperimentali e dei risultati scientifici tra i gruppi di ricerca indipendenti. Per superare la cosiddetta "crisi della replicazione", sono urgentemente necessari modelli standardizzati dettagliati per tutte le procedure. Come sforzo all'interno del consorzio di ricerca "ImmunoStroke" (https://immunostroke.de/), viene proposto un modello murino standardizzato di occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media (MCAo). Questo modello consente il completo ripristino del flusso sanguigno al momento della rimozione del filamento, simulando la lisi del coagulo terapeutica o spontanea che si verifica in gran parte degli ictus umani. La procedura chirurgica di questo modello di corsa "filamentosa" e gli strumenti per la sua analisi funzionale sono dimostrati nel video di accompagnamento.

Il modello qui descritto è una modifica del modello di corsa "filamento" comunemente usato, che consiste nell'introdurre un filamento rivestito di silicio attraverso l'ECA per bloccare transitoriamente l'origine dell'MCA (Figura 1). Dopo aver rimosso il filamento, solo il flusso sanguigno nell'ECA viene definitivamente interrotto, consentendo la completa ricanalizzazione del CCA e dell'ICA. Ciò consente un'adeguata riperfusione del cervello (Figura 2), simile ...

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Modeling Stroke in Mice: Transient Middle Cerebral Artery Occlusion via the External Carotid Artery

Diversi modelli di occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAo) sono utilizzati nella ricerca sperimentale sull'ictus. Qui, viene descritto un modello sperimentale di ictus di MCAo transitorio attraverso l'arteria carotide esterna (ECA), che mira a imitare l'ictus umano, in cui il trombo cerebrovascolare viene rimosso a causa della lisi spontanea del coagulo o della terapia.

Modellazione dell'ictus nei topi: occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media attraverso l'arteria carotide esterna

Stroke is the third most common cause of mortality and the leading cause of acquired adult disability in developed countries. To date, therapeutic options ...

Nel modello di filamento qui descritto, il ripristino completo del flusso sanguigno e la sua registrazione, sono requisiti per garantire un afflusso producibile tra i topi, specialmente negli studi sull'ictus traslazionale. Questo modello presenta due vantaggi principali rispetto ad altri modelli di corsa descritti in precedenza. Non è richiesta craniotomia e si ottiene una completa riperfusione del vaso sanguigno.Il modello di filamento è un intervento chirurgico complesso che coinvolge la manipolazione del processo di diverse arterie. La visualizzazione e la spiegazione di tutti questi sono piccoli ma importanti passi, potrebbero accelerare il periodo di apprendimento dei neurochirurghi. Collegare la coperta termica per mantenere la temperatura dell'area operativa e la temperatura corporea del mouse durante l'anestesia a 37 gradi Celsius.Preparare forbici e pinze per autoclave, soluzione di etanolo al 70% e unguento per occhi di dexpantenolo e tenere diversi pezzi di cotone e sutura di poliestere intrecciato rivestito Five O, pronti per l'uso. Preparare una soluzione salina allo 0,9% in una siringa da un millilitro senza ago per mantenere idratato il sito di incisione. Preparare un supporto per la sonda laser Doppler tagliando la punta di una punta della pipetta da 10 microlitri.Una volta che il mouse è completamente anestetizzato, posizionarlo in posizione prona nell'area operativa. Inserire delicatamente la sonda rettale per monitorare la temperatura durante le procedure chirurgiche. Dopo aver disinfettato il sito chirurgico, tagliare questo cuoio capelluto tra l'orecchio sinistro e l'occhio per esporre l'osso del cranio.Quindi, tagliare e ritirare il muscolo temporale per visualizzare le arterie cerebrali multiple o MCA sotto il cranio. Fissare la parte esterna della punta tenendo la sonda laser Doppler o la fibra sopra l'MCA sinistro con colla e chiudere la pelle in modo che anche la pelle sia incollata. Applicare da due a tre gocce di colla indurente per accelerare il processo.Assicurarsi che la fibra Laser Doppler non sia incollata e possa essere facilmente rimossa dal supporto della punta in qualsiasi momento. Girare il mouse in posizione supina, quindi mettere il muso nel cono di anestesia e fissare le zampe con del nastro adesivo. Disinfettare la pelle e i capelli che circondano il torace e fare un'incisione della linea mediana lunga due centimetri nel collo.Utilizzare una pinza per separare la ghiandola sottomandibolare della pelle e il muscolo sternomastoideo. Utilizzare divaricatori per esporre il campo chirurgico e trovare l'arteria carotide comune sinistra o CCA. Sezionare il CCA libero dal tessuto connettivo e dai nervi circostanti senza danneggiare il nervo vagale ed eseguire una legatura transitoria prima della biforcazione.Sezionare l'arteria carotide esterna o ECA e legare un nodo permanente nella parte visibile più distale. Posizionare un'altra sutura sotto l'ECA e vicino alla biforcazione, quindi preparare un nodo sciolto da utilizzare in seguito. Sezionare l'arteria carotide interna o ICA e posizionare una clip microvascolare su di essa a circa cinque millimetri sopra la biforcazione.Assicurati di non danneggiare il nervo vagale. Quindi tagliare un piccolo foro nell'ECA tra le legature strette e sciolte, assicurandosi di non tagliare l'intera ECA. Introdurre il filamento e farlo avanzare verso il CCA.Stringere la legatura allentata nell'ECA attorno al lume per fissare momentaneamente il filamento in quella posizione. Rimozione della clip microvascolare e prevenzione del sanguinamento. Dopo aver rimosso la clip microvascolare, inserire il filamento attraverso l'ICA fino a raggiungere l'origine dell'MCA.Fissare il filamento in questa posizione stringendo ulteriormente il nodo attorno all'ECA. Registrare i valori Doppler laser prima e dopo l'inserimento del filamento. Rimuovere il divaricatore e spostare il muscolo sternomastoideo nella ghiandola sottomandibolare prima di suturare la ferita.Rimuovere la sonda laser Doppler e posizionare l'animale in una camera di recupero a 37 gradi Celsius per un'ora. Posizionare il mouse in posizione prona nell'area operativa con il muso nella maschera di anestesia, quindi fissare le zampe dell'animale con del nastro adesivo. Inserire la sonda laser Doppler nel supporto della sonda.Rimuovere la sutura della ferita e utilizzare una pinza per separare la pelle, la ghiandola sottomandibolare e il muscolo sternomastoideo. Utilizzare divaricatori per esporre il campo chirurgico. Allentare la sutura ECA che stringe il filamento e tirare delicatamente il filamento.Evitare di danneggiare il rivestimento in gomma siliconica del filamento durante la rimozione. Registrare i valori doppler laser prima e dopo la rimozione del filamento. Legare strettamente la sutura ECA e confermare l'aumento del flusso sanguigno cerebrale nel dispositivo laser Doppler.Aprire la legatura transitoria prima della biforcazione dal CCA per ripristinare il flusso sanguigno completo. Rimuovere il divaricatore e spostare il muscolo sternomastoideo nella ghiandola sottomandibolare prima di suturare la ferita. Quindi, posizionare l'animale in una camera di recupero a 37 gradi Celsius per un'ora per riprendersi dall'anestesia.Dopo il recupero, i topi ritornano nelle loro gabbie in una stanza a temperatura controllata e si prendono cura degli animali aggiungendo pellet di cibo umido e idrogel in piccole piastre di Petri sul pavimento della gabbia e iniettano analgesia ogni 12 ore fino al terzo giorno dopo l'intervento chirurgico. Una volta ripristinato il flusso sanguigno nel CCA dopo aver rimosso il filamento, si verifica una completa riperfusione del cervello, che è simile alla situazione osservata dopo il successo della trombectomia meccanica nei pazienti umani. Gli animali colpiti da ictus hanno presentato un cambiamento significativo nel punteggio neuro composito e focale, ma non nel punteggio neuro generale rispetto agli animali finti.Il volume dell'infarto recuperato è stato anche eseguito utilizzando la colorazione viola cresolo delle sezioni cerebrali seriali coronali 24 ore dopo l'induzione dell'ictus. L'area della lesione comprende la corteccia somatosensoriale e motoria, nonché le strutture subcorticali, come lo striato. La media del volume dell'infarto era compresa tra 61 e 62 millimetri quadrati, che rappresentano il 48% dell'emisfero cerebrale interessato.È importante eseguire un'adeguata dissezione del CCA, ECA e RCA senza causare danni al tessuto adiacente, in particolare al nervo vago, per avere una buona visualizzazione di tutte le strutture e poter inserire il filamento e occludere l'origine MCA.

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