Name: basophil activation test for allergy diagnosis
Uploaded: 2021-05-31T14:00:00
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クラウディア・コラッツァの貴重な英語サポートに感謝します。この作業は、MINICOの保健研究所「カルロスIII」(ISCIII)の支援を受けました(ERDFが共同出資した助成金:「Una manera de hacer Europa」;助成金番号PI20 / 01715;PI18/00095;PI17/01410;PI17/01318;PI17 / 01237およびレティックアラディヤルRD16 / 0006 / 0001;アンダルシア地域保健省(助成金番号PI-0127-2020、PIO-0176-2018;PE-0172-2018;PE-0039-2018;PC-0098-2017;PI-0075-2017;PI-0241-2016)。IDは臨床研究者(B-0001-2017)であり、AAは上級ポスドク契約(RH-0099-2020)を保持しており、どちらもアンダルシア地域保健省(ESFが共同出資:「アンダルシアセムエベコンヨーロッパ」)によってサポートされています。

プロトコルの履行は、ヘルシンキ宣言の原則に従って実施され、地元の倫理委員会(スペイン、マラガ州調査委員会)によって承認されました。すべての被験者は調査研究について口頭で知らされ、対応するインフォームドコンセントフォームに署名しました。
注:現在のプロトコルは、著者が毎日使用するBAT手順を詳述しています。ただし、これは標準化された方?...

BATは、IgEを介したアレルギー反応を評価するための補完的な 体外 診断用検査であり、薬物、食品、吸入剤などのさまざまなトリガーによって引き起こされる反応の診断、および一部の形態の慢性蕁麻疹に有用であることが示されています。一般に、BAT性能は、i)アレルゲン/薬物がSTで偽陽性の結果を生成する場合に考慮する必要があります。ii)アレルゲン/薬物をSTまたはsIgE定量に使?...

IgEを介したアレルギー診断は、病歴、皮膚検査(ST)、血清特異的IgE(sIgE)の定量、および必要かつ必要に応じて対照群チャレンジテスト(CCT)に基づいています1、2、3、4、5、6。ただし、正確な情報が不足している可能性があるため、病歴は信頼できない可能性があり、STおよびCCTは、重度の生命を脅かす反応を経験している被験者に禁忌となる可能性のあるリスクのない手順ではありません1,2,3,4,5,6 .これらの問題は、検証済みおよび市販のフルオロ酵素イムノアッセイによるsIgEの測定が少数のアレルゲンおよび薬物に対してのみ利用可能であるという事実とともに、好塩基球活性化試験(BAT)などの他のin vitro機能アッセイの重要な役割を浮き彫りにしました。
好塩基球は、アレルゲン/薬物曝露後に細胞表面の高親和性受容体(FcεRI)に結合した隣接するsIgEが架橋すると活性化される、IgEを介したアレルギー反応に関与する重要なエフェクター細胞です。好塩基球の活性化は、細胞質内分泌顆粒に含まれる細胞脱顆粒および新規合成炎症メディエーターの放出を引き起こす7、8、9。BATは、刺激(アレルゲンまたは薬物)の存在下で好塩基球活性化を模倣しようとし、フローサイトメトリーによって好塩基球活性化マーカーの発現の変化を決定するin vitro法である7,10。好塩基球(IgE+、CCR3+、CRTH2+、CD203c+)を同定し、蛍光色素標識抗体の組み合わせを使用して細胞活性化(主にCD63およびCD203cのアップレギュレーション)を測定するためのさまざまな戦略があります7,10。臨床的に検証された最良の活性化マーカーであるCD631,12,13,14は、ヒスタミンを含む分泌顆粒に固定された膜タンパク質であり、細胞活性化および顆粒と膜との融合後、好塩基球表面に発現する15,16,17,18,19,20,21.CD203cは、好塩基球上に構成的に発現し、FcεRI刺激後にアップレギュレーションされる表面マーカーであり、BAT15、22、23、24、25においても信頼できる結果を示している。また、CD6326と共発現しているようです。
過去数十年で、BATは、以下に説明するように、薬物、食品、吸入剤などのさまざまなトリガーによって引き起こされるIgEを介したアレルギー反応、およびいくつかの形態の慢性蕁麻疹の診断に役立つことが示されています。ただし、診断アルゴリズムにおけるこの手法の位置は非常に変動し、十分に決定されていません。
薬物過敏症 BATは、選択された薬物および患者、特にSTの診断値がほとんどの薬物で十分に確立されていないという事実のために重篤な反応を経験する人々にとって、限られた数の薬物について検証および標準化されているため、補完的な検査として有用であることが示されている27,28,29,30。さらに、sIgEの定量は、ST 27、28、29、30、31、32よりも感度が低く、限られた数の薬物に対してのみ利用可能です。したがって、薬物過敏症の診断は通常、薬物誘発試験に依存しており、これは重度の生命を脅かす反応を経験している被験者には禁忌である可能性があります33。
ベタラクタム(BL)20,34,35,36,37,38,39、神経筋遮断薬(NMBA)19,22,40,41,42などのさまざまな薬物に対する即時過敏反応を報告する選択された患者におけるBATの使用について有望な結果が報告されています。43,44,45,フルオロキノロン類46,47,48,49,ピラゾロン類50,51,52,放射線造影剤(RCM)53,54,55,56,白金化合物57,58,59.BATの感度と特異度はそれぞれ51.7〜66.9%と89.2〜97.8%であると報告されています。陽性および陰性的中率は、それぞれ93.4%から66.3%の範囲であると説明されています27,31。さらに、BATは、薬物脱感作中の副作用のリスクが高い患者においてCD203c発現がCD63と比較して増加するため、白金化合物による脱感作中の画期的な反応の予測バイオマーカーとして提案されている57。
BATは、反応が好塩基球脱顆粒を伴う場合にのみ薬物過敏症において有用であることは注目に値する。したがって、シクロオキシゲナーゼ 142の酵素的阻害から生じる反応には有用ではない。
食物アレルギー BATは、アレルゲン抽出物全体または単一アレルゲンに対する血清sIgEの決定がしばしば曖昧であり、診断を確認するために経口食品チャレンジを必要とするため、食物アレルギーの潜在的な診断ツールとして浮上しており、これは薬物過敏症と同様に、費用がかかり、リスクのない手順ではありません60。いくつかの研究は、牛乳61,62、卵61,63、小麦64,65,66,67,68、ピーナッツ63,69,70,71,72、ヘーゼルナッツ73,74,75,76に関連する結果を示しています。、77、貝78、桃79,80,81、リンゴ21、セロリ、ニンジン82,83。
血清中のSTsやsIgEと比較して食物アレルギーの診断におけるBATの主な付加価値は、より高い特異性と類似の感度を示すことです。したがって、BATは、臨床的にアレルギー患者を、高い特異性(75-100%)と感度(77-98%)の両方を有する感作されたが耐性のある被験者と区別するための有用なツールである63,69,84。感度および特異度の値は、表現型(例えば、口腔アレルギー症候群対アナフィラキシー)、年齢、および地理関連の感作パターンとしてのアレルゲンおよび他の要因に依存する63,85。
単一のアレルゲン成分を使用するBATは、一部の食物アレルゲンの診断精度を向上させる可能性があります61,80。種子貯蔵タンパク質(例えば、落花生由来のAra h 1、Ara h 2、Ara h 3およびAra h 6)を用いた研究がある86;脂質伝達タンパク質(例えば、モモ由来のPru p 3および落花生由来のAra h 9)80,86;ベットv1ホモログ(例えば、ピーナッツのAra h 8)87。他の潜在的な有用性は、花粉食物アレルギー症候群21,87,88、赤身肉アレルギー89、または食物依存性運動誘発アナフィラキシー66の場合の原因アレルゲンの特定に関連しています。
興味深いことに、BATは、ピーナッツおよび牛乳アレルギー患者の研究で観察されるように、より重篤な反応を有する患者が活性化好塩基球の割合が高いため、アレルギー反応の重症度および閾値に関する情報を提供することができる84,90,91;微量のアレルゲンに反応する患者は、より大きな好塩基球感受性を示す84、90、92。これらのデータは、BATがより綿密なフォローアップとより強化された教育を必要とする高リスクアレルギー患者を特定するのに役立つ可能性があることを示唆しています93。さらに、BATは、食品チャレンジ応答70,91,92,94および反応性の閾値90,95を予測して、食品を安全に(再)導入できる時期を決定するのに役立つことが報告されています84。ただし、これらの調査結果はいくつかの研究では物議を醸しており63,96、さらに研究が必要です。
一方、BATは、自然または免疫調節治療下での食物アレルギーの解決を経時的に監視するために使用されてきましたが、これまでは経口食品チャレンジによってのみ評価されており、関連するリスクとコストがあります84,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106、107,108。さらに、好塩基球の活性化はオマリズマブによる治療中に減少するが、治療の中止後に増加するため、食物アレルギーにおけるオマリズマブの効果を監視するためにも使用されている109。
吸入剤アレルギー BATは、sIgE定量とSTによって日常的に診断を確立することができるため、吸入アレルギーにおいてめったに有益ではありません。しかし、局所アレルギー性鼻炎(鼻誘発検査陽性のsIgEおよび陰性STの検出不能レベル)の場合、BATは症例の50%で診断を可能にした110。さらに、好塩基球感受性と鼻/気管支誘発試験への反応、および喘息の重症度とオマリズマブ111,112による治療の有効性との相関が報告されています。
BATは、おそらくIgG抗体113,114,115,116,117の遮断の干渉のために、免疫療法中に好塩基球感受性が低下するため、イエダニおよび花粉のアレルゲン免疫療法のモニタリングにも使用されています。
膜翅目毒アレルギー 膜翅目毒アレルギーの診断は、日常的にSTおよび血清sIgEに基づいています。BATは高い感度(85-100%)と特異度(83-100%)を示しており、曖昧な結果が得られる場合、または毒アレルギーの示唆的な病歴があるが検出できないsIgEおよび陰性のST118,119の患者に有用であることが報告されています。しかしながら、BATはこれらの反応の重症度を予測していないようである120,121。
患者の最大60%がスズメバチとハチ毒の両方にsIgEを示し、優勢なアレルゲンの同定は適切な免疫療法治療に不可欠です。これらの場合、BATは、優性アレルゲン119,122,123,124の同定に有用であることが報告されている。ハチおよびスズメバチ毒の主要なアレルゲンに対するsIgEは、両方の毒に対して二重陽性の患者におけるBATの有用性を低下させる可能性があるが、主にsIgE決定において陰性の結果を有する被験者において有用な情報を提供する123。
いくつかの研究は、BATがこの治療オプションが好塩基球感受性を低下させることが報告されているため、毒免疫療法の蓄積段階での副作用の予測バイオマーカーとして有用である可能性があることを示唆しています。しかし、反応性は低下せず、このBATユーティリティは現在物議を醸しています13,120,125,126,127,128,129,130。
じんましんと血管浮腫 慢性蕁麻疹患者のサブセットは、自己アレルゲンに対するIgE自己抗体および肥満細胞表面に存在するFcεRIまたはIgE−FcεRI複合体を標的とするIgG自己抗体に起因する自己免疫病態生理機能を有する131,132。臨床診療では、このタイプの慢性蕁麻疹の診断は、偶発的な感染のリスクがある陽性の自家血清STに依存してきました。BATは、慢性蕁麻疹が疑われる患者を診断および監視するためのin vitro検査として提案されています。好塩基球の表面上のCD63およびCD203c発現の両方が、慢性蕁麻疹患者からの血清による刺激後に増加すると報告されており、活性自己抗体の検出を示している133,134,135,136,137。最近、BAT陽性の患者は、蕁麻疹活動性スコアによって評価される最も活発な病状を経験することが多く、BAT138陰性の患者と比較して、サードライン治療(シクロスポリンAまたはオマリズマブ)と一緒に高用量の抗ヒスタミン薬を必要とすることが報告されています。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 mL Round Bottom Polystyrene Test Tube, without Cap, Nonsterile</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>APC anti-human CD193 (CCR3) Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>310708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD FACSCalibur Flow Cytometer</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC anti-human CD63 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>353006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1 M)</td>
			<td>Thermo-Fisher</td>
			<td>15630106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysing Solution 10x concentrated</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>349202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Formyl-Met-Leu-Phe</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F3506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE anti-human CD203c (E-NPP3) Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>324606</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Purified Mouse Anti-Human IgE</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555857</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human IL-3</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>203-IL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sheath Fluid</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>342003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TUBE 9 mL LH Lithium Heparin</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>455084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

basophil activation test for allergy diagnosis

好塩基球活性化試験(BAT)は、食物、昆虫毒、薬物、およびある種の慢性蕁麻疹に対するIgE媒介アレルギー反応の評価において、病歴、皮膚試験(ST)、および特異的IgE(sIgE)測定に加えて使用できる補完的な 体外 診断試験です。ただし、診断アルゴリズムにおけるこの手法の役割は非常に変動し、十分に決定されていません。
BATは、フローサイトメトリーによる活性化マーカー(CD63、CD203cなど)の測定によるアレルゲン/薬物架橋IgE活性化に対する好塩基球応答の決定に基づいています。この検査は、特に重度の生命を脅かす反応を経験している被験者において、アレルギー診断を確認するための制御されたチャレンジテストを回避するための有用で補完的なツールになる可能性があります。一般に、BATの性能は、i)アレルゲン/薬物がSTで偽陽性の結果を生成する場合に考慮する必要があります。ii)STまたはsIgEの測定に使用するアレルゲン/薬物源がない。iii)患者の病歴とSTまたはsIgEの決定との間に不一致がある。iv)症状は、STが全身反応を引き起こす可能性があることを示唆しています。v)原因のアレルゲン/薬物を確認するためにCCTを検討する前。テストの主な制限は、特に薬物アレルギーにおける最適でない感度、サンプル抽出後24時間以内にテストを実行する必要性、および手順、濃度、および細胞マーカーに関するラボ間の標準化の欠如に関連しています。

アレルゲンまたは薬物を用いて実施されるBATは、IgE依存性過敏反応の調査を可能にする。好塩基球反応性は、最良の結果を得るために少なくとも2つの最適濃度で測定されるべきであり34 、活性化は、細胞表面上のCD63のアップレギュレーションによって視覚化される。アレルゲンの場合、さらに、好塩基球反応性を確認するために、好塩基球感受性は、複数の減少アレルゲ?...

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Basophil Activation Test for Allergy Diagnosis

好塩基球活性化試験は、フローサイトメトリーによる活性化マーカーの測定による特定の刺激の存在下での好塩基球活性化の検出に基づいて、IgEを介したアレルギー反応を評価するための補完的な 体外 診断試験です。

アレルギー診断のための好塩基球活性化試験

The basophil activation test (BAT) is a complementary in vitro diagnostic test that can be used in addition to clinical history, skin test (ST), and ...

好塩基球活性化試験は、薬物、食品、または吸入剤、および一部の形態の慢性蕁麻疹によって引き起こされる反応に有用であることが示されているIgEを介したアレルギー反応を評価するための無料の体外診断試験です。.この試験は、フローサイトメトリーによる活性化マーカーの測定を通じて、アレルゲンまたは薬物架橋IgE活性化に対する好塩基球応答を決定することに基づいています。好塩基球活性化試験は、特に重度の生命を脅かす反応を経験している被験者において、アレルギー診断を確認するための制御されたチャレンジ試験を回避するための有用で補完的なツールとなり得る。さらに、この試験は、少数の薬物およびアレルゲンに対してのみ利用可能な他のin vitro方法と比較して、任意の薬物またはアレルゲンに対する反応を分析できるという利点を有する。テストの主な制限は、特に薬物アレルギーにおける最適でない感度に関連しています。サンプル抽出後24時間以内にテストを実行する必要性と、ラボと診断アルゴリズムの間の標準化の欠如。まず、9ミリリットルのヘパリン化チューブで末梢血を収集し、サンプルをローターに入れて、実験プロトコルに必要になるまで室温に維持します。ネガティブコントロールとポジティブコントロールのためにそれぞれ2つの5ミリリットルサイトメーターチューブにラベルを付けます。また、テスト対象の異なるアレルゲンまたは薬物濃度について、それぞれ1本のチューブにラベルを付けます。次に、チューブが滑らずに完全にフィットするように、チューブをラックに入れます。最初の陽性対照のために、好塩基球の品質を確認するために、0.05%PBS-T中のN-ホルミルメチオニル-ロイシル-フェニルアラニンまたはfMLPの4マイクロモル溶液を調製します。2番目のポジティブコントロールでは、PBS-Tを使用して1ミリリットルあたり0.05ミリグラムの抗IgE溶液を調製します。刺激バッファー20マイクロリットルあたりCCR3-APC、CD203c-PE、およびCD63-FITC抗体をそれぞれ1マイクロリットル添加することにより、染色ミックスを調製します。次に、この染色ミックスを23マイクロリットル各チューブに追加します。ネガティブコントロールチューブに100マイクロリットルのPBS-Tを追加します。100マイクロリットルのfMLPをポジティブコントロールチューブの1つに追加し、もう1つのチューブに100マイクロリットルの抗IgE Eを追加します。異なるアレルゲンまたは薬物濃度の100マイクロリットルを加え、摂氏37度で10分間インキュベートします。インキュベーション後、溶血を避けるために各チューブに100マイクロリットルの血液を穏やかに追加します。次に、チューブを静かにボルテックスし、中程度の攪拌を伴う恒温槽で摂氏37度で25分間インキュベートします。脱顆粒を止めるために、チューブを摂氏4度に少なくとも5分間保ちます。各チューブに、赤血球を溶解するために2ミリリットルの溶解バッファーを追加します。各チューブをボルテックスし、室温で5分間チューブをインキュベートします。チューブを摂氏4度で300gで5分間遠心分離します。次に、ラックをシンクにひっくり返して、細胞がチューブの底に残っている間に上清をデカントします。各チューブに3ミリリットルのPBS-Tを加えて細胞を洗浄し、チューブをボルテックスします。同じパラメータセットを使用して2回目の遠心分離を実行し、ラックをシンクにひっくり返して上清をデカントします。その後、フローサイトメトリーまでサンプルを摂氏4度に保ち、光から保護します。フローサイトメーターをコンピューターソフトウェアに接続し、サイトメーターの準備ができるまで待ちます。テンプレートと楽器の設定を、テキスト原稿の説明に従ってロードします。サンプル取得のプロセスを開始します。活性化好塩基球を選択するには、まず、側方散布図-前方散布図からリンパ球をゲートします。次に、リンパ球集団から好塩基球をCCR3 + CD203c +細胞としてゲートし、チューブあたり少なくとも500個の好塩基球を獲得します。ネガティブコントロールチューブを使用してCD63閾値を約2.5%に設定し、サンプルを分析します。IgE依存性過敏反応は、アレルゲンと薬物を用いて好塩基球活性化試験(BAT)を行うことによって調査されました。好塩基球感受性は、50%好塩基球またはEC50の反応を誘発するアレルギー濃度を決定するのに役立つ複数の減少するアレルゲン濃度での反応性を測定することによって分析されました。まず、リンパ球を側方散乱-前方散布図からゲーティングした。次に、好塩基球をリンパ球集団からCCR3 + CD203c +細胞としてゲーティングしました。次に、CCR3-CD63プロットを使用して、CD63を2つの薬物および異なる濃度のアレルゲンの活性化マーカーとして使用して好塩基球の活性化を分析しました。検査は新鮮な全血で行われ、採血後24時間以内に実施する必要があります。試験で使用される刺激には賦形剤が含まれていてはならず、薬物の化学的特性を考慮する必要があります。IgE媒介アレルギー反応の診断、またはsIgEの測定、またはヒスタミン放出試験のための他の追加のインビトロ方法。

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Research

JoVE Journal

Medicine

FISH for Pre-implantation Genetic Diagnosis

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a cohort generated by assisted reproduction technology (ART). This selection may be required because of familial monogenic disease (e.g. cystic fibrosis), or because one partner carries a chromosome rearrangement (e.g. a two-way reciprocal translocation). PGD is available for couples who have had previous affected children, and/or in the case of chromosome rearrangements, recurrent miscarriages, or infertility. Oocytes aspirated following ovarian stimulation are fertilized by in vitro immersion in semen (IVF) or by intracytoplasmic injection of an individual spermatozoon (ICSI). Pre-implantation cleavage-stage embryos are biopsied, usually by the removal of a single cell on day 3 post-fertilization, and the biopsied cell is tested to establish the genetic status of the embryo. Fluorescence in situ hybridization (FISH) on the fixed nuclei of biopsied cells with target-specific DNA probes is the technique of choice to detect chromosome imbalance associated with chromosome rearrangements, and to select female embryos in families with X-linked disease for which there is no mutation-specific test. FISH has also been used to screen embryos for spontaneous chromosome aneuploidy (also known as PGS or PGD-AS) in order to try and improve the efficiency of assisted reproduction; however, the predictive value of this test using the spreading and FISH technique described here is likely to be unacceptably low in most people's hands and it is not recommended for routine clinical use. We describe the selection of suitable probes for single-cell FISH, spreading techniques for blastomere nuclei, and in situ hybridization and signal scoring, applied to PGD in a clinical setting.

This article describes the selection of suitable probes for single-cell FISH, spreading techniques for blastomere nuclei, and in situ hybridization and signal scoring, applied to pre-implantation genetic diagnosis (PGD) in a clinical setting.

着床前遺伝子診断のためのFISH

Pre-implantation genetic diagnosis (PGD) is an established alternative to pre-natal diagnosis, and involves selecting pre-implantation embryos from a ...

医学

The Trier Social Stress Test Protocol for Inducing Psychological Stress

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting. Protocols that allow researchers to study the biological pathways of the stress response in health and disease are fundamental to the progress of research in stress and anxiety.1 Although numerous protocols exist for inducing stress response in the laboratory, many neglect to provide a naturalistic context or to incorporate aspects of social and psychological stress. Of psychological stress protocols, meta-analysis suggests that the Trier Social Stress Test (TSST) is the most useful and appropriate standardized protocol for studies of stress hormone reactivity.2 In the original description of the TSST, researchers sought to design and evaluate a procedure capable of inducing a reliable stress response in the majority of healthy volunteers.3 These researchers found elevations in heart rate, blood pressure and several endocrine stress markers in response to the TSST (a psychological stressor) compared to a saline injection (a physical stressor).3 Although the TSST has been modified to meet the needs of various research groups, it generally consists of a waiting period upon arrival, anticipatory speech preparation, speech performance, and verbal arithmetic performance periods, followed by one or more recovery periods. The TSST requires participants to prepare and deliver a speech, and verbally respond to a challenging arithmetic problem in the presence of a socially evaluative audience.3 Social evaluation and uncontrollability have been identified as key components of stress induction by the TSST.4 In use for over a decade, the goal of the TSST is to systematically induce a stress response in order to measure differences in reactivity, anxiety and activation of the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) or sympathetic-adrenal-medullary (SAM) axis during the task.1 Researchers generally assess changes in self-reported anxiety, physiological measures (e.g. heart rate), and/or neuroendocrine indices (e.g. the stress hormone cortisol) in response to the TSST. Many investigators have adopted salivary sampling for stress markers such as cortisol and alpha-amylase (a marker of autonomic nervous system activation) as an alternative to blood sampling to reduce the confounding stress of blood-collection techniques. In addition to changes experienced by an individual completing the TSST, researchers can compare changes between different treatment groups (e.g. clinical versus healthy control samples) or the effectiveness of stress-reducing interventions.1

This article describes a protocol for inducing psychological stress in participants, which enables researchers to measure psychological, physiological and neuroendocrine responses to stress within single participants or between groups.

心理的ストレスを誘導するためのトリーアの社会ストレステストプロトコル

This article demonstrates a psychological stress protocol for use in a laboratory setting.  Protocols that allow researchers to study the biological ...

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves' Muntjac Deer

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of prion disease transmission and pathogenesis. Vertical transmission is an area of interest among researchers studying infectious diseases, including prion disease, and these investigations require efficient methods for evaluating the effects of maternal infection on reproductive performance. Ultrasonographic examination is a well-established tool for diagnosing pregnancy and assessing fetal health in many animal species1-7, including several species of farmed cervids8-19, however this technique has not been described in Reeves' muntjac deer. Here we describe the application of transabdominal ultrasound to detect pregnancy in muntjac does and to evaluate fetal growth and development throughout the gestational period. Using this procedure, pregnant animals were identified as early as 35 days following doe-buck pairing and this was an effective means to safely monitor the pregnancy at regular intervals. Future goals of this work will include establishing normal fetal measurement references for estimation of gestational age, determining sensitivity and specificity of the technique for diagnosing pregnancy at various stages of gestation, and identifying variations in fetal growth and development under different experimental conditions.

Transabdominal Ultrasound for Pregnancy Diagnosis in Reeves&#039; Muntjac Deer

Transabdominal ultrasound is described as an effective, noninvasive means for assessing reproductive status in Reeves' muntjac deer. These methods can be used to achieve early pregnancy diagnosis and to evaluate fetal viability. Future applications of this technique include estimation of gestational age and effects of maternal disease on fetal development.

リーブスのムンジャク鹿における妊娠診断のための腹腔内超音波

Reeves' muntjac deer (Muntiacus reevesi) are a small cervid species native to southeast Asia, and are currently being investigated as a potential model of ...

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described to assess MGT. Still, a standardized examination procedure is missing. Literature argues for weightbearing examination but the degree of knee flexion needed to eliminate the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion (ADF) is unknown. This manuscript investigates the effect of knee flexion on ankle dorsiflexion and provides a detailed description of a standardized examination protocol. Examination on 20 healthy individuals revealed, that 20&#176; of knee flexion is sufficient to fully eliminate the influence of the M. gastrocnemius on ADF. This builds the prerequisite for a standardized examination for MGT. Non-weightbearing and weightbearing examination of ADF has to be conducted with the knee fully extended and at least 20&#176; flexed. Two investigators should conduct non-weightbearing testing with the subject in supine position. In order to obtain reliable results, the axis of the fibula should be marked. One examiner can conduct weightbearing examination with the subject in lunge stance. Isolated MGT is present if ADF is impaired with the knee fully extended and knee flexion results in a significant ADF increase. The herein presented standardized examination is the prerequisite for future studies aiming at establishing norm values.

Diagnosis of Musculus Gastrocnemius Tightness - Key Factors for the Clinical Examination

Isolated Musculus gastrocnemius tightness is a common cause for foot and ankle pathologies. Currently no standardized examination procedure exists. This manuscript demonstrates that 20 degree of knee flexion eliminates the restraining effect of the M. gastrocnemius on ankle dorsiflexion and presents a video description of a standardized examination protocol.

の診断<em&gt;腓腹筋</em&gt;気密性 - 臨床検査のための主要因

Common foot and ankle pathologies have been linked to isolated Musculus gastrocnemius tightness (MGT). Various examination techniques have been described ...

Hydra, a Computer-Based Platform for Aiding Clinicians in Cardiovascular Analysis and Diagnosis

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect of different cardiovascular risk factors (e.g., diabetes, raised blood pressure, unhealthy diet, tobacco use, stress, etc.) that commonly coexist and act multiplicatively. Most CVDs can be prevented by an early identification of the highest risk factors and an appropriate treatment. The stratification of cardiovascular risk factors involves a wide range of parameters and tests that specialists use in their clinical practice. In addition to cardiovascular (CV) risk stratification, ambulatory blood pressure monitoring (ABPM) also provides relevant information for diagnostic and treatment purposes. This work presents a list of protocols based on the Hydra platform, a web-based system for clinical decision support which incorporates a set of functionalities and services that are required for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment and monitoring of patients over time. The program includes tools for inputting and managing comprehensive patient data, organized into different checkups to track the evolution over time. It also has a risk stratification tool to compute a CV risk factor based upon several risk stratification tables of reference. Additionally, the program includes a tool that incorporates ABPM analysis and allows the extraction of valuable information by monitoring blood pressure over a specific period of time. Finally, the reporting service summarizes the most relevant information in a set of reports that aid clinicians in their clinical decision-making process.

This article presents a protocol based on Hydra &#8212; a web-based system for clinical decision support that integrates a full and detailed set of functionalities and services required by physicians for complete cardiovascular analysis, risk assessment, early diagnosis, treatment, and monitoring over time.

ヒドラ、心血管分析および診断で臨床医を支援するコンピュータ ベースのプラットフォーム

Cardiovascular diseases (CVDs) are the leading cause of death throughout the world. The total risk of developing CVD is determined by the combined effect ...

International Expert Consensus and Recommendations for Neonatal Pneumothorax Ultrasound Diagnosis and Ultrasound-guided Thoracentesis Procedure

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic compromise, a life-threatening disorder. Traditionally, neonatal pneumothorax diagnosis has been based on clinical images, auscultation, transillumination, and chest X-ray findings. This approach may potentially lead to a delay in both diagnosis and treatment. The use of lung US in diagnosis of PTX together with US-guided thoracentesis results in earlier and more precise management. The recommendations presented in this publication are aimed at improving the application of lung US in guiding neonatal PTX diagnosis and management.

Pneumothorax is a common emergency and critical disease in newborn infants that needs rapid, clear diagnosis and timely treatment. Diagnosis and treatment based on chest X-rays are associated with delayed management and radiation damage. Lung ultrasound (US) provides useful guidance for rapid, accurate diagnosis and the precise thoracentesis of pneumothorax.

新生児気胸超音波診断と超音波誘導胸腔穿刺術のための国際専門家のコンセンサスと勧告

Pneumothorax (PTX) represents accumulation of the air in the pleural space. A large or tension pneumothorax can collapse the lung and cause hemodynamic ...

Diagnosis and Surgical Treatment of Human Brucellar Spondylodiscitis

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in pastoral communities. It is difficult to differentially diagnose and usually leads to irreversible neurologic deficits and spinal deformities. The initial diagnosis of BS is based on clinical findings and radiographic assessments, and the confirmed diagnosis should be established by the isolation of Brucella species from the blood and/or the standard tube agglutination test. Differential diagnosis of multifocal BS from either degenerative disc diseases or tuberculosis is especially highlighted. The surgical approach, either endoscopic or open, is demonstrated in detail, accompanied by radiographic evidence of structural compression or severe instability. Further, the crucial surgical steps, including single-stage transforaminal decompression, debridement, interbody fusion, and internal fixation, are explained. Moreover, perioperative care and postoperative rehabilitation are also addressed. Taken together, this clinical algorithm presents a practical guide that has yielded substantially satisfactory outcomes in the past decades, which can also be introduced for large-scale application to manage human BS, especially in endemic regions.

We describe a clinical algorithm, based on decades of front-line experience of diagnosis and surgical treatment of human Brucellar spondylodiscitis in the largest medical center of the China's Xinjiang Pastoral Area.

ヒトブルセル脊椎椎椎症の診断と外科的治療

Brucellar spondylodiscitis (BS) is the most prevalent and significant osteoarticular presentation of human Brucellosis, which is commonly manifested in ...

Testing Acetylcholine Followed by Adenosine for Invasive Diagnosis of Coronary Vasomotor Disorders

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary vasomotor disorders (impaired vasodilatation and/or enhanced vasoconstriction/spasm) represent important functional causes for such a clinical presentation. Although impaired vasodilatation may be assessed with non-invasive techniques such as positron emission tomography or cardiac magnetic resonance imaging, there is currently no reliable non-invasive technique for the diagnosis of coronary spasm available. Thus, invasive diagnostic procedures (IDP) have been developed for the diagnosis of coronary vasomotor disorders including spasm testing as well as assessment of coronary vasodilatation. The identification of the underlying type of disorder (so called endotype) allows the initiation of targeted pharmacological treatments. Despite the fact that such an approach is recommended by the current European Society of Cardiology guidelines for the management of chronic coronary syndromes based on the CorMicA study, comparability of results as well as multicenter trials are currently hampered by major differences in institutional protocols for coronary functional testing. This article describes a comprehensive IDP protocol including intracoronary acetylcholine provocation testing for diagnosis of epicardial/microvascular spasm, followed by Doppler wire-based assessment of coronary flow reserve (CFR) and hyperemic microvascular resistance (HMR) in search of coronary vasodilatory impairment.

Coronary vasomotion disorders represent frequent functional causes of angina in patients with unobstructed coronaries. The underlying mechanism of angina (endotype) in these patients can be determined by a comprehensive invasive diagnostic procedure based on acetylcholine provocation testing followed by Doppler-derived assessment of the coronary flow reserve and microvascular resistance.

冠動脈血管運動障害の侵襲的診断のためのアセチルコリンとそれに続くアデノシンの検査

More than 50% of patients with signs and symptoms of myocardial ischemia undergoing coronary angiography have unobstructed coronary arteries. Coronary ...

Measurement of Myocardial Lactate Production for Diagnosis of Coronary Microvascular Spasm

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina attack. Since the pressure-rate product is almost identical at rest and the onset of attack in those patients, the decrease in coronary blood flow rather than increased myocardial oxygen consumption is likely to explain myocardial ischemia, indicating a substantial involvement with coronary microvascular spasm (MVS). Myocardial lactate production, which could be defined as a negative myocardial lactate extraction ratio (ratio of the coronary arterial-venous difference in lactate concentration to arterial concentration), is considered indicative of objective evidence to support the emerging myocardial ischemia. Thus, monitoring of the myocardial lactate production and the emergence of chest pain and ischemic electrocardiographic changes during acetylcholine (ACh) provocation testing is of significant value for detecting the entity of MVS. Practically, 1 min after incremental doses of ACh (20, 50, and 100 &#956;g) are administered into the left coronary artery (LCA), paired samples of 1 mL of blood are collected from the LCA ostium and coronary sinus for measurement of lactate concentration by a calibrated automatic lactate analyzer. Then, the development of MVS could be confirmed by negative myocardial lactate extraction ratio despite the absence of angiographically demonstrable epicardial coronary spasm or before its occurrence throughout ACh provocation testing. In conclusion, assessment of myocardial lactate production is essential and valuable for the diagnosis of MVS.

Myocardial lactate production (coronary arterial-venous difference in serum lactate level) during coronary spasm provocation testing is considered as a highly sensitive marker that reflects acetylcholine-induced myocardial ischemia due to microvascular spasm. This article presents the procedures to assess myocardial lactate production for the diagnosis of coronary microvascular spasm.

冠動脈微小血管痙攣診断のための心筋乳酸産生測定

In about a quarter of patients with angina and non-obstructive coronary arteries, no epicardial spasm is noted on coronary arteriography during an angina ...

High-speed Video Microscopy Analysis for First-line Diagnosis of Primary Ciliary Dyskinesia

Primary ciliary dyskinesia (PCD) is a congenital disorder predominantly inherited in an autosomal recessive trait. The disorder causes disturbance in the motion of cilia, leading to severe impairment of mucociliary clearance (MCC). If undiagnosed or diagnosed too late, the condition leads to the development of bronchiectasis and serious damage to the lungs in later life. Most of the methods for diagnosing PCD are time-consuming and demand extensive economic resources to establish them. High-speed video microscopy analysis (HSVMA) is the only diagnostic tool to visualize and analyze living respiratory cells with beating cilia in vitro. It is fast, cost-effective, and, in experienced hands, very reliable as a diagnostic tool for PCD. In addition, classical diagnostic measures such as transmission electron microscopy (TEM) are not applicable for some mutations as morphological changes are absent. 
This paper describes the process of collecting respiratory epithelial cells, the further preparation of the specimen, and the process of HSVMA. We also describe how brushed cells can be successfully kept unharmed and beating by keeping them in a nourishing medium for storage and transport to the investigation site in cases where a clinic does not possess the equipment to perform HSVMA. Also shown are videos with pathologic beating patterns from patients with a mutation in the dynein arm heavy chain 11 gene (DNAH11), which cannot be diagnosed with TEM; the result of an inconclusive HSVMA due to infection of the upper airways, as well as an unsuccessful brushing with superimposition of red blood cells. With this article, we would like to encourage every unit dealing with pulmonology patients and rare lung diseases to perform HSVMA as part of their daily routine diagnostics for PCD or send the specimens over to a center specializing in performing HSVMA.

High-speed video microscopy analysis is a relatively easy-to-perform, fast, cost-effective, and, in experienced hands, a considerably reliable tool for first-line diagnostics of primary ciliary dyskinesia, which should be available in every center involved in diagnostics and the treatment of severe lung diseases.

原発性毛様体ジスキネジアの第一選択診断のための高速ビデオ顕微鏡分析

Primary ciliary dyskinesia (PCD) is a congenital disorder predominantly inherited in an autosomal recessive trait. The disorder causes disturbance in the ...