Name: handling techniques to reduce stress in mice
Uploaded: 2021-09-25T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Handling Techniques to Reduce Stress in Mice at JoVE.com

Forfatterne takker Animal Care Committee of CAMH for at støtte dette arbejde, samt dyrepassere af CAMH, der gav omfattende feedback om nytten af proceduren, motivere gennemførelsen af de beskrevne eksperimenter og indsendelse af den detaljerede protokol for andre brugere. Dette arbejde blev delvist finansieret af CAMH BreakThrough Challenge, tildelt TP, og af interne midler fra CAMH.

Forsøg med dyreforsøg blev godkendt af CAMH's dyreplejeudvalg og gennemført i overensstemmelse med retningslinjerne fra Det Canadiske Råd for Dyrepleje.
BEMÆRK: Den håndteringsmetode, der er beskrevet heri, kan anvendes i forskellige musestammer, herunder ikke-transgene (C57/BL6, BalbC, CD1, SV129 osv.) og transgene linjer. Det kan også bruges med unge eller gamle mus og bemærke, at unge voksne (4-6 uger gamle) mus har tendens til at være lidt mere aktive end voksne eller gamle mus, i...

<ol>
	<li>Deacon, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Housing,+husbandry+and+handling+of+rodents+for+behavioral+experiments.">Housing, husbandry and handling of rodents for behavioral experiments.</a> Nature Protocols. 1 (2), 936 (2006).</li><li>Bryda, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Mighty+Mouse:+the+impact+of+rodents+on+advances+in+biomedical+research.">The Mighty Mouse: the impact of rodents on advances in biomedical research.</a> Missouri Medicine. 110 (3), 207-211 (2013).</li><li>Martic-Kehl, M., Ametamey, S., Alf, M., Schubiger, P., Honer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+inherent+variability+and+experimental+parameters+on+the+reliability+of+small+animal+PET+data.">Impact of inherent variability and experimental parameters on the reliability of small animal PET data.</a> EJNMMI Research. 2 (1), 26 (2012).</li><li>Howard, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Variability.">Control of Variability.</a> ILAR Journal. 43 (4), 194-201 (2002).</li><li>Toth, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+the+cage+environment+on+rodent+physiology+and+behavior:+Implications+for+reproducibility+of+pre-clinical+rodent+research.">The influence of the cage environment on rodent physiology and behavior: Implications for reproducibility of pre-clinical rodent research.</a> Experimental Neurology. 270, 72-77 (2015).</li><li>Golini, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non-invasive+Digital+Biomarker+for+the+Detection+of+Rest+Disturbances+in+the+SOD1G93A+Mouse+Model+of+ALS.">A Non-invasive Digital Biomarker for the Detection of Rest Disturbances in the SOD1G93A Mouse Model of ALS.</a> Frontiers in Neuroscience. 14 (896), (2020).</li><li>Singh, S., Bermudez-Contreras, E., Nazari, M., Sutherland, R. J., Mohajerani, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-cost+solution+for+rodent+home-cage+behaviour+monitoring.">Low-cost solution for rodent home-cage behaviour monitoring.</a> PLoS One. 14 (8), 0220751 (2019).</li><li>Stewart, K., Schroeder, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+Handling+and+Restraint+Techniques.">Rodent Handling and Restraint Techniques.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2021).</li><li>Hurst, J. L., West, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taming+anxiety+in+laboratory+mice.">Taming anxiety in laboratory mice.</a> Nature Methods. 7 (10), 825-826 (2010).</li><li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+the+practicality+of+using+non-aversive+handling+methods+to+reduce+background+stress+and+anxiety+in+laboratory+mice.">Improving the practicality of using non-aversive handling methods to reduce background stress and anxiety in laboratory mice.</a> Scientific Reports. 9 (1), 20305 (2019).</li><li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimising+reliability+of+mouse+performance+in+behavioural+testing:+the+major+role+of+non-aversive+handling.">Optimising reliability of mouse performance in behavioural testing: the major role of non-aversive handling.</a> Scientific Reports. 7, 44999 (2017).</li><li>Ghosal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+handling+limits+the+impact+of+stress+on+metabolic+endpoints.">Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints.</a> Physiology &amp; Behavior. 150, 31-37 (2015).</li><li>Wahlsten, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+data+from+different+labs:+lessons+from+studies+of+gene-environment+interaction.">Different data from different labs: lessons from studies of gene-environment interaction.</a> Journal of Neurobiology. 54 (1), 283-311 (2003).</li><li>Nature Neuroscience. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Troublesome+variability+in+mouse+studies.">Troublesome variability in mouse studies.</a> Nature Neuroscience. 12 (9), 1075 (2009).</li><li>Sensini, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+handling+technique+and+handling+frequency+on+laboratory+mouse+welfare+is+sex-specific.">The impact of handling technique and handling frequency on laboratory mouse welfare is sex-specific.</a> Scientific Reports. 10 (1), 17281 (2020).</li><li>Ghosal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+handling+limits+the+impact+of+stress+on+metabolic+endpoints.">Mouse handling limits the impact of stress on metabolic endpoints.</a> Physiology &amp; Behavior. 150, 31-37 (2015).</li><li>Novak, J., Bailoo, J. D., Melotti, L., Rommen, J., W&#252;rbel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Exploration+Based+Cognitive+Bias+Test+for+Mice:+Effects+of+Handling+Method+and+Stereotypic+Behaviour.">An Exploration Based Cognitive Bias Test for Mice: Effects of Handling Method and Stereotypic Behaviour.</a> PLoS One. 10 (7), 0130718 (2015).</li><li>Gouveia, K., Waters, J., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Handling+Tutorial.">Mouse Handling Tutorial.</a> NC3Rs. , (2016).</li><li>Gouveia, K., Hurst, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reducing+Mouse+Anxiety+during+Handling:+Effect+of+Experience+with+Handling+Tunnels.">Reducing Mouse Anxiety during Handling: Effect of Experience with Handling Tunnels.</a> PLoS One. 8 (6), 66401 (2013).</li><li>Henderson, L. J., Smulders, T. V., Roughan, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identifying+obstacles+preventing+the+uptake+of+tunnel+handling+methods+for+laboratory+mice:+An+international+thematic+survey.">Identifying obstacles preventing the uptake of tunnel handling methods for laboratory mice: An international thematic survey.</a> PLoS One. 15 (4), 0231454 (2020).</li><li>Percie Du Sert, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ARRIVE+guidelines+2.0:+Updated+guidelines+for+reporting+animal+research.">The ARRIVE guidelines 2.0: Updated guidelines for reporting animal research.</a> PLOS Biology. 18 (7), 3000410 (2020).</li><li>Golde, W. T., Gollobin, P., Rodriguez, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid,+simple,+and+humane+method+for+submandibular+bleeding+of+mice+using+a+lancet.">A rapid, simple, and humane method for submandibular bleeding of mice using a lancet.</a> Lab Animal. 34 (9), 39-43 (2005).</li><li>Guilloux, J. P., Seney, M., Edgar, N., Sibille, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrated+behavioral+z-scoring+increases+the+sensitivity+and+reliability+of+behavioral+phenotyping+in+mice:+relevance+to+emotionality+and+sex.">Integrated behavioral z-scoring increases the sensitivity and reliability of behavioral phenotyping in mice: relevance to emotionality and sex.</a> Journal of Neuroscience Methods. 197 (1), 21-31 (2011).</li><li>LaFollette, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+Animal+Welfare+Meets+Human+Welfare:+A+Cross-Sectional+Study+of+Professional+Quality+of+Life,+Including+Compassion+Fatigue+in+Laboratory+Animal+Personnel.">Laboratory Animal Welfare Meets Human Welfare: A Cross-Sectional Study of Professional Quality of Life, Including Compassion Fatigue in Laboratory Animal Personnel.</a> Frontiers in Veterinary Science. 7 (114), (2020).</li><li>Sorge, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+exposure+to+males,+including+men,+causes+stress+and+related+analgesia+in+rodents.">Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents.</a> Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).</li><li>Bailoo, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Cage+Enrichment+on+Behavior,+Welfare+and+Outcome+Variability+in+Female+Mice.">Effects of Cage Enrichment on Behavior, Welfare and Outcome Variability in Female Mice.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 12, (2018).</li><li>Spangenberg, E. M., Keeling, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+the+welfare+of+laboratory+mice+in+their+home+environment+using+animal-based+measures+-+a+benchmarking+tool.">Assessing the welfare of laboratory mice in their home environment using animal-based measures - a benchmarking tool.</a> Laboratory Animals. 50 (1), 30-38 (2016).</li><li>Theil, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemiology+of+fighting+in+group-housed+laboratory+mice.">The epidemiology of fighting in group-housed laboratory mice.</a> Scientific Reports. 10 (1), 16649 (2020).</li><li>Weber, E. M., Dallaire, J. A., Gaskill, B. N., Pritchett-Corning, K. R., Garner, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aggression+in+group-housed+laboratory+mice:+why+can't+we+solve+the+problem.">Aggression in group-housed laboratory mice: why can't we solve the problem.</a> Lab Animal. 46 (4), 157-161 (2017).</li><li>Cloutier, S., Baker, C., Wahl, K., Panksepp, J., Newberry, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Playful+handling+as+social+enrichment+for+individually-+and+group-housed+laboratory+rats.">Playful handling as social enrichment for individually- and group-housed laboratory rats.</a> Applied Animal Behaviour Science. 143 (2), 85-95 (2013).</li><li>Panksepp, J., Burgdorf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=50-kHz+chirping+(laughter?)+in+response+to+conditioned+and+unconditioned+tickle-induced+reward+in+rats:+effects+of+social+housing+and+genetic+variables.">50-kHz chirping (laughter?) in response to conditioned and unconditioned tickle-induced reward in rats: effects of social housing and genetic variables.</a> Behavioural Brain Research. 115 (1), 25-38 (2000).</li></ol>

Denne undersøgelse og metodeudvikling er baseret på den observation, at håndteringsteknikker hos mus stadig overses af det videnskabelige samfund, og at nogle laboratorier stadig er tilbageholdende med at implementere tilvænnings- eller håndteringsteknikker for at reducere stress og reaktivitet hos deres dyr forud for forsøg. Samtidig med at dyrehåndteringen repræsenterer en tidsforpligtelse, giver den gavnlige virkning for dyrene, som kan bidrage til, at de forsøg, der skal udføres, bliver en succes, og forhin...

Mus og rotter er væsentlige aktiver til prækliniske undersøgelser1,2 til flere formål, herunder endokrinale, fysiologiske, farmakologiske eller adfærdsmæssige undersøgelser2. Fra det stigende antal undersøgelser, der involverer dyr, opstod det , at ukontrollerede miljøvariabler, herunder menneskelig interaktion, påvirker forskellige resultater i biomedicinsk forskning3,4,5. Dette er ansvarlig for betydelig variation observeret på tværs af eksperimenter og forskningslaboratorier4,5, udgør en stor advarsel i dyreforskning.
Der er gennemført forskellige tilgange med det formål at begrænse virkningen af miljøstressorer og reducere reaktiviteten til menneskelig interaktion. For eksempel, for at begrænse virkningen af miljøstressorer, standardisering af boligforhold og automatiserede boligsystemer6,7 er blevet implementeret på tværs aflaboratorier. Med hensyn til interaktion med mennesker havde almindeligt anvendte tilgange til håndtering og transport af dyr ringe hensyntagen til ubehag og stress hos dyr. For eksempel øger opplukning af dyr i halen eller ved hjælp af pincet8 baseline angst9,10,11, reducerer efterforskning9,12 og bidrager i høj grad til inter-individuelle variabilitet i og på tværs af undersøgelser13,14. Som følge heraf blev der udviklet andre tilgange, såsom kophåndteringsteknikken, som gælder for mus og rotter. I denne tilgang er dyrene "cupped" ud af deres bur og holdes af forsøgerne med deres hænder, der danner en kop9,10,11. Et andet nyttigt alternativ til halehåndtering indebærer brug af en polycarbonattunnel til overførsel af mus9,10,15. Denne fremgangsmåde eliminerer direkte interaktion mellem musen og eksperimentatoren. Både kop og tunnel tilgange viste effekt i at reducere angst-lignende adfærd og frygt for experimenter, der kan overdrives af aversive håndtering teknikker, såsom hale pick up / hale håndtering9,10.
Derfor viser stigende dokumentation nytten af korrekt musehåndtering for at reducere variationen mellemindividerne 9,11og forbedredyrevelfærden 10. De teknikker, der er nævnt ovenfor, står dog stadig over for begrænsninger. Kophåndteringsteknikken er implementeret med tidsplaner fra 10 dage (10 sessioner over 2 uger16) op til 15 uger17, hvilket er en betydelig mængde tid for facilitetspersonale og eksperimenter. Derudover, effektiviteten af kop håndtering varierer efter stamme9 og konventionelle kop håndtering i åbne hænder kan føre til naive mus eller særligt nervøse stammer til at hoppe fra hånden9,18. Tunnelhåndtering resulterer i mere konsistente og generelt hurtigere resultater i gentling19. Tunneler bruges også som hjemme bur berigelse. De hjælper dyr med at vænne sig til at håndtere hurtigt og give de ekstra fordele ved berigelse. Tunnelhåndtering har imidlertid begrænsninger ved overførsel af dyr mellem apparater. Interessant nok viste Hurst og West9, og Henderson et al.20, at brug af blid og kort manuel håndtering til at overføre dyr fra tunnelen til apparatet ikke påvirker deres fænotype.
For at give et alternativ til eksisterende metoder, med opnåelig tilvænning på kort tid, beskriver denne artikel en ny teknik, der udvider kophåndteringsteknikken og derfor ikke kræver noget bestemt udstyr. Denne tilgang bruger milepæle til at måle niveauet af komfortmus har med håndteringsprocessen. Det viser effekt ved faldende musereaktivitet og stress (på adfærdsmæssige og hormonelle niveauer), letter rutinemæssig håndtering og bidrager til at reducere variationen mellem dyr. Detaljer om denne teknik leveres her, og dens effektivitet ved at reducere angstlignende adfærd, forbedre interaktionen med eksperimentatorer og begrænse perifer stresshormon (corticosteron) frigivelse demonstreres i to separate undersøgelser (mandlige og kvindelige mus), sammenlignet med tunnelhåndtering (positiv kontrol) og halehåndteringsteknikker (negativ kontrol).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>23 G x 1 in. BD PrecisionGlide general use sterile hypodermic needle. Regular wall type and regular bevel.</td>
			<td>BD</td>
			<td>2546-CABD305145</td>
			<td>Needles for Blood collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Vacutainer&#174; Venous Blood Collection EDTA Tubes with Lavender BD Hemogard&#8482; closure, 2.0ml (13x75mm), 100/pk</td>
			<td>BD</td>
			<td>367841</td>
			<td>EDTA Coated tubes for blood collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bed&#8217;o cobs &#188;&#8221; Corn cob laboratory animal bedding</td>
			<td>Bed-O-Cobs</td>
			<td>BEDO1/4</td>
			<td>Novel bedding for novelty suppressed feeding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Centrifuge 5424 R</td>
			<td>For centrifugation of blood.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corticosterone ELISA Kit</td>
			<td>Arbor Assays</td>
			<td>K003-H1W</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>HC-V770</td>
			<td>Camera to record EPM/Experimenter interactions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Elevated Plus Maze</td>
			<td>Home Made</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Custom Maze made of four black Plexiglas arms (two open arms (29cm long by 7 cm wide) and two enclosed arms (29 cm long x7 cm wide with 16 cm tall walls)) that form a cross shape with the two open arms opposite to each other held 55 cm above the floor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Medstore House Brand</td>
			<td>39753-P016-EA95</td>
			<td>Dilute to 70% with Distilled water, for cleaning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethovision XT 15</td>
			<td>Noldus</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Automated animal tracking software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laboratory Rodent Diet</td>
			<td>LabDiet</td>
			<td>Rodent Diet 5001</td>
			<td>Standard Rodent diet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Memory Card</td>
			<td>Kingstone Technology</td>
			<td>SDA3/64GB</td>
			<td>For video recording and file transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Novelty Suppressed Feeding Chamber</td>
			<td>Home Made</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Custom test plexiglass test chamber with clear floors and walls 62cm long, by 31cm wide by 40cm tall .</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parlycarbonate tubes</td>
			<td>Home Made</td>
			<td>n/a</td>
			<td>13 cm in length and 5cm in diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purina Yesterday&#8217;s news recycled newspaper bedding</td>
			<td>Purina</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Standard Bedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Biotek</td>
			<td>Epoch Microplate Reader</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

handling techniques to reduce stress in mice

Forsøgsdyr udsættes for flere manipulationer af forskere eller dyreplejeudbydere. Den stress, dette forårsager, kan have dybtgående virkninger på dyrs trivsel og kan også være en forvirrende faktor for eksperimentelle variabler såsom angstforanstaltninger. I årenes løb er håndteringsteknikker, der minimerer håndteringsrelateret stress, blevet udviklet med særligt fokus på rotter og lidt opmærksomhed på mus. Det har dog vist sig, at mus kan vænnes til manipulationer ved hjælp af håndteringsteknikker. At vænne mus til håndtering reducerer stress, letter rutinemæssig håndtering, forbedrer dyrs trivsel, reducerer datavariationen og forbedrer eksperimentel pålidelighed. På trods af gavnlige virkninger af håndtering anvendes haleopstyrtningen, som er særlig stressende, stadig i vid udstrækning. Dette papir giver en detaljeret beskrivelse og demonstration af en nyudviklet musehåndteringsteknik, der har til formål at minimere den stress, som dyret oplever under menneskelig interaktion. Denne manuelle teknik udføres over 3 dage (3D-håndteringsteknik) og fokuserer på dyrets evne til at vænne sig til eksperimentatoren. Denne undersøgelse viser også effekten af tidligere etablerede tunnelhåndteringsteknikker (ved hjælp af en polycarbonattunnel) og haleopspørgningsteknikken. Specifikt undersøgt er deres virkninger på angstlignende adfærd ved hjælp af adfærdstest (Elevated-Plus Maze og Nyhed undertrykt fodring), frivillig interaktion med eksperimentatorer og fysiologisk måling (kortikosteronniveauer). 3D-håndteringsteknikken og tunnelhåndteringsteknikken reducerede angstlignende fænotyper. I det første eksperiment, ved hjælp af 6 måneder gamle mandlige mus, forbedrede 3D-håndteringsteknikken eksperimenterinteraktionen betydeligt. I det andet eksperiment, ved hjælp af 2,5 måneder gammel kvinde, reducerede det kortikosteronniveauer. 3D-håndteringen er således en nyttig tilgang i scenarier, hvor interaktion med eksperimentatoren er påkrævet eller foretrukket, eller hvor tunnelhåndtering muligvis ikke er mulig under eksperimentet.

To separate undersøgelser blev udført med C57BL/6 mus. Undersøgelse #1 omfattede 6-måneder gamle mænd og Undersøgelse #2 omfattede 2,5 måneder gamle kvinder (N = 36/study) fra Jackson Laboratories (Cat #000664). Mus ankom til anlægget i en alder af 2 måneder. Mens undersøgelse #2 hunner blev håndteret og testet to uger efter ankomsten, blev Undersøgelse #1 mænd kun håndteret og testet i en alder af 6 måneder (forsinkelse på grund af global pandemilukning). I løbet af denne tid døde en mus fra Study #2, ...

Watch this Scientific Journal Video about Handling Techniques to Reduce Stress in Mice at JoVE.com

Handling Techniques to Reduce Stress in Mice

Dette papir beskriver en håndteringsteknik hos mus, 3D-håndteringsteknikken, som letter rutinemæssig håndtering ved at reducere angstlignende adfærd og præsenterer detaljer om to eksisterende relaterede teknikker (tunnel- og halehåndtering).

Håndteringsteknikker til reduktion af stress hos mus

Laboratory animals are subjected to multiple manipulations by scientists or animal care providers. The stress this causes can have profound effects ...

Mit navn er Dr. Thomas Prevot. Jeg er forsker i Center for Addiction and Mental Health, eller CAMH, og en adjunkt ved University of Toronto i Institut for Psykiatri. Min gruppe har en særlig interesse i at reducere baseline angst og reaktivitet hos mus for at reducere datavariation og forbedre dyrevelfærden.Mus har vist sig at være uvurderlige aktiver i grundlæggende videnskab og præklinisk forskning, men meget få laboratorier rundt om i verden kontrol for baseline angst og reaktivitet af deres forsøgsdyr, derfor komplicerer replikatori af data mellem laboratorier. En væsentlig medvirkende faktor til baseline angst er ukontrollerede miljømæssige variabler, såsom boligforhold, miljøberigelse, og eksponering for stress. Mens standardisering af boligforhold og berigelse har bidraget til at forbedre dette problem, er eksponering for stress under interaktion med forsøg stadig stort set ubehandlet hos mus.Halehåndtering, processen med at løfte musen i halen, er stadig musens udbredte musehåndteringsteknik, på trods af at den er særlig stressende. Selv om alternativer til hale håndtering er opstået, herunder tunnel håndtering og kop håndtering. Vedtagelsen af disse teknikker har været langsom.Her beskriver vi en ny teknik, der ligner kophåndtering, som kan implementeres med så lidt som tre dages tilvænning eller 3D-håndtering. Ved gradvist at øge graden og kompleksiteten af interaktion og skride frem som reaktion på musens reaktivitet til bestemte håndteringsmilepæle, kan vi reducere stress og lette rutinemæssig håndtering. Vi vurderer effekten af 3D-håndtering hos mus i adfærdstest, vurderer angstlignende adfærd, interaktion med eksperimentatorer og perifert stresshormon, kortikosteron, niveauer og giver en sammenligning med tunnelhåndterings- og halehåndteringsteknikker.Åbn forsigtigt buret og læg låget på siden. Introducer din behandskede hånd til hjemmeburet, før du forsøger at samle musen op. Lad musen vænne sig til tilstedeværelsen af hånden i ca. 30 sekunder.Forsøg derefter at samle musen op i cupped hænder. Hvis musen ikke let kan afhentes, kop begge hænder sammen og bruge dem til at guide musen til hjørnet af buret. Brug derefter begge hænder til at samle musen op.Når musen er fjernet fra buret, skal du holde dine hænder så flade og åbne som muligt. Lad musen udforske frit. Dette giver en flad platform, som musen kan træde ind på og begrænser risikoen for at bide.Hold hånden åben og flad, med håndfladen op. Placer din anden hånd ved siden af musen og lad musen bevæge sig frit fra hånd til hånd uden nogen tilbageholdenhed. Efter et minuts håndtering med flade hænder, slappe af håndfladen, og lidt kop musen i hovedet, før forsigtigt rullende musen mellem hænderne.Fortsæt i fire minutter, skiftevis mellem blid rulning mellem hænderne og fri udforskning af dine åbne hænder. I løbet af de sidste to minutter skal du udføre en huslystest. Lad musen bevæge sig til kanten af din hånd og bringe de to hænder sammen.Meget langsomt, kop dine hænder, så musen passer ind i et husly dannet af hænderne. Sørg for at efterlade en åbning, så musen kan undslippe, hvis det er nødvendigt. Prøv at holde musen i ly i fem til 10 sekunder uden nogen tilbageholdenhed.Gentag beskyttelsesprøven tre til fire gange i løbet af de sidste to minutter. Skynd dig ikke processen. Hvis musen ser stresset ud ved at være indespærret inde i hånden, skal du fortsætte med at rulle mellem hænderne og fri udforskning i 30 sekunder og derefter prøve sheltertesten igen.Lad gratis udforskning i hænderne i 30 sekunder, og udskift derefter forsigtigt musen i buret. Rengør bænken toppen af enhver afføring og urin med 70% ethanol eller en passende rengøringsopløsning. Rengør handskerne af afføring og urin efter behov, og når du skifter til et nyt bur, skyl handsker med 70% ethanol eller skift handsker.Ved dag to bør det allerede være muligt at fjerne musen fra buret i cupped hænder. Hvis musen virker reaktiv, skal du udføre den flade hånd og den frie udforskning af åbne hoveder i 30 sekunder til et minut. Ellers skal du gå videre til rullen mellem hænder og husly test.Udfør rollen mellem hænder og huslystrin fra dag ét i to til tre minutter. Udfør hvert trin flere gange. Hvis musen synes tryg i husly test, forsøge at klappe musen på ryggen og hovedet.Hvis musen ikke forsøger at flygte kontakt, fortsæt til næsen stikke. Rør forsigtigt ved musen på spidsen af snuden. Hvis det ikke bider eller forsøger at dreje hovedet, er dette et godt tegn på tilvænning.For petting og næse poke test, skynd dig ikke processen. Hvis musen ser stresset ud ved at være indespærret i hænderne eller ikke ønsker at blive rørt, skal du fortsætte med at rulle mellem hænderne i et par minutter og derefter prøve igen. Stop denne session efter ca. tre minutters håndtering, hvis dyret reagerer godt på huslyet, hoved petting og næsestikke.Og hvis dyret ser ud til at være villig til at udforske dine hænder uden tegn på stress, såsom forsøg på at flygte, hoppe fra hænderne eller undgå kontakt med hænderne. Hvis musen fortsætter med at udvise tegn på stress eller ikke reagerer godt på husly test eller næse stikke test, fortsætte sessionen, indtil de når fem minutter, som i dag ét. Udskift musen i buret og rengør bænketoppen og handskerne.På den tredje dag skal du fortsætte gennem de samme trin den dag to. Saml musen op i håndfladen. Overfør musen mellem hænderne.Begræns forsigtigt musen i cupped hænder. Hvis musen reagerer godt på disse trin, kan du prøve at klappe musen og forsøge næsestikketesten. På den tredje dag skal musen være afslappet nok til at sidde i deres hule hånd uden at bevæge sig væk, og du skal være i stand til at fortsætte gennem disse trin over cirka to til tre minutter.Udskift musen i buret, og rengør bænketoppen og handskerne. På den tredje dag. Hvis dyret fastholdes til forsøgsformål, såsom oral sonde eller intra-peritoneal injektion, kan musene underkastes nakkekleriktesten.Tag fat i musen ved nakken, mellem tommel- og pegefingeren, og løft musen fem centimeter over hånden i to til tre sekunder. Dette er normalt en ubehagelig position for voksne mus, og hvis musene forbliver nær immobile, er de godt vant til håndtering og vil være lette at fastholde til injektioner. Placer musen tilbage på din flade hånd og lad den frit udforske i et minut.Dyr blev testet for deres vilje til frivilligt at interagere med eksperimentatoren og den lette håndtering i en eksperimentel sammenhæng. I studie 1 var mus, der blev håndteret ved enten rørhåndtering eller 3D-håndtering, mindre tilbøjelige til at flygte, når en forsøgsperson forsøger at samle en mus op. Derudover studerede en mus, der håndteres ved hjælp af 3D-teknikken, mere tid i samme kvadrant som eksperimentatorens hånd, hvilket indikerer en øget vilje til at interagere med eksperimentatoren.I studie to var mus, der blev håndteret ved enten rørhåndtering eller 3D-håndtering, mindre tilbøjelige til at flygte, når en eksperimentator forsøger at samle musen op sammenlignet med mus, der håndteres med halen. I studie to påvirkede håndteringsteknikken imidlertid ikke den tid, der blev brugt i samme kvadrant som eksperimentatorens hånd. Effekten af 3D og tunnelhåndtering blev sammenlignet med halehåndtering i to tests af angstlignende adfærd, den nyhed undertrykte fodringstest og den forhøjede pluslabyrint.I studie et, i nyhed undertrykt fodring test, var der en tendens til reduceret angst i tunnel håndteres og 3D håndteres mus. I den forhøjede plus labyrint var der ingen samlet effekt af håndtering. Når opsummeret som en Z-score, der var en betydelig reduktion i den samlede angst i tunnel håndteres og 3D håndteres mus i forhold til hale håndteres mus.I studie to var der ingen samlet effekt af håndtering på angstforanstaltninger i den nyheds undertrykte fodringstest eller den forhøjede pluslabyrint. Når opsummeret som en Z-score, håndtering teknik havde ingen samlet effekt på angst. Som et fysiologisk mål for stress indsamlede vi serum fra håndteret hale, 3D håndteret og tunnel håndteret mus 15 minutter efter en kort håndteringssession og testede kortikosteronniveauer.Der var ingen samlet effekt af håndtering i studie et. I studie to reducerede 3D-håndtering signifikant kortikosteronniveauer i forhold til halehåndtering. Baseret på observationer af, at håndteringsteknikker hos mus ikke er almindeligt anerkendt af det videnskabelige samfund, beskrev vi brugen af en ny håndteringsteknik.I begge undersøgelser, der blev præsenteret, reducerede tunnel- og 3D-håndtering forsøg på mus at flygte, når de blev afhentet, hvilket potentielt lettede rutinemæssig håndtering. Derudover reducerede denne teknik angstlignende adfærd og øget interaktion med eksperimentatoren hos ældre mandlige mus. Hos unge kvinder.denne teknik faldt kortikosteron niveauer observeret som reaktion på håndtering. Implementering af denne teknik har potentiale til at reducere datavariationer, forbedre dyrevelfærden og lette rutinemæssig håndtering.

Research

JoVE Journal

Behavior

Using Chronic Social Stress to Model Postpartum Depression in Lactating Rodents

Brug Kronisk Social Stress til model fødselsdepression hos diegivende Gnavere

Exposure to chronic stress is a reliable predictor of depressive disorders, and social stress is a common ethologically relevant stressor in both animals ...

Uncovering Beat Deafness: Detecting Rhythm Disorders with Synchronized Finger Tapping and Perceptual Timing Tasks

Afsløring beat Døvhed: Afsløring rytmeforstyrrelser med synkroniseret Finger Tapping og Sanselig Timing Opgaver

A set of behavioral tasks for assessing perceptual and sensorimotor timing abilities in the general population (i.e., non-musicians) is presented here ...

Mindfulness in Motion (MIM): An Onsite Mindfulness Based Intervention (MBI) for Chronically High Stress Work Environments to Increase Resiliency and Work Engagement

Mindfulness in Motion MIM: An Onsite Mindfulness Based Intervention MBI for Chronically High Stress Work Environments to Increase Resiliency and Work Engagement

Mindfulness in Motion (MIM): En på stedet Mindfulness Based Intervention (MBI) for Kronisk High Stress arbejdsmiljøer til Forhøjelse Resiliency og Work Engagement

A pragmatic mindfulness intervention to benefit personnel working in chronically high-stress environments, delivered onsite during the workday, is timely ...

The Social Dimension of Stress: Experimental Manipulations of Social Support and Social Identity in the Trier Social Stress Test

Den sociale dimension af stress: Eksperimentelle manipulationer af social støtte og social identitet i Trier Social stresstesten

In many situations humans are influenced by the behavior of other people and their relationships with them. For example, in stressful situations ...

Chronic Sleep Deprivation in Mouse Pups by Means of Gentle Handling

Kronisk søvnmangel i mus unger med skånsom håndtering

Sleep is critical for proper development and neural plasticity. Moreover, abnormal sleep patterns are characteristic of many neurodevelopmental disorders. ...

The Unpredictable Chronic Mild Stress Protocol for Inducing Anhedonia in Mice

Den uforudsigelige kroniske Mild Stress protokol for at fremkalde Anhedonia i mus

Depression is a highly prevalent and debilitating condition, only partially addressed by current pharmacotherapies. The lack of response to treatment by ...

Continuous Theta Burst Stimulation of the Posterior Medial Frontal Cortex to Experimentally Reduce Ideological Threat Responses

Kontinuerlig Theta Burst stimulering af den bageste mediale frontale Cortex eksperimentelt reducere ideologiske trussel svar

Decades of behavioral science research have documented functional shifts in attitudes and ideological adherence in response to various challenges, but ...

Visualization of Intensity Levels to Reduce the Gap Between Self-Reported and Directly Measured Physical Activity

Visualisering af intensitet niveauer til at mindske kløften selvrapporterede mellem og direkte målte fysisk aktivitet

Physical activity (PA) assessment needs tools that are inexpensive and easy to administer. Common questionnaires inquire time spent in light, moderate, ...

Behavioral Approaches to Studying Innate Stress in Zebrafish

Adfærdsmæssige tilgange til at studere medfødte stress i Zebrafish

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of ...

Modified Blood Collection from Tail Veins of Non-anesthetized Mice with a Vacuum Blood Collection System and Eyeglass Magnifier

Modificerede blod samling fra hale vener af ikke-bedøvede mus med en vakuum blod System til indsamling og monokel Forstørrelsesglas

Blood sample collection is the basis of experimental animal research. It is of importance to obtain adequate blood samples for various research purposes. ...