Name: microinjection method for anopheles gambiae embryos
Uploaded: 2021-07-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microinjection Method for Anopheles gambiae Embryos at JoVE.com

אנו מודים לדרוסילה סטילינג'ר, קיונה פרקר, פאריש פאוול ומדלין נוטולי על גידול יתושים. המימון ניתן על ידי אוניברסיטת קליפורניה, יוזמת מלריה אירוויין. AAJ הוא פרופסור דונלד ברן באוניברסיטת קליפורניה, אירווין.

1. הכנת יתושים למיקרו-ינון
<ol><li>זרע כלוב13 (~ 5000 ס"מ3) עם ~ 100 זכר ו 200-300 נקבה 1-2 יום מבוגר יתושים לאחר אקסלציה ולאפשר להם להזדווג במשך 2 ימים.</li>
	<li>לאחר תקופת ההזדווגות, לספק יתושים ארוחת דם באמצעות 2 מ"ל של דם עם מכשיר האכלה מלאכותי או בעלי חיים חיים מרדים בהתאם לשיטות חרקים<sup cl...

<ol>
	<li>Feramisco, J., Perona, R., Lacal, J. C., Lacal, J. C., Feramisco, J., Perona, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Needle+Microinjection:+A+Brief+History.">Needle Microinjection: A Brief History.</a> Microinjection. Methods and Tools in Biosciences and Medicine. , (1999).</li><li>Windbichler, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+synthetic+homing+endonuclease-based+gene+drive+system+in+the+human+malaria+mosquito.">A synthetic homing endonuclease-based gene drive system in the human malaria mosquito.</a> Nature. 473 (7346), 212-215 (2011).</li><li>Meredith, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Site-specific+integration+and+expression+of+an+anti-malarial+gene+in+transgenic+Anopheles+gambiae+significantly+reduces+Plasmodium+infections.">Site-specific integration and expression of an anti-malarial gene in transgenic Anopheles gambiae significantly reduces Plasmodium infections.</a> PLoS One. 6 (1), 14587 (2011).</li><li>Hammond, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR-Cas9+gene+drive+system+targeting+female+reproduction+in+the+malaria+mosquito+vector+Anopheles+gambiae.">CRISPR-Cas9 gene drive system targeting female reproduction in the malaria mosquito vector Anopheles gambiae.</a> Nature Biotechnology. 34 (1), 78-83 (2016).</li><li>Carballar-Lejarazu, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Next-generation+gene+drive+for+population+modification+of+the+malaria+vector+mosquito,+Anopheles+gambiae.">Next-generation gene drive for population modification of the malaria vector mosquito, Anopheles gambiae.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 117 (37), 22805-22814 (2020).</li><li>Sim&#245;es, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Anopheles+FBN9+immune+factor+mediates+Plasmodium+species-specific+defense+through+transgenic+fat+body+expression.">The Anopheles FBN9 immune factor mediates Plasmodium species-specific defense through transgenic fat body expression.</a> Develomental &amp; Comparative Immunology. 67, 257-265 (2017).</li><li>Arik, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+Akt+signaling+in+the+mosquito+fat+body+increases+adult+survivorship.">Increased Akt signaling in the mosquito fat body increases adult survivorship.</a> FASEB Journal. 4, 1404-1413 (2015).</li><li>Riabinina, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+olfactory+centres+in+the+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae.">Organization of olfactory centres in the malaria mosquito Anopheles gambiae.</a> Nature Communications. 7, 13010 (2016).</li><li>Kyrou, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CRISPR-Cas9+gene+drive+targeting+doublesex+causes+complete+population+suppression+in+caged+Anopheles+gambiae+mosquitoes.">A CRISPR-Cas9 gene drive targeting doublesex causes complete population suppression in caged Anopheles gambiae mosquitoes.</a> Nature Biotechnology. 36 (11), 1062-1066 (2018).</li><li>Dong, Y., Sim&#245;es, M. L., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Versatile+transgenic+multistage+effector-gene+combinations+for+Plasmodium+falciparum+suppression+in+Anopheles.">Versatile transgenic multistage effector-gene combinations for Plasmodium falciparum suppression in Anopheles.</a> Science Advances. 6 (20), (2020).</li><li>Grossman, G. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germline+transformation+of+the+malaria+vector,+Anopheles+gambiae,+with+the+piggyBac+transposable+element.">Germline transformation of the malaria vector, Anopheles gambiae, with the piggyBac transposable element.</a> Insect Molecular Biology. 6, 597-604 (2001).</li><li>Benedict, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+in+Anopheles+research.+Chapter+3:+Specific+Anopheles+techniques.+3.1+Embryonic+Techniques.+3.1.1+Microinjection+methods+for+Anopheles+Embryos.">Methods in Anopheles research. Chapter 3: Specific Anopheles techniques. 3.1 Embryonic Techniques. 3.1.1 Microinjection methods for Anopheles Embryos.</a> BEI resources. , (2015).</li><li>Pham, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+population+modification+of+the+malaria+vector+mosquito,+Anopheles+stephensi.">Experimental population modification of the malaria vector mosquito, Anopheles stephensi.</a> PLoS Genetics. 15 (12), 1008440 (2019).</li><li>Benedict, M. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pragmatic+selection+of+larval+mosquito+diets+for+insectary+rearing+of+Anopheles+gambiae+and+Aedes+aegypti.">Pragmatic selection of larval mosquito diets for insectary rearing of Anopheles gambiae and Aedes aegypti.</a> PLoS One. 15 (3), 0221838 (2020).</li><li>Carballar-Lejaraz&#250;, R., James, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population+modification+of+Anopheline+species+to+control+malaria+transmission.">Population modification of Anopheline species to control malaria transmission.</a> Pathogens and Global Health. 111 (8), 424-435 (2017).</li></ol>

עם הזמינות המוגברת של טכנולוגיות הנדסה גנטית מדויקות וגמישות כגון CRISPR/Cas9, ניתן לפתח אורגניזמים מהונדסים בצורה פשוטה ויציבה יותר ממה שאפשר בעבר. כלים אלה אפשרו לחוקרים ליצור זנים מהונדסים של וקטורים יתושים שקרובים מאוד להשגת התכונות הרצויות של השחלה לפתוגנים (שינוי אוכלוסין) או סטריליות ?...

טכניקות מיקרו-ג'ק-קציה שימשו לתפעול ניסיוני של אורגניזמים מאז תחילת המאהה-20 . Microinjection שימש כדי ללמוד הן פונקציות ביולוגיות בסיסיות ו /או להציג שינויים חשובים בביולוגיה של אורגניזם הרצוי. טכניקת המיקרו-שיתוף הייתה מעניינת במיוחד ביולוגים וקטורים, והיא נמצאת בשימוש נרחב לתפעול גנומים וקטוריים2-11. ניסויי Transgenesis בווקטורים פרוקי רגליים לעתים קרובות שואפים להפוך וקטורים פחות יעילים בהעברת פתוגנים על ידי חקיקת שינויים שמקטינים את הכושר של וקטור או מגבירים את השחלה לפתוגנים שהם משדרים. יתושים מעבירים מגוון פתוגנים אנושיים ויש להם השפעה משמעותית על התחלואה והתמותה ברחבי העולם. סוג אנופלס של יתושים מעביר את הפתוגנים טפילים מלריה האנושית, פלסמודיום spp. ניסויים בהנדסה גנטית עם אנופלים נועדו להבין טוב יותר את הביולוגיה ולהפחית את היכולת הווקטורית של יתושים אלה במאמצים לפתח אסטרטגיות לחיסול מלריה חדשניות.
וקטורים יתושים התורמים ביותר זיהומים מלריה ברחבי העולם הם במתחם מינים אנופלס גמביה. עם זאת, רוב הניסויים הטרנסגנזה המוצלחים בוצעו על וקטור המלריה של תת היבשת ההודית, אנופלס סטיבנסי. בעוד שפע של זני אנופלס גמביה מותאמי מעבדה קיימים, מספר הקווים המהותניים של אנופלס גמביה spp. שדווחו בספרות אינו משתווה לזה של אנופלס סטיבנסי. הוא חשב כי אנופלס גמביה עובר קשה יותר להזריק ולהשיג טרנסגנזה מוצלחת מאשר אנופלס stephensi, אם כי הסיבות להבדלים אלה אינם ידועים. פרוטוקול זה מתאר שיטה שהוכח כי היא מצליחה בעקביות בהשגת טרנסגנזה של עוברים אנופלס גמביה באמצעות מיקרו-ינון. הפרוטוקול מבוסס על שיטה שפותחה בעבר על ידי הרה בוסין ומארק בנדיקט12 עם כמה פרטים נוספים ושינויים שנוספו שנמצאו כמגבירים את היעילות של transgenesis.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >10x Microinjection Buffer</td>
			<td >-</td>
			<td >-</td>
			<td >1 mM NaHPO4 buffer, pH 6.8, 50 mM KCl</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Blotting membrane (Zeta-Probe GT Genomic Tested Blotting Membrane)</td>
			<td >Bio-Rad</td>
			<td ></td>
			<td >Neatly and straightly cut into 2x1 cm piece</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Conical tubes 50 ml (disposable centrifuge tube, polypropylene)</td>
			<td >Fisher Brand</td>
			<td ></td>
			<td >Ends cut</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >De-ionized or double-distilled water (ddH20)&#160;</td>
			<td >Mili-Q</td>
			<td ></td>
			<td >In a wash bottle&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dissecting microscope&#160;</td>
			<td >Leica&#160;</td>
			<td >Leica MZ12</td>
			<td >For embryo alignment</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Forceps&#160;</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td >No. 5 size&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass container&#160;</td>
			<td >Pyrex</td>
			<td >No. 3140</td>
			<td >125 x 65</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glass slide&#160;</td>
			<td >Fisher Brand</td>
			<td >No. 12-549-3</td>
			<td >75x26 mm</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Incubator</td>
			<td >Barnsted Lab-line</td>
			<td >Model No. 150</td>
			<td >28 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >KCl</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td >50 mM</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Latex dental film&#160;</td>
			<td >Crosstex International</td>
			<td >No. 19302</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microinjector</td>
			<td >Sutter Instrument</td>
			<td ></td>
			<td >XenoWorks Digital Microinjector</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microloader Pipette tips&#160;</td>
			<td >Eppendorf&#160;</td>
			<td ></td>
			<td >20 &#181;L microloader epT.I.P.S.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micromanipulator</td>
			<td >Sutter Instrument</td>
			<td ></td>
			<td >XenoWorks Micromanipulator</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette&#160;</td>
			<td >Rainin&#160;</td>
			<td ></td>
			<td >20 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Micropipette puller&#160;</td>
			<td >Sutter Instrument</td>
			<td >Sutter P-2000 micropipette puller</td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Microscope&#160;</td>
			<td >Leica</td>
			<td >DM 1000 LED or M165 FC</td>
			<td >For microinjection</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Minimum fiber filter paper&#160;</td>
			<td >Fisher Brand</td>
			<td >No. 05-714-4</td>
			<td >Chromatography Paper, Thick&#160;</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Mosquitoes&#160;</td>
			<td >MR4, BEI Resources</td>
			<td ></td>
			<td >Anopheles gambiae, mated adult females, blood-fed 4-5 days post-eclosion</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >NaHPO4 buffer&#160;</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td >1 mM, ph 6.8</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Nylon mesh</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td ></td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Paint brush</td>
			<td >Blick</td>
			<td >No. 05831-7040</td>
			<td >Fine, size 4/0</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Petri dish</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td >Plastic, (60x15 mm, 90x15 mm)</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sodium acetate</td>
			<td ></td>
			<td ></td>
			<td >&#160;3M</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Quartz glass capillaries&#160;</td>
			<td >Sutter Instrument</td>
			<td >No. QF100-70-10</td>
			<td >With filament, 1 mm OD,&#160; ID 0.7 10 cm length</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Water PCR grade&#160;</td>
			<td >Roche</td>
			<td >No. 03315843001</td>
			<td ></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microinjection method for anopheles gambiae embryos

טכניקות מיקרו-הנדסה עובריות חיוניות למחקרים מולקולריים וגנטיים רבים של מיני חרקים. הם מספקים אמצעי להכניס שברי DNA אקסוגניים קידוד גנים של עניין, כמו גם תכונות חיוביות לתוך נבט חרקים בצורה יציבה תורשתית. זנים מהונדסים וכתוצאה מכך ניתן ללמוד עבור שינויים פנוטיפיים הנובעים הביטוי של ה- DNA המשולב כדי לענות על שאלות בסיסיות או בשימוש ביישומים מעשיים. למרות שהטכנולוגיה פשוטה, היא דורשת מהחוקר סבלנות ותרגול כדי להשיג רמה של מיומנות שממקסמת את היעילות. מוצג כאן שיטה למיקרו-ג'ק-קציה של עוברים של יתוש המלריה האפריקאי, אנופלס גמביה. המטרה היא לספק על ידי DNA אקסוגניים מיקרו-אינטג'ק לעובר, כך שניתן יהיה לקחת אותו בתאי הנבט המתפתחים (מוט). ביטוי מהדנ"א המוזרק של טרנספוזות, integrases, רקומבינות או גרעינים אחרים (לדוגמה חלבונים הקשורים CRISPR, Cas) יכול לעורר אירועים שמובילים להכנסה קוולנטית שלה לכרומוזומים. גמביה מהונדסת שנוצרה מטכנולוגיות אלה שימשה למחקרים בסיסיים של רכיבי מערכת החיסון, גנים המעורבים בהאכלת דם ואלמנטים של מערכת הריח. בנוסף, טכניקות אלה שימשו לייצור זני An. gambiae עם תכונות שעשויות לעזור לשלוט בהעברת טפילים מלריה.

דוגמה מייצגת ליישום פרוטוקול המיקרו-בייג'ן המתואר ניתן למצוא ב Carballar-Lejarazú et al5. הכוונה כאן הייתה להכניס מערכת הנעת גנים אוטונומית לתוך הנבט של זן מעבדה, G3, של An. gambiae. המערכת תוכננה למקד את הלוקוס האורתולוגי הקרדינל (Agcd)על הכרומוזום השלישי במין זה, המקודד heme peroxidase ה...

Watch this Scientific Journal Video about Microinjection Method for Anopheles gambiae Embryos at JoVE.com

Microinjection Method for Anopheles gambiae Embryos

טכניקות מיקרו-ג'ק-קציה חיוניות כדי להכניס גנים אקסוגניים לגנומים של יתושים. פרוטוקול זה מסביר שיטה המשמשת את מעבדת ג'יימס למיקרו-המצאת מבני DNA לעוברי אנופלס גמביה כדי ליצור יתושים שעברו טרנספורמציה.

שיטת מיקרו-ג'ק-קציה לעוברי אנופלס גמביה

Embryo microinjection techniques are essential for many molecular and genetic studies of insect species. They provide a means to introduce exogenous DNA ...

פרוטוקול זה הוא משמעותי משום שהוא מספק שיטת מיקרו-הנדסה ספציפית עבור אנופלס גמביה, אשר היה קשה מבחינה היסטורית לשנות באמצעות טכניקות הנדסה גנטית נפוצות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא יוצרת באופן אמין אנופלס גמביה מהונדסת. היישומים של טכניקה זו להרחיב לקראת אסטרטגיות חדשניות לחיסול מלריה על ידי להקל על יצירת יתושים המתאימים לדיכוי האוכלוסייה או שינוי של אוכלוסיות סוג בר Anopheles גמביה.מתודולוגיה זו יכולה להיות מותאמת בקלות למינים שונים של יתושים. טכנולוגיית המיקרו-תרגול שלנו לוקחת סבלנות ותרגול. יש עקומת למידה.כדי להתחיל, השתמש בשאיפה למקם 20 עד 30 נקבות בצינור חרוט שקוף 50 מיליליטר. ודאו שהצינור נחתך בשני קצותיו ומכוסה בסרט שיניים לטקס בקצה אחד ורשת ניילון ונייר סינון בקצה השני, שם יתושים יטילו את ביציהם. מניחים את הצינור מלא יתושים בצלחת פטרי קטנה מלאה במים מזוקקים כפולים, ולאחר מכן מניחים את הצינור ואת המנה באינקובטור ב 28 מעלות צלזיוס במשך 45 דקות.הסר את הצינור מן האינקובטור ולהכניס את הצינור לתוך כלוב ריק. הקש בעדינות על הצינור כדי לאפשר ליתושים לעוף החוצה. הסר את הצינור מהכלוב ברגע שכל היתושים עפו החוצה.כאשר הצינור הוא ללא יתושים, לפתוח את הטבעת התחתונה, להסיר את הניילון, ולהשתמש במלקחיים כדי להסיר בזהירות את נייר המסנן עם הביצים מן הצינור. מניחים את נייר הפילטר עמוס הביצים בצלחת פטרי מפלסטיק המכילה שכבה של נייר סינון לח במים. שים קרום על שקופית זכוכית נקייה ולהשתמש מלקחיים נקיים כדי לכסות את הממברנה עם פיסת נייר מסנן, משאיר כמילימטר אחד של מסנן הממברנה חשוף.הרטיבו את נייר המסנן במים דה-יונים, ואז השתמשו במברשת כדי להעביר בעדינות 30 עד 50 עוברים לקצה הממברנה וליישר את הביצים אנכית לאורך הממברנה. כוון את הביצים באותו כיוון, כך שכאשר ביצים נצפות תחת מיקרוסקופ microinjection, הקצה האחורי נמצא במצב למטה ויוצר זווית של 15 מעלות עם המחט. מרפדים את כל קצה הממברנה בביצים.השתמש קצה microloader כדי למלא את המחטים עם שני microliters של תערובת DNA. הכנס את המחט למחזיק המחט וחבר את צינורות משאבת הלחץ האוטומטית. יישר את המחט כך שהיא עושה זווית של 15 מעלות עם המישור של השקופית.פתח את קצה המחט על ידי נגיעה זהירה בביצה הראשונה, ולאחר מכן הכנס את קצה המחט לכ -10 מיקרומטרים בקוטב האחורי. זריקה מוצלחת תוביל לתנועה קטנה של הציטופלסמה בתוך הביצה. השתמש בפקדי השלב הקואקסיאלי של המיקרוסקופ כדי לעבור לביצה הבאה כדי להמשיך בהזרקה.כדי להבטיח כי קצה המחט נשאר פתוח ולא היה סתום, לחץ על כפתור הזרק לפני הכניסה לעובר אחר לדמיין את טיפה קטנה בפתח המחט. אם המחט נסתמת, לחץ על כפתור נקה כדי לנקות את המחט ולחזור על בדיקת ההדמיה טיפה. התאם את הלחץ לפי הצורך אם פתח קצה המחט גדל מעט כדי להבטיח שגודל הטיפה יישאר קטן.להזריק על 40 עד 50 ביצים עם מחט אחת. לאחר השלמת הזריקות, לשטוף את הביצים לתוך מיכל זכוכית מרופד בנייר מסנן ומלא 50 מיליליטר של מים deionized. באמצעות פרוטוקול זה, מערכת מונחה גנים אוטונומית הוכנסה לתוך הנבט של זן מעבדה G3 של אנופלס גמביה.המערכת תוכננה למקד את האורתולוגיה הקרדינל, או Agcd, על הכרומוזום השלישי במין זה. pCO37 plasmid מוצג. הוא מכיל סטרפטוקוקוס פיוגנס Cas9 אנדונוקלאז תחת שליטה של האלמנטים הרגולטוריים של אורתולוגית הגן ננו.בנוסף, יש לו RNA מדריך תחת שליטתו של מקדם גנים U6 ואת קלטת הסמן הדומיננטית 3XP3 CFP המבטאת את חלבון הפלואורסצנטי ציאן. גישות מולקולריות אימתו החדרה מדויקת של כ -10 ק"ג זוגות בסיס של DNA, אשר הוגדר AgNosCd-1. ניתוחי מעקב מקיפים הראו כי AgNosCd-1 היה יעיל מאוד בכונן, יצר אללים עמידים מעטים, ולא היה עומס גנטי גדול בשל שילוב וביטוי של מערכת כונן הגנים.כונן גנים הומוזיגוס המכיל יתושים היו מוטנטים אובדן תפקוד, עם זחלים, גלמים, ומבוגרים שזה עתה הופיעו שיש פנוטיפ עיניים אדומות. כאשר מנסים פרוטוקול זה, שמירה על 88 הוא חיוני עבור בקיעה טובה כדי ביצה אפורה בהירה ולהימנע ביצים לבנות.

Research

JoVE Journal

Genetics

Microinjection Method for Anopheles gambiae Embryos

Laser-assisted Cytoplasmic Microinjection in Livestock Zygotes

לייזר בסיוע cytoplasmic Microinjection ב משק חי zygotes

Cytoplasmic microinjection into one-cell embryos is a very powerful technique. As an example, it enables the delivery of genome editing tools that can ...

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection of CRISPR/Cas9 Protein into Channel Catfish, Ictalurus punctatus, Embryos for Gene Editing

Microinjection CRISPR/Cas9 החלבון לתוך ערוץ שפמנון, Ictalurus punctatus, העוברים עבור ג'ין עריכה

The complete genome of the channel catfish, Ictalurus punctatus, has been sequenced, leading to greater opportunities for studying channel catfish gene ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

ברזולוציה גבוהה פלורסנט בחיי עיר הכלאה של עוברי דרוזופילה ורקמות באמצעות הגברה Tyramide אות

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

Embryo Microinjection and Transplantation Technique for Nasonia vitripennis Genome Manipulation

Embryo Microinjection and Transplantation Technique for Nasonia vitripennis Genome Manipulation

העובר Microinjection, טכניקת ההשתלה מניפולציה הגנום Nasonia vitripennis

The jewel wasp Nasonia vitripennis has emerged as an effective model system for the study of processes including sex determination, haplo-diploid sex ...

Generation of Genome-wide Chromatin Conformation Capture Libraries from Tightly Staged Early Drosophila Embryos

Generation of Genome-wide Chromatin Conformation Capture Libraries from Tightly Staged Early Drosophila Embryos

הדור של הגנום כולו כרומטין קונפורמציה לכידת ספריות מעוברים דרוזופילה בחוזקה בשלבים המוקדמים

Investigating the three-dimensional architecture of chromatin offers invaluable insight into the mechanisms of gene regulation. Here, we describe a ...

Use of Freeze-thawed Embryos for High-efficiency Production of Genetically Modified Mice

השימוש של עוברים הקפאת-הפשפה לייצור יעילות גבוהה של עכברים ששונו גנטית

The use of genetically modified (GM) mice has become crucial for understanding gene function and deciphering the underlying mechanisms of human diseases. ...

Embryo Microinjection Techniques for Efficient Site-Specific Mutagenesis in Culex quinquefasciatus

Embryo Microinjection Techniques for Efficient Site-Specific Mutagenesis in Culex quinquefasciatus

אמבריו מיקרו-סינתזה טכניקות עבור מוטגנזה יעילה ספציפית לאתר בקולקס quinquefasciatus

Culex quinquefasciatus is a vector of a diverse range of vector-borne diseases such as avian malaria, West Nile virus (WNV), Japanese encephalitis, ...

Sand Fly (Phlebotomus papatasi) Embryo Microinjection for CRISPR/Cas9 Mutagenesis

Sand Fly Phlebotomus papatasi Embryo Microinjection for CRISPR/Cas9 Mutagenesis

זבוב חול (פלבוטומוס פפטאסי) עובר מיקרו-אינג'קציה עבור CRISPR/Cas9 מוטגנזה

Sand flies are the natural vectors for Leishmania species, protozoan parasites producing a broad spectrum of symptoms ranging from cutaneous lesions to ...

Using the GAL4-UAS System for Functional Genetics in Anopheles gambiae

Using the GAL4-UAS System for Functional Genetics in Anopheles gambiae

שימוש במערכת GAL4-UAS לגנטיקה תפקודית בגמביה אנופלס

The bipartite GAL4-UAS system is a versatile and powerful tool for functional genetic analysis. The essence of the system is to cross transgenic 'driver' ...

Site-Directed &#966;C31-Mediated Integration and Cassette Exchange in Anopheles Vectors of Malaria

אתר φC31-בתיווך אינטגרציה וחילופי קלטות בוקטורים אנופלס של מלריה

Functional genomic analysis and related strategies for genetic control of malaria rely on validated and reproducible methods to accurately modify the ...